เซลล์ B16 - คู่มือพื้นฐานเกี่ยวกับเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ในการวิจัยด้านมะเร็งวิทยา

B16 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนัง (เมลาโนมา) ที่มีต้นกำเนิดจากหนู สายพันธุ์เซลล์นี้ถูกใช้เป็นแบบจำลองในหลอดทดลองที่มีประสิทธิภาพสำหรับการศึกษาโรคมะเร็งผิวหนังในมนุษย์ มักถูกใช้ในการวิจัยการก่อตัวของเนื้องอกชนิดแข็งและการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็ง

บทความนี้จะช่วยให้คุณเข้าใจพื้นฐานของเซลล์ไลน์ B16 เมลาโนมา โดยเฉพาะอย่างยิ่งจะครอบคลุมถึง:

ลักษณะทั่วไปและแหล่งกำเนิดของเซลล์ไลน์ B16

ส่วนนี้จะครอบคลุมลักษณะเฉพาะของเซลล์ไลน์มะเร็งผิวหนัง B16 คุณจะเรียนรู้คำตอบสำหรับคำถามที่พบบ่อย เช่น เซลล์ไลน์มะเร็ง B16 คืออะไร? เซลล์ B16 มาจากไหน? ขนาดของเซลล์ B16 เป็นอย่างไร?

• เซลล์ไลน์ B16 ถูกก่อตั้งขึ้นในปี 1954 เซลล์เหล่านี้ได้มาจากหนู C57BL/6J ซึ่งเกิดเนื้องอกในผิวหนังโดยธรรมชาติที่ห้องปฏิบัติการแจ็คสันในรัฐเมน
• เซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์เยื่อบุผิวที่ผลิตเมลานินและมีความสามารถในการแพร่กระจายไปยังม้าม ตับ และปอด
• เซลล์เมลาโนมา B16 เติบโตเป็นชั้นเดียวและมีลักษณะทางสัณฐานวิทยาคล้ายเซลล์เยื่อบุผิวและรูปทรงกระสวย
• ขนาดของเซลล์ไลน์ B16 ประมาณ 15.4 ไมโครเมตร
• มีสายพันธุ์ย่อยที่แตกต่างกันของเซลล์ B16 ได้แก่ B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 และ B16F10 สายพันธุ์ย่อยเหล่านี้แตกต่างจากเซลล์ B16 ต้นกำเนิดและยังคงลักษณะเฉพาะบางประการไว้ เช่น พวกมันมีความแตกต่างในด้านสัณฐานวิทยา ขนาดของเซลล์ และคุณสมบัติอื่นๆ B16F10 มีความสามารถในการแพร่กระจายไปยังปอดสูง และ B164A5 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนังที่มีความก้าวร้าวมากที่สุดเมื่อเทียบกับ B16F10, B16-GMCSF และ B16FLT3 [1]

ภาพเคลื่อนไหว 3 มิติของภาพระยะใกล้ของมะเร็งผิวหนังที่กำลังเติบโต เช่น เมลาโนมาชนิดร้าย ซึ่งทำให้เกิดการอักเสบรอบเนื้อเยื่อโดยรอบ

การเพาะเลี้ยงข้อมูลของเซลล์ไลน์ B16

ก่อนการบำรุงรักษาหรือเพาะเลี้ยงสายเซลล์ คุณอาจค้นหาข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับเวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่า, ประเภทของเซลล์, สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโต, สภาพแวดล้อมสำหรับการเพาะเลี้ยง, เป็นต้น ในส่วนนี้จะมีข้อมูลที่จำเป็นทั้งหมดสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ B16

จุดสำคัญสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ B16

เวลาการเพิ่มจำนวนประชากรเป็นสองเท่า:

ค่าเฉลี่ยของเวลาที่ใช้ในการเพิ่มจำนวนประชากรเป็นสองเท่าของเซลล์ B16 ประมาณ 24 ชั่วโมง

ติดกันหรือแขวนลอย:

เซลล์ B16 ติดแน่นและเจริญเติบโตเป็นชั้นเดียว

ความหนาแน่นของการหว่านเมล็ด:

แนะนำให้เพาะเลี้ยงเซลล์ B16 ที่ความหนาแน่น 1 ถึง 2 x 10⁴ เซลล์/ซม.² จากนั้นล้างเซลล์ B16 ที่เกาะติดด้วย 1 x PBS และแยกเซลล์ออกจากพื้นผิวโดยใช้สารละลาย Accutase นำเซลล์ไปปั่นเหวี่ยง และนำตะกอนเซลล์ไปแขวนลอยในอาหารเลี้ยงเซลล์ ต่อมา เซลล์เหล่านี้จะถูกนำไปใส่ในขวดใหม่เพื่อการเจริญเติบโต

อาหารเลี้ยงเชื้อ:

