Uvod

Celice Ba/F3, znana tudi pod sinonimi BA/F3, BaF3, BAF3 in Baf3 (Cellosaurus, številka vzorca CVCL_0161), je mišja pro-B-celična linija, odvisna od interleukina-3 (IL-3), ki izvira iz kostnega mozga. Linijo sta prvič opisala Palacios in Steinmetz leta 1985 med skupino neprekinjeno proliferirajočih, od IL-3 odvisnih klonov kostnega mozga, ki so nosili marker linije B-celic B-220 in ohranili svoje gene za imunoglobuline v konfiguraciji zarodne linije. ^[19] Sprva je veljalo, da izvira iz miši BALB/c, vendar je naknadna analiza z uporabo SNP-matrice pokazala, da ta linija v resnici izhaja iz miši C3H. ^[1] Od njihovega razvoja so se celice Ba/F3 uveljavile kot eden najpogosteje uporabljanih modelnih sistemov v raziskavah hematopoetskega signaliziranja in razvoju onkoloških zdravil. Njihova stroga odvisnost od IL-3 za preživetje in proliferacijo jih naredi izjemno čisto platformo: uvedba onkogene kinaze ali fuzijskega proteina naredi celice neodvisne od faktorja, kar zagotavlja močan in količinsko merljiv odziv. Raziskovalci to lastnost rutinsko izkoriščajo za karakterizacijo fuzijskih beljakovin BCR-ABL, mutacij FLT3, fuzij JAK2 in številnih drugih klinično pomembnih kinaznih onkogenov, pa tudi za profiliranje majhnih molekulskih zaviralcev kinaz v visokopretočnih formatih.

Ključne ugotovitve

• Ba/F3 je mišja linija pro-B-celic, odvisna od IL-3, ki izhaja iz kostnega mozga miši pasme C3H in je v katalogu Cellosaurus evidentirana pod številko CVCL_0161.
• Umaknitev IL-3 omogoča strog selekcijski test: matične celice odmrejo, medtem ko celice, ki izražajo aktivno onkogeno kinazo – ali kateri koli drug konstrukt, ki zagotavlja konstanten rastni signal –, preživijo in se razmnožujejo.
• Ta linija se je široko uporabljala za raziskovanje fuzijskih beljakovin BCR-ABL, mutacij FLT3, signalnega poteka JAK–STAT ter biologije receptorjev citokinov.
• Celice Ba/F3 so vedno bolj prilagojene presejanju zaviralcev kinaz z visoko zmogljivostjo, zaradi česar so postale temelj odkrivanja ciljno usmerjenih zdravil proti raku. ^[2]
• Iz celične linije Ba/F3 so bile ustvarjene stotine izvedenih celičnih linij z opredeljenimi onkogenimi mutacijami, ki zajemajo EGFR, ALK, ROS1, RET, NTRK, FLT3 in številne druge klinično pomembne tarče.

Kaj je Ba/F₃?

Ba/F3 je od faktorja odvisna linija mišjih pro-B-celic, vzpostavljena iz kostnega mozga miši pasme C3H; spol in starost darovalca v podatkih Cellosaurus za to linijo nista zabeležena. Starševska linija ne nosi nobenih znanih aktivirajočih mutacij kinaz in za preživetje potrebuje eksogeni IL-3. Njen čas podvojitve je v standardnih kultivacijskih pogojih približno 20 ur. Glavna značilnost te linije je njena stroga odvisnost od IL-3, kar pomeni, da je mogoče hitro in nedvoumno zaznati vsako genetsko manipulacijo, ki omogoča rast, neodvisno od faktorjev. Ta lastnost, skupaj z odsotnostjo motečih endogenih mutacij kinaz, je celice Ba/F3 naredila za nepogrešljivo orodje za raziskovanje onkogenega potenciala fuzij kinaz, točkovnih mutacij in konstitutivno aktivnih signalnih molekul v biologiji hematopoetskih in solidnih tumorjev. Treba je opozoriti, da odsotnost označbe mutacije ni enaka genetsko neokrnjenemu ozadju: Cellosaurus za to linijo beleži tudi podatke o variacijah, pridobljene z SNP-nizom.

Profiliranje z SNP-matriko je popravilo dolgoletno napačno pripisovanje porekla te linije. V zgodnji literaturi je bilo navedeno, da izhaja Ba/F3 iz miši BALB/c, vendar je genomsko analiziranje potrdilo, da izvira iz linije C3H. ^[1] Od 99 mišjih celičnih linij, preučenih v tej študiji, je bila Ba/F3 edina linija, katere genetsko ozadje ni ustrezalo navedenemu izvorniemu sev; neskladje je neodvisno potrdil tudi RIKEN, distributer te linije, morfološka primerjava z drugimi linijami, ki izhajajo iz C3H, pa je pokazala, da je Ba/F3 samostojna celična linija in ne posledica navzkrižne kontaminacije. Ta ugotovitev poudarja pomen rednega preverjanja pristnosti celičnih linij, zlasti pri mišjih linijah, kjer samo profiliranje STR morda ne zadostuje za razlikovanje med inbrednimi sevi. Raziskovalci, ki uporabljajo linijo Ba/F3, naj v svojih publikacijah navedejo referenčno številko Cellosaurus CVCL_0161, da zagotovijo nedvoumno identifikacijo.

Podatki o celičnih kulturah

Prednosti celic Ba/F₃

Najpomembnejša prednost celic Ba/F3 je njihovo binarno preklopno mehanizem preživetja, odvisen od IL-3. V odsotnosti IL-3 starševske celice Ba/F3 hitro podlegajo apoptozi. Vnos onkogene kinaze ali fuzijskega proteina reši celice pred smrtjo, kar omogoča preprosto selekcijo stabilno transformiranih klonov brez zapletenih reporternih konstruktov. Ta lastnost se izkorišča v številnih oblikah testiranja, od klasičnih testov preživetja kolonij do sodobnih presejalnih testov proliferacije z visoko zmogljivostjo za profiliranje spojin. ^[2] Zaradi preprostosti in zanesljivosti odčitavanja so testi na osnovi Ba/F₃ široko uporabljen sistem prve stopnje za razvrščanje učinkovitosti zaviralcev kinaz, čeprav absolutne vrednosti učinkovitosti ostajajo odvisne od posameznega testa in laboratorija, zato jih je pri primerjanju med raziskavami treba obravnavati previdno. ^[21]

Celice Ba/F3 so tudi genetsko prilagodljive in jih je enostavno transfektirati ali transducirati. Retrovirusno, lentivirusno in na elektroporaciji temelječe vnašanje ekspresijskih konstruktov učinkovito prinaša stabilno ekspresijo podlinij. To je omogočilo ustvarjanje več sto derivatnih linij, ki nosijo klinično pomembne mutacije v tarčah, kot so EGFR, FLT3, BCR-ABL, EML4-ALK in RET, med mnogimi drugimi. Odsotnost motečih endogenih mutacij kinaz v starševski liniji zagotavlja, da se fenotipski odzivi pripisujejo izključno vnesenemu transgenu. Poleg tega približno 20-urni čas podvojitve omogoča hiter eksperimentalni pretok, kar znatno skrajša časovni okvir testiranja v primerjavi s počasneje rastočimi primarnimi celičnimi kulturami.

Platforma Ba/F3 se je izkazala za izjemno primerno za aplikacije na področju odkrivanja signalnih sekvenc. Kojima in Kitamura sta izkoristila konstrukt konstitutivno aktivnega citokinskega receptorja, da sta preusmerila odvisnost rasti Ba/F3 v lokalizacijo beljakovin, ki nosijo signalni peptid, na celični površini, kar je omogočilo presejanje cDNA v velikem obsegu za identifikacijo izločanih in v membrano usmerjenih genovskih produktov. ^[3] Ta ustvarjalna uporaba ponazarja, kako je mogoče odvisnost celic Ba/F3 od IL-3 izkoristiti tudi za namene, ki segajo daleč onkraj preprostega raziskovanja kinaznih onkogenov, s čimer se ta linija uveljavlja kot vsestranska platforma za genetsko presejanje.

Omejitve celic Ba/F3

Kljub številnim prednostim imajo celice Ba/F3 vgrajene biološke omejitve, ki jih je treba upoštevati pri interpretaciji eksperimentalnih podatkov. Kot mišja linija pro-B-celic jim manjka veliko signalnih adapterjev in koreceptorjev, ki so prisotni v človeških rakavih celicah. Vrednosti moči inhibitorjev in odzivi signalnih poti, opazovani v celicah Ba/F3, morda ne odražajo natančno aktivnosti v primarnih človeških tumorskih celicah ali materialu, pridobljenem od bolnikov. Raziskovalci, ki preučujejo odpornost na ciljno usmerjene terapije za pljučni adenokarcinom, morajo na primer ugotovitve, pridobljene na podlagi celic Ba/F3, potrditi v fiziološko ustreznejših modelih človeških celic, preden sprejmejo klinične zaključke.

Tudi genomsko ozadje te linije je bilo predmet napačne opredelitve. Desetletja se je liniji Ba/F3 pripisoval izvor iz linije BALB/c, vendar je profiliranje s pomočjo SNP-matrice pokazalo, da izvira iz miši linije C3H. ^[1] Ista študija je odkrila dokaze za aneuploidijo pri približno 42 % pregledanih mišjih celičnih linij, vključno z znatnim deležem linij, pridobljenih iz normalnega in ne iz tumorskega tkiva; linija Ba/F3 sama je bila označena zaradi napačne identifikacije in ne zaradi spremembe števila kopij, vendar splošna ugotovitev ponazarja, kako hitro se v kulturi kopičijo kariotipski odmiki. Takšna nestabilnost pri visokem številu pasazov bi lahko vplivala na rezultate signalizacije, meritve občutljivosti na zdravila in ponovljivost transformiranih fenotipov. Raziskovalci bi zato morali delati z nizkim številom pasazov in redno preverjati avtentičnost svojih zalog.

Nazadnje, celice Ba/F3 ne odražajo celotnega tumorjevega mikrookolja niti stromalnih interakcij, prisotnih pri hematoloških malignomih. Prav tako jim manjka endogena ekspresija številnih človeških signalnih komponent, kar pomeni, da interakcije s koreceptorji, pomembne za delovanje onkogenov, morda manjkajo ali so drugačne. Študije kompleksnih večpodenotnih receptorjev za citokine ali receptorjev, ki zahtevajo signalizacijo, odvisno od glikozilacije, bodo morda potrebovale dopolnilne sisteme človeških celic, da bi prišle do biološko veljavnih zaključkov. Kljub tem omejitvam ostajajo celice Ba/F3 močno in splošno sprejeto orodje prve izbire v biologiji kinaz.

Oglejte si celotne tehnične podatke in oddajte naročilo

Uporaba

Odkrivanje zdravil za kinaze in presejanje onkogenov

Celice Ba/F3 so postale prevladujoča celična platforma za odkrivanje zdravil, usmerjenih v kinaze. Warmuth in sodelavci so za ta namen pripravili celovito oceno sistema Ba/F3, v kateri so opisali, kako je mogoče test neodvisnosti od IL-3 prilagoditi formatom z visoko zmogljivostjo za ocenjevanje tako onkogene moči mutacij kinaz kot tudi zmožnosti majhnih molekulskih zaviralcev kinaz, da obrnejo rast, neodvisno od faktorja. ^[2]V pregledu je bilo poudarjeno, da celice Ba/F3 podpirajo izjemno širok spekter onkogenih kinaz, kar jih naredi za univerzalno platformo za začetno profiliranje variant kinoma, povezanih z rakom, preden se preide na bolj kompleksne modele človeških celic.

Past za signalne sekvence, ki sta jo razvila Kojima in Kitamura, je pokazala, da se celice Ba/F3 lahko uporabljajo ne le za raziskave kinaznih onkogenov, temveč tudi za funkcionalno presejanje cDNA-knjižnic. ^[3]S povezovanjem konstitutivno aktivnega receptorja za citokine s funkcijo signalnega peptida je en sam pilotni poskus prinesel 150 že znanih klonov – vsi kodirajo izločene ali celične površinske proteine – skupaj z 48 novimi cDNA-kloni, vključno z membranskimi proteini tipa II, ki so se izognili prejšnjim strategijam pasti za signalne sekvence. Ta pristop ponazarja prilagodljivost platforme Ba/F3, ki presega klasično validacijo ciljnih molekul za zdravila.

Izjemna raznolikost izpeljanih linij Ba/F3, ki so zdaj katalogizirane v Cellosaurus – zajemajo stotine variant EGFR, ALK-fuzij, RET-preureditev, NTRK-fuzij in mutacij odpornosti – poudarja, kako je izvorna linija Ba/F3 postala temeljni okvir za raziskave na področju precizne onkologije. Vsaka izpeljana linija ohranja čisto ozadje, odvisno od IL-3, hkrati pa dodaja eno samo opredeljeno genetsko spremenljivko, kar omogoča sistematične študije razmerja med strukturo in aktivnostjo na celični ravni.

Mutacije FLT3 in akutna mieloidna levkemija

Ena od najvplivnejših uporab celic Ba/F3 je bila karakterizacija mutacij FLT3 (fms-podobna tirozin kinaza 3) pri akutni mieloidni levkemiji (AML). Notranja tandemna duplikacija FLT3 spada med najpogostejše onkogene lezije pri AML, ki so poročane v približno 20 % do 30 % primerov, odvisno od kohorte in metode detekcije. ^[4][20]Hayakawa in sodelavci so dokazali, da tandemsko podvojen FLT3, vnesen v dve liniji, odvisni od IL-3, 32D in Ba/F3, konstitutivno aktivira tako STAT5 kot MAP kinazo ter omogoča avtonomno, od IL-3 neodvisno rast, medtem ko je FLT3 divjega tipa podpiral le minimalno proliferacijo celo ob neprekinjeni stimulaciji z ligandom.^[4] Ta prelomna študija je celice Ba/F3 uveljavila kot primarni funkcionalni testni sistem za validacijo mutacij FLT3 in ostaja metodološka referenca na tem področju.

Nadaljnje raziskave so v veliki meri gradile na tej podlagi. Študije fukozilacije jedra so pokazale, da je izklop gena Fut8 s sistemom CRISPR/Cas9 v celicah Ba/F3, ki izražajo divji tip FLT3, zadostoval za sprožitev od IL-3 neodvisne proliferacije – učinek, ki ga v izvornih celicah ni bilo opaziti –, spremljala pa sta ga povečana tirozinska fosforilacija ter aktivacija STAT5, AKT in ERK ter z ligandu neodvisno dimerizacijo FLT3.^[20] To je razkrilo raven regulacije z glikozilacijo, ki za ta receptor prej ni bila prepoznana. Odpornost na zaviralec FLT3 gilteritinib je bila preučena tudi v modelih Ba/F3 FLT3-ITD, kjer je odpornost pri klinično dosegljivih koncentracijah zdravila običajno zahtevala več sekundarnih mutacij, od katerih so bile nekatere doslej še neporočane. ^[21]V isti raziskavi so sistematično ovrednotili prednosti in omejitve modelov Ba/F3 FLT3-ITD ter ugotovili, da je platforma sicer primerna za prepoznavanje in razvrščanje mutacij odpornosti, vendar ne posnema kompleksne niše kostnega mozga, ki oblikuje odpornost pri bolnikih.

Biologija BCR-ABL in kronična mieloidna levkemija

Celice Ba/F3, transfektirane s fuzijskimi proteini BCR-ABL, so bile ključne za razumevanje molekularne biologije kronične mieloidne levkemije (CML). Canitrot in sodelavci so z uporabo celic Ba/F3, ki izražajo izoforme p190 in p210 BCR-ABL, dokazali, da BCR-ABL povzroča mutatorski fenotip, pri čemer se pogostost spontanih mutacij v primerjavi s starševskimi celicami poveča za tri- do petkrat, ter da je bila ta genomna nestabilnost povezana s povečano ekspresijo DNA-polimeraze beta. ^[6]Ta ugotovitev je razkrila mehanizem, s katerim bi BCR-ABL lahko spodbujal napredovanje bolezni iz kronične faze CML v akutno mieloidno levkemijo.

Uemura in sodelavci so v celicah Ba/F3 preučevali adapterni protein CRKL, enega od glavnih tirozinskih fosfoproteinov v levkemičnih nevtrofilih bolnikov s CML. ^[7]Celice s prekomerno ekspresijo CRKL v polni dolžini so pokazale povečano adhezijo na fibronektin in spremenjeno morfologijo na površinah, prevlečenih s fibronektinom, medtem ko delecijski mutanti, ki jim je manjkala bodisi domena SH2 bodisi N-terminalna domena SH3, tega niso pokazali – kar kaže, da sta za ta učinek potrebni obe domeni. Adhezijo je blokiralo protitelo proti beta1-integrinu, čeprav prekomerna ekspresija CRKL ni spremenila površinske ekspresije beta1-integrina niti spontano sprožila njegovega aktivacijskega epitopa. Ti poskusi kažejo na vpletenost CRKL v signalne poti, ki uravnavajo adhezijo, posredovano z integrinom, v nadaljevanju signala BCR-ABL.

Skupaj te študije BCR-ABL ponazarjajo, kako celice Ba/F3 omogočajo jasno razčlenitev signalizacije, ki jo poganja onkogen, s tem ko odpravijo kompleksnost endogene kinazne aktivnosti. Platforma še naprej podpira karakterizacijo mutacij odpornosti na zaviralce BCR-ABL, saj so zdaj na voljo namenske linije Ba/F3 BCR-ABL in derivati BCR-ABL-T315I za neposredno profiliranje zaviralcev v okviru klinično relevantnih genotipov odpornosti.

Signalne poti JAK–STAT

Celice Ba/F3 so služile kot primarni model za razčlenitev, kateri signalni dogodki v smeri navzdol od citokinskih receptorjev so dejansko potrebni za rast. Liu in sodelavci so konstruirali himerno molekulo (beta/JAK2), sestavljeno iz ekstracelularnih in transmembranskih regij beta-c, združenih z JAK2, in jo izrazili v celicah Ba/F3. ^[8]Kimer je bil konstantno fosforiliran in je zadostoval za spodbujanje preživetja in proliferacije, neodvisnih od IL-3. Zlasti je bilo opazno, da STAT5, Shc in SHP-2 v teh celicah niso bili fosforilirani, aktivnost promotorjev beta-kazeina in c-fos pa ni bila povečana, medtem ko je bila transkripcija c-myc konstantno aktivirana. Avtorji so ugotovili, da za preživetje in proliferacijo zadostuje že sama aktivacija JAK2 ter da aktivacija STAT5 in MAP kinaze za te konkretne učinke ni potrebna – to je koristen opomnik, da rast v celicah Ba/F3, neodvisna od faktorjev, sama po sebi ne pomeni aktivacije STAT.

Vlogo STAT5 v signalizaciji IFN-alfa so v celicah Ba/F3 preučili Jaster in sodelavci, ki so pokazali, da IFN-alfa aktivira vezavo STAT5A in STAT5B na DNK, medtem ko je IL-3 veliko močnejši induktor obeh izoform. ^[9]Dominantno-negativni mutant JAK2 je zaviral aktivacijo STAT5, ki jo povzroča IL-3, ne pa tudi tisto, ki jo povzroča IFN-alfa, kar kaže, da ti dve citokini uporabljata neodvisna mehanizma v zgornjem delu signalne poti, da se združita na istem transkripcijskem faktorju; avtorji so kljub temu ugotovili, da STAT5 v tem sistemu ni ključnega pomena za signalizacijo IFN-alfa.

Konstitutivno aktiviranje JAK–STAT je bilo modelirano v celicah Ba/F3 z uporabo fuzijskega proteina TEL–JAK2, onkogene fuzije, povezane z akutno limfoblastno levkemijo T-celic. Ho in sodelavci so pokazali, da je fuzija koničaste domene TEL s funkcionalno domeno kinaze JAK2 (JH1) spremenila celice Ba/F3 v celice, neodvisne od faktorjev, medtem ko fuzija s domeno psevdokinaze (JH2) ali s kinazno neaktivno domeno JH1 tega ni povzročila; aktivni konstrukti so povzročili konstitutivno tirozinsko fosforilacijo STAT1, STAT3 in STAT5.^[5] Nedavno so ugotovili, da metotreksat zavira fosforilacijo STAT3 in STAT5 s TEL–JAK2 STAT3 in STAT5 v celicah Ba/F3 prek mehanizma, odvisnega od metabolizma folata: učinek je bil preprečen s folinsko kislino, ponovljen z izklopom dihidrofolat reduktaze s CRISPR/Cas9, 5-fluorouracil pa ga ni posnemal. ^[22]

Signalizacijo IL-4 prek STAT6 so preučevali Gingras in sodelavci, ki so dokazali, da so koaktivatorji p300/CBP potrebni za transkripcijsko indukcijo, posredovano s STAT6, in da prekomerna ekspresija p300/CBP okrepi aktivnost poročevalskega gena, ki jo povzroča IL-4. ^[10]Večina tega dela je bila opravljena na celicah COS7 in HeLa; celice Ba/F3 so prispevale ključne endogene dokaze, in sicer koimunoprecipitacijo naravnega STAT6 skupaj s CBP.

Signalizacija prek citokinskih receptorjev in biologija hematopoetskih celic

Sistem receptorjev GM-CSF/IL-3/IL-5 je bil obširno kartiran z uporabo celic Ba/F3. Itoh in sodelavci so izvedli sistematično mutacijsko analizo osmih citoplazemskih tirozinskih ostankov skupne beta podenote (betac), pri čemer so v celicah Ba/F3 izražali serijo mutantov, pri katerih je bil tirozin zamenjan s fenilalaninom, skupaj z divjo obliko človeške alfa podenote, da bi ugotovili, kateri ostanki posredujejo specifične signalne izhodne signale. ^[12]Okuda in sodelavci so ob pregledu vzporedne serije mutageneze poročali, da je mutacija vseh osmih citoplazemskih tirozinov v GMR-beta zmanjšala fosforilacijo samega receptorja, SHP2 in SHC, vendar ni onemogočila kratkoročnega proliferativnega signaliziranja ali fosforilacije JAK2 in STAT5, kar ponazarja hierarhijo funkcij receptorskih domen. ^[13]Pokazalo se je, da receptorna tirozin kinaza RON v celicah Ba/F3 aktivira pot receptorja IL-3 beta, s čimer inducira morfološke spremembe, ki vključujejo prerazporeditev F-aktina in edinstvene spremembe oblike jedra, kar razkriva medsebojno komunikacijo med sistemi receptorskih tirozin kinaz in citokinskih receptorjev. ^[14]

Zahteve glede poddomene receptorja so bile razčlenjene tudi za receptor IL-2. Z uporabo transfektiranih linij Ba/F3 so Hunt in sodelavci ugotovili, da sta kisla domena in membrani bližnji serin-bogati del beta verige receptorja IL-2 nujna za aktivacijo MAP-kinaz p38 in p54, pri čemer Tyr338 – mesto vezave Shc – deluje kot ključni posrednik. ^[11]Ker kisla domena ni nujna za proliferacijo, ki jo povzroča IL-2, so avtorji ugotovili, da za rast celic Ba/F3, ki jo povzroča IL-2, dejansko ni potrebna niti aktivacija MAP-kinaze p38 niti p54, kar velja tudi za primarne T-celice.

Regulacijo celičnega cikla v hematopoetskih progenitornih celicah so proučevali tudi z uporabo celic Ba/F3. Mahmud in sodelavci so pokazali, da TGF-beta1 upočasnjuje prehod iz faze G1 v fazo S v celicah Ba/F3, pri čemer so to upočasnitev rasti povezali s povečano ekspresijo beljakovine Bcl-2 in inhibitorja CDK p27. ^[15]Sinergijo IL-4 z aktiviranim Raf-1 pri spodbujanju dolgoročne proliferacije celic Ba/F3 so preučevali Levings in sodelavci, ki so ugotovili, da IL-4 sam ne more podpirati rasti, lahko pa sodeluje z aktiviranim Ras ali Raf-1, da ohrani neprekinjeno proliferacijo, primerljivo z IL-3. ^[16]

V sistemih za preklapljanje receptorjev, ustvarjenih z inženirstvom, so izkoristili odvisnost celic Ba/F3 od IL-3 za uporabo v genski terapiji. Kume in sodelavci so razvili receptor G-CSF, fuzioniran z bakterijsko girazo B (GcrGyr), v katerem je dimerizirajoči antibiotik kumermicin sprožil proliferacijo celic Ba/F3, neodvisno od IL-3, kot selektiven genetski ojačevalni sistem za razmnoževanje genetsko spremenjenih hematopoetskih celic. ^[17]Podobno je bilo dokazano, da fuzijski protein IL-11 in topnega receptorja za IL-11 deluje kot superagonist na celicah Ba/F3, transfekciranih z gp130, ki nimajo membransko vezanega receptorja alfa za IL-11, kar dokazuje, da lahko topne komponente receptorja funkcionalno nadomestijo transmembranske podenote. ^[18]

Zaključek

Celice Ba/F3 (CVCL_0161) predstavljajo eno najbolj vsestranskih in široko validiranih platform mišjih celičnih linij v sodobnih biomedicinskih raziskavah. Njihova stroga odvisnost od IL-3 omogoča eleganten in ponovljiv funkcionalni test za onkogene kinaze – vključno s fuzijskimi proteini BCR-ABL, mutacijami FLT3, in JAK2-fuzij – ter za majhne molekulske zaviralce kinaz s kliničnim pomenom za kronično mieloidno levkemijo, akutno mieloidno levkemijo, limfoblastno levkemijo-limfom iz prekurzorskih celic in pljučni adenokarcinom. Desetletja raziskav so potrdila, da so signalizacija JAK–STAT, biologija citokinskih receptorjev in regulacija hematopoetskih celic ključna področja uporabe linije Ba/F3. Prilagodljivost te linije je omogočila ustvarjanje več sto izvedenih modelov z opredeljenimi mutacijami odpornosti, zaradi česar je nepogrešljiva pri razvoju ciljnih terapij. Če želite vzpostaviti ali razširiti svoj program na področju biologije kinaz ali odkrivanja zdravil, so celice Ba/F3 na voljo na spletni strani cytion.com – obiščite stran z izdelki, da se pozanimate ali danes oddate naročilo.

