บทนำ

เซลล์ Ba/F3, ซึ่งยังเป็นที่รู้จักด้วยชื่ออื่น ๆ เช่น BA/F3, BaF3, BAF3 และ Baf3 (Cellosaurus accession CVCL_0161), เป็นสายเซลล์ pro-B ของหนูที่ขึ้นอยู่กับอินเตอร์ลิวคิน-3 (IL-3) ซึ่งได้มาจากไขกระดูก สายเซลล์นี้ถูกอธิบายครั้งแรกโดย Palacios และ Steinmetz ในปี 1985 ในกลุ่มของโคลนไขกระดูกที่เพิ่มจำนวนอย่างต่อเนื่องและขึ้นอยู่กับ IL-3 ซึ่งมีความเป็นเครื่องหมายสายพันธุ์เซลล์ B คือ B-220 และรักษาโครงสร้างยีนอิมมูโนโกลบูลินไว้ในรูปแบบของสายพันธุ์สืบพันธุ์ ^[19] ตามรายงานเดิม สายพันธุ์นี้ถูกระบุว่ามีต้นกำเนิดจากหนู BALB/c แต่ผลการวิเคราะห์ด้วย SNP array ในขั้นต่อไปได้ยืนยันว่า สายพันธุ์นี้แท้จริงแล้วมีต้นกำเนิดจากหนู C3H ^[1] ตั้งแต่ถูกพัฒนาขึ้น เซลล์ Ba/F3 ได้กลายเป็นหนึ่งในระบบแบบจำลองที่ได้รับการใช้อย่างแพร่หลายที่สุดในการวิจัยสัญญาณการสร้างเลือดและการค้นหายาสำหรับโรคมะเร็ง ความพึ่งพาอย่างเคร่งครัดต่อ IL-3 เพื่อการอยู่รอดและการเพิ่มจำนวน ทำให้เซลล์เหล่านี้เป็นแพลตฟอร์มที่สะอาดเป็นพิเศษ: การนำ kinase ที่ก่อมะเร็งหรือโปรตีนฟิวชันเข้ามาจะทำให้เซลล์เหล่านี้ไม่พึ่งพาปัจจัยอีกต่อไป ซึ่งให้ผลลัพธ์ที่ทรงพลังและสามารถวัดได้ นักวิจัยมักใช้คุณสมบัตินี้เป็นประจำเพื่อวิเคราะห์ลักษณะของโปรตีนฟิวชัน BCR-ABL, การกลายพันธุ์ของ FLT3, การฟิวชันของ JAK2 และยีนคินาสก่อมะเร็งอื่น ๆ ที่มีความสำคัญทางคลินิกอีกมากมาย รวมถึงเพื่อวิเคราะห์โปรไฟล์ของสารยับยั้งคินาสโมเลกุลเล็กในรูปแบบการวิเคราะห์แบบ high-throughput

จุดสำคัญที่ควรจดจำ

• Ba/F3 เป็นสายเซลล์โปร-บีของหนูที่ขึ้นอยู่กับ IL-3 ซึ่งได้มาจากไขกระดูกของหนูสายพันธุ์ C3H และถูกจัดทะเบียนใน Cellosaurus ด้วยรหัส CVCL_0161.
• การถอน IL-3 เป็นวิธีการคัดกรองที่เข้มงวด: เซลล์ต้นแบบจะตาย ในขณะที่เซลล์ที่แสดงออกของไคเนสก่อมะเร็งที่ทำงานได้ — หรือโครงสร้างใดๆ ที่ส่งสัญญาณการเจริญเติบโตอย่างต่อเนื่อง — จะรอดชีวิตและเพิ่มจำนวน
• สายเซลล์นี้ได้รับการใช้อย่างกว้างขวางในการศึกษาโปรตีนฟิวชัน BCR-ABL การกลายพันธุ์ของ FLT3 ระบบส่งสัญญาณ JAK–STAT และชีววิทยาของตัวรับไซโตไคน์
• เซลล์ Ba/F3 กำลังถูกนำมาใช้มากขึ้นเรื่อยๆ ในการคัดกรองสารยับยั้งคินาสแบบความเร็วสูง ซึ่งทำให้เซลล์เหล่านี้กลายเป็นพื้นฐานสำคัญในการค้นคว้ายาต้านมะเร็งแบบมุ่งเป้า ^[2]
• ได้สร้างสายเซลล์อนุพันธ์หลายร้อยสายที่มีกลายพันธุ์ก่อมะเร็งที่กำหนดไว้อย่างชัดเจนจาก Ba/F3 ซึ่งครอบคลุม EGFR, ALK, ROS1, RET, NTRK, FLT3 และเป้าหมายอื่น ๆ อีกมากมายที่มีความสำคัญทางคลินิก

Ba/F3 คืออะไร?

Ba/F3 เป็นสายเซลล์โปร-บีของหนูที่ขึ้นอยู่กับปัจจัย ซึ่งถูกสร้างขึ้นจากไขกระดูกของหนู C3H; ข้อมูลเกี่ยวกับเพศและอายุของผู้บริจาคไม่ถูกบันทึกไว้ในข้อมูล Cellosaurus สำหรับสายเซลล์นี้ สายเซลล์ต้นแบบไม่มีการกลายพันธุ์ของคินาสที่กระตุ้นที่ทราบ และจำเป็นต้องมี IL-3 จากภายนอกเพื่อความอยู่รอด เวลาเพิ่มจำนวนเซลล์เป็นสองเท่า (doubling time) ของสายเซลล์นี้อยู่ที่ประมาณ 20 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงมาตรฐาน ลักษณะสำคัญที่สุดของสายเซลล์นี้คือความพึ่งพา IL-3 อย่างเคร่งครัด ซึ่งหมายความว่า การดัดแปลงทางพันธุกรรมใดๆ ที่ทำให้เซลล์สามารถเติบโตได้โดยไม่พึ่งพาปัจจัยสามารถตรวจพบได้อย่างรวดเร็วและชัดเจน คุณสมบัตินี้ เมื่อรวมกับการไม่มีกลายพันธุ์ของไคเนสภายในที่อาจก่อให้เกิดความสับสน ได้ทำให้เซลล์ Ba/F3 กลายเป็นเครื่องมือที่ขาดไม่ได้สำหรับการวิเคราะห์ศักยภาพการก่อมะเร็งของฟิวชันไคเนส การกลายพันธุ์จุด และโมเลกุลส่งสัญญาณที่ทำงานอย่างต่อเนื่อง ในชีววิทยาของมะเร็งเม็ดเลือดและมะเร็งเนื้อแข็ง ควรสังเกตว่า การไม่มีข้อมูลการระบุการกลายพันธุ์ ไม่เท่ากับการมีพื้นหลังทางพันธุกรรมที่บริสุทธิ์: Cellosaurus ยังบันทึกข้อมูลความแปรผันที่ได้จาก SNP array สำหรับสายเซลล์นี้ด้วย

การวิเคราะห์ด้วย SNP array ได้แก้ไขความเข้าใจผิดที่คงอยู่มานานเกี่ยวกับต้นกำเนิดของสายพันธุ์นี้ ในวรรณกรรมช่วงต้นได้ระบุว่า Ba/F3 มีต้นกำเนิดจากหนู BALB/c แต่การวิเคราะห์จีโนมได้ยืนยันว่าต้นกำเนิดของมันคือ C3H. ^[1] ในจำนวน 99 สายเซลล์หนูที่ได้รับการตรวจสอบในการศึกษานั้น Ba/F3 เป็นสายเซลล์เดียวที่มีพื้นหลังทางพันธุกรรมไม่ตรงกับสายพันธุ์ต้นกำเนิดที่รายงานไว้; ความไม่สอดคล้องนี้ได้รับการยืนยันอย่างอิสระโดย RIKEN ซึ่งเป็นผู้จัดจำหน่ายสายเซลล์ดังกล่าว และการเปรียบเทียบทางสัณฐานวิทยา กับสายเซลล์อื่น ๆ ที่มาจาก C3H ชี้ให้เห็นว่า Ba/F3 เป็นสายเซลล์ที่แยกต่างหาก ไม่ใช่ผลจากการปนเปื้อนข้าม ผลการค้นพบนี้เน้นย้ำถึงความสำคัญของการตรวจสอบความถูกต้องของสายเซลล์อย่างสม่ำเสมอ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับสายเซลล์หนู ซึ่งการวิเคราะห์โปรไฟล์ STR เพียงอย่างเดียวอาจไม่เพียงพอที่จะแยกแยะสายพันธุ์ที่เพาะพันธุ์ในสายเลือดเดียวกัน นักวิจัยที่ใช้ Ba/F3 ควรอ้างอิงหมายเลขการเข้าถึง Cellosaurus CVCL_0161 เพื่อรับรองการระบุตัวตนที่ชัดเจนในสิ่งพิมพ์

ข้อมูลเกี่ยวกับการเพาะเลี้ยงเซลล์

ข้อดีของเซลล์ Ba/F3

ข้อได้เปรียบที่สำคัญที่สุดของเซลล์ Ba/F3 คือกลไกการอยู่รอดแบบสองทางที่ขึ้นอยู่กับ IL-3 เมื่อไม่มี IL-3 เซลล์ Ba/F3 ต้นแบบจะเกิดการตายแบบอะพอพโทซิสอย่างรวดเร็ว การนำ kinase ที่ก่อมะเร็งหรือโปรตีนฟิวชันเข้ามาช่วยป้องกันเซลล์จากการตาย ทำให้สามารถคัดเลือกโคลนที่ผ่านการแปลงสภาพอย่างเสถียรได้อย่างง่ายดาย โดยไม่ต้องใช้โครงสร้างรีพอร์ตเตอร์ที่ซับซ้อน คุณสมบัตินี้ได้ถูกนำไปใช้ในรูปแบบการทดสอบต่าง ๆ มากมาย ตั้งแต่การทดสอบการอยู่รอดของโคโลนีแบบคลาสสิก ไปจนถึงการคัดกรองการเพิ่มจำนวนเซลล์แบบ high-throughput สมัยใหม่ เพื่อวิเคราะห์โปรไฟล์ของสารประกอบ ^[2] ความเรียบง่ายและความน่าเชื่อถือของกระบวนการอ่านผลทำให้การทดสอบที่ใช้ Ba/F3 เป็นระบบแรกที่ได้รับความนิยมอย่างแพร่หลายในการจัดอันดับความแรงของสารยับยั้งคินาส แม้ว่าค่าความแรงแบบสัมบูรณ์จะยังคงขึ้นอยู่กับวิธีการทดสอบและห้องปฏิบัติการ และควรเปรียบเทียบระหว่างการศึกษาต่าง ๆ ด้วยความระมัดระวัง ^[21]

เซลล์ Ba/F3 ยังมีความยืดหยุ่นทางพันธุกรรมและสามารถนำยีนเข้าไปได้ทั้งทางทรานส์เฟกชันและทรานส์ดิวซ์ได้อย่างง่ายดาย การส่งมอบโครงสร้างการแสดงออกด้วยวิธีเรโทรไวรัส เลนติไวรัส และอิเล็กโทรโพเรชัน ล้วนให้ผลในการสร้างสายย่อยที่แสดงออกอย่างเสถียรได้อย่างมีประสิทธิภาพ สิ่งนี้ทำให้สามารถสร้างสายย่อยที่สืบทอดได้หลายร้อยสาย ซึ่งพกพาการกลายพันธุ์ที่มีความสำคัญทางคลินิกในเป้าหมายต่าง ๆ เช่น EGFR, FLT3, BCR-ABL, EML4-ALK และ RET รวมถึงเป้าหมายอื่น ๆ อีกมากมาย การไม่มีมิวเทชันของคินาส์ภายในตัวแม่ที่อาจก่อให้เกิดความสับสน ทำให้มั่นใจได้ว่าการตอบสนองทางฟีโนไทป์นั้นเกิดจากทรานสเจนที่ถูกนำเข้ามาโดยเฉพาะ นอกจากนี้ เวลาการเพิ่มจำนวนเซลล์ประมาณ 20 ชั่วโมงยังช่วยสนับสนุนการดำเนินการทดลองได้อย่างรวดเร็ว ซึ่งทำให้ระยะเวลาการทดสอบสั้นลงอย่างมากเมื่อเทียบกับการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิที่เติบโตช้ากว่า

แพลตฟอร์ม Ba/F3 ได้พิสูจน์แล้วว่าเหมาะสมอย่างพิเศษสำหรับการค้นพบลำดับสัญญาณ Kojima และ Kitamura ได้ใช้โครงสร้างตัวรับไซโตไคน์ที่ทำงานอย่างต่อเนื่องเพื่อเปลี่ยนทิศทางการพึ่งพาการเจริญเติบโตของ Ba/F3 ให้มุ่งไปที่การตั้งตำแหน่งบนผิวเซลล์ของโปรตีนที่มีเปปไทด์สัญญาณ ทำให้สามารถทำการคัดกรอง cDNA ในระดับใหญ่เพื่อระบุผลิตภัณฑ์ยีนที่ถูกหลั่งออกมาและที่ถูกกำหนดให้อยู่บนเยื่อหุ้มเซลล์ ^[3] การประยุกต์ใช้ที่สร้างสรรค์นี้แสดงให้เห็นว่า การที่เซลล์ Ba/F3 ขึ้นอยู่กับ IL-3 สามารถนำมาใช้ประโยชน์ได้มากกว่างานวิจัยเกี่ยวกับยีนก่อมะเร็งแบบไคเนสทั่วไป ซึ่งทำให้สายเซลล์นี้กลายเป็นแพลตฟอร์มการคัดกรองทางพันธุกรรมที่มีความหลากหลาย

ข้อจำกัดของเซลล์ Ba/F3

แม้จะมีข้อดีมากมาย แต่เซลล์ Ba/F3 ก็มีข้อจำกัดทางชีวภาพโดยธรรมชาติ ซึ่งต้องนำมาพิจารณาเมื่อตีความข้อมูลจากการทดลอง เนื่องจากเป็นสายเซลล์ pro-B ของหนู จึงขาดตัวปรับสัญญาณและตัวรับร่วมหลายชนิดที่มีอยู่ในเซลล์มะเร็งของมนุษย์ ค่าความแรงของสารยับยั้งและปฏิกิริยาการส่งสัญญาณในขั้นตอนต่อไปที่สังเกตได้ในเซลล์ Ba/F3 อาจไม่สะท้อนกิจกรรมในเซลล์มะเร็งมนุษย์ต้นแบบหรือวัสดุที่สกัดจากผู้ป่วยได้อย่างแม่นยำ ตัวอย่างเช่น นักวิจัยที่ศึกษาความต้านทานต่อการรักษาแบบมุ่งเป้าสำหรับมะเร็งต่อมน้ำเหลืองชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมาในปอด ต้องตรวจสอบความถูกต้องของผลการวิจัยที่ใช้เซลล์ Ba/F3 เป็นพื้นฐานในแบบจำลองเซลล์มนุษย์ที่มีความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยามากขึ้น ก่อนที่จะสรุปผลทางคลินิก

พื้นหลังทางพันธุกรรมของสายพันธุ์นี้ยังเคยถูกอธิบายผิดมาตลอดหลายทศวรรษ โดย Ba/F3 เคยถูกระบุว่ามีต้นกำเนิดจาก BALB/c แต่ผลการวิเคราะห์ด้วย SNP array แสดงให้เห็นว่าสายพันธุ์นี้มีต้นกำเนิดจากหนู C3H ^[1] การศึกษาเดียวกันนี้พบหลักฐานของภาวะไม่สมดุลโครโมโซม (aneuploidy) ในประมาณ 42% ของสายเซลล์หนูที่ได้รับการตรวจสอบ ซึ่งรวมถึงส่วนสำคัญของสายเซลล์ที่มาจากเนื้อเยื่อปกติมากกว่าเนื้อเยื่อมะเร็ง; สายเซลล์ Ba/F3 เองถูกระบุว่าเป็นกรณีการระบุผิดมากกว่าการเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนา แต่ผลการค้นพบโดยทั่วไปนี้แสดงให้เห็นว่าความเปลี่ยนแปลงของแบบแผนโครโมโซม (karyotypic drift) สามารถสะสมได้ง่ายเพียงใดในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ ความไม่เสถียรดังกล่าวเมื่อผ่านขั้นตอนการเพาะเลี้ยงหลายครั้ง อาจส่งผลต่อผลลัพธ์การส่งสัญญาณ การวัดความไวต่อยา และความสามารถในการทำซ้ำของลักษณะทางฟีโนไทป์ที่เปลี่ยนแปลงไป ดังนั้น นักวิจัยควรทำงานในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงที่น้อยครั้ง และตรวจสอบความถูกต้องของสต็อกเซลล์อย่างสม่ำเสมอ

สุดท้ายนี้ เซลล์ Ba/F3 ไม่สามารถจำลองสภาพแวดล้อมไมโครของเนื้องอกอย่างครบถ้วน หรือปฏิสัมพันธ์ของเนื้อเยื่อสโตรมาที่พบในโรคมะเร็งทางโลหิตวิทยา นอกจากนี้ เซลล์เหล่านี้ยังขาดการแสดงออกตามธรรมชาติขององค์ประกอบสัญญาณหลายชนิดในมนุษย์ ซึ่งหมายความว่าปฏิสัมพันธ์ของโค-รีเซพเตอร์ที่สำคัญต่อการทำงานของยีนก่อมะเร็งอาจไม่มีอยู่หรือแตกต่างไป การศึกษาเกี่ยวกับตัวรับไซโตไคน์ที่ซับซ้อนซึ่งประกอบด้วยหลายซับยูนิต หรือตัวรับที่ต้องการสัญญาณที่ขึ้นอยู่กับการไกลโคซิเลชัน อาจจำเป็นต้องใช้ระบบเซลล์มนุษย์เสริมเพื่อได้ข้อสรุปที่มีความเป็นจริงทางชีววิทยา แม้จะมีข้อจำกัดเหล่านี้ เซลล์ Ba/F3 ยังคงเป็นเครื่องมือหลักที่ทรงพลังและได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางในชีววิทยาของไคเนส

ดูข้อมูลจำเพาะทั้งหมดและสั่งซื้อ

การใช้งาน

การค้นพบยาที่มุ่งเป้าไปที่ไคเนสและการคัดกรองยีนก่อมะเร็ง

เซลล์ Ba/F3 ได้กลายเป็นแพลตฟอร์มเซลล์หลักสำหรับการค้นพบยาที่มุ่งเป้าไปที่คินาส Warmuth และเพื่อนร่วมงานได้นำเสนอการประเมินอย่างละเอียดเกี่ยวกับระบบ Ba/F3 สำหรับวัตถุประสงค์นี้ โดยอธิบายว่าวิธีการทดสอบความอิสระจาก IL-3 สามารถปรับใช้กับรูปแบบการวิเคราะห์แบบผ่านปริมาณสูง (high-throughput) เพื่อประเมินทั้งศักยภาพก่อมะเร็งของการกลายพันธุ์ของคินาส์ และความสามารถของสารยับยั้งคินาส์โมเลกุลเล็กในการย้อนกลับการเจริญเติบโตที่ไม่ขึ้นอยู่กับปัจจัย ^[2]บทความทบทวนนี้เน้นย้ำว่า เซลล์ Ba/F3 สามารถรองรับคินาสก่อมะเร็งได้หลากหลายอย่างน่าทึ่ง ทำให้มันกลายเป็นแพลตฟอร์มสากลสำหรับการวิเคราะห์เบื้องต้นของตัวแปรคิโนมที่เกี่ยวข้องกับมะเร็ง ก่อนที่จะดำเนินการต่อสู่โมเดลเซลล์มนุษย์ที่ซับซ้อนยิ่งขึ้น

กับดักลำดับสัญญาณที่พัฒนาโดย Kojima และ Kitamura ได้แสดงให้เห็นว่าเซลล์ Ba/F3 สามารถใช้ได้ไม่เพียงแต่ในการศึกษาออนโคจีนของไคเนส แต่ยังสำหรับการคัดกรองไลบรารี cDNA แบบฟังก์ชันนัลด้วย ^[3]โดยการเชื่อมต่อตัวรับไซโตไคน์ที่ทำงานอย่างต่อเนื่องกับฟังก์ชันของสัญญาณเปปไทด์ การทดลองนำร่องเพียงครั้งเดียวได้ให้ผลลัพธ์เป็นโคลนที่รู้จักมาก่อน 150 โคลน — ซึ่งทั้งหมดเข้ารหัสโปรตีนที่ถูกหลั่งหรืออยู่บนผิวเซลล์ — พร้อมกับโคลน cDNA ใหม่ 48 โคลน รวมถึงโปรตีนเมมเบรนประเภท II ที่เคยหลุดรอดจากกลยุทธ์กับดักลำดับสัญญาณก่อนหน้านี้ วิธีการนี้แสดงให้เห็นถึงความสามารถในการขยายขนาดของแพลตฟอร์ม Ba/F3 ที่เกินกว่าการตรวจสอบเป้าหมายยาแบบดั้งเดิม

ความหลากหลายที่สุดยอดของสายพันธุ์ Ba/F3 ที่ถูกจัดหมวดหมู่ไว้ใน Cellosaurus — ซึ่งครอบคลุมตัวแปร EGFR หลายร้อยชนิด การรวมตัว ALK การจัดเรียงใหม่ของ RET การรวมตัว NTRK และการกลายพันธุ์ที่ก่อให้เกิดความต้านทาน — เน้นย้ำว่าสายพันธุ์ Ba/F3 ต้นแบบได้กลายเป็นโครงสร้างพื้นฐานสำหรับการวิจัยด้านมะเร็งแบบแม่นยำ แต่ละสายพันธุ์ที่พัฒนาขึ้นยังคงรักษาพื้นหลังที่สะอาดและขึ้นอยู่กับ IL-3 ไว้ พร้อมทั้งเพิ่มตัวแปรทางพันธุกรรมที่กำหนดไว้อย่างชัดเจนเพียงตัวเดียว ซึ่งช่วยให้สามารถศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างและกิจกรรม (SAR) อย่างเป็นระบบในระดับเซลล์ได้

การกลายพันธุ์ของ FLT3 และโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเฉียบพลันชนิดไมอีลอยด์

หนึ่งในแอปพลิเคชันที่มีผลกระทบมากที่สุดของเซลล์ Ba/F3 คือการวิเคราะห์ลักษณะการกลายพันธุ์ของ FLT3 (fms-like tyrosine kinase 3) ในโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดไมอีลอยด์เฉียบพลัน (AML) การซ้ำซ้อนแบบแทนเดมภายในของ FLT3 เป็นหนึ่งในความผิดปกติก่อมะเร็งที่พบบ่อยที่สุดใน AML โดยรายงานว่าพบในประมาณ 20% ถึง 30% ของกรณี ขึ้นอยู่กับกลุ่มตัวอย่างและวิธีการตรวจหา ^[4][20]Hayakawa และเพื่อนร่วมงานได้แสดงให้เห็นว่า FLT3 ที่เกิดการคัดลอกแบบแทนเดม ซึ่งถูกนำเข้าสู่สองสายเซลล์ที่พึ่งพา IL-3 คือ 32D และ Ba/F3 จะกระตุ้น STAT5 และ MAP kinase อย่างต่อเนื่อง และทำให้เซลล์สามารถเจริญเติบโตได้อย่างอิสระ การเติบโตที่อิสระจาก IL-3 ได้ ในขณะที่ FLT3 แบบไวลด์ไทป์สนับสนุนการเพิ่มจำนวนเซลล์ได้เพียงเล็กน้อย แม้ภายใต้การกระตุ้นด้วยลิแกนด์อย่างต่อเนื่อง การศึกษาสำคัญนี้ได้กำหนดให้เซลล์ Ba/F3 เป็นระบบทดสอบการทำงานหลักสำหรับการตรวจสอบการกลายพันธุ์ของ FLT3 และยังคงเป็นมาตรฐานทางวิธีการสำหรับสาขานี้

งานวิจัยต่อมาได้พัฒนาต่อจากพื้นฐานนี้อย่างกว้างขวาง การศึกษาเกี่ยวกับการฟุโคซิเลชันของแกนกลางแสดงให้เห็นว่า การใช้ CRISPR/Cas9 เพื่อปิดการทำงานของยีน Fut8 ในเซลล์ Ba/F3 ที่แสดง FLT3 แบบไวลด์ไทป์ เพียงพอที่จะกระตุ้นการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่ไม่ขึ้นอยู่กับ IL-3 — ซึ่งเป็นผลที่ไม่พบในเซลล์ต้นแบบ — พร้อมกับการเพิ่มขึ้นของการฟอสโฟรีเลชันไทโรซีนและการกระตุ้น STAT5, AKT และ ERK รวมถึงการรวมตัวเป็นไดเมอร์ของ FLT3 ที่ไม่ขึ้นกับลิแกนด์ ซึ่งเปิดเผยชั้นการควบคุมผ่านการไกลโคซิเลชันที่ยังไม่เคยได้รับการตระหนักมาก่อนสำหรับตัวรับนี้ ความต้านทานต่อยาต้าน FLT3 อย่าง gilteritinib ยังได้รับการศึกษาในแบบจำลอง Ba/F3 FLT3-ITD ซึ่งความต้านทานที่ความเข้มข้นของยาที่สามารถบรรลุได้ในทางคลินิกมักต้องการการกลายพันธุ์ทุติยภูมิหลายครั้ง โดยหลายการกลายพันธุ์ในจำนวนนั้นยังไม่เคยมีรายงานมาก่อน ^[21]งานวิจัยเดียวกันนี้ได้ประเมินอย่างเป็นระบบถึงจุดแข็งและข้อจำกัดของแบบจำลอง Ba/F3 FLT3-ITD โดยชี้ให้เห็นว่า แม้แพลตฟอร์มนี้จะเหมาะสมสำหรับการระบุและจัดอันดับการกลายพันธุ์ที่ก่อให้เกิดความต้านทาน แต่ไม่สามารถจำลองสภาพแวดล้อมที่ซับซ้อนของไขกระดูกซึ่งมีบทบาทสำคัญในการกำหนดความต้านทานในผู้ป่วยได้

ชีววิทยาของ BCR-ABL และโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดไมอีลอยด์เรื้อรัง

เซลล์ Ba/F3 ที่ถูกทรานส์เฟกต์ด้วยโปรตีนฟิวชัน BCR-ABL มีบทบาทสำคัญในการเข้าใจชีววิทยาโมเลกุลของโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวไมอีลอยด์เรื้อรัง (CML) Canitrot และเพื่อนร่วมงานได้ใช้เซลล์ Ba/F3 ที่แสดงไอโซฟอร์ม p190 และ p210 ของ BCR-ABL เพื่อแสดงให้เห็นว่า BCR-ABL สร้างฟีโนไทป์มิวเทเตอร์ ซึ่งเพิ่มความถี่ของการกลายพันธุ์แบบสุ่มขึ้น 3 ถึง 5 เท่า เมื่อเทียบกับเซลล์ต้นแบบ และว่าความไม่เสถียรทางจีโนมนี้เกี่ยวข้องกับการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ DNA polymerase beta ^[6]ผลการวิจัยนี้ได้ชี้ให้เห็นกลไกที่ BCR-ABL อาจเป็นตัวขับเคลื่อนการก้าวหน้าของโรคจากระยะเรื้อรังของ CML ไปสู่โรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดไมอีลอยด์เฉียบพลัน

โปรตีนอะแดปเตอร์ CRKL ซึ่งเป็นหนึ่งในโปรตีนไทโรซีนฟอสโฟโปรตีนหลักในนิวโทรฟิลที่มีภาวะลิวคีเมียจากผู้ป่วย CML ได้รับการศึกษาในเซลล์ Ba/F3 โดย Uemura และคณะ ^[7]เซลล์ที่แสดงออก CRKL แบบเต็มความยาวอย่างเกินปกติ แสดงการยึดติดกับไฟโบรเนคตินที่เพิ่มขึ้นและรูปร่างที่เปลี่ยนแปลงบนพื้นผิวที่เคลือบด้วยไฟโบรเนคติน ในขณะที่มิวแทนต์ที่ขาดโดเมน SH2 หรือโดเมน SH3 ปลาย N ไม่แสดงลักษณะดังกล่าว — ซึ่งบ่งชี้ว่าโดเมนทั้งสองจำเป็นต่อผลลัพธ์นี้ การยึดติดถูกยับยั้งโดยแอนติบอดีต่อเบต้า1 อินทิกริน แม้ว่าการแสดงออกเกินของ CRKL จะไม่เปลี่ยนแปลงการแสดงออกของเบต้า1 อินทิกรินบนพื้นผิวเซลล์ หรือกระตุ้นให้เอพิโทปการกระตุ้นของมันเกิดขึ้นเองตามธรรมชาติ การทดลองเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CRKL มีส่วนร่วมในเส้นทางการส่งสัญญาณที่ควบคุมการยึดติดที่อาศัยอินทิกริน ซึ่งอยู่ด้านล่างของ BCR-ABL

โดยรวมแล้ว การศึกษา BCR-ABL เหล่านี้เป็นตัวอย่างที่ชัดเจนว่าเซลล์ Ba/F3 ช่วยให้สามารถวิเคราะห์สัญญาณที่ถูกขับเคลื่อนโดยยีนก่อมะเร็งได้อย่างชัดเจน โดยการขจัดความซับซ้อนของกิจกรรมไคเนสภายในเซลล์ แพลตฟอร์มนี้ยังคงสนับสนุนการวิเคราะห์ลักษณะของกลายพันธุ์ที่ก่อให้เกิดความต้านทานต่อสารยับยั้ง BCR-ABL โดยปัจจุบันมีสายพันธุ์ Ba/F3 BCR-ABL และสายพันธุ์อนุพันธ์ BCR-ABL-T315I ที่ได้รับการพัฒนาโดยเฉพาะ เพื่อใช้ในการวิเคราะห์โปรไฟล์สารยับยั้งโดยตรงในบริบทของจีโนไทป์ความต้านทานที่มีความเกี่ยวข้องทางคลินิก

เส้นทางสัญญาณ JAK–STAT

เซลล์ Ba/F3 ได้ทำหน้าที่เป็นแบบจำลองหลักในการวิเคราะห์ว่าเหตุการณ์การส่งสัญญาณใดที่อยู่ด้านล่างของตัวรับไซโตไคน์นั้นจำเป็นต่อการเจริญเติบโตจริง ๆ Liu และเพื่อนร่วมงานได้สร้างโมเลกุลคิเมรา (beta/JAK2) ซึ่งประกอบด้วยส่วนนอกเซลล์และส่วนข้ามเยื่อหุ้มเซลล์ของ betac ที่ถูกหลอมรวมกับ JAK2 และแสดงออกในเซลล์ Ba/F3 ^[8]โมเลกุลคิเมรานี้ถูกฟอสโฟรีเลตอย่างต่อเนื่อง และเพียงพอที่จะขับเคลื่อนการอยู่รอดและการเพิ่มจำนวนเซลล์โดยไม่พึ่งพา IL-3 ที่น่าสังเกตคือ STAT5, Shc และ SHP-2 ไม่ถูกฟอสโฟรีเลตในเซลล์เหล่านี้ และกิจกรรมของโปรโมเตอร์เบตา-เคซีนและ c-fos ไม่เพิ่มขึ้น ในขณะที่การถอดรหัส c-myc ถูกกระตุ้นอย่างต่อเนื่อง ผู้วิจัยสรุปว่า การกระตุ้น JAK2 เพียงอย่างเดียวก็เพียงพอสำหรับการอยู่รอดและการเพิ่มจำนวนเซลล์ และว่าการกระตุ้น STAT5 และ MAP kinase ไม่จำเป็นสำหรับผลลัพธ์เฉพาะเหล่านี้ — ซึ่งเป็นข้อเตือนที่มีประโยชน์ว่าการเติบโตที่ไม่ขึ้นอยู่กับปัจจัยในเซลล์ Ba/F3 ไม่จำเป็นต้องบ่งชี้ถึงการกระตุ้น STAT เสมอไป

บทบาทของ STAT5 ในระบบส่งสัญญาณ IFN-alpha ได้ถูกศึกษาในเซลล์ Ba/F3 โดย Jaster และคณะ ซึ่งแสดงให้เห็นว่า IFN-alpha กระตุ้นการจับกับ DNA ของ STAT5A และ STAT5B แต่ IL-3 เป็นตัวกระตุ้นที่มีประสิทธิภาพสูงกว่ามากสำหรับทั้งสองไอโซฟอร์ม ^[9]การกลายพันธุ์ JAK2 แบบ dominant-negative ได้ยับยั้งการกระตุ้น STAT5 ที่เกิดจาก IL-3 แต่ไม่ยับยั้งการกระตุ้น STAT5 ที่เกิดจาก IFN-alpha ซึ่งแสดงให้เห็นว่าไซโตไคน์ทั้งสองชนิดนี้ใช้กลไกต้นทางที่อิสระกันเพื่อรวมตัวกันที่ปัจจัยการถอดรหัสเดียวกัน; อย่างไรก็ตาม ผู้เขียนได้สรุปว่า STAT5 ไม่เป็นปัจจัยสำคัญสำหรับการส่งสัญญาณ IFN-alpha ในระบบนี้

การกระตุ้น JAK–STAT แบบคงที่ได้รับการจำลองในเซลล์ Ba/F3 โดยใช้โปรตีนฟิวชัน TEL–JAK2 ซึ่งเป็นฟิวชันก่อมะเร็งที่เกี่ยวข้องกับโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดลิมโฟบลาสติกเฉียบพลันของเซลล์ T Ho และเพื่อนร่วมงานได้แสดงให้เห็นว่า การรวมโดเมนปลายของ TEL เข้ากับโดเมนไคเนส JAK2 ที่ทำงานได้ (JH1) ทำให้เซลล์ Ba/F3 กลายเป็นเซลล์ที่ไม่พึ่งพาปัจจัย ในขณะที่การรวมกับโดเมนไคเนสเทียม (JH2) หรือโดเมน JH1 ที่ไม่ทำงานเป็นไคเนส ไม่ได้ส่งผลเช่นนั้น; โครงสร้างที่ทำงานได้ทำให้เกิดการฟอสโฟรีเลชันไทโรซีนแบบคงที่ของ STAT1, STAT3 และ STAT5.^[5] เมื่อเร็วๆ นี้ พบว่าเมโธเทรกเซตสามารถยับยั้ง TEL–JAK2, การฟอสโฟรีเลชันของ STAT3 และ STAT5 ในเซลล์ Ba/F3 ผ่านกลไกที่ขึ้นอยู่กับกระบวนการเมแทบอลิซึมของโฟเลต: ผลนี้ถูกย้อนกลับโดยกรดโฟลินิก, สามารถสร้างซ้ำได้ด้วยการปิดการทำงานของเอนไซม์ไดไฮโดรโฟเลตรีดักเทสด้วย CRISPR/Cas9, และไม่ถูกเลียนแบบโดย 5-ฟลูออโรยูราซิล. ^[22]

การส่งสัญญาณ IL-4 ผ่าน STAT6 ได้รับการศึกษาโดย Gingras และคณะ ซึ่งได้แสดงให้เห็นว่าโคแอคทิเวเตอร์ p300/CBP เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเหนี่ยวนำการถอดรหัสที่ STAT6 เป็นตัวกลาง และการแสดงออกเกินของ p300/CBP จะเพิ่มประสิทธิภาพกิจกรรมของยีนรีพอร์ตเตอร์ที่ถูกขับเคลื่อนโดย IL-4 ^[10]งานวิจัยส่วนใหญ่ดำเนินการในเซลล์ COS7 และ HeLa; ส่วนเซลล์ Ba/F3 ได้ให้หลักฐานภายในที่สำคัญ คือ การโค-อิมมูโนพรีซิพิเทชันของ STAT6 แบบธรรมชาติร่วมกับ CBP

การส่งสัญญาณของตัวรับไซโตไคน์และชีววิทยาของเซลล์สร้างเลือด

ระบบรับสัญญาณ GM-CSF/IL-3/IL-5 ได้ถูกวิเคราะห์อย่างละเอียดโดยใช้เซลล์ Ba/F3 Itoh และเพื่อนร่วมงานได้ดำเนินการวิเคราะห์การกลายพันธุ์อย่างเป็นระบบของกรดไทโรซีนในไซโทพลาซึมทั้งแปดตำแหน่งของซับยูนิตเบต้าทั่วไป (betac) โดยแสดงชุดของตัวกลายพันธุ์ที่เปลี่ยนกรดไทโรซีนเป็นฟีนิลอะลานีน ร่วมกับซับยูนิตอัลฟาของมนุษย์แบบไวลด์ไทป์ในเซลล์ Ba/F3 เพื่อกำหนดว่ากรดไทโรซีนตำแหน่งใดเป็นตัวกลางในการส่งสัญญาณเฉพาะ ^[12]จากการทบทวนชุดการกลายพันธุ์แบบขนาน Okuda และคณะรายงานว่า การกลายพันธุ์ของไทโรซีนในไซโทพลาซึมทั้งแปดตำแหน่งใน GMR-beta ทำให้การฟอสโฟรีเลชันของตัวรับเอง SHP2 และ SHC ลดลง แต่ไม่ทำให้สัญญาณการเพิ่มจำนวนเซลล์ในระยะสั้นหรือการฟอสโฟรีเลชันของ JAK2 และ STAT5 หยุดลง ซึ่งแสดงให้เห็นลำดับชั้นของหน้าที่ในโดเมนของตัวรับ ^[13]ได้แสดงให้เห็นว่า RON (ตัวรับไทโรซีนไคเนส) มีส่วนร่วมในเส้นทางตัวรับ IL-3 beta ในเซลล์ Ba/F3 เพื่อก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่เกี่ยวข้องกับการจัดเรียงใหม่ของ F-actin และการเปลี่ยนแปลงรูปร่างนิวเคลียสที่เป็นเอกลักษณ์ ซึ่งเผยให้เห็นการสื่อสารข้ามระบบระหว่างระบบตัวรับไทโรซีนไคเนสและระบบตัวรับไซโตไคน์ ^[14]

นอกจากนี้ ยังได้วิเคราะห์ความต้องการของซับโดเมนของตัวรับสำหรับตัวรับ IL-2 ด้วย โดยใช้สายเซลล์ Ba/F3 ที่ถูกทรานส์เฟกต์ Hunt และคณะได้ระบุโดเมนกรดและบริเวณที่อุดมด้วยเซรีนใกล้เยื่อหุ้มเซลล์ของสายเบต้าของตัวรับ IL-2 เป็นส่วนที่จำเป็นสำหรับการกระตุ้นการทำงานของ p38 และ p54 MAP kinases โดย Tyr338 — จุดจับกับ Shc — ทำหน้าที่เป็นตัวกลางสำคัญ ^[11]เนื่องจากโดเมนกรดไม่จำเป็นสำหรับการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่ขับเคลื่อนโดย IL-2 ผู้เขียนจึงสรุปว่า การกระตุ้น MAP kinase p38 หรือ p54 นั้นไม่จำเป็นจริง ๆ สำหรับการเติบโตของเซลล์ Ba/F3 ที่ขับเคลื่อนโดย IL-2 ซึ่งการแยกตัวนี้ยังเกิดขึ้นกับเซลล์ T ปฐมภูมิด้วย

การควบคุมวงจรเซลล์ในเซลล์ต้นกำเนิดสร้างเลือดก็ได้รับการศึกษาโดยใช้เซลล์ Ba/F3 เช่นกัน Mahmud และคณะได้แสดงให้เห็นว่า TGF-beta1 ชะลอการเปลี่ยนผ่านจากระยะ G1 ไปยังระยะ S ในเซลล์ Ba/F3 โดยเชื่อมโยงการชะลอการเจริญเติบโตนี้กับการเพิ่มระดับการแสดงออกของโปรตีน Bcl-2 และสารยับยั้ง CDK p27 ^[15]Levings และคณะได้ศึกษาการเสริมฤทธิ์ของ IL-4 กับ Raf-1 ที่ถูกกระตุ้นเพื่อส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์ Ba/F3 ในระยะยาว โดยพบว่า IL-4 เพียงอย่างเดียวไม่สามารถสนับสนุนการเจริญเติบโตได้ แต่สามารถทำงานร่วมกับ Ras หรือ Raf-1 ที่ถูกกระตุ้นเพื่อรักษาการเพิ่มจำนวนอย่างต่อเนื่องได้เทียบเท่ากับ IL-3 ^[16]

ระบบสลับตัวรับที่ได้รับการออกแบบได้ใช้ประโยชน์จากความพึ่งพา IL-3 ของเซลล์ Ba/F3 สำหรับการประยุกต์ใช้ในบำบัดด้วยยีน Kume และเพื่อนร่วมงานได้พัฒนารับ G-CSF ที่รวมกับแบคทีเรีย gyrase B (GcrGyr) ซึ่งยาปฏิชีวนะ coumermycin ที่สร้างไดเมอร์ได้กระตุ้นการเพิ่มจำนวนของ Ba/F3 โดยไม่พึ่งพา IL-3 เป็นระบบยีนขยายแบบเลือกสรรเพื่อพิสูจน์แนวคิดสำหรับการขยายเซลล์สร้างเลือดที่ถูกดัดแปลงทางพันธุกรรม ^[17]ในทำนองเดียวกัน โปรตีนฟิวชันของ IL-11 และตัวรับ IL-11 ที่ละลายได้ ได้แสดงให้เห็นว่าทำหน้าที่เป็นซูเปอร์อะโกนิสต์บนเซลล์ Ba/F3 ที่ถูกทรานส์เฟกต์ด้วย gp130 และขาดตัวรับ IL-11 α ที่ผูกติดกับเยื่อหุ้มเซลล์ ซึ่งแสดงให้เห็นว่าส่วนประกอบของตัวรับที่ละลายได้สามารถทดแทนหน่วยย่อยข้ามเยื่อหุ้มเซลล์ได้ในเชิงหน้าที่ ^[18]

สรุป

เซลล์ Ba/F3 (CVCL_0161) เป็นหนึ่งในแพลตฟอร์มสายเซลล์หนูที่มีความหลากหลายและได้รับการตรวจสอบความถูกต้องอย่างกว้างขวางที่สุดในงานวิจัยชีวการแพทย์สมัยใหม่ ความพึ่งพา IL-3 อย่างเคร่งครัดของเซลล์เหล่านี้ให้วิธีการทดสอบการทำงานที่เรียบง่ายและสามารถทำซ้ำได้สำหรับไคเนสก่อมะเร็ง — รวมถึงโปรตีนฟิวชัน BCR-ABL, การกลายพันธุ์ FLT3, และการรวมตัวของ JAK2 — รวมถึงสารยับยั้งไคเนสโมเลกุลเล็กที่มีความเกี่ยวข้องทางคลินิกกับโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเรื้อรังชนิดไมอีลอยด์ (CML), โรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเรื้อรังชนิดไมอีลอยด์เฉียบพลัน (AML), โรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดลิมโฟบลาสติกจากเซลล์ต้นกำเนิด (PCLL), และมะเร็งปอดชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมา การวิจัยมาหลายทศวรรษได้ยืนยันว่า ระบบสัญญาณ JAK–STAT, ชีววิทยาของตัวรับไซโตไคน์ และการควบคุมเซลล์สร้างเลือด เป็นพื้นที่หลักในการประยุกต์ใช้ Ba/F3 ความสามารถในการปรับตัวของสายเซลล์นี้ทำให้สามารถสร้างแบบจำลองอนุพันธ์ได้หลายร้อยแบบที่มีการกลายพันธุ์ความต้านทานที่กำหนดไว้อย่างชัดเจน ทำให้มันกลายเป็นส่วนที่ขาดไม่ได้ในการพัฒนาการรักษาแบบมุ่งเป้า หากท่านกำลังต้องการจัดตั้งหรือขยายโครงการวิจัยด้านชีววิทยาของไคเนสหรือการค้นพบยา เซลล์ Ba/F3 มีจำหน่ายที่ cytion.com — เยี่ยมชมหน้าผลิตภัณฑ์เพื่อสอบถามหรือสั่งซื้อวันนี้เลย

บทความสำคัญ

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) การวิเคราะห์โปรไฟล์ SNP array ของสายเซลล์หนูช่วยระบุสายพันธุ์ต้นกำเนิด และเปิดเผยการปนเปื้อนข้ามสายพันธุ์ รวมถึงภาวะแอนูพลอยดีที่แพร่หลาย BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) เซลล์ Ba/F3 และการใช้งานในการค้นคว้ายาสำหรับคินาส์ Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) กับดักลำดับสัญญาณที่อิงจากตัวรับไซโตไคน์ที่ทำงานอย่างต่อเนื่อง Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) Flt3 ที่ถูกคัดลอกแบบแทนเดมจะกระตุ้น STAT5 และ MAP kinase อย่างต่อเนื่อง และก่อให้เกิดการเติบโตของเซลล์แบบอิสระในสายเซลล์ที่พึ่งพา IL-3. Oncogene. PMID: 10698507
5. Ho JM, Beattie BK, Squire JA (1999) การรวมตัวของปัจจัยการถอดรหัส ets TEL กับ Jak2 ส่งผลให้เกิดการส่งสัญญาณ Jak-Stat แบบคงที่ Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y, Lautier D, Laurent G (1999) ลักษณะการกลายพันธุ์ของสายเซลล์ Ba/F3 ที่ถูกถ่ายโอนยีน BCR–ABL และความสัมพันธ์กับการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ DNA polymerase beta. Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N, Salgia R, Ewaniuk DS (1999) การมีส่วนร่วมของโปรตีนตัวเชื่อมต่อ CRKL ในการยึดติดที่สื่อผ่านอินทิกริน. Oncogene. PMID: 10362355
8. Liu CB, Itoh T, Arai K (1999) การกระตุ้น JAK2 แบบคงที่ช่วยให้เซลล์ BA/F3 อยู่รอดและเพิ่มจำนวนได้โดยไม่พึ่งพาอินเตอร์ลิวคิน-3 ของหนู. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R, Tschirch E, Bittorf T (1999) บทบาทของ STAT5 ในการถ่ายทอดสัญญาณอินเตอร์เฟอรอน-อัลฟาในเซลล์ Ba/F3. Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S, Simard J, Groner B (1999) p300/CBP เป็นปัจจัยจำเป็นสำหรับการกระตุ้นการถอดรหัสโดยอินเตอร์ลิวคิน-4 และมีปฏิสัมพันธ์กับ Stat6. Nucleic Acids Research. PMID: 10373589
11. Hunt AE, Lali FV, Lord JD (1999) บทบาทของซับโดเมนในสายเบตาของตัวรับอินเตอร์ลิวคิน (IL)-2 และ Shc ในการกระตุ้นการทำงานของ p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase และ p54 MAP kinase. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Itoh T, Liu R, Arai K (1999) อิทธิพลที่แตกต่างกันของกรดไทโรซีนในหน่วยย่อยเบต้าของตัวรับร่วมต่อสัญญาณหลายชนิดที่ถูกกระตุ้นโดย GM-CSF ของมนุษย์. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. PMID: 10329850
13. Okuda K, Foster R, Griffin JD (1999) โดเมนส่งสัญญาณของสายเบตาซีของตัวรับ GM-CSF/IL-3/IL-5. Annals of the New York Academy of Sciences. [บทวิจารณ์] PMID: 10372132
14. Mera A, Suga M, Ando M (1999) การกระตุ้นให้เกิดการเปลี่ยนแปลงรูปร่างเซลล์ผ่านการกระตุ้นตัวรับสายเบตาส่วนร่วมของอินเตอร์ลิวคิน-3 โดยไทโรซีนไคเนสแบบตัวรับ RON. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10336478
15. Mahmud N, Katayama N, Nishii K (1999) ความเกี่ยวข้องที่อาจมีของ bcl-2 ในการควบคุมการดำเนินของวงจรเซลล์ของเซลล์สร้างเลือดโดยปัจจัยการเจริญเติบโตแบบแปลงสภาพเบต้า 1 (TGF-β1). British Journal of Haematology. PMID: 10233423
16. Levings MK, Bessette DC, Schrader JW (1999) อินเตอร์ลิวคิน-4 ทำงานร่วมกันกับ Raf-1 เพื่อส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์ในระยะยาวและการกระตุ้นการทำงานของ c-jun N-terminal kinase. Blood. PMID: 10339476
17. Kume A, Ito K, Ueda Y (1999) ยีนฟิวชันของตัวรับ G-CSF กับไกรเซส B: สวิตช์โมเลกุลชนิดใหม่สำหรับการขยายตัวของเซลล์สร้างเลือดที่ถูกดัดแปลงทางพันธุกรรม. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 10381335
18. Pflanz S, Tacken I, Grötzinger J (1999) โปรตีนฟิวชันของอินเตอร์ลิวคิน-11 และตัวรับอินเตอร์ลิวคิน-11 ที่ละลายได้ ทำหน้าที่เป็นซูเปอร์อะโกนิสต์ต่อเซลล์ที่แสดง gp130. FEBS Letters. PMID: 10350068
19. Palacios R, Steinmetz M (1985) คลอนหนูที่ขึ้นอยู่กับ IL-3 ซึ่งแสดงแอนติเจนผิว B-220 มียีน Ig ในรูปแบบสายพันธุ์ และสร้างเซลล์ลิมโฟไซต์ชนิด B ในร่างกาย Cell. PMID: 3924409
20. Duan C, Fukuda T, Isaji T (2020) การขาดการฟุโคซิเลชันของส่วนแกน (core fucosylation) จะกระตุ้นการส่งสัญญาณเซลล์ที่ขึ้นอยู่กับการแสดงออกของ FLT3 ในระบบเซลล์ Ba/F3. The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Yang J, Friedman R (2025) จุดแข็งและข้อจำกัดของเซลล์ Ba/F3 ในการสร้างแบบจำลองความต้านทานต่อ AML ที่ขับเคลื่อนโดย FLT3. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Saito M, Takeda K, Yoshino M (2026) เมโธเทรกเซตยับยั้งเส้นทาง TEL-JAK2-STAT ผ่านกลไกที่ขึ้นอยู่กับกระบวนการเมแทบอลิซึมของโฟเลตในเซลล์ Ba/F3. International Immunopharmacology. PMID: 42287956