Skip to content
HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP
Tissue
צוואר הרחם
Disease
אדנוקרצינומה
Metastatic site
מיקום הגידול הראשוני (חלקו הפנימי של צוואר הרחם)
Synonyms
HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP #67, HK CRISPR CAP-H2-mEGFP

Documents

HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP

Cell line · Product number 301569

The HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP cell line is a Hela Kyoto cell model developed using CRISPR-Cas9 technology. This cell line incorporates the mEGFP (monomeric E...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

קו התאים HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP הוא מודל תאים Hela Kyoto שפותח באמצעות טכנולוגיית CRISPR-Cas9. קו תאים זה משלב את mEGFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר מונומרי) בגן CAP-H2, שהוא חלק ממכלול הקונדנסין II המעורב בהפרדת כרומוזומים ובקונדנסציה במהלך המיטוזה. התג mEGFP מאפשר לחוקרים לעקוב באופן חזותי אחר הדינמיקה של קונדנסין II במהלך חלוקת התאים.

קו תאים זה שימושי לחקר תהליכי מיטוזה, מבנה כרומוזומים ורגולציה גנטית. סמן ה-mEGFP מאפשר הדמיה של תאים חיים ותצפית בזמן אמת על תפקוד חלבון CAP-H2. מודל זה מסייע בחקר המנגנונים המולקולריים של התקדמות מחזור התא ושלמות כרומוזומית, ותורם להבנת הפרעות גנטיות ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
אדנוקרצינומה
Metastatic site
מיקום הגידול הראשוני (חלקו הפנימי של צוואר הרחם)
Applications
ביולוגיה של קומפלקס קונדנסין II; הדמיה של החלבון CAP-H2 הקשור לכרומטין; התכווצות והפרדה כרומוזומלית; מיטוזה; הדמיה של תאים חיים; אימות נוק-אין באמצעות CRISPR; מחקר על יציבות כרומוזומלית
Synonyms
  • HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP #67
  • HK CRISPR CAP-H2-mEGFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-integrated mEGFP tag at the CAP-H2 locus supporting chromosome-structure analysis. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס
Cell type
תאי אפיתל

04Identifiers

Citation
HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP (מספר קטלוגי Cytion 301569)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_UR45
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Products
EGFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי