Въведение

Ba/F3 клетки, известна също под синонимите BA/F3, BaF3, BAF3 и Baf3 (Cellosaurus, номер в базата данни CVCL_0161), представлява мишина интерлейкин-3 (IL-3)-зависима про-B-клетъчна линия, получена от костния мозък. Линията е описана за първи път от Паласиос и Щайнметц през 1985 г. сред група непрекъснато пролифериращи, IL-3-зависими клони от костния мозък, които носеха маркера на B-клетъчната линия B-220 и запазваха гените си за имуноглобулини в зародишна конфигурация. ^[19] Първоначално се смяташе, че произхожда от мишка от линията BALB/c, но последващото профилиране чрез SNP-матрица установи, че линията всъщност произхожда от мишка от линията C3H. ^[1] Откакто са разработени, Ba/F3-клетките се превърнаха в една от най-широко използваните моделни системи в изследванията на хематопоетичния сигнализационен път и при разработването на онкологични лекарства. Тяхната строга зависимост от IL-3 за оцеляване и пролиферация ги превръща в изключително чиста платформа: въвеждането на онкогенна киназа или фузионен протеин прави клетките независими от фактора, което осигурява мощен и количествено измерим резултат. Изследователите рутинно използват това свойство за характеризиране на BCR-ABL фузионни протеини, FLT3 мутации, JAK2 фузии и много други клинично значими киназни онкогени, както и за профилиране на нискомолекулни киназни инхибитори във формати с висока производителност.

Основни изводи

• Ba/F3 е миши IL-3-зависима про-B-клетъчна линия, получена от костния мозък на мишка от линията C3H, каталогизирана в Cellosaurus под номер CVCL_0161.
• Преустановяването на IL-3 осигурява строг селекционен тест: родителските клетки умират, докато клетките, изразяващи активна онкогенна киназа — или какъвто и да е друг конструкт, който осигурява конститутивен сигнал за растеж — оцеляват и се размножават.
• Тази клетъчна линия се използва широко за изследване на BCR-ABL-фузионни протеини, FLT3-мутации, JAK–STAT-сигнализацията и биологията на цитокиновите рецептори.
• Клетките Ba/F3 се използват все по-често за скрининг на инхибитори на кинази с висока производителност, което ги превръща в основен елемент от разработването на целеви лекарства за рак. ^[2]
• От Ba/F3 са създадени стотици производни клетъчни линии, носещи определени онкогенни мутации, обхващащи EGFR, ALK, ROS1, RET, NTRK, FLT3 и много други клинично значими мишени.

Какво представлява Ba/F3?

Ba/F3 е фактор-зависима миши про-В-клетъчна линия, получена от костния мозък на мишка от линия C3H; полът и възрастта на донора не са отбелязани в данните на Cellosaurus за тази линия. Родителската линия не носи известни активиращи киназни мутации и се нуждае от екзогенен IL-3 за оцеляване. Времето ѝ за удвояване е приблизително 20 часа при стандартни условия на култивиране. Основната определяща характеристика на линията е нейната строга зависимост от IL-3, което означава, че всяка генетична манипулация, осигуряваща независим от фактори растеж, може да бъде открита бързо и недвусмислено. Това свойство, съчетано с липсата на смущаващи ендогенни мутации в киназите, е превърнало Ba/F3 клетките в незаменим инструмент за анализиране на онкогенния потенциал на киназните фузии, точковите мутации и конститутивно активните сигнални молекули в биологията на хематопоетичните и солидните тумори. Трябва да се отбележи, че липсата на анотация за мутации не е равнозначна на генетично незасегнат фон: Cellosaurus също така регистрира данни за вариации, получени чрез SNP матрица, за тази линия.

