Uvod

Ta 3T3-švicarske albinske celice Linija — znana tudi pod sinonimi Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino in Swiss3T3 — je ena najdlje obstojnih in najpogosteje uporabljanih celičnih linij v biomedicinskih raziskavah. Linijo sta leta 1962 ustanovila George Todaro in Howard Green iz razčlenjenih zarodkov miši Swiss albino in jo opisala v svoji razpravi iz leta 1963; nastala je na podlagi protokola serijskega prenosa, v skladu s katerim so skoraj vse kulture zarodkov sčasoma privedle do vzpostavljenih, spontano nesmrnih linij [1]. V naslednjih šestih desetletjih so se celice 3T3-Swiss albino razvile v nepogrešljiv model za preučevanje regulacije celičnega cikla, signalizacije rastnih faktorjev, dinamike citoскеletne mreže ter biologije celjenja ran. Njihovo natančno opredeljeno obnašanje pri kontaktni inhibiciji, odzivnost na mitogene, kot sta rastni faktor iz trombocitov in bradikinin, ter genetska obdelovalnost so jih naredile za temeljni referenčni model v neštetih študijah signalnih poti in testih za presejanje zdravil.

Ključne ugotovitve

• 3T3-Swiss albino je spontano imortalizirana linija mišjih embrionalnih fibroblastov, ki sta jo leta 1962 vzpostavila Todaro in Green (Cellosaurus, številka vzorca CVCL_0120, moški darovalec, celoten zarodek) [25].
• Ta linija kaže kontaktno zaviranje rasti, zaradi česar je odličen model za preučevanje prehoda med mirovanjem in proliferacijo — čeprav je izrazitost tega fenotipa odvisna od pogojev gojenja in ni fiksna lastnost te linije [22] [23].
• Zelo se odziva na različne mitogene, vključno z rastnim faktorjem, izvedenim iz trombocitov, bombesinom, bradikininom in inzulinu podobnim rastnim faktorjem I.
• Celice 3T3-Swiss albino so imele ključno vlogo pri raziskovanju organizacije citoскеletne mreže, signalizacije GTPaz iz družine Rho ter dinamike fokalnih adhezij.
• Iz te linije je nastala obsežna družina izpeljanih podlinij – med njimi 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 in podlinija 3T3-J2, ki služi kot hranilni sloj –, ki se uporabljajo v raziskavah adipogeneze, onkologije in v aplikacijah s skupno kulturo. [25].
• Medlaboratorijsko validirana multipleksna STR-analiza (19 mišjih markerjev ter dva človeška markera za medvrstno presejanje; 18 od 19 mišjih markerjev se je izkazalo za primernih za razlikovanje znotraj vrste) zdaj omogoča zanesljivo avtentifikacijo mišjih celičnih linij, vključno z linijo 3T3-Swiss albino [2].

Kaj je 3T3-Swiss albino?

3T3-Swiss albino je bil pridobljen iz tkiva celotnega zarodka samca miši Swiss albino v zarodkovni fazi, pri katerem ni bilo ugotovljeno nobeno bolezensko stanje, povezano z darovalcem [25]. Ime »3T3« se nanaša na prvotni protokol prenosa: celice so se vsakih tri dni presadile z inokulumom v koncentraciji 3 × 10⁵ celic na 20 cm² posoda. Todaro in Green sta pokazala, da se je hitrost rasti kultur mišjih zarodkov z vsakim zaporednim prenosom zmanjševala – stopnja upada je deloma odvisna od gostote inokulacije –, preden so se skoraj vse kulture v treh mesecih razvile v uveljavljene linije, ter da so uporabljeni pogoji gojenja določili, katere lastnosti je pridobila nastala linija; režim 3T3 je dal linijo, ki je izjemno občutljiva na kontaktno inhibicijo [1]. Tako pridobljena celična linija ima fibroblastno morfologijo, raste kot adhezivna monosloj in ob doseganju konfluence doživi kontaktno zaviranje proliferacije — lastnost, ki jo loči od transformiranih linij in jo naredi za idealni model za preučevanje prehodov iz mirovanja v proliferacijo.

Mišja linija 3T3-Swiss albino je bila med mišjimi linijami, vključenimi v obsežno raziskavo s pomočjo SNP-niza, katere namen je bil preveriti poročana genetska ozadja pasem ter odkriti spremembe v številu kopij kromosomov, ki jih profiliranje STR ne more ugotoviti; od 99 pregledanih linij jih je 98 ustrezalo genetskemu ozadju, ki je bilo za njih poročano [3] [25]. Da bi odpravili pomisleke glede avtentifikacije v vsakdanji praksi, je medlaboratorijski konzorcij, ki ga sestavlja dvanajst laboratorijev, validiral test za večkratno profiliranje STR za identifikacijo mišjih celičnih linij znotraj iste vrste, ki temelji na 50 najpogosteje uporabljanih mišjih linijah, pri čemer bodo dobljeni profili objavljeni v bazi podatkov NCBI BioSample; STR-profil, ki je zdaj v Cellosaurusu naveden za linijo 3T3-Swiss albino, izhaja iz te študije [2] [25]. Ti napredki so znatno izboljšali ponovljivost raziskav, izvedenih s to široko razširjeno linijo.

Podatki o celičnih kulturah

Prednosti celic 3T3-Swiss albino

Ena od najbolj prepričljivih prednosti celic 3T3-Swiss albino je njihov dobro opisan odziv na stimulacijo z rastnimi faktorji po odvzemu seruma. S tem, da se celice s pomočjo odvzema seruma spravijo v mirovanje in nato ponovno stimulirajo z določenimi mitogeni, lahko raziskovalci preučujejo posamezne signalne dogodke z visoko časovno ločljivostjo. Ta eksperimentalni pristop se je izkoristil za preučevanje odzivov na rastni faktor iz trombocitov, bombesin, bradikinin, insulinopodobni rastni faktor I in bazični fibroblastni rastni faktor – kar zajema izjemno širok spekter razredov receptorjev in navzdolnih signalnih poti znotraj enotnega, doslednega celičnega ozadja. [4] [5] [6].

Druga pomembna prednost je fenotip te linije v zvezi z zaviranjem stika. Za razliko od mnogih transformiranih rakavih linij se albinske celice 3T3-Swiss pri doseganju konfluence ustavijo, namesto da bi še naprej prekomerno rasle. Zaradi tega so odličen referenčni model za preskuse celjenja ran z vrezom, kjer je mogoče pod določenimi pogoji količinsko opredeliti migracijo v območje brez celic. Ključno pa je, da je ta fenotip odvisen od načina gojenja celic in ni fiksna lastnost linije. Aaronson in Todaro sta pokazala, da so linije mišjih zarodkov, gojene v pogojih, ki zmanjšujejo stik med celicami na minimum, ostale netumorogene več kot 200 generacij, medtem ko so linije, gojene v pogojih intenzivnega stika med celicami, postale tumorogene v roku 30 generacij — in da je bila lastnost kulture, ki je najbolj korelirala s tumorigenostjo, prav izguba kontaktne inhibicije celične delitve [22]. Kasnejše raziskave so ugotovile konkretne spremenljivke, ki pri tem igrajo vlogo: spontana transformirana žarišča se pojavijo v kulturah tipa 3T3, ki so v stanju konfluence več kot deset dni, njihova pogostost pa je odvisna od vrste in koncentracije uporabljenega seruma ter od zgodovine pasážiranja kulture [23]. Učinek je lahko presenetljivo hiter — klon, ki v petdesetih zaporednih poskusih v obdobju 21 tednov ni ustvaril nobenih žarišč, jih je začel tvoriti že po dveh dneh v gojišču z nizko vsebnostjo seruma [24]. Ti poskusi so bili izvedeni na linijah 3T3, ki izhajajo iz linij BALB/c in NIH, in ne na sami liniji 3T3-Swiss albino, vendar opisujejo odvisnost od režima, ki je skupna linijam fibroblastov tipa 3T3, in imajo konkretne praktične posledice: laboratoriji, ki se posebej zanašajo na kontaktno inhibicijo, morajo delati z nizkim in dokumentiranim številom pasaž pod opredeljenimi pogoji glede seruma, se izogibati ohranjanju kultur v stanju konfluence dlje, kot to zahteva test, ter fenotip preveriti sami.

Fibroblastni izvor te linije je prav tako neposredno pomemben za raziskave preoblikovanja ekstracelularne matrice, signalizacije integrinov in obnove kože – saj zagotavlja fiziološki kontekst, ki ga čisto epitelne ali rakave linije ne morejo ponuditi. Poleg tega obsežen katalog izpeljanih podlinij, pridobljenih iz linije 3T3-Swiss albino, razširja nabor eksperimentalnih orodij, ki so na voljo raziskovalcem na področjih adipogeneze, onkologije in aplikacij s so-kulturo izvornih celic. [25].

Omejitve celic 3T3-Swiss albino

Kljub svoji uporabnosti imajo albinske celice 3T3-Swiss vgrajene omejitve, ki izhajajo iz njihove mišje narave in dejstva, da so spontano postale nesmrtne. Kariotipski drift je bil dokumentiran že v prvotni študiji, v kateri so se populacije – pogosto zelo hitro – premaknile iz diploidnega v tetraploidno območje, še preden so se pojavili markerji kromosomov [1]. Ta nestabilnost ni značilna le za to linijo: pri profiliranju s SNP-matriko 99 pogosto uporabljanih mišjih celičnih linij so odkrili dokaze o spremembah števila kopij v 42 % med njimi, vključno z 24 % linij, pridobljenih iz normalnega in ne iz tumorskega tkiva, kar potrjuje, da je aneuploidija razširjena značilnost mišjih celičnih kultur in ni specifična za raka [3]. Takšna genomna nestabilnost pomeni, da rezultati, pridobljeni pri visokem številu pasáž, morda ne odražajo zanesljivo lastnosti celic v zgodnjih pasážih, medlaboratorijske primerjave pa lahko moti neopažena genomska derivacija. Raziskovalci bi zato morali svoje zaloge avtentificirati z validiranimi STR-metodami in voditi dosledne evidence o pasážah [2].

S tem povezana omejitev je dejstvo, da so v raziskovalni skupnosti v preteklosti pogosto naleteli na napačno identificirane ali navzkrižno kontaminirane zaloge celic, kar je splošno dokumentirana težava pri mišjih celičnih linijah [3]. Posebna in pogosto spregledana težava se nanaša na nomenklaturo: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, objavljen leta 1963) in NIH 3T3 (CVCL_0594, izpeljana iz miši NIH Swiss in objavljena leta 1969) se v strokovni literaturi pogosto skrajšata na »3T3« ali »Swiss 3T3«. Če članek ne navaja kataloške številke zbirke, iz katere izvirajo celice, teh dveh linij pogosto ni mogoče razlikovati, ne da bi se neposredno obrnili na avtorje [26]. Ta nejasnost se nanaša tudi na večino klasične literature o signalizaciji, ki je povzeta v nadaljevanju: v poročilih, ki opisujejo raziskave na »Swiss 3T3«, je redko navedeno, katera linija je mišljena, zato je treba ugotovitve razumeti kot veljavne za mišje fibroblaste tipa 3T3, razen če vir izrecno navaja konkretno linijo. Ker 3T3-Swiss albino poleg tega ni klonski izolat, temveč poliklonalna populacija, lahko funkcionalna heterogenost med zalogami iz različnih virov dodatno vpliva na eksperimentalne rezultate. Nazadnje, kot linija mišjih fibroblastov 3T3-Swiss albino morda brez skrbne validacije ne odraža nianse signalizacije, pomembne za človeško biologijo, zato je treba rezultate tega modela potrditi v za vrsto primernih primarnih celicah ali in vivo sistemih, preden se izpeljejo translacijske zaključke.

Oglejte si celotne tehnične podatke in oddajte naročilo

Uporaba

Signalizacija rastnih faktorjev in celična proliferacija

Albinske celice 3T3-Swiss so služile kot izjemen model za raziskovanje mitogenih signalnih kaskad, ki jih sprožajo različni rastni faktorji in nevropeptidi. V zgodnjih raziskavah Daviesa in Rossa so bile celice Swiss 3T3 skupaj z gladkimi mišičnimi celicami opičje aorte in endotelijskimi celicami goveje aorte uporabljene za dokaz, da zamenjava plazemskega seruma s serumom iz polne krvi ali delno prečiščenim rastnim faktorjem iz trombocitov znatno spodbuja pinocitozo ter proliferacijo v mirujočih kulturah — zgodnja povezava med prometom prek membrane, ki ga inducirajo rastni faktorji, in vstopom v celični cikel, ugotovljena predvsem v sistemu gladkih mišičnih celic [7]. Kasnejše študije so izkoristile paradigmo odvzema seruma in ponovne stimulacije, da so posamezne signalne molekule umestile v urejene poti v smeri navzdol od aktivacije receptorja.

Fosfatidilinozitol 3-kinaza (PI3K) se je izkazala kot osrednje vozlišče v odzivih, ki jih stimulirajo rastni faktorji. Johanson in sodelavci so pokazali, da se zaloga p110α PI3K, neodvisna od p85-podenote, kolokalizira s p70 S6-kinazo na aktinskih stresnih vlaknih in da je aktivnost PI3K potrebna za trombinom povzročeno tvorbo stresnih vlaken v celicah Swiss 3T3 [8]. Podobno vlogo PI3K pri privzemu hranil sta opisala Higaki in Shimokado, ki sta pokazala, da zaviralci PI3K preprečijo privzem aminokislin, ki ga spodbuja rastni faktor iz trombocitov, v celicah gladke mišice žil, ter poročala o podobnem učinku zaviralcev v celicah Swiss 3T3 [9].

Proteinska kinaza D (PKD) se v nepoškodovanih celicah Swiss 3T3 aktivira s forbolovimi estri, diacilgliceroli, ki prehajajo celično membrano, bryostatinom, nevropeptidi in rastnimi faktorji prek mehanizma, odvisnega od fosforilacije in ki zahteva prisotnost proteinske kinaze C. Kot so v pregledu navedli Waldron, Iglesias in Rozengurt, je mutageneza ostankov serina 744 in serina 748 v aktivacijski zanki v PKD-konstruktih, izraženih v celicah COS-7, neposredno pokazala, da je fosforilacija teh dveh ostankov, posredovana s PKC, osnova za aktivacijo PKD [10]. Hkrati so Lim in sodelavci pokazali, da se atipični izoformi PKC, PKCλ in PKCζ, vežeta na vezavni protein FRS2 v celicah Swiss 3T3, stimuliranih z bazičnim rastnim faktorjem fibroblastov, s čimer se atipični PKC umestita v signalni kompleks receptorja rastnega faktorja fibroblastov [6].

Dinamika citoскеletne mreže in signalizacija GTPaz iz družine Rho

Odzivnost citoskeleta albinskih celic 3T3-Swiss na določene dražljaje jih je naredila za temeljni model za raziskave GTPaz iz družine Rho. Ohta in sodelavci so pokazali, da se majhna GTPaza RalA, sorodna Ras, veže na filamin na način, specifičen za GTP, in inducira nastajanje filopodij, bogatih z aktinom, na površinah celic Swiss 3T3 z vključevanjem filamina v filopodialni cito-skelet [11]. Ključno je, da sta dominantno-negativni RalA ali domena filamina, ki se veže na RalA, blokirala nastajanje filopodij, ki ga inducira Cdc42, s čimer je RalA postal posrednik v spodnjem delu verige pri reorganizaciji citoeskeleta, ki jo posreduje Cdc42. Podobno so Granés in sodelavci v transfekcijskih študijah na celicah COS-1 in Swiss 3T3 pokazali, da je prekomerna ekspresija transmembranskega heparansulfatnega proteoglikana sindekana-2 sprožila nastanek dolgih struktur, podobnih filopodijam, prek mehanizma, odvisnega od aktivnega Cdc42 [12].