Ključne publikacije

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Profiliranje mišjih celičnih linij s pomočjo SNP-niza identificira njihove izvorne sevove ter razkriva navzkrižno kontaminacijo in razširjeno aneuploidijo. BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) Celice Ba/F3 in njihova uporaba pri odkrivanju zdravil za kinaze. Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) Past za signalne sekvence na podlagi konstitutivno aktivnega receptorja za citokine. Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) Tandemsko podvojeni Flt3 konstitutivno aktivira STAT5 in MAP kinazo ter sproži avtonomno rast celic v linijah, odvisnih od IL-3. Oncogene. PMID: 10698507
5. Ho JM, Beattie BK, Squire JA (1999) Fuzija transkripcijskega faktorja ets TEL z Jak2 povzroči konstitutivno signalizacijo Jak-Stat. Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y, Lautier D, Laurent G (1999) Mutatorski fenotip celičnih linij Ba/F3, transfektiranih z BCR–ABL, in njegova povezanost s povečano ekspresijo DNA-polimeraze beta. Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N, Salgia R, Ewaniuk DS (1999) Vloga adapternega proteina CRKL pri adheziji, posredovani z integrini. Oncogene. PMID: 10362355
8. Liu CB, Itoh T, Arai K (1999) Konstitutivna aktivacija JAK2 omogoča preživetje in proliferacijo celic BA/F3, neodvisno od mišjega interlevkina-3. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R, Tschirch E, Bittorf T (1999) Vloga STAT5 pri signalni transdukciji interferona-alfa v celicah Ba/F3. Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S, Simard J, Groner B (1999) p300/CBP je potreben za transkripcijsko indukcijo z interleukinom-4 in interagira s Stat6. Nucleic Acids Research. PMID: 10373589
11. Hunt AE, Lali FV, Lord JD (1999) Vloga poddomene beta verige receptorja za interleukin (IL)-2 in Shc pri aktivaciji p38 mitogen-aktivirane proteinske (MAP) kinaze in p54 MAP kinaze. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Itoh T, Liu R, Arai K (1999) Različen vpliv tirozinskih ostankov skupne beta podenote receptorja na več signalov, ki jih inducira človeški GM-CSF. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. PMID: 10329850
13. Okuda K, Foster R, Griffin JD (1999) Signalne domene beta-c verige receptorja GM-CSF/IL-3/IL-5. Annals of the New York Academy of Sciences. [Pregled] PMID: 10372132
14. Mera A, Suga M, Ando M (1999) Indukcija sprememb oblike celic prek aktivacije skupnega receptorja za interleukin-3 z beta verigo s pomočjo tirozinske kinaze tipa RON. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10336478
15. Mahmud N, Katayama N, Nishii K (1999) Možna vpletenost bcl-2 v regulacijo poteka celičnega cikla hematopoetskih celic s pomočjo transformirajočega rastnega faktorja beta1. British Journal of Haematology. PMID: 10233423
16. Levings MK, Bessette DC, Schrader JW (1999) Interleukin-4 deluje sinergistično z Raf-1 in spodbuja dolgoročno proliferacijo ter aktivacijo N-terminalne kinaze c-jun. Blood. PMID: 10339476
17. Kume A, Ito K, Ueda Y (1999) Fuzijski gen receptorja G-CSF in giraze B: nov tip molekularnega stikala za razmnoževanje genetsko spremenjenih hematopoetskih celic. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 10381335
18. Pflanz S, Tacken I, Grötzinger J (1999) Fuzijski protein interleukina-11 in topnega receptorja za interleukin-11 deluje kot superagonist na celicah, ki izražajo gp130. FEBS Letters. PMID: 10350068
19. Palacios R, Steinmetz M (1985) Od IL-3 odvisni mišji kloni, ki izražajo površinski antigen B-220, vsebujejo gene za imunoglobuline v konfiguraciji zarodne linije in in vivo ustvarjajo B-limfocite. Cell. PMID: 3924409
20. Duan C, Fukuda T, Isaji T (2020) Pomanjkanje jedrne fukozilacije aktivira celično signalizacijo, odvisno od izražanja FLT3, v celičnem sistemu Ba/F3. The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Yang J, Friedman R (2025) Prednosti in omejitve celic Ba/F3 pri modeliranju odpornosti na AML, ki jo povzroča FLT3. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Saito M, Takeda K, Yoshino M (2026) Metotreksat zavira pot TEL-JAK2-STAT prek mehanizma, odvisnega od metabolizma folata, v celicah Ba/F3. International Immunopharmacology. PMID: 42287956