Introduzione

Cellule Ba/F3, nota anche con i sinonimi BA/F3, BaF3, BAF3 e Baf3 (codice di accesso Cellosaurus CVCL_0161), è una linea cellulare murina di pro-B-cellule dipendenti dall’interleuchina-3 (IL-3) derivata dal midollo osseo. La linea è stata descritta per la prima volta da Palacios e Steinmetz nel 1985 all’interno di un gruppo di cloni del midollo osseo in continua proliferazione, dipendenti dall’IL-3, che presentavano il marcatore del lignaggio delle cellule B B-220 e conservavano i propri geni delle immunoglobuline nella configurazione germinale. ^[19] Sebbene inizialmente fosse stato riferito che la linea provenisse da un topo BALB/c, successive analisi con array SNP hanno stabilito che essa deriva in realtà da un topo C3H. ^[1] Sin dalla loro creazione, le cellule Ba/F3 sono diventate uno dei sistemi modello più utilizzati nella ricerca sulla segnalazione ematopoietica e nella scoperta di farmaci oncologici. La loro stretta dipendenza dall’IL-3 per la sopravvivenza e la proliferazione le rende una piattaforma eccezionalmente pulita: l’introduzione di una chinasi oncogenica o di una proteina di fusione rende le cellule indipendenti dai fattori di crescita, fornendo un risultato potente e quantificabile. I ricercatori sfruttano abitualmente questa proprietà per caratterizzare le proteine di fusione BCR-ABL, le mutazioni di FLT3, le fusioni di JAK2 e molti altri oncogeni chinasi clinicamente rilevanti, nonché per profilare gli inibitori delle chinasi a piccole molecole in formati ad alta produttività.

Punti chiave

• Ba/F3 è una linea cellulare murina di pro-B-cellule IL-3-dipendenti derivata dal midollo osseo del topo C3H, catalogata su Cellosaurus con il numero di accesso CVCL_0161.
• La sospensione dell'IL-3 costituisce un test di selezione rigoroso: le cellule parentali muoiono, mentre le cellule che esprimono una chinasi oncogenica attiva — o qualsiasi altro costrutto che fornisca un segnale di crescita costitutivo — sopravvivono e proliferano.
• Questa linea cellulare è stata ampiamente utilizzata per lo studio delle proteine di fusione BCR-ABL, delle mutazioni del gene FLT3, della via di segnalazione JAK–STAT e della biologia dei recettori delle citochine.
• Le cellule Ba/F3 si stanno dimostrando sempre più adatte allo screening ad alta produttività degli inibitori delle chinasi, diventando così un pilastro fondamentale nella scoperta di farmaci antitumorali mirati. ^[2]
• Da Ba/F3 sono state generate centinaia di linee cellulari derivate portatrici di mutazioni oncogeniche ben definite, che coprono EGFR, ALK, ROS1, RET, NTRK, FLT3 e molti altri bersagli clinicamente rilevanti.

Che cos’è il Ba/F₃?

Ba/F3 è una linea cellulare murina di pro-B-cellule dipendente da fattori, ottenuta dal midollo osseo di topi C3H; il sesso e l’età del donatore non sono registrati nei dati di Cellosaurus relativi a questa linea. La linea parentale non presenta mutazioni note delle chinasi attivanti e richiede IL-3 esogena per la sopravvivenza. Il suo tempo di raddoppio è di circa 20 ore in condizioni di coltura standard. La caratteristica principale che definisce questa linea è la sua stretta dipendenza dall’IL-3, il che significa che qualsiasi manipolazione genetica che conferisca una crescita indipendente dai fattori può essere rilevata rapidamente e in modo inequivocabile. Questa proprietà, unita all’assenza di mutazioni endogene delle chinasi che potrebbero introdurre fattori di confondimento, ha reso le cellule Ba/F3 uno strumento indispensabile per analizzare il potenziale oncogenico delle fusioni di chinasi, delle mutazioni puntiformi e delle molecole di segnalazione costitutivamente attive nell’ambito della biologia dei tumori ematopoietici e solidi. Va notato che l’assenza di un’annotazione relativa a una mutazione non equivale a un background genetico incontaminato: Cellosaurus registra anche dati sulle variazioni derivati dall’array SNP per questa linea.

L'analisi del profilo genomico mediante array SNP ha corretto un errore di attribuzione di lunga data riguardo all'origine di questa linea. La letteratura precedente descriveva la linea Ba/F3 come derivante da un topo BALB/c, ma l'analisi genomica ne ha confermato l'origine C3H. ^[1] Delle 99 linee cellulari di topo esaminate in quello studio, la Ba/F3 era l’unica linea il cui background genetico non corrispondeva al ceppo di origine riportato; la discrepanza è stata confermata in modo indipendente dal RIKEN, distributore della linea, e un confronto morfologico con altre linee derivate dal C3H ha indicato che la Ba/F3 è una linea cellulare distinta piuttosto che il risultato di una contaminazione incrociata. Questo risultato sottolinea l’importanza dell’autenticazione di routine delle linee cellulari, in particolare per le linee di topo in cui la sola analisi del profilo STR potrebbe non essere sufficiente a distinguere i ceppi inbred. I ricercatori che utilizzano la linea Ba/F3 dovrebbero fare riferimento al numero di accesso Cellosaurus CVCL_0161 per garantire un’identificazione univoca nelle pubblicazioni.

Informazioni sulla coltura cellulare

Vantaggi delle celle Ba/F3

Il vantaggio più significativo delle cellule Ba/F3 è il loro meccanismo di sopravvivenza binario, dipendente dall’IL-3. In assenza di IL-3, le cellule Ba/F3 parentali subiscono rapidamente l’apoptosi. L’introduzione di una chinasi oncogenica o di una proteina di fusione salva le cellule dalla morte, consentendo una selezione diretta dei cloni stabilmente trasformati senza ricorrere a complessi costrutti reporter. Questa proprietà è stata sfruttata in numerosi formati di analisi, dai classici test di sopravvivenza delle colonie ai moderni screening di proliferazione ad alta produttività per la caratterizzazione dei composti. ^[2] La semplicità e l’affidabilità della lettura dei risultati rendono i test basati sul Ba/F3 un sistema di prima valutazione ampiamente utilizzato per classificare la potenza degli inibitori delle chinasi, sebbene i valori assoluti di potenza continuino a dipendere dal test e dal laboratorio e debbano essere confrontati con cautela tra i vari studi. ^[21]

Le cellule Ba/F3 sono inoltre geneticamente malleabili e facili da trasfettare o transdurre. La trasposizione di costrutti di espressione tramite vettori retrovirali, lentivirali e mediante elettroporazione consente di ottenere in modo efficiente sottolinee con espressione stabile. Ciò ha permesso di generare centinaia di linee derivate portatrici di mutazioni clinicamente rilevanti in geni bersaglio quali EGFR, FLT3, BCR-ABL, EML4-ALK e RET, tra molti altri. L’assenza di mutazioni endogene confondenti delle chinasi nella linea parentale garantisce che le risposte fenotipiche siano attribuibili specificamente al transgene introdotto. Inoltre, il tempo di raddoppio di circa 20 ore favorisce un rapido rendimento sperimentale, riducendo notevolmente i tempi dei test rispetto alle colture di cellule primarie a crescita più lenta.

La piattaforma Ba/F3 si è dimostrata particolarmente adatta alle applicazioni di identificazione delle sequenze di segnale. Kojima e Kitamura hanno sfruttato un costrutto di recettore delle citochine costitutivamente attivo per reindirizzare la dipendenza di crescita delle cellule Ba/F3 verso la localizzazione sulla superficie cellulare delle proteine dotate di peptide segnale, consentendo uno screening su larga scala del cDNA per identificare i prodotti genici secreti e quelli destinati alla membrana. ^[3] Questa applicazione creativa illustra come la dipendenza dalle cellule Ba/F3 dall’IL-3 possa essere sfruttata ben oltre il semplice studio degli oncogeni chinasi, rendendo questa linea cellulare una piattaforma versatile per lo screening genetico.

Limiti delle celle Ba/F3

Nonostante i loro numerosi vantaggi, le cellule Ba/F3 presentano dei limiti biologici intrinseci che devono essere presi in considerazione nell’interpretazione dei dati sperimentali. Trattandosi di una linea cellulare murina di pro-B, esse sono prive di molti adattatori di segnalazione e corecettori presenti nelle cellule tumorali umane. I valori di potenza degli inibitori e le risposte di segnalazione a valle osservate nelle cellule Ba/F3 potrebbero non riflettere accuratamente l’attività nelle cellule tumorali umane primarie o nel materiale derivato dai pazienti. I ricercatori che studiano la resistenza alle terapie mirate per l’adenocarcinoma polmonare, ad esempio, devono convalidare i risultati ottenuti sulle cellule Ba/F3 in modelli cellulari umani più rilevanti dal punto di vista fisiologico prima di trarre conclusioni cliniche.

Anche il background genomico di questa linea è stato oggetto di interpretazioni errate. Per decenni, la linea Ba/F3 è stata attribuita a un’origine BALB/c, ma l’analisi del profilo SNP ha dimostrato che essa deriva da un topo C3H. ^[1] Lo stesso studio ha rilevato segni di aneuploidia in circa il 42% delle linee cellulari murine esaminate, compresa una quota significativa di linee derivate da tessuto normale anziché tumorale; la linea Ba/F3 stessa è stata segnalata per un errore di identificazione piuttosto che per una variazione del numero di copie, ma il risultato generale illustra con quanta facilità si accumuli la deriva cariotipica in coltura. Tale instabilità a numeri elevati di passaggi potrebbe influenzare i risultati della segnalazione, le misurazioni della sensibilità ai farmaci e la riproducibilità dei fenotipi trasformati. I ricercatori dovrebbero quindi lavorare con un numero ridotto di passaggi e autenticare regolarmente le loro scorte.

Infine, le cellule Ba/F3 non riproducono integralmente il microambiente tumorale né le interazioni stromali presenti nelle neoplasie ematologiche. Inoltre, non presentano l’espressione endogena di molti componenti di segnalazione umani, il che significa che le interazioni con i co-recettori, importanti per la funzione degli oncogeni, potrebbero essere assenti o divergenti. Gli studi sui recettori delle citochine complessi a più subunità o sui recettori che richiedono una segnalazione dipendente dalla glicosilazione potrebbero necessitare di sistemi cellulari umani complementari per giungere a conclusioni biologicamente valide. Nonostante queste riserve, le cellule Ba/F3 rimangono uno strumento di prima linea potente e ampiamente accettato nella biologia delle chinasi.

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Applicazioni

Ricerca di farmaci mirati alle chinasi e screening degli oncogeni

Le cellule Ba/F3 sono diventate la piattaforma cellulare dominante per la scoperta di farmaci mirati alle chinasi. Warmuth e colleghi hanno fornito una valutazione completa del sistema Ba/F3 a questo scopo, descrivendo come il test di indipendenza dall’IL-3 possa essere adattato a formati ad alta produttività per valutare sia la potenza oncogenica delle mutazioni delle chinasi sia la capacità degli inibitori delle chinasi a piccole molecole di invertire la crescita indipendente dal fattore. ^[2]La revisione ha evidenziato che le cellule Ba/F3 ospitano una notevole varietà di chinasi oncogeniche, rendendole una piattaforma universale per la profilazione iniziale delle varianti del chinoma associate al cancro prima di passare a modelli cellulari umani più complessi.

La trappola per sequenze di segnale sviluppata da Kojima e Kitamura ha dimostrato che le cellule Ba/F3 possono essere utilizzate non solo per lo studio degli oncogeni chinasi, ma anche per lo screening funzionale delle librerie di cDNA. ^[3]Accoppiando un recettore delle citochine costitutivamente attivo alla funzione del peptide di segnale, un singolo esperimento pilota ha prodotto 150 cloni già noti — tutti codificanti proteine secrete o di superficie cellulare — insieme a 48 nuovi cloni di cDNA, comprese proteine di membrana di tipo II che erano sfuggite alle precedenti strategie basate sulla trappola della sequenza di segnale. Questo approccio illustra la scalabilità della piattaforma Ba/F3 al di là della classica validazione dei bersagli farmacologici.

L’estrema diversità delle linee derivate da Ba/F3 ora catalogate in Cellosaurus — che comprendono centinaia di varianti dell’EGFR, fusioni ALK, riarrangiamenti RET, fusioni NTRK e mutazioni di resistenza — sottolinea come la linea parentale Ba/F3 sia diventata una piattaforma fondamentale per la ricerca oncologica di precisione. Ogni linea derivata conserva il background pulito dipendente dall’IL-3, aggiungendo al contempo una singola variabile genetica definita, il che consente studi sistematici sulla relazione struttura-attività a livello cellulare.

Mutazioni FLT3 e leucemia mieloide acuta

Una delle applicazioni di maggiore impatto delle cellule Ba/F3 è stata la caratterizzazione delle mutazioni di FLT3 (tirosina chinasi 3 simile a fms) nella leucemia mieloide acuta (LMA). La duplicazione interna in tandem di FLT3 è tra le lesioni oncogeniche più frequenti nella LMA, segnalata in circa il 20–30% dei casi a seconda della coorte e del metodo di rilevamento. ^[4][20]Hayakawa e colleghi hanno dimostrato che il gene FLT3 con duplicazione in tandem, introdotto nelle due linee cellulari IL-3-dipendenti 32D e Ba/F3, attiva in modo costitutivo sia STAT5 che la MAP chinasi e conferisce una crescita autonoma e indipendente dall’IL-3, mentre il FLT3 wild-type favoriva solo una proliferazione minima anche in presenza di stimolazione continua da parte del ligando.^[4] Questo studio fondamentale ha consacrato le cellule Ba/F3 come sistema di analisi funzionale primario per la validazione delle mutazioni del FLT3 e rimane un punto di riferimento metodologico per il settore.

I lavori successivi si sono ampiamente basati su queste fondamenta. Studi sulla fucosilazione del nucleo hanno dimostrato che il knockout del gene Fut8 mediante CRISPR/Cas9 nelle cellule Ba/F3 che esprimono FLT3 di tipo selvatico era sufficiente a indurre una proliferazione indipendente dall’IL-3 — un effetto non osservato nelle cellule parentali — accompagnata da un aumento della fosforilazione della tirosina e dall’attivazione di STAT5, AKT ed ERK, nonché da una dimerizzazione di FLT3 indipendente dal ligando.^[20] Ciò ha rivelato un livello di regolazione legato alla glicosilazione che non era stato precedentemente considerato per questo recettore. La resistenza all’inibitore di FLT3 gilteritinib è stata inoltre analizzata nei modelli Ba/F3 FLT3-ITD, dove la resistenza a concentrazioni farmacologiche clinicamente raggiungibili richiedeva tipicamente mutazioni secondarie multiple, molte delle quali non segnalate in precedenza. ^[21]Lo stesso lavoro ha valutato sistematicamente i punti di forza e i limiti dei modelli Ba/F3 FLT3-ITD, osservando che, sebbene la piattaforma sia particolarmente adatta a identificare e classificare le mutazioni di resistenza, non riproduce la complessa nicchia del midollo osseo che determina la resistenza nei pazienti.

Biologia di BCR-ABL e leucemia mieloide cronica

Le cellule Ba/F3 trasfettate con proteine di fusione BCR-ABL sono state fondamentali per comprendere la biologia molecolare della leucemia mieloide cronica (LMC). Canitrot e colleghi hanno utilizzato cellule Ba/F3 che esprimono le isoforme p190 e p210 di BCR-ABL per dimostrare che BCR-ABL conferisce un fenotipo mutatore, aumentando la frequenza delle mutazioni spontanee da tre a cinque volte rispetto alle cellule parentali, e che questa instabilità genomica era associata a una maggiore espressione della DNA polimerasi beta. ^[6]Questa scoperta ha fornito un meccanismo attraverso il quale BCR-ABL potrebbe guidare la progressione della malattia dalla fase cronica della LMC alla leucemia mieloide acuta.

La proteina adattatrice CRKL, una delle principali fosfoproteine tirosiniche presenti nei neutrofili leucemici dei pazienti affetti da LMC, è stata studiata nelle cellule Ba/F3 da Uemura e colleghi. ^[7]Le cellule che sovraesprimevano CRKL a lunghezza intera mostravano una maggiore adesione alla fibronectina e una morfologia alterata su superfici rivestite di fibronectina, mentre i mutanti di delezione privi del dominio SH2 o del dominio SH3 N-terminale non presentavano tali caratteristiche — indicando che entrambi i domini sono necessari per l’effetto. L’adesione è stata bloccata da un anticorpo anti-integrina beta1, sebbene la sovraespressione di CRKL non abbia modificato l’espressione di superficie dell’integrina beta1 né abbia indotto spontaneamente il suo epitopo di attivazione. Questi esperimenti indicano il coinvolgimento di CRKL nelle vie di segnalazione che regolano l’adesione mediata dalle integrine a valle di BCR-ABL.

Nel loro insieme, questi studi su BCR-ABL dimostrano come le cellule Ba/F3 consentano un’analisi chiara della segnalazione guidata dall’oncogene, eliminando la complessità dell’attività endogena delle chinasi. La piattaforma continua a supportare la caratterizzazione delle mutazioni di resistenza agli inibitori di BCR-ABL, con linee dedicate di Ba/F3 BCR-ABL e derivati di BCR-ABL-T315I ora disponibili per la profilazione diretta degli inibitori nel contesto di genotipi di resistenza clinicamente rilevanti.

Vie di segnalazione JAK–STAT

Le cellule Ba/F3 hanno rappresentato un modello fondamentale per individuare quali eventi di segnalazione a valle dei recettori delle citochine siano effettivamente necessari per la crescita. Liu e colleghi hanno costruito una molecola chimerica (beta/JAK2) costituita dalle regioni extracellulari e transmembranarie di betac fuse a JAK2 e l’hanno espressa nelle cellule Ba/F3. ^[8]La molecola chimerica era costitutivamente fosforilata e sufficiente a indurre la sopravvivenza e la proliferazione indipendenti dall’IL-3. In particolare, STAT5, Shc e SHP-2 non erano fosforilati in queste cellule e l’attività dei promotori della beta-caseina e di c-fos non era potenziata, mentre la trascrizione di c-myc era costitutivamente attivata. Gli autori hanno concluso che l’attivazione di JAK2 da sola è sufficiente per la sopravvivenza e la proliferazione e che l’attivazione di STAT5 e della MAP chinasi non è necessaria per questi particolari esiti — un utile promemoria del fatto che la crescita indipendente dal fattore nelle cellule Ba/F3 non implica di per sé l’attivazione di STAT.

Il ruolo di STAT5 nella segnalazione dell’IFN-alfa è stato esaminato nelle cellule Ba/F3 da Jaster e colleghi, i quali hanno dimostrato che l’IFN-alfa attiva il legame al DNA di STAT5A e STAT5B, ma che l’IL-3 è un induttore di gran lunga più potente di entrambe le isoforme. ^[9]Un mutante JAK2 dominante-negativo ha soppresso l’attivazione di STAT5 indotta dall’IL-3, ma non quella indotta dall’IFN-alfa, rivelando che le due citochine attivano meccanismi a monte indipendenti per convergere sullo stesso fattore di trascrizione; gli autori hanno tuttavia concluso che STAT5 non è fondamentale per la segnalazione dell’IFN-alfa in questo sistema.

