Skip to content
תאי HK-ZFN-AURKB-mEGFP
Tissue
צוואר הרחם
Disease
אדנוקרצינומה
Metastatic site
מיקום הגידול הראשוני (חלקו הפנימי של צוואר הרחם)

Documents

תאי HK-ZFN-AURKB-mEGFP

Cell line · Product number 300173

The HK-ZFN-AURKB-mEGFP cell line is a genetically engineered human cell model designed to express the AURKB (Aurora Kinase B) protein fused with mEGFP (mo...

US$800.00excl. tax and shipping
Made to order
1

01General information

Description

קו התאים HK-ZFN-AURKB-mEGFP הוא מודל תאים אנושיים מהונדסים גנטית שנועד לבטא את החלבון AURKB (Aurora Kinase B) הממוזג עם mEGFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר מונומרי) באמצעות טכנולוגיית Zinc Finger Nuclease (ZFN). AURKB הוא סרין/תראונין קינאז הממלא תפקיד מכריע בהפרדת כרומוזומים מיטוטיים, ציטוקינזה וויסות נקודת הבקרה של הציר המיטוטי. ההיתוך עם mEGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של פעילות AURKB ומיקומו בתוך התא, מה שמקל על מחקרים מפורטים של התנהגותו הדינמית במהלך חלוקת התא.

קו תאים זה משמש ככלי רב עוצמה לחוקרים הבוחנים את המנגנונים המולקולריים של המיטוזה ואת הפונקציות הספציפיות של AURKB. שילוב ה-mEGFP מאפשר ביצוע בדיקות מבוססות פלואורסצנציה והדמיה של תאים חיים, ומספק תובנות לגבי התפלגות AURKB במרחב ובזמן. השימוש בטכנולוגיית ZFN מבטיח אינטגרציה גנומית מדויקת, תוך שמירה על נאמנות הביטוי של AURKB. מודל זה בעל ערך רב במיוחד במחקר הסרטן, שבו AURKB לעתים קרובות מבוטא יתר על המידה וקשור להיווצרות גידולים, מה שהופך אותו ליעד פוטנציאלי להתערבויות טיפוליות.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
אדנוקרצינומה
Metastatic site
מיקום הגידול הראשוני (חלקו הפנימי של צוואר הרחם)
Applications
ביולוגיה של קינאז Aurora B (AURKB); הדמיה של קינאז במיטוזיס; הפרדת כרומוזומים; נקודת הבקרה של הציר; הדמיה של תאים חיים; אימות עריכת גנום באמצעות ZFN; ביולוגיה של הסרטן

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a ZFN-integrated mEGFP fusion at the endogenous AURKB locus for mitotic kinase imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס
Cell type
תאי אפיתל

04Identifiers

Citation
HK-ZFN-AURKB-mEGFP (מספר קטלוגי Cytion 300173)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_VL13
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Products
EGFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי