תאי B16 – מדריך בסיסי לתאי מלנומה מסוג B16 במחקר אונקולוגי

B16 הוא קו תאים של סרטן העור (מלנומה) שמקורו בעכברים. קו תאים זה מהווה מודל יעיל במבחנה לחקר סוגי סרטן העור בבני אדם. הוא משמש לעתים קרובות לחקר היווצרות גידולים מוצקים וגרורות של תאי סרטן.

מאמר זה יסייע לכם להבין את היסודות של קו התאים B16 של מלנומה. באופן ספציפי, הוא יעסוק בנושאים הבאים:

מאפיינים כלליים ומקור קו התאים B16

חלק זה של המאמר יסקור את המאפיינים של קו תאי המלנומה B16. תוכלו למצוא כאן תשובות לשאלות נפוצות כגון: מהו קו תאי הסרטן B16? מהיכן נגזרים תאי B16? מהו גודל תאי B16?

• קו התאים B16 הוקם בשנת 1954. תאים אלה נגזרו מעכברי C57BL/6J שפתחו באופן ספונטני גידול בעור במעבדות ג'קסון במיין.
• מדובר בתאי אפיתל המייצרים מלנין, בעלי יכולת גרורתית בטחול, בכבד ובריאות.
• תאי המלנומה B16 גדלים כשכבה אחת ומציגים מורפולוגיה של תאים דמויי אפיתל ובעלי צורה של ציר.
• גודל קו התאים B16 הוא כ-15.4 מיקרומטר.
• ישנם תת-קלונים מובחנים של תאי B16, כולל B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 ו-B16F10. קווי משנה אלה שונים מתאי B16 ההורים ושומרים על כמה תכונות ספציפיות. למשל, יש להן הבדלים במורפולוגיה, בגודל התא ובמאפיינים אחרים. ל-B16F10 יש יכולת גרורתית גבוהה לריאות, ו-B164A5 הוא קו התאים הסרטני האגרסיבי ביותר בעור בהשוואה ל-B16F10, B16-GMCSF ו-B16FLT3 [1].

אנימציה תלת-ממדית של תקריב של גידול סרטני בעור, כגון מלנומה ממאירה, הגורם לדלקת ברקמה הסובבת.

מידע על גידול קו התאים B16

לפני תחזוקה או גידול של קו תאים, ייתכן שתחפשו מידע מרכזי אודות זמן הכפלה, סוג התא, מצעי גידול, תנאי גידול וכו'. סעיף זה מכיל את כל המידע הדרוש לגידול תאי B16.

נקודות מרכזיות לגידול תאי B16

זמן הכפלת האוכלוסייה:

זמן הכפלת האוכלוסייה הממוצע של תאי B16 מוערך ב-24 שעות.

תאים דבקים או בתמיסה:

תאי B16 הם תאים דבקים וגדלים בשכבה אחת.

צפיפות זריעה:

מומלץ לזרוע תאי B16 בצפיפות של 1 עד 2 x 10⁴ תאים/סמ"^ר. תאי B16 הנצמדים נשטפים ב-1 x PBS ומופרדים מהמשטח באמצעות תמיסת Accutase. התאים עוברים צנטריפוגה, והמשקע התאי מושעה מחדש במדיום הגידול. בהמשך, תאים אלה מועברים לצלחת חדשה לצורך גידול.

מדיום גידול:

תאי B16 מתורבתים במדיום EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) המכיל 10% סרום עגלי (FBS). יש לחדש את מדיום הגידול 2-3 פעמים בשבוע.

תנאי גידול:

לגידול קו התאים B16 משמש אינקובטור לח עם אספקת CO₂ של 5% וטמפרטורה של 37 °C.

אחסון:

תאים אלה מאוחסנים בטמפרטורה הנמוכה מ-150 °C או בשלב האדי של חנקן נוזלי כדי להגן על חיוניות התאים.

תהליך הקפאה ומדיום:

מדיום הקפאה CM-1 או CM-ACF משמש להקפאת תאי B16 בתהליך הקפאה איטי.

תהליך ההפשרה:

תאי B16 קפואים מופשרים בטמפרטורה של 37 °C באמבט מים המכיל חומר אנטי-מיקרוביאלי. ניתן לתרבת תאים מופשרים ישירות על ידי העברתם לצלחות המכילות מדיום גידול. בנוסף, ניתן לסובב תאים אלה בצנטריפוגה כדי להסיר מרכיבי מדיום ההקפאה ולאחר מכן לתרבת אותם במדיום חדש.

רמת בטיחות ביולוגית:

יש לטפל בקו התאים B16 או לשמור עליו במעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 1.

שכבה של תאי מלנומה מסוג B16 המכוסה חלקית, בהגדלה של פי 10 ופי 20.

קו תאים B16: יתרונות וחסרונות

כמו קווי תאים אחרים, גם ל-B16 יש שילוב ייחודי של יתרונות וחסרונות. בסעיף זה מפורטים כמה מהיתרונות והחסרונות המשמעותיים של קו תאים זה של מלנומה.

יתרונות

B16 הוא הכלי המורין הראשון היעיל הנמצא בשימוש נרחב במחקר גרורות, בזכות היתרונות שהוא מציע. להלן כמה מהיתרונות של קו תאים זה של סרטן העור:

קל לגידול

קו התאים B16 קל לגידול במעבדות מחקר. הוא נמצא בשימוש נרחב לחקר ביולוגיה של תאי סרטן, מסלולי איתות ועוד.

צמיחה מהירה

קו התאים B16 של מלנומה מציג קצב התרבות גבוה, מה שהופך אותו למתאים לחקר תהליכי חלוקת תאים וצמיחה.

יכולת גידול

B16 הוא קו תאים ממאיר בעל תכונות דמויות-גידול כגון פלישה, נדידה והתפשטות. הוא בעל ערך רב לחקר היווצרות גידולים, התקדמותם וגרורות.

 

חסרונות

החסרונות הקשורים לקו התאים B16 הם:

חוסר רלוונטיות לבני אדם

מכיוון ש-B16 הוא קו תאים של מלנומה בעכברים, ייתכן שהוא אינו מייצג במדויק את הביולוגיה של סרטן העור בבני אדם, מה שמגביל את יכולת היישום של ממצאי המחקר.

הטרוגניות

תאי B16 הם הטרוגניים, ומציגים תכונות גנטיות ופנוטיפיות מגוונות בתוך אותה תרבית. דבר זה עלול להשפיע על אמינות התוצאות ועל יכולת השחזור שלהן.

 

יישומים של תאי B16

קו התאים B16 נמצא בשימוש נרחב במחקרים. להלן מספר יישומים מבטיחים של קו תאים זה:

• ביולוגיה של גידולים: קו תאים זה של סרטן העור בעכברים הוא טומוגני ונמצא בשימוש נרחב להבנת הביולוגיה של הגידולים. נערך מספר מחקרים לבחינת המנגנונים התאיים העומדים מאחורי צמיחת תאי הגידול, התרבותם וגרורותיהם, תוך שימוש בתאי B16. מחקר שנערך בשנת 2020 השתמש בתאי B16 כדי לחקור את תפקידו של RNA ארוך שאינו מקודד, LncRNA MEG3, בהיווצרות, בצמיחה ובגרורות של מלנומה. מחקר זה מצא כי ה-RNA הלא מקודד מווסת את ציר miRNA-21/E-Cadherin כדי לעורר אירועים תאיים אלה [2]. באופן דומה, נערך מחקר כדי לחקור את התפקיד הפוטנציאלי של איתות Notch1 בדיכוי חיסוני המושרה על ידי הגידול באמצעות תאי B16 [3].
• גילוי תרופות: תאי B16 משמשים לאימות ולבחינה של ההשפעות הטיפוליות הפוטנציאליות של תרופות מועמדות. מחקר העריך את ההשפעה האנטי-גידולית של חומצה נאו-גמבוגית, תרכובת טבעית, באמצעות קו תאים B16. תוצאות המחקר גילו כי תרכובת זו מווסתת את מסלול האיתות PI3K/Akt/mTOR כדי לגרום למוות של תאי סרטן [4]. מחקר אחר בחן את ההשפעה האנטי-מלנומית של ג'ינסנוסיד Rg3, ספונין, באמצעות קו תאי B16. המחקר הציע כי תרכובת טבעית זו גרמה לפעילות אנטי-גידולית על ידי ויסות מטה של מסלולי ERK ו-Akt [5].

 

5. פרסומים מחקריים העוסקים בתאי B16

להלן מספר פרסומים מחקריים משמעותיים העוסקים בקו התאים B16 של מלנומה.

LncRNA MEG3 מקדם את צמיחת המלנומה, את הגרורות ואת היווצרותן באמצעות ויסות ציר miR-21/E-cadherin

פרסום זה בכתב העת Cancer Cell International (2020) הציע כי RNA ארוך שאינו מקודד MEG3 משפר את היווצרותם, צמיחתם וגרורותיהם של תאי מלנומה B16 באמצעות ויסות ציר miRNA-21/E-Cadherin.

נגזרת פסורלן חדשה – MPFC – משפרת את המלנוגנזה באמצעות הפעלת מסלולי האיתות p38 MAPK ו-PKA בתאי B16

מאמר זה פורסם ב-International Journal of Molecular Medicine בשנת 2018. מחקר זה בחן את ההשפעה המלנוגנית ואת המנגנונים של נגזרת הפסורלן 4-methyl-6-phenyl-2H-furo[3,2-g] chromen-2-one (MPFC) בתאי B16. המחקר הציע כי נגזרת זו מקדמת מלנוגנזה על ידי גירוי מסלולי האיתות התאיים PKA ו-p38 MAPK.

אותות Notch1 בתאי מלנומה קידמו דיכוי חיסוני הנגרם על ידי הגידול באמצעות ויסות-עלה של TGF-β1

מחקר זה פורסם בשנת 2018 בכתב העת Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. ממצאי המחקר מצביעים על כך שהפעלת איתות Notch1 בתאי B16 עשויה למנוע חסינות אנטי-גידולית באמצעות העלאת הביטוי של הגן TGF-β1.

חומצה נאו-גמבוגית גורמת לאפופטוזיס של תאי מלנומה B16 באמצעות מסלול האיתות PI3K/Akt/mTOR

מחקר זה נערך על ידי Chunlan Wu ועמיתיו בשנת 2020 ופורסם בכתב העת Acta Biochimica Polonica. מחקר זה קובע כי חומצה נאו-גמבוגית, תרכובת טבעית, יכולה לגרום למוות של תאי מלנומה B16 על ידי ויסות שרשרת האיתות PI3K/Akt/mTOR.

קומפלקס אירידיום (III) כגורם אנטי-סרטני חזק גורם לאפופטוזיס ולאוטופגיה בתאי B16 באמצעות עיכוב מסלול ה-AKT/mTOR

מאמר מחקר זה פורסם ב-European Journal of Medicinal Chemistry בשנת 2018. במחקר זה, החוקרים בחנו את הפעילות האנטי-סרטנית של תרכובת, קומפלקס אירידיום (III), באמצעות תאי מלנומה מסוג B16.

איילנטון גורם לעצירת מחזור התא ואפופטוזיס בתאי מלנומה B16 ו-A375

מחקר זה הציע כי חומר ביו-פעיל צמחי, איילנתון, בעל פוטנציאל אנטי-סרטני מכיוון שהוא יכול לגרום לאפופטוזיס ועצירת מחזור התא בתאי מלנומה B16 ו-A375. מאמר זה פורסם ב-Biomolecules בשנת 2019.

משאבים עבור קו תאים B16: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

ישנם משאבים מוגבלים על קו התאים B16 המסבירים את פרוטוקולי התרבית והטרנספקציה שלו.

• גידול תאי מלנומה: סרטון זה מספק טיפים חשובים לגידול קווי תאי מלנומה.
• תרבית משנה של קו תאים: סרטון זה מסביר פרוטוקול כללי לתרבית משנה של קו תאים.
• טרנספקציה של קו תאים B16F10: סרטון זה מסביר את פרוטוקול הטרנספקציה עבור תת-קו של תאי מלנומה B16. הוא יכול לעזור לכם לייעל את פרוטוקול הטרנספקציה עבור תאי B16.

להלן מספר פרוטוקולים לגידול תאים עבור תאי B16. 

• גידול תאי B16: אתר זה מכיל את כל המידע הדרוש לגידול תאי B16, כולל מצעי גידול, תרבית משנה, הפשרה והקפאת תאים.

מקורות

1. Danciu, C., et al., התנהגותן של ארבע תת-שורות שונות של תאי מלנומה עכבריים B 16: עור C57 BL/6J. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): עמ' 73-80.
2. Wu, L., et al., LncRNA MEG3 מקדם את צמיחת המלנומה, גרורות והיווצרותה באמצעות ויסות ציר miR-21/E-cadherin. Cancer cell international, 2020. 20: עמ' 1-14.
3. Yang, Z., et al., איתות Notch1 בתאי מלנומה קידם דיכוי חיסוני המושרה על ידי הגידול באמצעות ויסות-עלה של TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): עמ' 1-13.
4. Wu, C., et al., חומצה Neogambogic גורמת לאפופטוזיס של תאי מלנומה B16 באמצעות מסלול האיתות PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): עמ' 197-202.
5. Meng, L., et al., פעילות אנטי-סרטנית של ג'ינסנוסיד Rg3 במלנומה באמצעות ויסות מטה של מסלולי ERK ו-Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): עמ' 2069-2079.