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HK-CRISPR-Tpr-mEGFP
Tissu
Endocol
Maladie
Adénocarcinome

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HK-CRISPR-Tpr-mEGFP

Cell line · Référence du produit 300662

The HK-CRISPR-Tpr-mEGFP cell line is a specialized model developed for advanced genetic research, particularly in genome editing and gene expression studi...

€800.00hors taxes et frais de port
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Lot
Recommandé (lot le plus récent)
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1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire HK-CRISPR-Tpr-mEGFP est un modèle spécialisé développé pour la recherche génétique avancée, en particulier pour l'édition du génome et les études d'expression génique. Dérivée des cellules HeLa Kyoto, elle intègre la technologie CRISPR/Cas9 pour des modifications génomiques précises. L'incorporation du gène rapporteur mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) facilite la visualisation et le suivi en temps réel des processus cellulaires, ce qui en fait un outil robuste pour étudier la fonction des gènes, la localisation des protéines et les événements cellulaires dynamiques dans les cellules vivantes.

Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour la recherche en néphrologie, la découverte de médicaments et les études toxicologiques. L'expression du gène Tpr, un composant du complexe du pore nucléaire, aide à comprendre les mécanismes de transport nucléaire et la compartimentation cellulaire. Les chercheurs utilisent les cellules HK-CRISPR-Tpr-mEGFP pour explorer les rôles des protéines du pore nucléaire dans diverses voies cellulaires, contribuant ainsi à la compréhension du cancer, des infections virales et des maladies génétiques.

Tissu
Endocol
Maladie
Adénocarcinome

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an mEGFP-tagged Tpr generated via CRISPR, enabling studies of nuclear basket architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
Cellules de type épithélial avec une forme de pierre en mosaïque

04Identifiants

Référence
HK-CRISPR-Tpr-mEGFP (numéro de catalogue Cytion 300662)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Déposant
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

05Expression et sensibilité

Expression des protéines
Tpr, étiquette mEGFP

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Âge du donneur
30 ans
Origine ethnique
Afro-américain