Профилирането чрез SNP-матрица коригира дългогодишната грешка в определянето на произхода на тази линия. В ранната литература Ba/F3 се описваше като произхождаща от мишка от линията BALB/c, но геномният анализ потвърди, че произходът ѝ е от линията C3H. ^[1] От 99-те миши клетъчни линии, изследвани в това проучване, Ba/F3 беше единствената линия, чийто генетичен фон не съответстваше на посочения ѝ произходен щам; разликата беше независимо потвърдена от RIKEN, дистрибутор на линията, а морфологичното сравнение с други линии, произхождащи от C3H, показа, че Ba/F3 е самостоятелна клетъчна линия, а не резултат от кръстосано замърсяване. Това откритие подчертава важността на рутинната автентификация на клетъчните линии, особено при миши линии, при които само STR-профилирането може да се окаже недостатъчно за разграничаване на инбредни щамове. Изследователите, които използват Ba/F3, трябва да посочват регистрационния номер CVCL_0161 в Cellosaurus, за да гарантират еднозначна идентификация в публикациите.

Информация за клетъчните култури

Предимства на Ba/F3-клетките

Най-значителното предимство на Ba/F3-клетките е техният бинарен, зависим от IL-3 механизъм за оцеляване. При липса на IL-3 родителските Ba/F3-клетки бързо претърпяват апоптоза. Въвеждането на онкогенна киназа или фузионен протеин спасява клетките от смърт, което позволява лесен подбор на стабилно трансформирани клони без сложни репортерни конструкции. Това свойство е използвано в множество формати на тестове – от класическите тестове за оцеляване на колонии до съвременните скрининги за пролиферация с висока производителност за профилиране на съединения. ^[2] Простотата и надеждността на отчитането превръщат тестовете на базата на Ba/F3 в широко използвана система за първоначална оценка при класифициране на ефикасността на инхибиторите на кинази, въпреки че абсолютните стойности на ефикасността продължават да зависят от конкретния тест и лабораторията и трябва да се сравняват внимателно между различните проучвания. ^[21]

Клетките Ba/F3 също са генетично пластични и лесни за трансфекция или трансдукция. Доставянето на експресионни конструкции чрез ретровируси, лентивируси и електропорация ефективно води до получаване на стабилно експресиращи подлинии. Това е позволило създаването на стотици производни линии, носещи клинично значими мутации в мишени като EGFR, FLT3, BCR-ABL, EML4-ALK и RET, както и в много други. Отсъствието на смущаващи ендогенни мутации на киназите в родителската линия гарантира, че фенотипните реакции се дължат конкретно на въведения трансген. Освен това времето за удвояване от приблизително 20 часа подпомага бързата експериментална производителност, като значително съкращава времето за провеждане на тестовете в сравнение с по-бавно растящите първични клетъчни култури.

Платформата Ba/F3 се е доказала като изключително подходяща за приложения, свързани с откриването на сигнални последователности. Коджима и Китамура използваха конструкт на постоянно активен цитокинов рецептор, за да пренасочат зависимостта на растежа на Ba/F3 към локализация на повърхността на клетката на протеини, носещи сигнален пептид, което позволи широкомащабно скриниране на cDNA за идентифициране на секретирани и насочени към мембраната генни продукти. ^[3] Това творческо приложение илюстрира как зависимостта на Ba/F3-клетките от IL-3 може да бъде използвана за цели, които далеч надхвърлят обичайните изследвания на онкогени, свързани с кинази, като по този начин тази клетъчна линия се утвърждава като многофункционална платформа за генетичен скрининг.

Ограничения на Ba/F3 клетките

Въпреки многобройните си предимства, Ba/F3 клетките имат присъщи биологични ограничения, които трябва да се вземат предвид при интерпретирането на експерименталните данни. Като миши про-В-клетъчна линия, те не разполагат с много от сигналните адаптори и корецептори, присъстващи в човешките ракови клетки. Стойностите на инхибиторната активност и последващите сигнални реакции, наблюдавани в Ba/F3 клетките, може да не отразяват точно активността в първични човешки туморни клетки или в материал, получен от пациенти. Изследователите, изучаващи резистентността към целеви терапии за белодробен аденокарцином, например, трябва да валидират резултатите, получени с Ba/F3 клетки, в по-физиологично релевантни модели на човешки клетки, преди да правят клинични заключения.