Pokazalo se je, da bombesin in rastni faktor, pridobljen iz trombocitov, v celicah Swiss 3T3 sprožita povezavo med kinazo fokalne adhezije (FAK) in člani družine Src, vendar po različnih poteh. Odziv na bombesin je bil zaznavni v minuti po stimulaciji, dosegel vrhunec po desetih minutah in potekal neodvisno od ^Ca²⁺ in fosfatidilinozitol-3'-kinaze, medtem ko je odziv na nizke koncentracije rastnega faktorja iz trombocitov zahteval PI3K; oba sta bila odvisna od celovitosti mreže aktinskih filamentov [4]. Hotchin in sodelavci so uporabili celice Swiss 3T3 skupaj z fibroblasti BHK, da bi razčlenili različne prispevke devetega in desetega domena fibronektina tipa III (FIII) k fosforilaciji FAK in aktivaciji Rho/Rac, pri čemer so pokazali, da FIII10 podpira pritrditev celic, ne da bi povzročal fosforilacijo FAK [13]. Li in sodelavci so biokemično kartirali regije Cdc42, ki določajo PAK1, WASP in IQGAP1, nato pa so s mikroinjekcijo vnesli konstitutivno aktivne Cdc42/RhoA v celice Swiss 3T3, ki so bile izpostavljene pomanjkanju seruma, s čimer so razkrili, da domena »switch I« zagotavlja bistvene determinante za vezavo efektorjev, medtem ko se vsak efektor prepozna prek posebnega mehanizma [14].

Ugotovljeno je bilo, da se stopnja fosforilacije beljakovine WAVE, ki spada v družino WASP in posreduje nagubanje membrane v smeri navzdol od Rac, poveča v celicah Swiss 3T3, stimuliranih s trombocitnim rastnim faktorjem, to hiperfosforilacijo pa je zaviral zaviralec MEK PD98059 [15]. Martelli in sodelavci so dokazali, da je za stimulacijo aktivnosti jedrske fosfolipaze C-β1, odvisne od insulinopodobnega rastnega faktorja I, potreben nepoškodovan mikrotubulski citoeskelet, saj je motnja s kolhicinom preprečila povečanje jedrskega diacilglicerola, ne da bi vplivala na fosforilacijo receptorja IGF-I ali aktivnost PI3K [5]. Critchley in sodelavci so pregledali povezavo med integrinom in aktinom, v kateri sodelujejo talin, α-aktinin, filamin in vinkulin, ter poročali, da poskusi na celicah Swiss 3T3, permeabiliziranih s streptolizinom-O, kažejo na vpletenost GTP-vezavnega proteina ARF-1 pri usmerjanju paksilina v fokalne adhezije [16].

Regulacija celičnega cikla

Rastno obnašanje albinskih celic 3T3-Swiss, zavirano s stikom, jih je uvrstilo med klasične modele za študije celičnega cikla. Wang in sodelavci so naredili presenetljivo ugotovitev, da so v poskusih s subcelularno frakcionacijo ugotovili, da se inhibitor ciklinsko odvisne kinaze p²7^Kip1 nahaja izključno v citosolu celic Swiss/3T3 skozi celotno fazo G1 in v zgodnjo fazo S, namesto v jedru, kot so domnevali [17]. Po stimulaciji mirujočih celic s serumom se je koncentracija ^p27Kip1 v citosolu v pozni fazi G1 znatno zmanjšala, kar časovno sovpada s povečanjem koncentracij Cdk2 in ciklina E v jedru.

Sistem mirujočih celic Swiss 3T3 je avtorjem omogočil, da so dokazali, da se neaktiven Cdk2 v mirujočih celicah koprecipitira s p27Kip1, medtem ko stimulacija s serumom aktivira tako jedrski kot citosolski Cdk2, ko se raven p27Kip1 zmanjša; prekomerno izražen p27^Kip1 se je kopičil v jedru in blokiral vstop Cdk2 [17]. Na tej podlagi so avtorji predlagali, da ima citosolski p27^Kip1 funkcionalno vlogo v poteku celičnega cikla, verjetno z omejevanjem uvoza kompleksov ciklina E-Cdk2 v jedro – model kompartmentalizacije, ki deluje vzporedno s prevajalskim in proteasomsko posredovanim nadzorom količine p27Kip1. Sposobnost ponovljive sinhronizacije albinskih celic 3T3-Swiss s pomanjkanjem seruma ostaja ključna za eksperimentalno moč teh ugotovitev.

Celjenje ran in testiranje biomaterialov

Fibroblastska identiteta in rast celic 3T3-Swiss albino, zavirana s stikom, jih uvrščata med standardne referenčne modele v raziskavah celjenja ran in ocenjevanju biokompatibilnosti biomaterialov. V posebej poučni študiji so preučevali učinkovitost resveratrola (RES) v procesu celjenja ran, pri čemer so kot primarni celični model uporabili fibroblaste 3T3 Swiss Albino [19]. Oksidativni stres je bil povzročen s peroksidom vodika, odmerki RES v razponu od 1 do 100 µM pa so bili uporabljeni do 48 ur, da bi ocenili učinke na celično proliferacijo, migracijo in ravni oksidativnega stresa – ključne determinante učinkovitosti zapiranja ran.

V tej študiji je vodikov peroksid zmanjšal indeks proliferacije, medtem ko je uporaba resveratrola ta indeks povečala, znižala ravni oksidativnega stresa ter izboljšala hitrosti migracije in ohranjanje ultrastrukture; zlasti ni bila ugotovljena nobena razlika v ekspresiji mRNA kolagena I (COL1A2), kar kaže, da opazovani učinek ni bil posredovan prek povečane transkripcije kolagena [19]. Uporaba albinskih celic 3T3-Swiss v tem kontekstu odraža njihovo sprejetost kot reprezentativne linije normalnih fibroblastov, s katero se lahko primerjajo posegi za celjenje ran. Primerljivo preverjanje citozdružljivosti podpira razvoj oblog za rane: na primer, alginatni hidrogel, ki vsebuje glikolni izvleček ognjiča, je bil na primer najprej ocenjen glede celične vitalnosti v fibroblastih 3T3 s testoma MTT in SRB, preden je bil preizkušen v modelu reznih ran pri podganah, kjer je izboljšal zapiranje rane in odlaganje kolagena [21].

Ta linija se prav tako uporablja kot referenčni substrat pri testiranju genotoksičnosti. V primerjalni študiji s kometnim testom, ki je izrecno uporabljala linijo 3T3-Swiss albino, so ocenili časovno odvisno kinetiko popravljanja DNK po izpostavljenosti šestim pogosto uporabljanim genotoksičnim snovem – vodikovemu peroksidu, kalijevemu bromat, etilmetansulfonatu, metilmetansulfonatu, N-etil-N-nitrozourea in etopozid – in ugotovila, da so profili popravljanja odvisni od posameznega agenta, pri čemer so se poškodbe, povzročene s peroksidom vodika in EMS, hitro popravile, medtem ko so lezije, povzročene z ENU in etopozidom, vztrajale več kot 24 ur [20]. Študije te vrste zagotavljajo referenčne podatke, potrebne za standardizacijo in validacijo in vitro kometnega testa za regulativno testiranje genotoksičnosti.

