AAV-293

375,00 €*

Produktnummer: 305127

Description	Die AAV-293-Zelllinie ist eine permanente Linie, die aus primären embryonalen menschlichen Nieren gewonnen wird, die mit menschlicher Adenovirus Typ 5-DNA transformiert wurden. Die von der E1-Region des Adenovirus kodierten Gene (E1a und E1b) werden in diesen Zellen exprimiert und sind an der Transaktivierung der viralen Promotoren beteiligt, so dass diese Zellen hohe Mengen an Protein produzieren können. AAV-293 ist von der elterlichen 293-Zelllinie abgeleitet. Durch Klonen und mehrere Testrunden wurde AAV-293 speziell für eine hohe AAV-Produktion in einem helferfreien System ausgewählt. Sie bietet mehrere Vorteile gegenüber den normalen 293-Zellen: Eine größere Zelloberfläche, was zu einer höheren Transfektion und einer besseren Ausbeute an AAV führt. Die Vorteile sind eine abgeflachte Morphologie, eine feste Anheftung an die Kulturplatte und die ideale Eignung der Zellen für die Kultur in großem Maßstab und die AAV-Produktion. Adeno-assoziierte Viren (AAV) gehören zur Familie der Parvoviridae, einer Gruppe von Viren, die zu den kleinsten einzelsträngigen und unbehüllten DNA-Viren gehören. Bislang sind neun verschiedene AAV-Serotypen bekannt. AAV können sowohl sich teilende als auch sich nicht teilende Zellen infizieren und in der menschlichen Wirtszelle erhalten bleiben, was die Möglichkeit eines langfristigen Gentransfers eröffnet. Rekombinantes AAV-2 ist der am häufigsten für den Gentransfer verwendete Serotyp und kann mit einem Hilfsvirus oder mit AAV-293-Zellen in hohen Titern produziert werden.
Organism	Menschen
Tissue	Embryonale Niere
Synonyms	AAV293

Age	Fötus
Gender	Weiblich
Morphology	Epithelial
Growth properties	Adhärent

Citation	AAV-293 (Cytion Katalognummer 305127)
Biosafety level	1

Culture Medium	DMEM
Medium supplements	10% FBS, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, 0,1 mM NEAA
Passaging solution	Accutase
Subculturing	Medium entfernen und die anhaftenden Zellen mit PBS ohne Kalzium und Magnesium spülen (3-5 ml PBS für T25-, 5-10 ml für T75-Zellkulturflaschen). Accutase zugeben (1-2 ml pro T25-, 2,5 ml pro T75-Zellkulturflasche), die Zellschicht muss vollständig bedeckt sein. 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Die Zellen vorsichtig mit Medium (10 ml) resuspendieren, 3 Minuten bei 300 g zentrifugieren, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Flaschen mit frischem Medium geben.
Split ratio	1:3 bis 1:5
Fluid renewal	2 bis 3 Mal pro Woche
Freeze medium	CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100)
Handling of cryopreserved cultures	Die Zellen werden tiefgefroren auf Trockeneis versandt. Bitte stellen Sie sicher, dass das Fläschchen noch gefroren ist. Wenn eine sofortige Kultivierung nicht beabsichtigt ist, muss das Kryovial nach der Ankunft unter -150 Grad Celsius gelagert werden. Wenn eine sofortige Kultivierung beabsichtigt ist, befolgen Sie bitte die nachstehenden Anweisungen: Schnelles Auftauen durch schnelles Schütteln in einem 37 Grad Celsius warmen Wasserbad innerhalb von 40-60 Sekunden. Das Wasserbad sollte sauberes Wasser enthalten, das ein antimikrobielles Mittel enthält. Sobald die Probe aufgetaut ist, nehmen Sie das Kryovial aus dem Wasserbad. Es sollte noch ein kleiner Eisklumpen zurückbleiben und das Fläschchen sollte noch kalt sein. Von nun an sollten alle Operationen unter aseptischen Bedingungen durchgeführt werden. Überführen Sie das Kryovial in einen sterilen Durchflussschrank und wischen Sie es mit 70%igem Alkohol ab. Das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen mit 8 ml Kulturmedium (Raumtemperatur) überführen. Die Zellen vorsichtig resuspendieren. Zentrifugieren Sie bei 300 x g für 3 Minuten und verwerfen Sie den Überstand. Der Zentrifugationsschritt kann ausgelassen werden, aber in diesem Fall müssen die Reste des Gefriermediums 24 Stunden später entfernt werden. Die Zellen vorsichtig in 10 ml frischem Zellkulturmedium resuspendieren und in zwei T25-Zellkulturflaschen überführen. Alle weiteren Schritte sind im Abschnitt Subkultur beschrieben.
Handling of proliferating cultures	Eine oder zwei Zellkulturflaschen werden mit Zellkulturmedium gefüllt. Fangen Sie das gesamte Medium in 1 bzw. 2 x 50 ml Zentrifugenröhrchen auf. Geben Sie vorsichtig 5 ml Zellkulturmedium in jede T25-Zellkulturflasche. Kontrollieren Sie die Zellmorphologie und den Konfluenzgrad unter dem Mikroskop. Mindestens 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubieren. Schleudern Sie das gesammelte Medium 3 Minuten lang bei 300 x g, um die Zellen zu sammeln, die sich während des Transports abgelöst haben könnten. Wenn ein Zellpellet sichtbar ist, die Zellen in 5 ml Zellkulturmedium resuspendieren und in eine T25-Zellkulturflasche überführen. Bei 37 Grad Celsius mindestens 24 Stunden lang bebrüten.

Sterility	Mykoplasmen-Kontaminationen werden durch PCR- und Lumineszenz-basierte Mykoplasmen-Assays ausgeschlossen. Das Nichtvorhandensein von Bakterien-, Pilz- oder Hefekontaminationen wird durch tägliche visuelle Zellüberwachung kontrolliert.

Kontaminationsfreie Zellen

Zur Identifizierung von Mykoplasmen-Kontaminationen führen wir PCR- und Lumineszenz-basierte Mykoplasmen-Tests durch. Darüber hinaus bestimmen wir jegliche bakterielle oder pilzliche Kontamination durch unsere standardisierten Herstellungsprozesse.

Kundenspezifische Projekte

Neben genomischer DNA, RNA, Zellpellets und Zelllysaten können wir auch große Mengen assayfähiger Zellen, plattierte Zellen in verschiedenen Formaten sowie gefrorene oder wachsende Zellen anbieten. Kontaktieren Sie uns, um ein Angebot zu erhalten.

Authentifizierte Zellen

Jede hergestellte Charge von Zelllinien* wird mittels STR-Analyse authentifiziert. Kontaktieren Sie uns, wenn Sie einen zur Veröffentlichung bereiten STR-Bericht für Ihre Zellen benötigen (*Human-, Hamster-, Maus-, Ratten- und Hundezellen).

HLA-Allele

Eine HLA-Charakterisierung ist für mehr als 200 Zelllinien verfügbar. HLA Klasse I -A, B, C und Klasse II HLA-DPA1, -DPB1, -DQA1, DQB1 und DRB1 Allele wurden durch Next-Generation-Sequencing-Methoden (NGS) für Klasse I und Klasse II Allele erhalten.

AAV-293

Allgemeine Informationen

Merkmale

Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation

Expression / Mutation

Handhabung

Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA