Introdução

O Células 3T3-Swiss albinas Esta linha celular — também conhecida pelos sinónimos Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino e Swiss3T3 — é uma das linhas celulares mais duradouras e amplamente utilizadas na investigação biomédica. Criada em 1962 por George Todaro e Howard Green a partir de embriões desagregados de ratos Swiss Albino e descrita no seu artigo de 1963, a linha resultou de um protocolo de transferência em série, no âmbito do qual quase todas as culturas de embriões acabaram por dar origem a linhas estabelecidas e espontaneamente imortalizadas [1]. Ao longo das seis décadas seguintes, as células 3T3-Swiss albinas tornaram-se um modelo indispensável para o estudo da regulação do ciclo celular, da sinalização dos fatores de crescimento, da dinâmica do citoesqueleto e da biologia da cicatrização de feridas. O seu comportamento bem definido de inibição por contacto, a sua capacidade de resposta a mitógenos, tais como o fator de crescimento derivado das plaquetas e a bradicinina, e a sua maleabilidade genética tornaram-nas um modelo de referência fundamental em inúmeros estudos sobre vias de sinalização e ensaios de triagem de fármacos.

Pontos-chave

• A 3T3-Swiss albino é uma linha de fibroblastos embrionários murinos imortalizados espontaneamente, estabelecida em 1962 por Todaro e Green (número de acesso no Cellosaurus CVCL_0120, dador macho, embrião completo) [25].
• Esta linhagem apresenta inibição do crescimento por contacto, o que a torna um modelo poderoso para estudar a transição entre a quiescência e a proliferação — embora a intensidade deste fenótipo dependa do regime de cultura e não seja uma propriedade fixa da linhagem [22] [23].
• É altamente sensível a diversos mitógenos, incluindo o fator de crescimento derivado das plaquetas, a bombesina, a bradicinina e o fator de crescimento semelhante à insulina tipo I.
• As células 3T3-Swiss albinas têm sido fundamentais para a análise da organização do citoesqueleto, da sinalização das GTPases da família Rho e da dinâmica das adesões focais.
• Esta linha deu origem a uma vasta família de sublinhas derivadas — incluindo as 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 e a sublinha da camada alimentadora 3T3-J2 — utilizadas em aplicações de adipogénese, oncologia e cocultura [25].
• Um ensaio STR multiplex validado interlaboratorialmente (19 marcadores de rato mais dois marcadores humanos para rastreio interespécies; 18 dos 19 marcadores de rato revelaram-se adequados para a discriminação intraespécies) permite agora a autenticação fiável de linhas celulares de rato, incluindo a 3T3-Swiss albina [2].

O que é o 3T3-Swiss albino?

A linha 3T3-Swiss albino foi obtida a partir do tecido de um embrião inteiro de um rato macho da linhagem Swiss albino na fase embrionária, sem qualquer doença associada ao dador [25]. O nome «3T3» remete para o protocolo de transferência original: as células eram repicadas a cada três dias com um inóculo de 3 × 10⁵ células por 20 cm² prato. Todaro e Green demonstraram que as culturas de embriões de rato apresentavam um declínio na taxa de crescimento após transferências sucessivas — sendo que a taxa de declínio dependia, em parte, da densidade de inoculação — antes de quase todas as culturas se desenvolverem em linhas estabelecidas no prazo de três meses, e que as condições de cultura utilizadas determinavam quais as propriedades que a linha resultante adquiria; o regime 3T3 produziu uma linha que é extremamente sensível à inibição por contacto [1]. A linha resultante apresenta uma morfologia fibroblástica, cresce sob a forma de uma monocamada aderente e sofre inibição da proliferação por contacto quando atinge a confluência — uma propriedade que a distingue das linhas transformadas e a torna um modelo ideal para o estudo das transições da quiescência para a proliferação.

A linhagem 3T3-Swiss albino estava entre as linhagens de ratos incluídas num vasto estudo com um painel de SNP, concebido para verificar os antecedentes genéticos das estirpes relatados e para detetar alterações no número de cópias cromossómicas que a análise de perfis STR não consegue identificar; das 99 linhagens examinadas, 98 corresponderam aos antecedentes genéticos que lhes foram atribuídos [3] [25]. Para dar resposta às preocupações relativas à autenticação no âmbito da prática corrente, um consórcio interlaboratorial composto por doze laboratórios validou um ensaio de perfilagem STR multiplex para a identificação intraespecífica de linhas celulares de ratinho, com base em 50 das linhas de ratinho mais utilizadas, devendo os perfis resultantes ser publicados na base de dados BioSample do NCBI; o perfil STR agora listado para a linha 3T3-Swiss albino no Cellosaurus provém desse estudo [2] [25]. Estes avanços melhoraram substancialmente a reprodutibilidade da investigação realizada com esta linhagem amplamente difundida.

Informações sobre cultura celular

Vantagens das células 3T3-Swiss albino

Um dos pontos fortes mais notáveis das células 3T3-Swiss albino é a sua resposta bem caracterizada à estimulação por fatores de crescimento após a retirada do soro. Colocar as células em estado de quiescência através da privação de soro e, posteriormente, reestimulá-las com mitógenos definidos permite aos investigadores estudar eventos de sinalização distintos com elevada resolução temporal. Este paradigma experimental tem sido utilizado para investigar as respostas ao fator de crescimento derivado das plaquetas, à bombesina, à bradicinina, ao fator de crescimento semelhante à insulina tipo I e ao fator de crescimento básico dos fibroblastos — abrangendo uma gama invulgarmente ampla de classes de recetores e vias a jusante num único contexto celular consistente [4] [5] [6].

Uma segunda grande vantagem é o fenótipo de inibição de contacto desta linha celular. Ao contrário de muitas linhas celulares cancerosas transformadas, as células albinas 3T3-Swiss entram em paragem de divisão quando atingem a confluência, em vez de continuarem a crescer de forma descontrolada. Isto torna-as um excelente modelo de referência para ensaios de cicatrização de feridas do tipo «scratch», nos quais a migração para uma zona desnudada pode ser quantificada em condições definidas. No entanto, é fundamental notar que este fenótipo depende da forma como as células são cultivadas, em vez de ser uma característica fixa da linha. Aaronson e Todaro demonstraram que as linhas de embriões de rato mantidas em condições que minimizam o contacto célula a célula permaneceram não tumorigénicas durante mais de 200 gerações, enquanto que as linhas cultivadas em condições de contacto celular extensivo se tornaram tumorigénicas no espaço de 30 gerações — e que a propriedade de cultura que melhor se correlacionava com a tumorigénica era precisamente a perda da inibição do contacto na divisão celular [22]. Estudos posteriores identificaram as variáveis específicas envolvidas: surgem focos transformados espontâneos em culturas do tipo 3T3 mantidas em condição de confluência durante mais de dez dias, e a sua frequência depende do tipo e da concentração do soro utilizado, bem como do histórico de passagens da cultura [23]. O efeito pode ser surpreendentemente rápido — um clone que não produziu focos em cinquenta ensaios consecutivos ao longo de 21 semanas começou a formá-los após apenas dois dias num meio com baixo teor de soro [24]. Estas experiências foram realizadas em linhas 3T3 derivadas de BALB/c e do NIH, em vez de na própria linha 3T3-Swiss albino, mas descrevem uma dependência do regime comum às linhas de fibroblastos do tipo 3T3 e têm uma implicação prática concreta: os laboratórios que dependem especificamente da inibição por contacto devem trabalhar com números de passagens baixos e documentados, em condições séricas definidas, evitar manter as culturas em confluência por mais tempo do que o exigido pelo ensaio e verificar o fenótipo por si próprios.

A origem fibroblástica desta linha é também diretamente relevante para estudos sobre a remodelação da matriz extracelular, a sinalização das integrinas e a reparação dérmica — proporcionando um contexto fisiológico que as linhas puramente epiteliais ou cancerosas não conseguem oferecer. Além disso, o extenso catálogo de sublinhas derivadas da 3T3-Swiss albino alarga o conjunto de ferramentas experimentais à disposição dos investigadores nas áreas da adipogénese, oncologia e aplicações de cocultura de células estaminais [25].

Limitações das células 3T3-Swiss albinas

Apesar da sua utilidade, as células 3T3-Swiss albino apresentam limitações inerentes decorrentes da sua natureza murina e da sua imortalização espontânea. A deriva cariotípica já tinha sido documentada no estudo inicial, no qual as populações passaram da gama diplóide para a tetraplóide — muitas vezes de forma muito rápida — antes do aparecimento de cromossomas marcadores [1]. Essa instabilidade não é exclusiva desta linha: a análise por matriz de SNP de 99 linhas celulares de ratinho comumente utilizadas revelou indícios de alterações no número de cópias em 42% delas, incluindo 24% das linhas derivadas de tecido normal, em vez de tecido tumoral, o que confirma que a aneuploidia é uma característica generalizada da cultura celular de ratinho, e não uma característica específica do cancro [3]. Essa instabilidade genómica significa que os resultados obtidos em passagens avançadas podem não refletir fielmente as propriedades das células em passagens iniciais, e as comparações entre laboratórios podem ser afetadas por desvios não detetados. Os investigadores devem, por isso, autenticar os seus lotes utilizando métodos STR validados e manter registos consistentes das passagens [2].

Uma limitação relacionada é a prevalência histórica de stocks de células mal identificadas ou contaminadas de forma cruzada na comunidade científica, uma questão amplamente documentada no que diz respeito às linhas celulares de ratinho [3]. Uma armadilha específica e frequentemente ignorada diz respeito à nomenclatura: o 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, publicado em 1963) e o NIH 3T3 (CVCL_0594, derivado de um rato suíço do NIH e publicado em 1969) são ambas frequentemente abreviadas para «3T3» ou «Swiss 3T3» na literatura. Quando um artigo não indica o número de catálogo da coleção de onde provêm as células, muitas vezes não é possível distinguir as duas linhagens sem contactar diretamente os autores [26]. Esta ambiguidade estende-se a grande parte da literatura clássica sobre sinalização resumida abaixo: os relatórios que descrevem trabalhos com «Swiss 3T3» raramente especificam a que linha se referem, pelo que os resultados devem ser interpretados como aplicáveis aos fibroblastos murinos do tipo 3T3, a menos que a fonte identifique explicitamente a linha. Além disso, uma vez que a 3T3-Swiss albino não é um isolado clonal, mas sim uma população policlonal, a heterogeneidade funcional entre lotes de diferentes origens pode influenciar adicionalmente os resultados experimentais. Por fim, sendo uma linha de fibroblastos de ratinho, a 3T3-Swiss albino pode não reproduzir as nuances de sinalização relevantes para a biologia humana sem uma validação cuidadosa, devendo os resultados deste modelo ser corroborados em sistemas de células primárias ou in vivo adequados à espécie antes de se tirarem conclusões translacionais.

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Aplicações

Sinalização de fatores de crescimento e proliferação celular

As células albinas 3T3-Swiss têm servido como um modelo de excelência para a análise das cascatas de sinalização mitogénica desencadeadas por diversos fatores de crescimento e neuropeptídeos. Em trabalhos pioneiros de Davies e Ross, as células 3T3-Swiss foram utilizadas em conjunto com células do músculo liso aórtico de macaco e células endoteliais aórticas bovinas para demonstrar que a substituição do soro derivado do plasma por soro de sangue total ou por fator de crescimento derivado de plaquetas parcialmente purificado estimulava significativamente a pinocitose, bem como a proliferação em culturas em repouso — uma ligação precoce entre o tráfego de membranas induzido por fatores de crescimento e a entrada no ciclo celular, estabelecida principalmente no sistema das células do músculo liso [7]. Estudos subsequentes exploraram o paradigma da retirada de soro/reestimulação para situar moléculas de sinalização individuais em vias ordenadas a jusante da ativação do recetor.

A fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) surgiu como um nó central nas respostas estimuladas por fatores de crescimento. Johanson e colegas demonstraram que um conjunto de PI3K p110α, independente da subunidade p85, se colocaliza com a quinase p70 S6 nas fibras de tensão de actina e que a atividade da PI3K é necessária para a formação de fibras de tensão induzida pela trombina nas células Swiss 3T3 [8]. Um papel semelhante da PI3K na captação de nutrientes foi descrito por Higaki e Shimokado, que demonstraram que os inibidores da PI3K aboliram a captação de aminoácidos estimulada pelo fator de crescimento derivado de plaquetas nas células do músculo liso vascular e relataram um efeito inibidor semelhante nas células Swiss 3T3 [9].

A proteína quinase D (PKD) é ativada em células Swiss 3T3 intactas por ésteres de forbol, diacilgliceróis permeáveis às células, briostatina, neuropeptídeos e fatores de crescimento, através de um mecanismo dependente de fosforilação e que requer a proteína quinase C. Conforme revisado por Waldron, Iglesias e Rozengurt, a mutagénese dos resíduos da alça de ativação — serina 744 e serina 748 — em construções de PKD expressas em células COS-7 demonstrou diretamente que a fosforilação mediada pela PKC destes dois resíduos está na base da ativação da PKD [10]. Paralelamente, Lim e colegas demonstraram que as isoformas atípicas da PKC, PKCλ e PKCζ, se associam à proteína «docker» FRS2 em células Swiss 3T3 estimuladas com fator de crescimento fibroblástico básico, situando a PKC atípica no complexo de sinalização do recetor do fator de crescimento fibroblástico [6].

Dinâmica do citoesqueleto e sinalização das GTPases da família Rho

A capacidade de resposta do citoesqueleto das células albinas 3T3-Swiss a estímulos definidos tornou-as um modelo fundamental para a investigação das GTPases da família Rho. Ohta e colegas demonstraram que a pequena GTPase RalA, relacionada com a Ras, se liga à filamina de forma específica ao GTP e induz a formação de filópodes ricos em actina na superfície das células Swiss 3T3, recrutando a filamina para o citoesqueleto filopodial [11]. Fundamentalmente, a RalA dominante-negativa ou o domínio de ligação à RalA da filamina bloquearam a formação de filópodes induzida pela Cdc42, posicionando a RalA como um intermediário a jusante na reorganização do citoesqueleto mediada pela Cdc42. De forma semelhante, Granés e colegas demonstraram, em estudos de transfecção em células COS-1 e Swiss 3T3, que a sobreexpressão do proteoglicano transmembranar de heparano sulfato, o sindecano-2, induzia longas estruturas semelhantes a filópodes através de um mecanismo dependente da Cdc42 ativa [12].

Demonstrou-se que tanto a bombesina como o fator de crescimento derivado das plaquetas induzem a associação entre a quinase de adesão focal (FAK) e membros da família Src em células Swiss 3T3, mas por vias distintas. A resposta à bombesina era detetável no prazo de um minuto após a estimulação, atingia o pico após dez minutos e decorreu independentemente do ^Ca²⁺ e da fosfatidilinositol 3'-quinase, enquanto a resposta a baixas concentrações do fator de crescimento derivado das plaquetas exigia a PI3K; ambas dependiam da integridade da rede de filamentos de actina [4]. Hotchin e colegas utilizaram células Swiss 3T3 juntamente com fibroblastos BHK para analisar as contribuições distintas do nono e décimo domínios da fibronectina tipo III (FIII) para a fosforilação da FAK e a ativação de Rho/Rac, demonstrando que o FIII10 suporta a adesão celular sem induzir a fosforilação da FAK [13]. Li e colegas mapearam bioquimicamente as regiões da Cdc42 específicas para PAK1, WASP e IQGAP1 e, em seguida, microinjetaram quimeras de Cdc42/RhoA em células Swiss 3T3 privadas de soro, revelando que o domínio «switch I» fornece determinantes essenciais para a ligação dos efetores, enquanto cada efetor é reconhecido através de um mecanismo distinto [14].

Verificou-se que o estado de fosforilação da WAVE, uma proteína da família WASP que medeia a ondulação da membrana a jusante da Rac, aumentava nas células Swiss 3T3 estimuladas com o fator de crescimento derivado de plaquetas, e esta hiperfosforilação foi inibida pelo inibidor da MEK PD98059 [15]. Martelli e colegas demonstraram que a estimulação dependente do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-I) da atividade da fosfolipase C-β1 nuclear exigia um citoesqueleto de microtúbulos intacto, uma vez que a sua perturbação com colchicina anulou o aumento do diacilglicerol nuclear sem afetar a fosforilação do recetor do IGF-I ou a atividade da PI3K [5]. Critchley e colegas analisaram a ligação integrina-actina envolvendo talina, α-actinina, filamina e vinculina, e relataram que experiências em células Swiss 3T3 permeabilizadas com estreptolisina-O implicam a proteína de ligação a GTP ARF-1 na orientação da paxilina para as adesões focais [16].

Regulação do ciclo celular

O comportamento de crescimento inibido por contacto das células 3T3-Swiss albinas posicionou-as como um modelo clássico para estudos do ciclo celular. Wang e colegas fizeram a surpreendente observação de que, em experiências de fracionamento subcelular, o inibidor da quinase dependente de ciclina ^p27Kip1 foi encontrado exclusivamente no citosol das células Swiss/3T3 ao longo da fase G1 e até ao início da fase S, em vez de no núcleo, como se supunha [17]. Após a estimulação sérica de células quiescentes, ^{a p27Kip1} citosólica diminuiu acentuadamente no final da fase G1, o que coincidiu temporalmente com um aumento dos níveis nucleares tanto da Cdk2 como da ciclina E.

O sistema de células Swiss 3T3 em repouso permitiu aos autores demonstrar que a Cdk2 inativa se coprecipita com a ^p27Kip1 nas células em repouso, enquanto que a estimulação sérica ativa tanto a Cdk2 nuclear como a citosólica à medida que a p27Kip1 diminui; ^{a p27Kip1} sobreexpressa acumulou-se no núcleo e bloqueou a entrada de Cdk2 [17]. Com base nisto, os autores propuseram que ^{a p27Kip1} citosólica desempenha um papel funcional na progressão do ciclo celular, possivelmente ao restringir a importação nuclear de complexos ciclina E-Cdk2 — um modelo de compartimentação que funciona em paralelo com o controlo translacional e mediado pelo proteassoma da abundância de ^p27Kip1. A capacidade de sincronizar células 3T3-Swiss albinas de forma reprodutível através da privação de soro continua a ser fundamental para o valor experimental destas descobertas.

Cicatrização de feridas e ensaios de biomateriais

A identidade fibroblástica e o crescimento inibido por contacto das células 3T3-Swiss albino tornam-nas um modelo de referência padrão na investigação sobre a cicatrização de feridas e na avaliação da biocompatibilidade de biomateriais. Um estudo particularmente esclarecedor investigou a eficácia do resveratrol (RES) no processo de cicatrização de feridas, utilizando fibroblastos 3T3-Swiss Albino como modelo celular primário [19]. O stress oxidativo foi induzido por peróxido de hidrogénio, e foram aplicadas doses de RES que variaram entre 1 e 100 µM durante um período de até 48 horas, para avaliar os efeitos na proliferação celular, na migração e nos níveis de stress oxidativo — determinantes-chave da eficiência do encerramento da ferida.

Nesse estudo, o peróxido de hidrogénio reduziu o índice de proliferação, enquanto a aplicação de resveratrol o aumentou, diminuiu os níveis de stress oxidativo e melhorou as taxas de migração e a preservação ultraestrutural; notavelmente, não foi detetada qualquer diferença na expressão do ARNm do colagénio I (COL1A2), indicando que o benefício observado não foi mediado pelo aumento da transcrição do colagénio [19]. A utilização de células 3T3-Swiss albinas neste contexto reflete a sua aceitação como uma linha representativa de fibroblastos normais, em relação à qual as intervenções de cicatrização de feridas podem ser avaliadas. Um rastreio comparável de citocompatibilidade sustenta o desenvolvimento de pensos para feridas: um hidrogel de alginato contendo extrato glicólico de calêndula, por exemplo, foi primeiro avaliado quanto à viabilidade celular em fibroblastos 3T3 através de ensaios MTT e SRB antes de ser testado num modelo de ferida incisional em ratos, onde melhorou o fecho da ferida e a deposição de colagénio [21].

A linha é igualmente utilizada como substrato de referência em ensaios de genotoxicidade. Um estudo comparativo do ensaio Comet, realizado especificamente com a linha 3T3-Swiss albino, avaliou a cinética de reparação do ADN em função do tempo após a exposição a seis agentes genotóxicos de uso comum — peróxido de hidrogénio, bromato de potássio, metanosulfonato de etilo, metanosulfonato de metilo, N-etil-N-nitrosoureia e etoposídeo — e identificou perfis de reparação específicos para cada agente, tendo os danos induzidos pelo peróxido de hidrogénio e pelo EMS sido reparados rapidamente, enquanto as lesões induzidas pela ENU e pelo etoposídeo persistiram para além das 24 horas [20]. Estudos deste tipo fornecem os dados de referência necessários para normalizar e validar o ensaio «comet» in vitro para testes regulamentares de genotoxicidade.

Vesículas Extracelulares e Tecnologias Emergentes

As células 3T3-Swiss albino assumiram um papel importante como referência de células normais em estudos sobre a biologia das vesículas extracelulares (EV). Fukuta e colegas utilizaram células de melanoma murino B16F1 juntamente com células 3T3 Swiss Albino como linhas celulares representativas de células cancerosas e normais, respetivamente, para investigar se a estimulação elétrica de baixa intensidade (0,34 mA/cm) poderia aumentar a secreção de EV por parte das células em cultura [18]. Este desenho experimental emparelhado foi essencial para distinguir as respostas celulares gerais à estimulação elétrica dos efeitos específicos das células cancerosas na libertação de EV. O tratamento elétrico aumentou o número de partículas de EV em ambas as linhas — 1,7 vezes nas 3T3 Swiss Albino e 1,26 vezes nas B16F1 — sem citotoxicidade aparente [18].

O desenho emparelhado revelou também uma diferença mecânica entre os dois tipos de células: a inibição farmacológica da Rho GTPase suprimiu o aumento induzido eletricamente na secreção de EV na linha de melanoma de forma dependente da dose, mas teve pouco efeito nas células 3T3 Swiss Albino, indicando que os requisitos de sinalização subjacentes não são idênticos em células cancerosas e normais [18]. Os marcadores representativos de exossomas CD9, HSP70 e CD81 foram detetados nos EV de ambas as linhas e permaneceram essencialmente inalterados pelo tratamento (sendo o HSP70 consistentemente baixo nos EV derivados de 3T3), o que — juntamente com uma relação partícula/proteína inalterada — sugere que o tratamento aumentou a quantidade de EV sem alterar a sua qualidade. À medida que a investigação sobre as VE se expande para a administração terapêutica, a descoberta de biomarcadores e a comunicação celular, a disponibilidade de uma linha de fibroblastos bem validada e não derivada de tumores, como a 3T3-Swiss albino, torna-se cada vez mais valiosa para contextualizar os resultados de modelos de células cancerosas ou modificadas geneticamente.