Геномният произход на тази линия също е бил обект на погрешно тълкуване. В продължение на десетилетия Ba/F3 се приписваше на произход от BALB/c, но профилирането чрез SNP-матрица показа, че тя произхожда от мишка от линията C3H. ^[1] Същото проучване установи доказателства за анеуплоидия при около 42 % от изследваните миши клетъчни линии, включително значителна част от линиите, получени от нормална, а не от туморна тъкан; самата линия Ba/F3 беше отбелязана като грешно идентифицирана, а не поради промяна в броя на копията, но общото заключение илюстрира колко лесно се натрупва кариотипната дрейфа в култура. Такава нестабилност при голям брой пасажи може да повлияе на резултатите от сигнализацията, измерванията на чувствителността към лекарства и възпроизводимостта на трансформираните фенотипи. Затова изследователите трябва да работят с малък брой пасажи и редовно да удостоверяват автентичността на своите запаси.

Накрая, Ba/F3 клетките не възпроизвеждат изцяло туморната микросреда или стромалните взаимодействия, присъщи на хематологичните злокачествени заболявания. Те също така не притежават ендогенна експресия на много човешки сигнални компоненти, което означава, че взаимодействията между корецепторите, важни за функцията на онкогените, могат да липсват или да се различават. Изследванията на сложни цитокинови рецептори с много субединици или на рецептори, изискващи гликозилиращо-зависима сигнализация, може да се наложи да използват допълнителни системи от човешки клетки, за да се достигне до биологично валидни заключения. Въпреки тези ограничения, Ba/F3 клетките остават мощен и широко признат инструмент от първа линия в киназната биология.

Вижте пълните технически характеристики и поръчайте

Приложения

Откриване на лекарства, насочени към кинази, и скрининг на онкогени

Клетките Ba/F3 се превърнаха в доминиращата клетъчна платформа за откриване на лекарства, насочени към кинази. Warmuth и колегите му предоставиха изчерпателна оценка на системата Ba/F3 за тази цел, като описаха как тестът за независимост от IL-3 може да бъде адаптиран към формати с висока производителност, за да се оцени както онкогенният потенциал на мутациите в киназите, така и способността на нискомолекулните инхибитори на киназите да обърнат растежа, независим от фактори. ^[2]В обзора се подчертава, че клетките Ba/F3 поддържат забележителна гама от онкогенни кинази, което ги превръща в универсална платформа за първоначално профилиране на варианти на кинома, свързани с рака, преди да се премине към по-сложни модели на човешки клетки.

Капанът за сигнална последователност, разработен от Коджима и Китамура, демонстрира, че Ba/F3 клетките могат да се използват не само за изследвания на киназни онкогени, но и за функционален скрининг на cDNA библиотеки. ^[3]Чрез свързване на постоянно активен цитокинов рецептор с функцията на сигналния пептид един-единствен пилотен експеримент доведе до получаването на 150 вече известни клона — всички кодиращи секретирани или повърхностни протеини — наред с 48 нови cDNA клона, включително мембранни протеини от тип II, които са убягнали от по-ранни стратегии за капани за сигнални последователности. Този подход илюстрира мащабируемостта на платформата Ba/F3 отвъд класическата валидация на лекарствени мишени.

Изключителното разнообразие от производни линии на Ba/F3, които сега са каталогизирани в Cellosaurus — обхващащи стотици варианти на EGFR, ALK-фузии, RET-прегрупирания, NTRK-фузии и мутации на резистентност — подчертава как родителската линия Ba/F3 се е превърнала в основополагаща платформа за прецизни онкологични изследвания. Всяка производна линия запазва чистия IL-3-зависим фон, като същевременно добавя една единствена дефинирана генетична променлива, което позволява систематични изследвания на връзката структура–активност на клетъчно ниво.

Мутации на FLT3 и остра миелоидна левкемия

Едно от най-значимите приложения на Ba/F3 клетките е характеризирането на FLT3 (fms-подобна тирозин киназа 3) мутации при остра миелоидна левкемия (AML). Вътрешното тандемно дублиране на FLT3 е сред най-честите онкогенни лезии при AML, отчитани при приблизително 20% до 30% от случаите в зависимост от кохортата и метода на откриване. ^[4][20]Хаякава и колегите му доказаха, че тандемно дублираният FLT3, въведен в двете IL-3-зависими линии 32D и Ba/F3, конститутивно активира както STAT5, така и MAP киназата и осигурява автономен, независим от IL-3 растеж, докато FLT3 от див тип поддържаше само минимална пролиферация дори при продължителна стимулация с лиганд.^[4] Това знаково проучване утвърди клетките Ba/F3 като основна функционална система за валидиране на мутациите на FLT3 и остава методологичен еталон в тази област.

Последващите изследвания се основават в голяма степен на тази основа. Изследвания на фокузилирането на ядрото показаха, че нокаутът на гена Fut8 чрез CRISPR/Cas9 в Ba/F3 клетки, експресиращи FLT3 от див тип, е достатъчен, за да предизвика IL-3-независима пролиферация — ефект, който не се наблюдава в родителските клетки — придружен от повишена тирозинова фосфорилация и активиране на STAT5, AKT и ERK, както и от независима от лиганд димеризация на FLT3.^[20] Това разкри ниво на регулация чрез гликозилиране, което досега не е било отбелязвано за този рецептор. Резистентността към инхибитора на FLT3 гилтеритиниб също е изследвана в модели Ba/F3 FLT3-ITD, където резистентността при клинично постижими концентрации на лекарството обикновено изискваше множество вторични мутации, някои от които не са били докладвани преди това. ^[21]В същото проучване систематично бяха преценени предимствата и ограниченията на моделите Ba/F3 FLT3-ITD, като се отбеляза, че макар платформата да е подходяща за идентифициране и класифициране на мутации, свързани с резистентност, тя не възпроизвежда сложната ниша в костния мозък, която определя резистентността при пациентите.

Биология на BCR-ABL и хронична миелоидна левкемия

Клетките Ba/F3, трансфектирани с фузионни протеини BCR-ABL, са изиграли ключова роля в разбирането на молекулярната биология на хроничната миелоидна левкемия (ХМЛ). Канитрот и колегите му използваха Ba/F3 клетки, експресиращи изоформите p190 и p210 на BCR-ABL, за да демонстрират, че BCR-ABL придава мутаторен фенотип, като увеличава честотата на спонтанните мутации от три до пет пъти в сравнение с родителските клетки, и че тази геномна нестабилност е свързана с повишена експресия на ДНК-полимераза бета. ^[6]Това откритие предостави механизъм, чрез който BCR-ABL може да предизвика прогресиране на заболяването от хронична фаза на CML към остра миелоидна левкемия.

Адаптерният протеин CRKL, един от основните тирозин-фосфопротеини в левкемичните неутрофили на пациенти с ХМЛ, беше изследван в Ba/F3 клетки от Уемура и колеги. ^[7]Клетките, които свръхекспресират CRKL в пълна дължина, показаха повишена адхезия към фибронектин и променена морфология върху повърхности, покрити с фибронектин, докато мутантите с делеция, при които липсваше или SH2, или N-терминалният SH3 домейн, не показаха такива ефекти — което показва, че и двата домейна са необходими за този ефект. Адхезията беше блокирана от анти-бета1-интегринов антитяло, въпреки че свръхекспресията на CRKL не промени повърхностната експресия на бета1-интегрина, нито спонтанно индуцира неговия активационен епитоп. Тези експерименти сочат, че CRKL участва в сигнални пътища, които регулират интегрин-медиираната адхезия надолу по веригата от BCR-ABL.

Като цяло тези изследвания на BCR-ABL илюстрират как Ba/F3 клетките позволяват ясно разграничаване на сигнализацията, задвижвана от онкогени, като премахват сложността на ендогенната киназна активност. Платформата продължава да подпомага характеризирането на мутациите, свързани с резистентност към инхибитори на BCR-ABL, като вече са налични специализирани линии Ba/F3 BCR-ABL и производни на BCR-ABL-T315I за директно профилиране на инхибитори в контекста на клинично значими генотипове на резистентност.

Сигнални пътища JAK–STAT

Клетките Ba/F3 са служили като основен модел за анализиране на това кои сигнални събития надолу по веригата от цитокиновите рецептори са действително необходими за растежа. Liu и колегите му конструираха химерична молекула (бета/JAK2), състояща се от екстрацелуларните и трансмембранните региони на бета-казеина, слита с JAK2, и я експресираха в клетки Ba/F3. ^[8]Химерата беше постоянно фосфорилирана и достатъчна, за да стимулира IL-3-независимо оцеляване и пролиферация. Забележително е, че STAT5, Shc и SHP-2 не бяха фосфорилирани в тези клетки, а активността на промоторите на бета-казеина и c-fos не беше повишена, докато транскрипцията на c-myc беше постоянно активирана. Авторите стигат до заключението, че само активирането на JAK2 е достатъчно за оцеляване и пролиферация и че активирането на STAT5 и MAP киназата не е необходимо за тези конкретни резултати — полезно напомняне, че независимият от фактори растеж в Ba/F3 клетките сам по себе си не предполага активиране на STAT.

Ролята на STAT5 в сигнализацията на IFN-алфа е изследвана в Ba/F3 клетки от Jaster и колеги, които показаха, че IFN-алфа активира свързването на STAT5A и STAT5B с ДНК, но че IL-3 е далеч по-мощен индуктор и на двете изоформи. ^[9]Доминантно-негативен мутант на JAK2 потискаше активирането на STAT5, предизвикано от IL-3, но не и това, предизвикано от IFN-алфа, което разкрива, че двата цитокина задействат независими механизми нагоре по веригата, за да се съберат върху един и същ транскрипционен фактор; въпреки това авторите стигнаха до заключението, че STAT5 не е от ключово значение за сигнализацията на IFN-алфа в тази система.

Конститутивната JAK–STAT активация е моделирана в Ba/F3 клетки с помощта на TEL–JAK2 фузионния протеин – онкогенна фузия, свързана с остра лимфобластна левкемия на Т-клетките. Хо и колегите му показаха, че сливането на острия домейн на TEL с функционалния киназен домейн на JAK2 (JH1) превърна Ba/F3-клетките в независими от фактори, докато сливането с псевдокиназния домейн (JH2) или с киназно-неактивен JH1-домейн не доведе до това; активните конструкти предизвикваха конститутивно фосфорилиране на тирозин на STAT1, STAT3 и STAT5.^[5] Наскоро беше установено, че метотрексатът потиска фосфорилирането на STAT3 и STAT5 от TEL–JAK2 STAT3 и STAT5 в Ba/F3 клетките чрез механизъм, зависещ от фолатния метаболизъм: ефектът беше обърнат от фолинова киселина, възпроизведен чрез CRISPR/Cas9 нокаут на дихидрофолат редуктазата и не беше имитиран от 5-флуороурацил. ^[22]

Сигнализацията на IL-4 чрез STAT6 беше изследвана от Gingras и колеги, които доказаха, че коактиваторите p300/CBP са необходими за медиираната от STAT6 транскрипционна индукция и че свръхекспресията на p300/CBP усилва активността на репортерния ген, задвижвана от IL-4. ^[10]По-голямата част от тази работа беше извършена в COS7 и HeLa клетки; Ba/F3 клетките допринесоха с ключовите ендогенни доказателства, а именно съимунопреципитацията на нативния STAT6 заедно с CBP.

Сигнализация на цитокиновите рецептори и биология на хемопоетичните клетки

Системата от рецептори на GM-CSF/IL-3/IL-5 е подробно картирана с помощта на Ba/F3 клетки. Ито и колегите му извършиха систематичен мутационен анализ на осемте цитоплазматични тирозинови остатъка на общата бета-субединица (betac), като експресираха серия от мутанти с замяна на тирозин с фенилаланин заедно с дивата форма на човешката алфа-субединица в Ba/F3 клетки, за да определят кои остатъци медиират специфични сигнални изходи. ^[12]При преглед на паралелна серия от мутагенези Окуда и колегите му съобщиха, че мутацията на всички осем цитоплазматични тирозинови остатъци в GMR-бета намалява фосфорилирането на самия рецептор, SHP2 и SHC, но не прекъсва краткосрочното пролиферативно сигнализиране или фосфорилирането на JAK2 и STAT5, което илюстрира йерархията на функциите на рецепторните домени. ^[13]Беше показано, че тирозинкиназният рецептор RON се включва в пътя на IL-3 бета-рецептора в Ba/F3 клетки, за да индуцира морфологични промени, включващи преразпределение на F-актина и уникални промени във формата на ядрото, разкривайки взаимодействие между системите на рецепторните тирозинкинази и цитокиновите рецептори. ^[14]