L’attivazione costitutiva della via JAK–STAT è stata modellata nelle cellule Ba/F3 utilizzando la proteina di fusione TEL–JAK2, una fusione oncogenica associata alla leucemia linfoblastica acuta a cellule T. Ho e colleghi hanno dimostrato che la fusione del dominio puntiforme di TEL con il dominio funzionale della chinasi JAK2 (JH1) ha reso le cellule Ba/F3 indipendenti dai fattori di crescita, mentre la fusione con il dominio pseudochinasi (JH2) o con un dominio JH1 inattivo dal punto di vista chinasi non ha prodotto lo stesso effetto; i costrutti attivi inducevano la fosforilazione costitutiva della tirosina di STAT1, STAT3 e STAT5.^[5] Più recentemente, è stato scoperto che il metotrexato sopprime la fosforilazione di TEL–JAK2, di STAT3 e di STAT5 nelle cellule Ba/F3 attraverso un meccanismo dipendente dal metabolismo del folato: l’effetto è stato invertito dall’acido folinico, riprodotto dal knockout via CRISPR/Cas9 della diidrofolato reduttasi e non imitato dal 5-fluorouracile. ^[22]

La segnalazione dell’IL-4 attraverso STAT6 è stata studiata da Gingras e colleghi, i quali hanno dimostrato che i coattivatori p300/CBP sono necessari per l’induzione trascrizionale mediata da STAT6 e che la sovraespressione di p300/CBP potenzia l’attività del gene reporter indotta dall’IL-4. ^[10]La maggior parte di quel lavoro è stata condotta su cellule COS7 e HeLa; le cellule Ba/F3 hanno fornito la prova endogena fondamentale, ovvero la co-immunoprecipitazione di STAT6 nativo insieme a CBP.

Segnalazione dei recettori delle citochine e biologia delle cellule ematopoietiche

Il sistema recettoriale GM-CSF/IL-3/IL-5 è stato ampiamente mappato utilizzando cellule Ba/F3. Itoh e colleghi hanno eseguito un'analisi mutazionale sistematica degli otto residui di tirosina citoplasmatici della subunità beta comune (betac), esprimendo una serie di mutanti da tirosina a fenilalanina insieme alla subunità alfa umana di tipo selvatico nelle cellule Ba/F3 per determinare quali residui mediano specifici output di segnalazione. ^[12]Esaminando una serie parallela di mutagenesi, Okuda e colleghi hanno riportato che la mutazione di tutte e otto le tirosine citoplasmatiche nella GMR-beta ha ridotto la fosforilazione del recettore stesso, di SHP2 e SHC, ma non ha inibito la segnalazione proliferativa a breve termine né la fosforilazione di JAK2 e STAT5, illustrando una gerarchia delle funzioni dei domini del recettore. ^[13]È stato dimostrato che la tirosina chinasi del recettore RON attiva la via del recettore beta dell’IL-3 nelle cellule Ba/F3 per indurre cambiamenti morfologici che comportano la ridistribuzione dell’actina F e cambiamenti unici nella forma del nucleo, rivelando un’interazione tra i sistemi delle tirosin-chinasi recettoriali e dei recettori delle citochine. ^[14]

Sono stati inoltre analizzati i requisiti dei sottodomini del recettore per il recettore dell’IL-2. Utilizzando linee Ba/F3 trasfettate, Hunt e colleghi hanno identificato il dominio acido e la regione ricca di serina prossimale alla membrana della catena beta del recettore dell’IL-2 come necessari per l’attivazione delle MAP chinasi p38 e p54, con Tyr338 — il sito di legame con Shc — che funge da intermediario critico. ^[11]Poiché il dominio acido non è indispensabile per la proliferazione indotta dall’IL-2, gli autori hanno concluso che né l’attivazione della MAP chinasi p38 né quella della p54 è effettivamente necessaria per la crescita delle cellule Ba/F3 indotta dall’IL-2, una dissociazione che si è verificata anche per le cellule T primarie.

Anche la regolazione del ciclo cellulare nei progenitori ematopoietici è stata studiata utilizzando le cellule Ba/F3. Mahmud e colleghi hanno dimostrato che il TGF-beta1 rallentava la progressione dalla fase G1 alla fase S nelle cellule Ba/F3, associando questo rallentamento della crescita alla sovraregolazione della proteina Bcl-2 e dell’inibitore della CDK p27. ^[15]La sinergia dell’IL-4 con Raf-1 attivato nel guidare la proliferazione a lungo termine delle cellule Ba/F3 è stata studiata da Levings e colleghi, i quali hanno scoperto che l’IL-4 da sola non era in grado di sostenere la crescita, ma poteva cooperare con Ras o Raf-1 attivati per sostenere una proliferazione continua paragonabile a quella indotta dall’IL-3. ^[16]

I sistemi di commutazione dei recettori ingegnerizzati hanno sfruttato la dipendenza delle cellule Ba/F3 dall’IL-3 per applicazioni di terapia genica. Kume e colleghi hanno sviluppato un recettore del G-CSF fuso con la girasi B batterica (GcrGyr), in cui l’antibiotico dimerizzante coumermicina innescava la proliferazione delle cellule Ba/F3 indipendente dall’IL-3, come sistema genico amplificatore selettivo di prova di concetto per l’espansione di cellule ematopoietiche geneticamente modificate. ^[17]Analogamente, è stato dimostrato che una proteina di fusione tra l’IL-11 e il recettore solubile dell’IL-11 agisce come superagonista sulle cellule Ba/F3 trasfettate con gp130 prive del recettore alfa dell’IL-11 legato alla membrana, dimostrando che i componenti del recettore solubile possono sostituire funzionalmente le subunità transmembranarie. ^[18]

Conclusione

Le cellule Ba/F3 (CVCL_0161) rappresentano una delle piattaforme di linee cellulari murine più versatili e ampiamente validate nella moderna ricerca biomedica. La loro stretta dipendenza dall’IL-3 fornisce un test funzionale elegante e riproducibile per le chinasi oncogeniche — comprese le proteine di fusione BCR-ABL, le mutazioni FLT3, e le fusioni JAK2 — e per gli inibitori delle chinasi a piccole molecole con rilevanza clinica per la leucemia mieloide cronica, la leucemia mieloide acuta, la leucemia-linfoma linfoblastico delle cellule precursori e l’adenocarcinoma polmonare. Decenni di ricerca hanno consolidato la segnalazione JAK–STAT, la biologia dei recettori delle citochine e la regolazione delle cellule ematopoietiche come ambiti fondamentali di applicazione delle cellule Ba/F3. L’adattabilità di questa linea ha consentito la creazione di centinaia di modelli derivati portatori di mutazioni di resistenza definite, rendendola indispensabile nello sviluppo di terapie mirate. Se desiderate avviare o ampliare il vostro programma di ricerca sulla biologia delle chinasi o di scoperta di nuovi farmaci, le cellule Ba/F3 sono disponibili su cytion.com: visitate la pagina del prodotto per richiedere informazioni o effettuare un ordine oggi stesso.