เซลล์ B16 ถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) ที่มีเซรั่มจากเลือดวัวตัวเมียที่ตั้งท้อง 10% (FBS) อาหารเลี้ยงเซลล์ควรเปลี่ยนใหม่ 2-3 ครั้งต่อสัปดาห์

เงื่อนไขการเจริญเติบโต:

ตู้อบควบคุมความชื้นพร้อมระบบจ่ายก๊าซ_{คาร์บอนไดออกไซด์} 5% และอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ถูกใช้เพื่อเพาะเลี้ยงเซลล์ไลน์ B16

การเก็บรักษา:

เซลล์เหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำกว่า -150 °C หรือในสถานะไอของไนโตรเจนเหลวเพื่อปกป้องความมีชีวิตของเซลล์

กระบวนการแช่แข็งและตัวกลาง:

CM-1 หรือ CM-ACF freezing medium ใช้สำหรับแช่แข็งเซลล์ B16 โดยใช้กระบวนการแช่แข็งแบบช้า

กระบวนการละลาย

เซลล์ B16 ที่ถูกแช่แข็งจะถูกละลายที่อุณหภูมิ 37 °C ในอ่างน้ำที่มีสารต้านจุลชีพ เซลล์ที่ละลายแล้วสามารถนำไปเพาะเลี้ยงโดยตรงโดยการเทลงในขวดเพาะเลี้ยงที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ นอกจากนี้ เซลล์เหล่านี้สามารถนำไปปั่นเหวี่ยงเพื่อกำจัดส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้ในการแช่แข็ง แล้วจึงนำไปเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่

ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ:

ควรจัดการหรือเก็บรักษาเซลล์ไลน์ B16 ในห้องปฏิบัติการระดับความปลอดภัยทางชีวภาพระดับหนึ่ง

ชั้นเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ที่เรียงตัวกึ่งชิดกันภายใต้กำลังขยาย 10 เท่า และ 20 เท่า

เซลล์ไลน์ B16: ข้อดีและข้อเสีย

เช่นเดียวกับเซลล์ไลน์อื่น ๆ B16 มีส่วนผสมเฉพาะของข้อดีและข้อเสียที่โดดเด่น ข้อดีและข้อเสียที่สำคัญบางประการของเซลล์ไลน์เมลาโนมาชนิดนี้ได้แสดงไว้ในส่วนนี้

ข้อดี

B16 เป็นเครื่องมือในหนูที่มีประสิทธิภาพตัวแรกที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยการแพร่กระจายของมะเร็ง เนื่องจากข้อได้เปรียบที่มันมอบให้ ข้อได้เปรียบบางประการของสายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนังนี้คือ:

ปลูกง่าย

เซลล์ไลน์ B16 สามารถเพาะเลี้ยงได้ง่ายในห้องปฏิบัติการวิจัย และถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาชีววิทยาของเซลล์มะเร็ง เส้นทางสัญญาณ และอื่น ๆ

เติบโตอย่างรวดเร็ว

สายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 แสดงอัตราการเพิ่มจำนวนเซลล์สูง ทำให้เหมาะสำหรับการศึกษาการแบ่งเซลล์และกระบวนการเจริญเติบโต

การก่อให้เกิดเนื้องอก

B16 เป็นสายพันธุ์เซลล์ที่ก่อให้เกิดเนื้องอกและมีคุณสมบัติคล้ายเนื้องอก เช่น การรุกราน การเคลื่อนที่ และการเพิ่มจำนวนเซลล์ สายพันธุ์นี้มีคุณค่าในการศึกษาการก่อตัวของเนื้องอก การลุกลาม และการแพร่กระจายของมะเร็ง

 

ข้อเสีย

ข้อเสียที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ไลน์ B16 ได้แก่:

การขาดความเกี่ยวข้องกับมนุษย์

เนื่องจาก B16 เป็นสายพันธุ์เซลล์เมลาโนมาของหนู ซึ่งอาจไม่สามารถแสดงลักษณะทางชีววิทยาของมะเร็งผิวหนังในมนุษย์ได้อย่างถูกต้อง จึงเป็นข้อจำกัดในการนำผลการวิจัยไปประยุกต์ใช้ในมนุษย์

ความไม่สม่ำเสมอ

เซลล์ B16 มีความหลากหลายทางพันธุกรรมและลักษณะทางฟีโนไทป์ภายในวัฒนธรรมเดียวกัน ซึ่งอาจส่งผลต่อความน่าเชื่อถือและความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์

 

การประยุกต์ใช้เซลล์ B16

เซลล์ไลน์ B16 ถูกใช้อย่างแพร่หลายในงานวิจัยต่าง ๆ การประยุกต์ใช้ที่มีแนวโน้มดีบางประการของเซลล์ไลน์นี้ ได้แก่:

• ชีววิทยาของเนื้องอก: สายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนังในหนูชนิดนี้สามารถก่อให้เกิดเนื้องอกและถูกใช้อย่างแพร่หลายในการศึกษาชีววิทยาของเนื้องอก มีการศึกษาหลายชิ้นที่ดำเนินการเพื่อสำรวจกลไกระดับเซลล์ที่อยู่เบื้องหลังการเจริญเติบโต การเพิ่มจำนวน และการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็ง โดยใช้เซลล์ B16 งานวิจัยที่ดำเนินการในปี 2020 ได้ใช้เซลล์ B16 เพื่อศึกษาบทบาทของ long non-coding RNA, LncRNA MEG3, ในการก่อตัว การเจริญเติบโต และการแพร่กระจายของมะเร็งผิวหนังเมลาโนมา งานวิจัยนี้พบว่า RNA ที่ไม่เข้ารหัสสามารถปรับสมดุลแกน miRNA-21/E-Cadherin เพื่อกระตุ้นเหตุการณ์ระดับเซลล์เหล่านี้ [2] เช่นเดียวกัน งานวิจัยได้ดำเนินการเพื่อศึกษาบทบาทที่เป็นไปได้ของสัญญาณ Notch1 ในการกดภูมิคุ้มกันที่เกิดจากเนื้องอก โดยใช้เซลล์ B16 [3]
• การค้นพบยา: เซลล์ B16 ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบและทดสอบฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาที่เป็นไปได้ของตัวยาที่เป็นผู้สมัคร การศึกษาได้ประเมินผลต้านเนื้องอกของกรดนีโอแกมโบจิก ซึ่งเป็นสารประกอบธรรมชาติ โดยใช้เซลล์ไลน์ B16 ผลการศึกษาพบว่าสารประกอบนี้สามารถปรับเปลี่ยนเส้นทางการส่งสัญญาณ PI3K/Akt/mTOR จนนำไปสู่การตายของเซลล์มะเร็ง [4] การศึกษาอีกชิ้นหนึ่งได้ตรวจสอบฤทธิ์ต้านมะเร็งผิวหนังของจินเสนโนไซด์ อาร์จี3 ซึ่งเป็นสารซาโปนิน โดยใช้เซลล์ไลน์ B16 งานวิจัยนี้เสนอว่าสารประกอบธรรมชาติดังกล่าวออกฤทธิ์ต้านเนื้องอกผ่านการลดการทำงานของเส้นทาง ERK และ Akt [5]

 

5. สิ่งพิมพ์วิจัยที่นำเสนอเซลล์ B16

นี่คือผลงานวิจัยสำคัญบางฉบับที่นำเสนอข้อมูลเกี่ยวกับสายพันธุ์เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

LncRNA MEG3 ส่งเสริมการเจริญเติบโต การแพร่กระจาย และการก่อตัวของมะเร็งผิวหนังเมลาโนมาผ่านการปรับแกน miR-21/E-cadherin

การตีพิมพ์ในวารสาร Cancer Cell International (2020) เสนอว่า RNA ที่ไม่เข้ารหัสยาว MEG3 ช่วยเพิ่มการก่อตัว การเจริญเติบโต และการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 โดยปรับแกน miRNA-21/E-Cadherin

อนุพันธ์ใหม่ของโพซาเรน-MPFC เพิ่มการเกิดเมลานินผ่านการกระตุ้นเส้นทางสัญญาณ p38 MAPK และ PKA ในเซลล์ B16

บทความนี้ได้รับการตีพิมพ์ในวารสาร International Journal of Molecular Medicine ในปี 2018 การศึกษานี้ได้ตรวจสอบผลและกลไกการเกิดเมลานินของอนุพันธ์ของพโซราเลน - 4-เมทิล-6-ฟีนิล-2H-ฟิวโร[3,2-g]โครเมน-2-โอน (MPFC) ในเซลล์ B16 การศึกษาได้เสนอว่าอนุพันธ์นี้ส่งเสริมการสร้างเม็ดสีเมลานินโดยการกระตุ้นการส่งสัญญาณของเซลล์ PKA และ p38 MAPK

การส่งสัญญาณ Notch1 ในเซลล์เมลาโนมาส่งเสริมการกดภูมิคุ้มกันที่เกิดจากเนื้องอกผ่านการเพิ่มระดับของ TGF-β1

งานวิจัยนี้ได้รับการตีพิมพ์ในปี 2018 ในวารสาร Journal of Experimental & Clinical Cancer Research ผลการศึกษาชี้ให้เห็นว่าการกระตุ้นสัญญาณ Notch1 ในเซลล์ B16 อาจป้องกันการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อเนื้องอกโดยการเพิ่มการแสดงออกของยีน TGF-β1

กรดนีโอแกมโบจิกเหนี่ยวนำให้เกิดการตายแบบอะพอพโทซิสของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ผ่านเส้นทางสัญญาณ PI3K/Akt/mTOR

การศึกษานี้ดำเนินการโดย Chunlan Wu และคณะในปี 2020 และตีพิมพ์ในวารสาร Acta Biochimica Polonica งานวิจัยนี้ระบุว่ากรด neogambogic ซึ่งเป็นสารประกอบธรรมชาติ สามารถทำให้เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ตายได้โดยการปรับกระบวนการส่งสัญญาณ PI3K/Akt/mTOR

สารประกอบไอริเดียม (III) ที่มีฤทธิ์แรงในการต้านมะเร็ง กระตุ้นการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสและออโตฟาจีในเซลล์ B16 ผ่านการยับยั้งเส้นทาง AKT/mTOR

งานวิจัยฉบับนี้ได้รับการตีพิมพ์ในวารสาร European Journal of Medicinal Chemistry ในปี 2018 ในการศึกษานี้ นักวิจัยได้ตรวจสอบฤทธิ์ต้านมะเร็งของสารประกอบ ไอริเดียม (III) คอมเพล็กซ์ โดยใช้เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

Ailanthone กระตุ้นการหยุดวงจรเซลล์และการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 และ A375

การศึกษานี้เสนอว่าสารชีวภาพจากพืชที่ชื่อว่า Ailanthone มีศักยภาพในการต้านมะเร็ง เนื่องจากสามารถเหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสและยับยั้งการแบ่งเซลล์ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 และ A375 บทความนี้ได้รับการตีพิมพ์ในวารสาร Biomolecules ในปี 2019

ทรัพยากรสำหรับสายเซลล์ B16: โปรโตคอล, วิดีโอ, และอื่น ๆ

มีทรัพยากรจำกัดเกี่ยวกับสายเซลล์ B16 ที่อธิบายถึงวิธีการเพาะเลี้ยงและการถ่ายโอนยีนในเซลล์นี้

• การเพาะเลี้ยงเซลล์เมลาโนมา: วิดีโอนี้ให้คำแนะนำที่มีคุณค่าสำหรับการเพาะเลี้ยงสายพันธุ์เซลล์เมลาโนมา
• การเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์: วิดีโอนี้อธิบายขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์ทั่วไป
• การถ่ายยีนในเซลล์สายพันธุ์ B16F10: วิดีโอนี้อธิบายขั้นตอนการถ่ายยีนสำหรับสายย่อยของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ซึ่งสามารถช่วยให้คุณปรับขั้นตอนการถ่ายยีนให้เหมาะสมกับเซลล์ B16 ได้

ต่อไปนี้คือโปรโตคอลการเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับเซลล์ B16 

• การเพาะเลี้ยงเซลล์ B16: เว็บไซต์นี้มีข้อมูลที่จำเป็นทั้งหมดสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ B16 รวมถึงอาหารเลี้ยงเชื้อ การเพาะเลี้ยงต่อรุ่น การละลายน้ำแข็ง และการแช่แข็งเซลล์

เอกสารอ้างอิง

1. Danciu, C., และคณะ, พฤติกรรมของเซลล์มะเร็งผิวหนังเมลาโนมาชนิด B 16 สายพันธุ์ย่อย 4 ชนิด: ผิวหนังหนู C57 BL/6J. วารสารนานาชาติด้านพยาธิวิทยาระดับทดลอง, 2015. 96(2): หน้า 73-80.
2. Wu, L., และคณะ, LncRNA MEG3 ส่งเสริมการเจริญเติบโต การแพร่กระจาย และการก่อตัวของเมลาโนมาผ่านการปรับแกน miR-21/E-cadherin. Cancer cell international, 2020. 20: หน้า 1-14.
3. หยาง, ซี., และคณะ, การส่งสัญญาณ Notch1 ในเซลล์เมลาโนมาส่งเสริมการกดภูมิคุ้มกันที่เกิดจากเนื้องอกผ่านการเพิ่มระดับของ TGF-β1. วารสารการวิจัยมะเร็งเชิงทดลองและคลินิก, 2018. 37(1): หน้า 1-13.
4. อู๋, ซี., และคณะ, กรดนีโอแกมโบจิกเหนี่ยวนำให้เกิดการตายแบบอะพอพโทซิสของเซลล์เมลาโนมา B16 ผ่านทางเส้นทางสัญญาณ PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): หน้า 197-202.
5. Meng, L., และคณะ, กิจกรรมต้านเนื้องอกของจินเซโนไซด์ Rg3 ในมะเร็งผิวหนังเมลาโนมาผ่านการลดระดับของเส้นทาง ERK และ Akt. วารสารนานาชาติด้านมะเร็งวิทยา, 2019. 54(6): หน้า 2069-2079.