はじめに

Ba/F3細胞、別名BA/F3、BaF3、BAF3、Baf3（Cellosaurus登録番号CVCL_0161）としても知られるこの細胞株は、骨髄由来のマウスインターロイキン-3（IL-3）依存性プロB細胞株である。 この細胞株は、1985年にパラシオス（Palacios）とシュタインメッツ（Steinmetz）によって、B細胞系マーカーであるB-220を表現し、免疫グロブリン遺伝子を生殖細胞系列構成のまま保持している、継続的に増殖するIL-3依存性の骨髄クローン群の中から初めて報告された。^[19] 当初はBALB/cマウスに由来すると報告されていたが、その後のSNPアレイによるプロファイリングにより、この系統は実際にはC3Hマウスに由来することが判明した。^[1] Ba/F3細胞は、その開発以来、造血シグナル伝達研究やがん治療薬の創薬において、最も広く利用されているモデル系の一つとなっています。 これらの細胞は、生存と増殖においてIL-3に厳密に依存しているため、非常にクリーンなプラットフォームとなっています。発癌性キナーゼや融合タンパク質を導入すると、細胞は因子非依存性となり、強力かつ定量可能な測定結果が得られます。 研究者たちは、この特性を日常的に活用して、BCR-ABL 融合タンパク質、FLT3 変異、JAK2 融合、その他多くの臨床的に関連するキナーゼ発がん遺伝子の特性評価を行うほか、ハイスループット形式で低分子キナーゼ阻害剤のプロファイリングも行っています。

主なポイント

• Ba/F3は、C3Hマウスの骨髄由来の、IL-3依存性のプロB細胞株であり、Cellosaurusのアクセッション番号CVCL_0161として登録されている。
• IL-3の除去は、厳格な選別アッセイをもたらす。すなわち、親細胞は死滅する一方で、活性型の発がん性キナーゼを発現する細胞、あるいは恒常的な増殖シグナルを供給するその他の構築体を発現する細胞は生存し、増殖する。
• この細胞株は、BCR-ABL融合タンパク質、FLT3変異、JAK–STATシグナル伝達、およびサイトカイン受容体の生物学的特性の研究に広く利用されてきた。
• Ba/F3細胞は、ハイスループットなキナーゼ阻害剤スクリーニングへの適応が進んでおり、標的指向型抗がん剤創薬の基盤となっている。^[2]
• Ba/F3細胞株から、EGFR、ALK、ROS1、RET、NTRK、FLT3、およびその他多くの臨床的に重要な標的遺伝子を含む、特定の発癌性変異を有する数百の派生細胞株が作製されている。

Ba/F3とは何ですか？

Ba/F3は、C3Hマウスの骨髄から樹立された因子依存性のマウスプロB細胞株である。Cellosaurusのデータには、この株のドナーの性別および年齢に関する記録はない。 親株には既知の活性化キナーゼ変異は認められず、生存には外因性のIL-3を必要とする。標準的な培養条件下での倍加時間は約20時間である。この細胞株の主な特徴は、IL-3への厳格な依存性であり、これにより、因子非依存的な増殖をもたらすあらゆる遺伝子操作を迅速かつ明確に検出することができる。 この特性に加え、交絡要因となる内因性キナーゼ変異が存在しないことから、Ba/F3細胞は、造血系および固形腫瘍の生物学全般において、キナーゼ融合、点変異、および恒常的に活性化したシグナル伝達分子の発癌能を解明するための不可欠なツールとなっている。 なお、変異の注釈がないことは、遺伝的に純粋な背景であるということとは同一ではない点に留意すべきである。Cellosaurusでは、この細胞株についてSNPアレイから得られた変異データも記録されている。

SNPアレイによるプロファイリングにより、この系統の起源に関する長年の誤った認識が是正された。初期の文献では、Ba/F3はBALB/cマウスに由来するとされていたが、ゲノム解析によりC3H由来であることが確認された。^[1] その研究で調査された99のマウス細胞株のうち、Ba/F3は、その遺伝的背景が報告されている由来系統と一致しなかった唯一の株であった。 この不一致は、当該細胞株の供給元である理化学研究所（RIKEN）によって独立して確認され、他のC3H由来の細胞株との形態学的比較から、Ba/F3は交差汚染によるものではなく、独自の細胞株であることが示された。 この発見は、特にSTRプロファイリングだけでは近交系を区別できない可能性があるマウス細胞株において、定期的な細胞株の真正性確認の重要性を浮き彫りにしている。Ba/F3を使用する研究者は、論文において明確な同定を確保するため、Cellosaurusのアクセッション番号CVCL_0161を参照すべきである。

