บทนำ

The เซลล์ 3T3-Swiss albino สายเซลล์ — ซึ่งยังเป็นที่รู้จักด้วยชื่ออื่น ๆ เช่น Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino และ Swiss3T3 — เป็นหนึ่งในสายเซลล์ที่มีอายุยืนยาวที่สุดและถูกใช้อย่างแพร่หลายที่สุดในงานวิจัยทางชีวการแพทย์ สายเซลล์นี้ถูกสร้างขึ้นในปี 1962 โดย George Todaro และ Howard Green จากตัวอ่อนหนู Swiss albino ที่ถูกแยกส่วน และได้รับการอธิบายในบทความวิจัยของพวกเขาในปี 1963 สายเซลล์นี้เกิดขึ้นจากวิธีการถ่ายโอนแบบต่อเนื่อง ซึ่งภายใต้กระบวนการนี้ การเพาะเลี้ยงตัวอ่อนเกือบทั้งหมดจะก่อให้เกิดสายเซลล์ที่มั่นคงและกลายเป็นเซลล์อมตะโดยธรรมชาติในที่สุด [1]. ในช่วงหกทศวรรษถัดมา เซลล์ 3T3-Swiss albino ได้กลายเป็นแบบจำลองที่ขาดไม่ได้สำหรับการศึกษาการควบคุมวงจรเซลล์ การส่งสัญญาณของปัจจัยการเจริญเติบโต พลวัตของโครงร่างเซลล์ และชีววิทยาการสมานแผล พฤติกรรมการยับยั้งการติดต่อที่ชัดเจน ความตอบสนองต่อสารกระตุ้นการแบ่งตัวเซลล์ เช่น ปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (PDGF) และบราดีคินิน (bradykinin) รวมถึงความสามารถในการปรับเปลี่ยนทางพันธุกรรม ได้ทำให้เซลล์เหล่านี้กลายเป็นแบบจำลองอ้างอิงหลักในการศึกษาเส้นทางสัญญาณและกระบวนการคัดกรองยาอย่างนับไม่ถ้วน

จุดสำคัญที่ควรจดจำ

• 3T3-Swiss albino เป็นสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์จากตัวอ่อนหนูที่ถูกทำให้เป็นอมตะโดยธรรมชาติ ซึ่งถูกสร้างขึ้นในปี ค.ศ. 1962 โดย Todaro และ Green (Cellosaurus accession CVCL_0120, ผู้บริจาคเพศชาย, ตัวอ่อนทั้งตัว) [25].
• สายพันธุ์นี้แสดงการยับยั้งการเจริญเติบโตจากการสัมผัส ทำให้มันเป็นแบบจำลองที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการศึกษาการเปลี่ยนผ่านระหว่างภาวะพักตัวและการเพิ่มจำนวน — แม้ว่าความเข้มของลักษณะทางฟีโนไทป์นี้จะขึ้นอยู่กับระบบการเพาะเลี้ยงมากกว่าที่จะเป็นคุณสมบัติคงที่ของสายพันธุ์นี้ [22] [23].
• มันมีความไวสูงต่อสารกระตุ้นการแบ่งตัวของเซลล์หลากหลายชนิด รวมถึงปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (platelet-derived growth factor), บอมเบซิน (bombesin), บราดีคินิน (bradykinin) และปัจจัยการเจริญเติบโตคล้ายอินซูลิน-I (insulin-like growth factor-I)
• เซลล์ 3T3-Swiss albino มีบทบาทสำคัญในการศึกษาโครงสร้างของโครงร่างเซลล์ (cytoskeletal organisation), ระบบสัญญาณของ GTPase ในตระกูล Rho, และพลวัตของการยึดติดแบบโฟกัส (focal adhesion dynamics)
• สายเซลล์นี้ได้ก่อให้เกิดกลุ่มสายเซลล์ลูกจำนวนมาก — รวมถึง 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 และสายเซลล์ชั้นป้อน 3T3-J2 — ซึ่งถูกใช้ในด้านการสร้างเซลล์ไขมัน (adipogenesis), การวิจัยโรคมะเร็ง (oncology) และการเพาะเลี้ยงร่วม (co-culture) [25].
• วิธีการวิเคราะห์ STR แบบมัลติเพล็กซ์ที่ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องระหว่างห้องปฏิบัติการ (ประกอบด้วยมาร์กเกอร์ของหนู 19 ตัว และมาร์กเกอร์ของมนุษย์ 2 ตัว สำหรับการคัดกรองระหว่างสปีชีส์; มาร์กเกอร์ของหนู 18 ตัวจากทั้งหมด 19 ตัวได้รับการพิสูจน์ว่าเหมาะสมสำหรับการแยกแยะภายในสปีชีส์) ปัจจุบันสามารถใช้เพื่อยืนยันความถูกต้องของสายเซลล์หนูได้อย่างน่าเชื่อถือ รวมถึงสายเซลล์ 3T3-Swiss albino [2].

3T3-Swiss albino คืออะไร?

3T3-Swiss albino ได้รับการสกัดจากเนื้อเยื่อของตัวอ่อนทั้งตัวของหนู Swiss albino เพศผู้ ในระยะตัวอ่อน โดยไม่พบโรคใดที่เกี่ยวข้องกับผู้บริจาค [25]. ชื่อ "3T3" หมายถึงโปรโตคอลการถ่ายโอนเซลล์แบบดั้งเดิม: เซลล์ถูกถ่ายโอนทุกสามวัน ด้วยปริมาณเริ่มต้น 3 × 10⁵ เซลล์ต่อ 20 ซม.² จาน. Todaro และ Green ได้แสดงให้เห็นว่าอัตราการเติบโตของวัฒนธรรมตัวอ่อนหนูจะลดลงเมื่อมีการถ่ายโอนต่อเนื่อง — โดยอัตราการลดลงนี้ขึ้นอยู่กับความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงบางส่วน — ก่อนที่วัฒนธรรมเกือบทั้งหมดจะพัฒนาเป็นสายพันธุ์ที่มั่นคงภายในสามเดือน และว่าเงื่อนไขการเพาะเลี้ยงที่ใช้จะกำหนดคุณสมบัติที่สายพันธุ์ที่ได้มาจะรับมา; วิธีการเพาะเลี้ยงแบบ 3T3 ให้สายพันธุ์ที่มีความไวต่อการยับยั้งการติดต่ออย่างสูง [1]. สายเซลล์ที่ได้มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ เติบโตเป็นชั้นเดียวที่ติดกับพื้นผิว และเกิดการยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์เมื่อเซลล์เติบโตจนเต็มพื้นที่ — ซึ่งเป็นคุณสมบัติที่ทำให้มันแตกต่างจากสายเซลล์ที่ถูกเปลี่ยนแปลง และทำให้มันเป็นแบบจำลองที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการศึกษาการเปลี่ยนผ่านจากภาวะพักตัวสู่การเพิ่มจำนวนเซลล์

สายพันธุ์ 3T3-Swiss albino เป็นหนึ่งในสายพันธุ์หนูที่ถูกนำมาใช้ในโครงการสำรวจ SNP array ขนาดใหญ่ ซึ่งออกแบบมาเพื่อตรวจสอบพื้นหลังทางพันธุกรรมของสายพันธุ์ที่ได้รับการรายงานไว้ และเพื่อตรวจหาการเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนาโครโมโซมที่การวิเคราะห์ STR ไม่สามารถระบุได้; จากสายพันธุ์หนู 99 สายพันธุ์ที่ได้รับการตรวจสอบ มี 98 สายพันธุ์ที่ตรงกับพื้นหลังทางพันธุกรรมที่ได้รับการรายงานไว้ [3] [25]. เพื่อแก้ไขปัญหาด้านการตรวจสอบความถูกต้องในระดับการปฏิบัติงานประจำวัน กลุ่มความร่วมมือระหว่างห้องปฏิบัติการที่ประกอบด้วยห้องปฏิบัติการ 12 แห่ง ได้ทำการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการวิเคราะห์โปรไฟล์ STR แบบมัลติเพล็กซ์ สำหรับการระบุชนิดภายในสายพันธุ์ของเซลล์ไลน์หนู โดยใช้เซลล์ไลน์หนู 50 สายพันธุ์ที่นิยมใช้มากที่สุดเป็นพื้นฐาน และโปรไฟล์ที่ได้จะถูกเผยแพร่ในฐานข้อมูล NCBI BioSample; โปรไฟล์ STR ที่ปัจจุบันถูกระบุไว้สำหรับ 3T3-Swiss albino ใน Cellosaurus มาจากการศึกษานั้น [2] [25]. ความก้าวหน้าเหล่านี้ได้ช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำของงานวิจัยที่ดำเนินการกับสายพันธุ์ที่แพร่หลายนี้ได้อย่างมีนัยสำคัญ

ข้อมูลการเพาะเลี้ยงเซลล์

ข้อดีของเซลล์ 3T3-Swiss albino

หนึ่งในจุดแข็งที่น่าสนใจที่สุดของเซลล์ 3T3-Swiss albino คือการตอบสนองที่ได้รับการศึกษาอย่างละเอียดต่อการกระตุ้นด้วยปัจจัยการเจริญเติบโต หลังจากหยุดการให้เซรั่ม การทำให้เซลล์อยู่ในภาวะพักตัวโดยการหยุดการให้เซรั่ม และจากนั้นกระตุ้นใหม่ด้วยมิโทเจนที่กำหนดไว้อย่างชัดเจน ช่วยให้นักวิจัยสามารถศึกษาเหตุการณ์การส่งสัญญาณที่แยกต่างหากได้ด้วยความละเอียดทางเวลาสูง แบบจำลองการทดลองนี้ได้ถูกนำมาใช้เพื่อศึกษาการตอบสนองต่อปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (PDGF), บอมเบซิน (bombesin), บราดีคินิน (bradykinin), ปัจจัยการเจริญเติบโตคล้ายอินซูลิน-I (IGF-I), และปัจจัยการเจริญเติบโตของไฟโบรบลาสต์แบบเบสิก (bFGF) — ซึ่งครอบคลุมกลุ่มตัวรับและเส้นทางสัญญาณระดับล่างที่หลากหลายอย่างผิดปกติ ภายในบริบทเซลล์เดียวที่สม่ำเสมอ [4] [5] [6].

ข้อได้เปรียบสำคัญอีกประการหนึ่งคือลักษณะการยับยั้งการติดต่อของสายเซลล์นี้ ซึ่งแตกต่างจากสายเซลล์มะเร็งที่ถูกดัดแปลงหลายชนิด เซลล์ 3T3-Swiss albino จะหยุดการเจริญเติบโตเมื่อถึงจุดที่เซลล์เต็มพื้นที่ แทนที่จะเติบโตต่อไปอย่างไม่หยุดยั้ง สิ่งนี้ทำให้เซลล์เหล่านี้เป็นแบบจำลองอ้างอิงที่ยอดเยี่ยมสำหรับการทดสอบการหายของแผลแบบ scratch assay ซึ่งสามารถวัดปริมาณการเคลื่อนที่เข้าสู่พื้นที่ที่ถูกขูดออกได้ภายใต้เงื่อนไขที่กำหนด อย่างไรก็ตาม สิ่งสำคัญคือ ลักษณะทางฟีโนไทป์นี้ขึ้นอยู่กับวิธีการเลี้ยงเซลล์มากกว่าที่จะเป็นลักษณะคงที่ของสายเซลล์ Aaronson และ Todaro ได้แสดงให้เห็นว่า สายพันธุ์เซลล์จากตัวอ่อนหนูที่ได้รับการเลี้ยงในสภาพที่ลดการสัมผัสระหว่างเซลล์ให้น้อยที่สุด ยังคงไม่ก่อให้เกิดเนื้องอกได้มากกว่า 200 รุ่น ในขณะที่สายพันธุ์เซลล์ที่ได้รับการเลี้ยงในสภาพที่มีการสัมผัสระหว่างเซลล์อย่างกว้างขวาง จะเริ่มก่อให้เกิดเนื้องอกภายใน 30 รุ่น — และว่าคุณสมบัติการเพาะเลี้ยงที่มีความสัมพันธ์ดีที่สุดกับความสามารถในการก่อมะเร็ง คือการสูญเสียการยับยั้งการแบ่งตัวของเซลล์จากการสัมผัส [22]. งานวิจัยต่อมาได้กำหนดตัวแปรเฉพาะที่เกี่ยวข้องไว้ว่า: จุดที่มีการเปลี่ยนแปลงแบบสปอนเทนัสจะเกิดขึ้นในวัฒนธรรมเซลล์แบบ 3T3 ที่ถูกเลี้ยงจนเซลล์เต็มพื้นที่เพาะเลี้ยงเป็นเวลามากกว่าสิบวัน และความถี่ของการเกิดจุดดังกล่าวขึ้นอยู่กับประเภทและความเข้มข้นของเซรั่มที่ใช้ รวมถึงประวัติการเพาะเลี้ยงซ้ำของวัฒนธรรมเซลล์ [23]. ผลลัพธ์อาจเกิดขึ้นได้อย่างรวดเร็วอย่างน่าประหลาด — คลอนที่ไม่สร้างโฟกัสเลยใน 50 การทดสอบติดต่อกันตลอด 21 สัปดาห์ เริ่มสร้างโฟกัสได้หลังจากเพียง 2 วันในสื่อที่มีเซรั่มต่ำ [24]. การทดลองเหล่านี้ได้ดำเนินการบนสายเซลล์ 3T3 ที่มาจาก BALB/c และ NIH แทนที่จะใช้ 3T3-Swiss albino เอง แต่ผลการทดลองดังกล่าวชี้ให้เห็นถึงความขึ้นอยู่กับสภาวะการเพาะเลี้ยงที่พบได้ทั่วไปในสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ประเภท 3T3 และมีความหมายเชิงปฏิบัติที่ชัดเจน: ห้องปฏิบัติการที่พึ่งพาการยับยั้งการติดต่อโดยเฉพาะควรทำงานที่จำนวนการเพาะเลี้ยงต่ำและมีการบันทึกไว้อย่างชัดเจนภายใต้เงื่อนไขเซรั่มที่กำหนดไว้ หลีกเลี่ยงการเก็บรักษาวัฒนธรรมเซลล์ที่ถึงจุดเต็ม (confluence) นานกว่าที่การทดสอบต้องการ และตรวจสอบลักษณะทางฟีโนไทป์ด้วยตนเอง

ต้นกำเนิดจากเซลล์ไฟโบรบลาสต์ของสายเซลล์นี้ยังมีความเกี่ยวข้องโดยตรงกับการศึกษาเกี่ยวกับการปรับโครงสร้างของแมทริกซ์นอกเซลล์ การส่งสัญญาณของอินทิกริน และการซ่อมแซมชั้นผิวหนัง — ซึ่งให้บริบททางสรีรวิทยาที่สายเซลล์แบบเอพิเทลิอัลล้วนๆ หรือสายเซลล์มะเร็งไม่สามารถให้ได้ นอกจากนี้ รายชื่อสายเซลล์ลูกที่สร้างขึ้นจาก 3T3-Swiss albino ยังช่วยขยายชุดเครื่องมือทดลองที่มีอยู่สำหรับนักวิจัยในด้านการสร้างเซลล์ไขมัน (adipogenesis) มะเร็งวิทยา และการเพาะเลี้ยงร่วมของเซลล์ต้นกำเนิด [25].

ข้อจำกัดของเซลล์ 3T3-Swiss albino

แม้จะมีประโยชน์ แต่เซลล์ 3T3-Swiss albino ก็มีข้อจำกัดโดยธรรมชาติที่เกิดจากความเป็นเซลล์ของหนูและลักษณะที่กลายเป็นเซลล์อมตะโดยธรรมชาติ การเปลี่ยนแปลงของแบบโครโมโซม (karyotypic drift) ได้ถูกบันทึกไว้แล้วในงานวิจัยต้นฉบับ ซึ่งพบว่าประชากรเซลล์เปลี่ยนจากระดับไดพลอยด์ไปสู่ระดับเตตระพลอยด์ — มักเกิดขึ้นอย่างรวดเร็วมาก — ก่อนที่โครโมโซมมาร์กเกอร์จะปรากฏขึ้น [1]. ความไม่เสถียรนี้ไม่ใช่ลักษณะเฉพาะของสายเซลล์นี้เท่านั้น: การวิเคราะห์ด้วย SNP array ของสายเซลล์หนู 99 สายที่ใช้กันทั่วไป พบหลักฐานการเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนาใน 42% ของสายเซลล์เหล่านั้น รวมถึง 24% ของสายเซลล์ที่มาจากเนื้อเยื่อปกติ ไม่ใช่เนื้อเยื่อมะเร็ง ซึ่งยืนยันว่าภาวะไม่สมดุลโครโมโซม (aneuploidy) เป็นลักษณะที่พบได้ทั่วไปในการเพาะเลี้ยงเซลล์หนู ไม่ใช่ลักษณะเฉพาะของมะเร็ง [3]. ความไม่เสถียรทางจีโนมดังกล่าวหมายความว่า ผลลัพธ์ที่ได้จากเซลล์ที่ผ่านกระบวนการเพาะเลี้ยงหลายครั้งอาจไม่สะท้อนคุณสมบัติของเซลล์ในระยะเริ่มต้นได้อย่างถูกต้อง และการเปรียบเทียบระหว่างห้องปฏิบัติการอาจถูกบิดเบือนโดยความเปลี่ยนแปลงที่ไม่ถูกตรวจพบ ดังนั้น นักวิจัยควรตรวจสอบความถูกต้องของสต็อกเซลล์ของตนโดยใช้วิธีการ STR ที่ได้รับการยืนยันแล้ว และรักษาบันทึกการเพาะเลี้ยงให้สอดคล้องกัน [2].