Ekstracelularne vezikle in nastajajoče tehnologije

Celice 3T3-Swiss albino so prevzele pomembno vlogo kot referenca normalnih celic v študijah biologije ekstracelularnih veziklov (EV). Fukuta in sodelavci so uporabili mišje melanomske celice B16F1 skupaj s celicami 3T3 Swiss Albino kot reprezentativne rakave oziroma normalne celične linije, da bi preučili, ali lahko električna stimulacija nizke intenzivnosti (0,34 mA/cm) poveča izločanje EV iz gojenih celic [18]. Ta parni eksperimentalni načrt je bil bistven za razlikovanje splošnih celičnih odzivov na električno stimulacijo od učinkov, specifičnih za rakave celice, na sproščanje EV. Električna obdelava je povečala število delcev EV v obeh linijah – 1,7-krat v liniji 3T3 Swiss Albino in 1,26-krat v liniji B16F1 – brez očitne citotoksičnosti [18].

Parni načrt je razkril tudi mehanistično razliko med tema dvema tipoma celic: farmakološko zaviranje Rho GTPaze je odvisno od odmerka zaviralo električno povzročeno povečanje izločanja EV v liniji melanoma, vendar je imelo le majhen učinek na celice 3T3 Swiss Albino, kar kaže, da osnovne zahteve signalizacije v rakavih in normalnih celicah niso enake [18]. Reprezentativni markerji eksosomov CD9, HSP70 in CD81 so bili zaznani v EV obeh linij in so ostali v bistvu nespremenjeni po zdravljenju (HSP70 je bil v EV, pridobljenih iz linije 3T3, dosledno nizek), kar – skupaj z nespremenjenim razmerjem med delci in beljakovinami – kaže, da je zdravljenje povečalo količino EV, ne da bi spremenilo njihovo kakovost. Ker se raziskave EV širijo na področja terapevtskega dajanja zdravil, odkrivanja biomarkerjev in celične komunikacije, postaja razpoložljivost dobro validirane linije fibroblastov, ki ne izvirajo iz tumorjev, kot je 3T3-Swiss albino, vse bolj dragocena za kontekstualizacijo rezultatov iz rakavih ali inženirskih celičnih modelov.

Zaključek

Celice 3T3-Swiss albino veljajo za eno najbolj vsestranskih in zgodovinsko pomembnih linij mišjih fibroblastov, ki so na voljo raziskovalni skupnosti. Od temeljnih raziskav o pinocitozi in proliferaciji, ki ju posreduje rastni faktor, izveden iz trombocitov, do sedanjih preiskav izločanja ekstracelularnih veziklov, ki ga spodbuja nizkonapetostna elektrika [18], je ta spontano imortalizirana linija nenehno dokazovala svojo relevantnost v različnih disciplinah. Njen jasno opredeljen preklop med mirovanjem in proliferacijo, široka odzivnost na mitogene, plastičnost citoskeleta ter sprejetost kot referenčni model normalnih celic za preskuse celjenja ran in biomaterialov zagotavljajo, da bodo celice 3T3-Swiss albino še dolga leta ostale osrednje v celični biologiji — pod pogojem, da so zaloge avtentificirane s STR-profiliranjem, da je zgodovina pasážiranja dokumentirana in da je režim gojenja premišljeno izbran, kadar je fenotip kontaktne inhibicije pomemben za poskus. Raziskovalce, ki iščejo zanesljiv in avtentificiran vir celic 3T3-Swiss albino za svojo naslednjo študijo signalizacije, citoeskeleta ali celjenja ran, spodbujamo, da si ogledajo specifikacije izdelka in oddajo naročilo na cytion.com.

Ključne publikacije

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Kvantitativne študije rasti celic mišjih zarodkov v kulturi in njihovega razvoja v uveljavljene linije. The Journal of cell biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Medlaboratorijska študija za validacijo metode profiliranja STR za identifikacijo mišjih celičnih linij znotraj iste vrste. PloS one. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Profiliranje mišičnih celičnih linij s SNP-nizom identificira njihove izvorne linije ter razkriva navzkrižno kontaminacijo in razširjeno aneuploidijo. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Bombesin in rastni faktor, izveden iz trombocitov, spodbujata povezavo endogene kinaze fokalne adhezije s Src v nepoškodovanih celicah Swiss 3T3. The Journal of biological chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) Stimulacija aktivnosti jedrske fosfolipaze C-beta1 v celicah Swiss 3T3, odvisna od insulinopodobnega rastnega faktorja I, zahteva nepoškodovan cito-skelet in jo spremlja povečana fosforilacija fosfolipaze. Journal of cellular biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Povezava atipičnih izotipov proteinske kinaze C z vezavnim proteinom FRS2 v signalizaciji rastnega faktorja fibroblastov. Revija za biološko kemijo. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Posredovanje pinocitoze v gojenih gladkih mišičnih in endotelnih celicah arterij s pomočjo rastnega faktorja, izvedenega iz trombocitov. The Journal of cell biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) PI 3-kinaza p110alfa, neodvisna od podenote p85, se kolokalizira s kinazo p70 S6 na aktinskih stresnih vlaknih in uravnava trombinom stimulirano nastajanje stresnih vlaken v celicah Swiss 3T3. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) Fosfatidilinozitol 3-kinaza je potrebna za rastni faktorji inducirano privzemanje aminokislin v celicah gladke mišice žil. Arterioskleroza, tromboza in vaskularna biologija. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) Fosforilacijsko odvisna aktivacija proteinske kinaze D [Pregled]. Electrophoresis. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) Mala GTPaza RalA cilja na filamin, da inducira filopodije. Zbornik Nacionalne akademije znanosti Združenih držav Amerike. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) Syndecan-2 inducira filopodije prek aktivnega cdc42Hs. Experimental cell research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Diferencialna aktivacija kinaze fokalne adhezije, Rho in Rac s pomočjo devete in desete domene FIII fibronektina. Journal of cell science. PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) Lokalizacija regij Cdc42, ki določajo PAK1, WASP in IQGAP1. Časopis za biološko kemijo. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) Fosforilacija WAVE v nadaljevanju signalne poti mitogen-aktivirane proteinske kinaze. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Celična adhezija, posredovana z integrini: povezava s citoeskeletom [Pregled]. Simpozij Biochemical Society. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) Inhibitor ciklin-odvisne kinaze p27Kip1 se nahaja v citosolu v celicah Swiss/3T3. Oncogene. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) Nizka raven električnega toka poveča izločanje ekstracelularnih veziklov iz gojenih celic. Biochemistry and biophysics reports. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) Učinkovitost resveratrola v procesu celjenja ran z zmanjšanjem oksidativnega stresa ter spodbujanjem proliferacije in migracije fibroblastov. Dermatološka terapija. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Kinetičnost popravljanja DNA, specifična za posamezno snov, v celicah 3T3: primerjalna študija z uporabo in vitro kometnega testa. Raziskave v toksikologiji. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) Glikolni izvleček ognjiča izboljša celjenje ran z alginatnim hidrogelom. Acta cirurgica brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Osnove za pridobitev malignega potenciala pri mišjih celicah, gojenih in vitro. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Dokazi za progresivno in adaptivno naravo spontanega preoblikovanja v celični liniji NIH 3T3. Zbornik Nacionalne akademije znanosti Združenih držav Amerike. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Prilagajanje in selekcija kot dejavnika pri spontanem preoblikovanju celic NIH-3T3. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Vnos v bazo podatkov Cellosaurus 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Švicarski inštitut za bioinformatiko. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Pogosta vprašanja o Cellosaurusu, vprašanje 21: Zakaj obstajajo različni vnosi za celično linijo 3T3 v Cellosaurusu? cellosaurus.org/faq