Conclusão

As células 3T3-Swiss albino constituem uma das linhas de fibroblastos murinos mais versáteis e historicamente significativas à disposição da comunidade científica. Desde trabalhos fundamentais sobre a pinocitose e a proliferação mediadas pelo fator de crescimento derivado de plaquetas até às investigações atuais sobre a secreção de vesículas extracelulares potenciada por eletricidade de baixa intensidade [18], esta linha espontaneamente imortalizada tem provado continuamente a sua relevância em diversas disciplinas. A sua alternância bem definida entre quiescência e proliferação, a ampla capacidade de resposta aos mitógenos, a plasticidade do citoesqueleto e a aceitação como referência de células normais para ensaios de cicatrização de feridas e de biomateriais garantem que as células 3T3-Swiss albino continuarão a ser fundamentais para a biologia celular nos próximos anos — desde que os lotes sejam autenticados por perfilagem STR, que os históricos de passagem sejam documentados e que o regime de cultura seja escolhido deliberadamente nos casos em que o fenótipo de inibição de contacto seja relevante para a experiência. Os investigadores que procurem uma fonte fiável e autenticada de células 3T3-Swiss albino para o seu próximo estudo sobre sinalização, citoesqueleto ou cicatrização de feridas são encorajados a explorar as especificações do produto e a efetuar uma encomenda em cytion.com.

Publicações principais

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Estudos quantitativos do crescimento de células embrionárias de ratinho em cultura e do seu desenvolvimento em linhas estabelecidas. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Estudo interlaboratorial para validar um método de perfilagem STR para a identificação intraespécies de linhas celulares de ratinho. PloS one. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) A análise de perfis de SNP em matrizes de linhas celulares de ratos identifica as suas estirpes de origem e revela contaminação cruzada e aneuploidia generalizada. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) A bombesina e o fator de crescimento derivado de plaquetas induzem a associação da quinase de adesão focal endógena com a Src em células Swiss 3T3 intactas. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) A estimulação dependente do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I da atividade da fosfolipase C-beta1 nuclear em células Swiss 3T3 requer um citoesqueleto intacto e é acompanhada por um aumento da fosforilação da fosfolipase. Journal of Cellular Biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Associação de isótipos atípicos da proteína quinase C com a proteína de ligação FRS2 na sinalização do fator de crescimento dos fibroblastos. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Mediação da pinocitose em células musculares lisas arteriais e endoteliais em cultura pelo fator de crescimento derivado das plaquetas. The Journal of Cell Biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) Uma PI-3-quinase p110alfa, independente da subunidade p85, colocaliza-se com a quinase p70 S6 nas fibras de tensão de actina e regula a formação de fibras de tensão estimulada pela trombina em células Swiss 3T3. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) A fosfatidilinositol 3-quinase é necessária para a captação de aminoácidos induzida por fatores de crescimento pelas células do músculo liso vascular. Arteriosclerose, trombose e biologia vascular. PMID: 10479654
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11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) A pequena GTPase RalA tem como alvo a filamina para induzir filópodes. Atas da Academia Nacional de Ciências dos Estados Unidos da América. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) O sindecano-2 induz filópodes por meio da cdc42Hs ativa. Experimental Cell Research. PMID: 10222136
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15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) Fosforilação da WAVE a jusante da via de sinalização da proteína quinase ativada por mitógeno. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Adesão celular mediada por integrinas: a ligação ao citoesqueleto [Revisão]. Simpósio da Sociedade Bioquímica. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) O inibidor da quinase dependente de ciclina p27Kip1 está localizado no citosol em células Swiss/3T3. *Oncogene*. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) A eletricidade de baixa intensidade aumenta a secreção de vesículas extracelulares por células em cultura. Relatórios de Bioquímica e Biofísica. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) Eficácia do resveratrol no processo de cicatrização de feridas através da redução do stress oxidativo e da promoção da proliferação e migração dos fibroblastos. Dermatologic Therapy. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Cinética de reparação do ADN específica do agente em células 3T3: um estudo comparativo utilizando o ensaio cometa in vitro. Investigação em Toxicologia. PMID: 41399455
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22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Bases para a aquisição de potencial maligno por células de ratinho cultivadas in vitro. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Evidências da natureza progressiva e adaptativa da transformação espontânea na linha celular NIH 3T3. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Adaptação e seleção como fatores na transformação espontânea das células NIH-3T3. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Entrada no Cellosaurus 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB – Instituto Suíço de Bioinformática. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Perguntas frequentes do Cellosaurus, P21: Por que razão existem entradas diferentes para a linha celular 3T3 no Cellosaurus? cellosaurus.org/faq