Изискванията към субдомейните на рецептора са анализирани и за IL-2 рецептора. Използвайки трансфектирани линии Ba/F3, Хънт и колегите му идентифицираха киселинния домейн и богатата на серин област, близка до мембраната, на бета-веригата на IL-2 рецептора като необходими за активирането на p38 и p54 MAP кинази, като Tyr338 — мястото на свързване с Shc — служи като критичен посредник. ^[11]Тъй като киселинният домейн не е необходим за пролиферацията, предизвикана от IL-2, авторите стигат до заключението, че всъщност нито активирането на p38, нито това на p54 MAP киназата е необходимо за растежа на Ba/F3 клетките, предизвикан от IL-2 — разграничение, което важи и за първичните Т-клетки.

Регулацията на клетъчния цикъл в хематопоетичните прогенитори също е изследвана с помощта на Ba/F3 клетки. Махмуд и колегите му демонстрираха, че TGF-бета1 забавя преминаването от фаза G1 към фаза S в Ba/F3 клетките, като свързват това забавяне на растежа с повишена експресия на протеина Bcl-2 и CDK-инхибитора p27. ^[15]Синергизмът на IL-4 с активиран Raf-1 за стимулиране на дългосрочната пролиферация на Ba/F3 е изследван от Левингс и колеги, които установиха, че IL-4 сам по себе си не може да поддържа растежа, но може да взаимодейства с активиран Ras или Raf-1, за да поддържа непрекъсната пролиферация, сравнима с тази, предизвикана от IL-3. ^[16]

Инженерните системи за превключване на рецептори са използвали зависимостта на Ba/F3 от IL-3 за приложения в генната терапия. Куме и колеги разработиха G-CSF рецептор, слит с бактериалната гираза B (GcrGyr), при който димеризиращият антибиотик кумермицин предизвиква IL-3-независима пролиферация на Ba/F3 като селективна генна система за усилване, доказваща концепцията, за размножаване на генетично модифицирани хемопоетични клетки. ^[17]По подобен начин беше показано, че фузионният протеин от IL-11 и разтворимия IL-11 рецептор действа като суперагонист върху трансфектирани с gp130 Ba/F3 клетки, лишен от мембранно-свързан IL-11 рецептор алфа, което доказва, че разтворимите рецепторни компоненти могат функционално да заместят трансмембранните субединици. ^[18]

Заключение

Клетките Ba/F3 (CVCL_0161) представляват една от най-универсалните и широко валидирани платформи на миши клетъчни линии в съвременните биомедицински изследвания. Тяхната строга зависимост от IL-3 осигурява елегантен и възпроизводим функционален тест за онкогенни кинази — включително BCR-ABL фузионни протеини, FLT3 мутации, и JAK2-фузии — както и за нискомолекулни инхибитори на кинази с клинично значение за хроничната миелоидна левкемия, острата миелоидна левкемия, лимфобластната левкемия-лимфом от прекурсорни клетки и белодробния аденокарцином. Десетилетия на изследвания са утвърдили JAK–STAT сигнализацията, биологията на цитокиновите рецептори и регулацията на хематопоетичните клетки като основни области на приложение на Ba/F3. Адаптивността на линията е позволила създаването на стотици производни модели с дефинирани мутации на резистентност, което я прави незаменима при разработването на целева терапия. Ако желаете да създадете или разширите своята програма в областта на биологията на киназите или откриването на лекарства, клетките Ba/F3 са достъпни на cytion.com — посетете страницата на продукта, за да направите запитване или да подадете поръчка още днес.