細胞培養に関する情報

Ba/F3電池の利点

Ba/F3細胞の最も大きな利点は、IL-3に依存する二値的な生存スイッチである。IL-3が存在しない場合、親株のBa/F3細胞は急速にアポトーシスを起こす。 発癌性キナーゼや融合タンパク質を導入することで、細胞は死から救われ、複雑なレポーター構築体を用いることなく、安定的に形質転換されたクローンを容易に選別することが可能となる。この特性は、従来のコロニー生存アッセイから、化合物のプロファイリングを行う最新のハイスループット増殖スクリーニングに至るまで、数多くのアッセイ形式で活用されてきた。^[2] 測定結果の簡便さと信頼性の高さから、Ba/F3を用いたアッセイは、キナーゼ阻害剤の効力をランク付けするための「ファーストパス」システムとして広く利用されている。ただし、絶対的な効力値はアッセイ法や実験室によって異なるため、研究間で比較する際には細心の注意を払う必要がある。^[21]

Ba/F3細胞は遺伝的に可塑性が高く、トランスフェクションやトランスデューションも容易です。 レトロウイルス、レンチウイルス、およびエレクトロポレーションを用いた発現ベクターの導入はいずれも、安定発現するサブラインを効率的に得ることができる。これにより、EGFR、FLT3、BCR-ABL、EML4-ALK、RETなど、臨床的に重要な標的遺伝子に変異を持つ数百もの派生系統の作製が可能となった。 親株に交絡要因となる内因性のキナーゼ変異が存在しないため、表現型の反応は導入されたトランスジーンにのみ起因することが保証されます。さらに、約 20 時間の倍加時間により、実験のスループットが向上し、増殖速度の遅い初代細胞培養と比較して、アッセイの所要時間を大幅に短縮することができます。

Ba/F3プラットフォームは、シグナル配列の発見用途に特に適していることが実証されている。 小島と北村は、恒常的に活性なサイトカイン受容体構築体を用いて、Ba/F3細胞の増殖依存性をシグナルペプチドを有するタンパク質の細胞表面局在へと転換させ、分泌型および膜標的型の遺伝子産物を同定するための大規模なcDNAスクリーニングを可能にした。^[3] この独創的な応用例は、Ba/F3細胞のIL-3依存性が、単なるキナーゼ発がん遺伝子の研究にとどまらず、はるかに幅広い用途に転用できることを示しており、この細胞株を汎用性の高い遺伝子スクリーニングプラットフォームとして確立している。

Ba/F3細胞の限界

Ba/F3細胞には多くの利点があるものの、実験データを解釈する際には、この細胞に固有の生物学的限界を考慮する必要があります。マウス由来のプロB細胞株であるため、ヒトのがん細胞に存在する多くのシグナル伝達アダプターや共受容体が欠如しています。 Ba/F3細胞で観察される阻害活性値や下流のシグナル伝達反応は、ヒトの原発性腫瘍細胞や患者由来の検体における活性を正確に反映していない可能性がある。例えば、肺腺癌に対する標的療法の耐性を研究する研究者は、臨床的な結論を導き出す前に、Ba/F3細胞に基づく知見を、より生理学的に関連性の高いヒト細胞モデルで検証しなければならない。

この系統のゲノム的背景についても、誤った解釈がなされてきた。何十年もの間、Ba/F3はBALB/c系統に由来するとされてきたが、SNPアレイによるプロファイリングにより、実際にはC3Hマウスに由来することが明らかになった。^[1] 同研究では、調査対象となったマウス細胞株の約42％に異数性の証拠が認められ、その中には腫瘍組織ではなく正常組織由来の細胞株も相当数含まれていた。Ba/F3自体については、コピー数変化ではなく誤同定として指摘されたが、この一般的な知見は、培養において核型ドリフトがいかに容易に蓄積するかを示している。 このような高継代数における不安定性は、シグナル伝達の結果、薬剤感受性の測定、および形質転換された表現型の再現性に影響を及ぼす可能性がある。したがって、研究者は低継代数で実験を行い、ストック細胞を定期的に検証すべきである。

最後に、Ba/F3細胞は、血液悪性腫瘍に見られる腫瘍微小環境や間質との相互作用を完全に再現しているわけではない。また、多くのヒトシグナル伝達因子の内因性発現も欠如しているため、発がん遺伝子の機能に重要なコ受容体との相互作用が存在しないか、あるいは異なる可能性がある。 複雑な多サブユニット型サイトカイン受容体や、糖鎖修飾依存性のシグナル伝達を必要とする受容体の研究においては、生物学的に妥当な結論を導き出すために、補完的なヒト細胞系が必要となる可能性がある。こうした注意点はあるものの、Ba/F3細胞は依然として、キナーゼ生物学において強力かつ広く受け入れられている第一線のツールである。

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応用分野

キナーゼを標的とした創薬およびオンコジーンスクリーニング

Ba/F3細胞は、キナーゼを標的とした創薬における主要な細胞プラットフォームとなっている。 Warmuthらは、この目的のためのBa/F3システムの包括的な評価を行い、IL-3非依存性アッセイをハイスループット形式に適応させ、キナーゼ変異の発癌性および低分子キナーゼ阻害剤による因子非依存性増殖の逆転能力の両方を評価する方法を説明した。 ^[2]この総説では、Ba/F3 細胞が驚くほど幅広い発癌性キナーゼに対応しており、より複雑なヒト細胞モデルに移行する前に、がん関連キノーメ変異の初期プロファイリングを行うための汎用プラットフォームとなり得ることが強調されました。

小島と北村が開発したシグナル配列トラップにより、Ba/F3細胞はキナーゼ発がん遺伝子の研究だけでなく、機能的cDNAライブラリーのスクリーニングにも使用できることが実証された。 ^[3]恒常的に活性なサイトカイン受容体をシグナルペプチド機能に結合させることで、1回のパイロット実験で、150個の既知のクローン（すべて分泌型または細胞表面タンパク質をコードするもの）に加え、以前のシグナル配列トラップ戦略では検出できなかったII型膜タンパク質を含む48個の新規cDNAクローンが得られた。 このアプローチは、Ba/F3プラットフォームが従来の薬剤ターゲットの検証を超えて拡張性を持つことを示している。

現在 Cellosaurus に登録されている Ba/F3 派生系統は、数百もの EGFR 変異体、ALK 融合、RET 再編成、NTRK 融合、および耐性変異に及ぶ極めて多様なものであり、親系統である Ba/F3 系統が、精密腫瘍学研究の基盤となるシャーシとなっていることを強調しています。 各派生系統は、IL-3 依存性のクリーンなバックグラウンドを維持しつつ、単一の明確な遺伝的変数を追加しており、細胞レベルでの体系的な構造活性相関研究を可能にしています。

FLT3変異と急性骨髄性白血病

Ba/F3 細胞の最も影響力のある応用例の 1 つは、急性骨髄性白血病（AML）における FLT3（fms-like tyrosine kinase 3）変異の特性評価です。 FLT3 の内部タンデム重複は、AML において最も頻度の高い発癌性病変の一つであり、コホートや検出方法にもよるが、症例の約 20% から 30% で報告されています。 ^[4][20]早川らは、2つのIL-3依存性細胞株である32DおよびBa/F3に導入されたタンデム重複型FLT3が、STAT5およびMAPキナーゼの両方を恒常的に活性化し、自律的な、 IL-3非依存的な増殖をもたらすのに対し、野生型のFLT3は、リガンドによる継続的な刺激下であってもごくわずかな増殖しか支持しなかった。^[4]この画期的な研究により、Ba/F3細胞はFLT3変異を検証するための主要な機能アッセイシステムとして確立され、現在もこの分野における方法論上の基準となっている。

その後の研究は、この基盤を大いに活用してきた。 コアフコシル化に関する研究により、野生型FLT3を発現するBa/F3細胞においてFut8遺伝子をCRISPR/Cas9を用いてノックアウトするだけで、親細胞では見られないIL-3非依存性の増殖が誘導され、これに伴いチロシンリン酸化の増加およびSTAT5、 AKTおよびERKの活性化、ならびにリガンド非依存的なFLT3二量体化の増加を伴うことが明らかになった。^[20]これにより、この受容体においてこれまで認識されていなかった糖鎖修飾による調節機構が明らかになった。 FLT3阻害剤ギルテリチニブに対する耐性についても、Ba/F3 FLT3-ITDモデルを用いて検討が行われた。その結果、臨床的に達成可能な薬物濃度下での耐性発現には、通常、複数の二次変異が必要であり、そのうちのいくつかはこれまで報告されていなかったことが明らかになった。 ^[21]同研究では、Ba/F3 FLT3-ITDモデルの長所と限界を体系的に評価し、このプラットフォームは耐性変異の特定と優先順位付けには適しているものの、患者の耐性を形成する複雑な骨髄ニッチを再現することはできないと指摘した。