Pubblicazioni principali

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) La profilazione tramite array SNP di linee cellulari murine identifica i loro ceppi di origine e rivela contaminazione incrociata e aneuploidia diffusa. BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) Le cellule Ba/F3 e il loro impiego nella scoperta di farmaci per le chinasi. Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) Una trappola per sequenze di segnalazione basata su un recettore delle citochine costitutivamente attivo. Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) La duplicazione in tandem di Flt3 attiva in modo costitutivo STAT5 e la MAP chinasi e induce una crescita cellulare autonoma in linee cellulari dipendenti dall’IL-3. Oncogene. PMID: 10698507
5. Ho JM, Beattie BK, Squire JA (1999) La fusione del fattore di trascrizione ets TEL con Jak2 determina una segnalazione Jak-Stat costitutiva. Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y, Lautier D, Laurent G (1999) Fenotipo mutatore delle linee cellulari Ba/F3 trasfettate con BCR–ABL e sua associazione con una maggiore espressione della DNA polimerasi beta. Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N, Salgia R, Ewaniuk DS (1999) Coinvolgimento della proteina adattatrice CRKL nell’adesione mediata dall’integrina. Oncogene. PMID: 10362355
8. Liu CB, Itoh T, Arai K (1999) L’attivazione costitutiva di JAK2 conferisce alle cellule BA/F3 una sopravvivenza e una proliferazione indipendenti dall’interleuchina-3 murina. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R, Tschirch E, Bittorf T (1999) Ruolo di STAT5 nella trasduzione del segnale dell’interferone alfa nelle cellule Ba/F3. Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S, Simard J, Groner B (1999) p300/CBP è necessario per l’induzione trascrizionale da parte dell’interleuchina-4 e interagisce con Stat6. Nucleic Acids Research. PMID: 10373589
11. Hunt AE, Lali FV, Lord JD (1999) Ruolo dei sottodomini della catena beta del recettore dell’interleuchina (IL)-2 e di Shc nell’attivazione della proteina chinasi p38 attivata dai mitogeni (MAP) e della proteina chinasi p54 MAP. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Itoh T, Liu R, Arai K (1999) Influenza differenziale dei residui di tirosina della subunità beta del recettore comune sui segnali multipli indotti dal GM-CSF umano. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. PMID: 10329850
13. Okuda K, Foster R, Griffin JD (1999) Domini di segnalazione della catena beta c del recettore del GM-CSF/IL-3/IL-5. Annals of the New York Academy of Sciences. [Rassegna] PMID: 10372132
14. Mera A, Suga M, Ando M (1999) Induzione di cambiamenti nella forma cellulare attraverso l’attivazione del recettore a catena beta comune dell’interleuchina-3 da parte della tirosin-chinasi di tipo RON. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10336478
15. Mahmud N, Katayama N, Nishii K (1999) Possibile coinvolgimento di bcl-2 nella regolazione della progressione del ciclo cellulare delle cellule emopoietiche da parte del fattore di crescita trasformante beta-1. British Journal of Haematology. PMID: 10233423
16. Levings MK, Bessette DC, Schrader JW (1999) L’interleuchina-4 agisce in sinergia con Raf-1 per promuovere la proliferazione a lungo termine e l’attivazione della chinasi N-terminale di c-Jun. Blood. PMID: 10339476
17. Kume A, Ito K, Ueda Y (1999) Un gene di fusione tra il recettore del G-CSF e la girasi B: un nuovo tipo di interruttore molecolare per l’espansione delle cellule ematopoietiche geneticamente modificate. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 10381335
18. Pflanz S, Tacken I, Grötzinger J (1999) Una proteina di fusione tra l’interleuchina-11 e il recettore solubile dell’interleuchina-11 agisce come superagonista sulle cellule che esprimono gp130. FEBS Letters. PMID: 10350068
19. Palacios R, Steinmetz M (1985) Cloni murini IL-3-dipendenti che esprimono l’antigene di superficie B-220, contengono geni Ig in configurazione germinale e generano linfociti B in vivo. Cell. PMID: 3924409
20. Duan C, Fukuda T, Isaji T (2020) La carenza di fucosilazione del core attiva la segnalazione cellulare dipendente dall’espressione di FLT3 in un sistema cellulare Ba/F3. The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Yang J, Friedman R (2025) Punti di forza e limiti delle cellule Ba/F3 nella modellizzazione della resistenza alla LMA indotta da FLT3. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Saito M, Takeda K, Yoshino M (2026) Il metotrexato inibisce la via TEL-JAK2-STAT attraverso un meccanismo dipendente dal metabolismo dei folati nelle cellule Ba/F3. International Immunopharmacology. PMID: 42287956