Ключови публикации

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Профилирането чрез SNP матрица на миши клетъчни линии идентифицира техните изходни щамове и разкрива кръстосано замърсяване и широко разпространена анеуплоидия. BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) Клетките Ba/F3 и тяхното приложение при откриването на лекарства, насочени към кинази. Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) Капан за сигнална последователност, базиран на конститутивно активен цитокинов рецептор. Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) Тандемно дублираният Flt3 конститутивно активира STAT5 и MAP киназата и предизвиква автономен клетъчен растеж в IL-3-зависими клетъчни линии. Oncogene. PMID: 10698507
5. Хо Дж.М., Бийти Б.К., Скуайър Дж.А. (1999) Фузията на транскрипционния фактор TEL от семейството на ets с Jak2 води до конститутивно Jak-Stat сигнализиране. Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y, Lautier D, Laurent G (1999) Мутаторен фенотип на трансфектираните с BCR–ABL клетъчни линии Ba/F3 и неговата връзка с повишена експресия на ДНК-полимераза бета. Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N, Salgia R, Ewaniuk DS (1999) Участие на адаптерния протеин CRKL в интегрин-медиираната адхезия. Oncogene. PMID: 10362355
8. Лиу С.Б., Ито Т., Араи К. (1999) Конститутивната активация на JAK2 осигурява независимо от миши интерлевкин-3 оцеляване и пролиферация на BA/F3 клетки. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R, Tschirch E, Bittorf T (1999) Ролята на STAT5 в сигналната трансдукция на интерферон-алфа в Ba/F3 клетки. Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S, Simard J, Groner B (1999) p300/CBP е необходим за транскрипционната индукция от интерлейкин-4 и взаимодейства със Stat6. „Nucleic Acids Research“. PMID: 10373589
11. Хънт А.Е., Лали Ф.В., Лорд Дж.Д. (1999) Ролята на поддомейните на бета-веригата на рецептора на интерлейкин (IL)-2 и на Shc в активирането на p38 митоген-активираната протеинкиназа (MAP) и p54 MAP киназа. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Ито Т., Лиу Р., Араи К. (1999) Диференциално влияние на тирозиновите остатъци на общата бета-субединица на рецептора върху множество сигнали, индуцирани от човешки GM-CSF. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. PMID: 10329850
13. Окуда К., Фостър Р., Грифин Дж.Д. (1999) Сигнални домени на бета-в-веригата на рецептора за GM-CSF/IL-3/IL-5. „Annals of the New York Academy of Sciences“. [Обзор] PMID: 10372132
14. Мера А., Суга М., Андо М. (1999) Индуциране на промени във формата на клетките чрез активиране на рецептора с обща бета верига на интерлевкин-3 от тирозин киназата от типа на RON-рецептора. „The Journal of Biological Chemistry“. PMID: 10336478
15. Махмуд Н., Катаяма Н., Нишии К. (1999) Възможно участие на bcl-2 в регулацията на протичането на клетъчния цикъл на хемопоетичните клетки чрез трансформиращия растежен фактор-бета1. British Journal of Haematology. PMID: 10233423
16. Levings MK, Bessette DC, Schrader JW (1999) Интерлейкин-4 действа синергично с Raf-1, за да стимулира дългосрочната пролиферация и активация на c-jun N-терминалната киназа. Blood. PMID: 10339476
17. Куме А., Ито К., Уеда Й. (1999) Фузионен ген на G-CSF рецептор и гираза B: Нов тип молекулен превключвател за размножаване на генетично модифицирани хемопоетични клетки. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 10381335
18. Планц С., Такен И., Грьотцингер Й. (1999) Фузионен протеин от интерлевкин-11 и разтворим рецептор на интерлевкин-11 действа като суперагонист върху клетки, експресиращи gp130. FEBS Letters. PMID: 10350068
19. Паласиос Р., Щайнметц М. (1985) IL-3-зависими миши клони, които експресират повърхностния антиген B-220, съдържат гени за Ig в зародишна конфигурация и генерират В-лимфоцити in vivo. Cell. PMID: 3924409
20. Дуан С., Фукуда Т., Исаджи Т. (2020) Дефицитът на основна фукозилиране активира клетъчния сигналинг, зависим от експресията на FLT3, в клетъчна система Ba/F3. The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Ян Дж., Фридман Р. (2025) Силни страни и ограничения на Ba/F3 клетките при моделиране на резистентността към остра миелоидна левкемия (AML), предизвикана от FLT3. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Сайто М., Такеда К., Йошино М. (2026) Метотрексатът инхибира TEL-JAK2-STAT пътя чрез механизъм, зависим от фолатния метаболизъм, в Ba/F3 клетки. International Immunopharmacology. PMID: 42287956