BCR-ABLの生物学と慢性骨髄性白血病

BCR-ABL 融合タンパク質をトランスフェクトした Ba/F3 細胞は、慢性骨髄性白血病（CML）の分子生物学を理解する上で重要な役割を果たしてきた。 Canitrotらは、p190およびp210 BCR-ABLアイソフォームを発現するBa/F3細胞を用いて、BCR-ABLがミューテーター表現型を付与し、親細胞と比較して自然変異頻度を3～5倍に増加させること、またこのゲノム不安定性がDNAポリメラーゼβの発現増強と関連していることを実証した。 ^[6]この発見により、BCR-ABL が慢性期の CML から急性骨髄性白血病へと疾患を進行させるメカニズムが明らかになった。

CML 患者の白血病性好中球に見られる主要なチロシンリン酸化タンパク質の一つであるアダプタータンパク質 CRKL について、上村らは Ba/F3 細胞を用いて研究を行った。 ^[7]全長CRKLを過剰発現する細胞は、フィブロネクチンへの接着が増加し、フィブロネクチンでコーティングされた表面上で形態の変化が見られたが、SH2ドメインまたはN末端SH3ドメインのいずれかを欠く欠失変異体ではそのような変化は見られなかった。これは、この効果には両方のドメインが必要であることを示している。 CRKLの過剰発現は、β1インテグリンの表面発現に変化をもたらさず、その活性化エピトープを自発的に誘導することもなかったが、抗β1インテグリン抗体によって接着は阻害された。これらの実験結果は、CRKLがBCR-ABLの下流において、インテグリンを介した接着を調節するシグナル伝達経路に関与していることを示唆している。

これらのBCR-ABLに関する研究は、Ba/F3細胞が内因性キナーゼ活性の複雑さを排除することで、オンコジーン駆動型シグナル伝達を明確に解明することを可能にする好例である。 このプラットフォームは、BCR-ABL阻害剤に対する耐性変異の特性解析を引き続き支援しており、臨床的に関連する耐性遺伝子型を背景とした直接的な阻害剤プロファイリングのために、専用のBa/F3 BCR-ABLおよびBCR-ABL-T315I派生株が現在利用可能となっている。

JAK–STATシグナル伝達経路

Ba/F3 細胞は、サイトカイン受容体の下流にあるどのシグナル伝達イベントが実際に増殖に必要であるかを解明するための主要なモデルとして役立ってきました。Liu らは、βc の細胞外領域および膜貫通領域を JAK2 に融合させたキメラ分子（β/JAK2）を構築し、Ba/F3 細胞で発現させました。 ^[8]このキメラ分子は恒常的にリン酸化されており、IL-3に依存しない生存および増殖を促進するのに十分であった。注目すべきことに、これらの細胞ではSTAT5、Shc、SHP-2はリン酸化されず、β-カゼインおよびc-fosのプロモーター活性も増強されなかったが、c-mycの転写は恒常的に活性化されていた。 著者らは、JAK2の活性化のみが生存と増殖に十分であり、これらの特定の出力にはSTAT5およびMAPキナーゼの活性化は不要であると結論付けた。これは、Ba/F3細胞における因子非依存的な増殖が、それ自体でSTATの活性化を意味するわけではないという有用な示唆である。

JasterらはBa/F3細胞において、IFN-αシグナル伝達におけるSTAT5の役割を調べ、IFN-αがSTAT5AおよびSTAT5BのDNA結合を活性化することを示したが、IL-3の方が両アイソフォームに対してはるかに強力な誘導因子であることを明らかにした。 ^[9]ドミナントネガティブなJAK2変異体は、IL-3に誘導されるSTAT5活性化を抑制したが、IFN-αに誘導される活性化は抑制しなかった。このことから、これら2つのサイトカインは、同じ転写因子に収束するために独立した上流のメカニズムを介していることが明らかになった。それにもかかわらず、著者らは、この系においてSTAT5がIFN-αシグナル伝達に不可欠ではないと結論付けた。

T細胞急性リンパ芽球性白血病に関連する発癌性融合タンパク質であるTEL–JAK2融合タンパク質を用いて、Ba/F3細胞において恒常的なJAK–STAT活性化のモデルが構築された。 Hoらは、TELのポインテッドドメインを機能的なJAK2キナーゼ（JH1）ドメインに融合させると、Ba/F3細胞が因子非依存性になることを示したが、擬似キナーゼ（JH2）ドメインやキナーゼ不活性なJH1ドメインに融合させた場合にはその現象は認められなかった； 活性型構築体は、STAT1、STAT3、およびSTAT5の恒常的なチロシンリン酸化を誘導した。^[5]さらに最近では、メトトレキサートが、葉酸代謝依存的なメカニズムを介してBa/F3細胞におけるTEL–JAK2、 STAT3およびSTAT5のリン酸化を、葉酸代謝依存的なメカニズムを介して抑制することが明らかになった。この効果はフォリン酸によって逆転し、ジヒドロ葉酸還元酵素のCRISPR/Cas9によるノックアウトによって再現されたが、5-フルオロウラシルでは同様の効果は得られなかった。 ^[22]

STAT6を介したIL-4シグナル伝達については、Gingrasらによって調査が行われ、p300/CBPコアクチベーターがSTAT6を介した転写誘導に必要であること、およびp300/CBPの過剰発現がIL-4によるレポーター遺伝子活性を増強することが実証された。 ^[10]これらの研究のほとんどはCOS7細胞およびHeLa細胞を用いて行われたが、Ba/F3細胞は、天然型のSTAT6とCBPの共免疫沈降という重要な内因性の証拠を提供した。

サイトカイン受容体シグナル伝達と造血細胞生物学

GM-CSF/IL-3/IL-5 受容体システムは、Ba/F3 細胞を用いて広範囲に解明されてきた。 伊藤らは、共通βサブユニット（betac）の 8 つの細胞質チロシン残基について系統的な変異解析を行い、Ba/F3 細胞において、一連のチロシンからフェニルアラニンへの変異体を野生型のヒトαサブユニットとともに発現させ、どの残基が特定のシグナル伝達出力を媒介するかを特定した。 ^[12]並行して行われた一連の突然変異導入実験をレビューした奥田らは、GMR-βの細胞質側の8つのチロシン残基すべてに変異を導入すると、受容体自体、SHP2、およびSHCのリン酸化が減少したが、短期的な増殖シグナル伝達やJAK2およびSTAT5のリン酸化は阻害されなかったと報告しており、受容体ドメインの機能に階層性があることを示した。 ^[13]RON受容体チロシンキナーゼは、Ba/F3細胞においてIL-3ベータ受容体経路に関与し、F-アクチンの再分布や独特の核形状変化を伴う形態学的変化を誘導することが示され、受容体チロシンキナーゼとサイトカイン受容体システム間のクロストークが明らかになった。 ^[14]

IL-2受容体についても、受容体サブドメインの要件が解明されている。 Huntらは、トランスフェクトされたBa/F3細胞株を用いて、p38およびp54 MAPキナーゼの活性化には、IL-2受容体β鎖の酸性ドメインと膜近傍のセリン豊富な領域が必要であり、Shc結合部位であるTyr338が重要な仲介役として機能することを同定した。 ^[11]酸性ドメインは IL-2 による増殖には必須ではないため、著者らは、Ba/F3 細胞の IL-2 による増殖には、実際には p38 および p54 MAP キナーゼの活性化のいずれも必要ではないと結論づけた。この解離は、初代 T 細胞においても同様であった。

造血前駆細胞における細胞周期の調節についても、Ba/F3細胞を用いて研究が行われてきた。Mahmudらは、TGF-β1がBa/F3細胞におけるG1期からS期への移行を遅延させることを実証し、この増殖の減速をBcl-2タンパク質およびCDK阻害因子p27の発現亢進と関連付けた。 ^[15]IL-4が活性化Raf-1と相乗的に作用してBa/F3細胞の長期増殖を促進することについては、Levingsらは、IL-4単独では増殖を維持できないが、活性化RasまたはRaf-1と協調して、IL-3と同等の持続的な増殖を維持できることを明らかにした。 ^[16]

遺伝子治療への応用において、Ba/F3細胞のIL-3依存性を活用した、人工的に設計された受容体切り替えシステムが開発されている。 Kumeらは、G-CSF受容体と細菌のジャイレースB（GcrGyr）を融合させたものを開発した。このシステムでは、二量体を形成する抗生物質クメルマイシンが、IL-3非依存的なBa/F3細胞の増殖を誘発し、遺伝子改変造血細胞を増殖させるための概念実証的な選択的増幅遺伝子システムとして機能することが示された。 ^[17]同様に、IL-11 および可溶性 IL-11 受容体融合タンパク質が、膜結合型 IL-11 受容体αを欠く gp130 をトランスフェクトした Ba/F3 細胞に対してスーパーアゴニストとして作用することが示され、可溶性受容体成分が膜貫通サブユニットを機能的に代替できることが実証された。 ^[18]

結論

Ba/F3細胞（CVCL_0161）は、現代の生物医学研究において、最も汎用性が高く、広く検証されたマウス細胞株プラットフォームの一つである。これらの細胞がIL-3に厳密に依存していることは、BCR-ABL融合タンパク質、FLT3変異、 JAK2融合タンパク質など）や、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、前駆細胞リンパ芽球性白血病・リンパ腫、および肺腺癌に対して臨床的意義を持つ低分子キナーゼ阻害剤を評価するための、洗練され再現性の高い機能アッセイを提供する。 数十年にわたる研究により、JAK–STATシグナル伝達、サイトカイン受容体の生物学、および造血細胞の調節が、Ba/F3の応用における中核領域として確立されています。この細胞株の適応性により、特定の耐性変異を持つ数百もの派生モデルが作成可能となり、標的療法の開発において不可欠な存在となっています。 キナーゼ生物学や創薬プログラムの立ち上げ・拡大をお考えの方は、cytion.comにてBa/F3細胞をご購入いただけます。製品ページをご覧の上、今すぐお問い合わせまたはご注文ください。

主な論文

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) マウス細胞株のSNPアレイプロファイリングにより、その由来株を特定し、交差汚染および広範な異数性を明らかにした。BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) Ba/F3細胞およびキナーゼ創薬におけるその利用。Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) 恒常的に活性なサイトカイン受容体に基づくシグナル配列トラップ。Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) タンデム重複したFlt3はSTAT5およびMAPキナーゼを恒常的に活性化し、IL-3依存性細胞株に自律的な細胞増殖をもたらす。Oncogene. PMID: 10698507
5. Ho JM、Beattie BK、Squire JA (1999) ets転写因子TELとJak2の融合は、恒常的なJak-Statシグナル伝達をもたらす。Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y、Lautier D、Laurent G (1999) BCR–ABLをトランスフェクトしたBa/F3細胞株のミューテーター表現型およびDNAポリメラーゼβの発現増強との関連。Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N、Salgia R、Ewaniuk DS (1999) インテグリンを介した接着におけるアダプタータンパク質CRKLの関与。Oncogene. PMID: 10362355
8. Liu CB、Itoh T、Arai K (1999) JAK2の恒常的活性化は、BA/F3細胞にマウスインターロイキン-3非依存性の生存および増殖をもたらす。The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R、Tschirch E、Bittorf T (1999) BA/F3細胞におけるインターフェロン-αシグナル伝達におけるSTAT5の役割。Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S、Simard J、Groner B (1999) p300/CBPはインターロイキン-4による転写誘導に必要であり、Stat6と相互作用する。『Nucleic Acids Research』. PMID: 10373589
11. Hunt AE、Lali FV、Lord JD (1999) p38マイトジェン活性化プロテイン（MAP）キナーゼおよびp54 MAPキナーゼの活性化における、インターロイキン（IL）-2受容体β鎖サブドメインおよびShcの役割。The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Itoh T、Liu R、Arai K (1999) ヒトGM-CSFによって誘導される複数のシグナルに対する、共通受容体βサブユニットのチロシン残基の異なる影響。『The Journal of Allergy and Clinical Immunology』。PMID: 10329850
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17. Kume A、Ito K、Ueda Y (1999) G-CSF受容体とジラーゼBの融合遺伝子：遺伝子改変造血細胞の増殖を誘導する新しいタイプの分子スイッチ。『Biochemical and Biophysical Research Communications』。PMID: 10381335
18. Pflanz S、Tacken I、Grötzinger J (1999) インターロイキン-11と可溶性インターロイキン-11受容体の融合タンパク質は、gp130を発現する細胞に対してスーパーアゴニストとして作用する。FEBS Letters. PMID: 10350068
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20. Duan C、Fukuda T、Isaji T (2020) コアフコシル化の欠損は、Ba/F3細胞系においてFLT3発現に依存する細胞シグナル伝達を活性化する。The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Yang J、Friedman R（2025）FLT3によるAML耐性のモデル化におけるBa/F3細胞の長所と限界。Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Saito M, Takeda K, Yoshino M (2026) メトトレキサートは、Ba/F3細胞において葉酸代謝依存的なメカニズムを介してTEL-JAK2-STAT経路を阻害する。International Immunopharmacology. PMID: 42287956