ข้อจำกัดที่เกี่ยวข้องอีกประการหนึ่งคือปัญหาการระบุชนิดเซลล์ผิดหรือการปนเปื้อนข้ามในสต็อกเซลล์ ซึ่งเคยเกิดขึ้นบ่อยครั้งในชุมชนนักวิจัยมาโดยตลอด ซึ่งเป็นปัญหาที่ได้รับการบันทึกไว้อย่างกว้างขวางสำหรับสายเซลล์หนู [3]. จุดอ่อนที่เฉพาะเจาะจงและมักถูกมองข้ามคือเรื่องชื่อเรียก: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, เผยแพร่ปี 1963) และ NIH 3T3 (CVCL_0594, ที่ได้มาจากหนู Swiss ของ NIH และเผยแพร่ในปี 1969) ทั้งสองสายพันธุ์นี้มักถูกย่อเป็น "3T3" หรือ "Swiss 3T3" ในวรรณกรรม หากบทความไม่ระบุหมายเลขแคตตาล็อกของแหล่งที่มาของเซลล์นั้น ทั้งสองสายพันธุ์มักไม่สามารถแยกแยะได้โดยสิ้นเชิง โดยไม่ติดต่อผู้เขียนโดยตรง [26]. ความไม่ชัดเจนนี้ขยายไปถึงส่วนใหญของวรรณกรรมคลาสสิกเกี่ยวกับระบบส่งสัญญาณที่สรุปไว้ด้านล่างนี้: รายงานที่อธิบายงานวิจัยใน "Swiss 3T3" มักไม่ระบุอย่างชัดเจนว่าหมายถึงสายเซลล์ใด และผลการวิจัยจึงควรตีความว่าใช้ได้กับเซลล์ไฟโบรบลาสต์ของหนูชนิด 3T3 เว้นแต่แหล่งข้อมูลจะระบุสายเซลล์นั้นอย่างชัดเจน เนื่องจาก 3T3-Swiss albino ไม่ใช่สายพันธุ์โคลน แต่เป็นประชากรโพลีโคลน ความไม่สม่ำเสมอทางหน้าที่ระหว่างสต็อกจากแหล่งต่าง ๆ จึงอาจส่งผลต่อผลลัพธ์การทดลองเพิ่มเติมได้ สุดท้ายนี้ เนื่องจาก 3T3-Swiss albino เป็นสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ของหนู จึงอาจไม่สามารถสะท้อนความละเอียดอ่อนในการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับชีววิทยาของมนุษย์ได้โดยไม่ผ่านการตรวจสอบอย่างระมัดระวัง และผลลัพธ์จากโมเดลนี้ควรได้รับการยืนยันในระบบเซลล์ปฐมภูมิที่เหมาะสมกับชนิดสัตว์หรือในระบบ in vivo ก่อนที่จะสรุปผลในการประยุกต์ใช้ทางคลินิก

ดูข้อมูลจำเพาะทั้งหมดและสั่งซื้อ

การใช้งาน

สัญญาณของปัจจัยการเจริญเติบโตและการเพิ่มจำนวนเซลล์

เซลล์ 3T3-Swiss albino ได้ถูกใช้เป็นแบบจำลองหลักในการวิเคราะห์กระบวนการส่งสัญญาณกระตุ้นการแบ่งตัวเซลล์ (mitogenic signalling cascades) ที่ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการเจริญเติบโตและนิวโรเปปไทด์ต่าง ๆ ในงานวิจัยช่วงต้นของ Davies และ Ross ได้ใช้เซลล์ Swiss 3T3 ร่วมกับเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือดแดงใหญ่จากลิง และเซลล์เยื่อบุหลอดเลือดแดงใหญ่จากวัว เพื่อแสดงให้เห็นว่า การแทนที่เซรั่มที่ได้จากพลาสมาด้วยเซรั่มจากเลือดทั้งตัว หรือปัจจัยการเจริญเติบโตที่ได้จากเกล็ดเลือดที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์บางส่วน จะกระตุ้นการพินอซิโทซิส (pinocytosis) รวมถึงการเพิ่มจำนวนเซลล์ในวัฒนธรรมเซลล์ที่อยู่ในภาวะพักตัวได้อย่างชัดเจน — ซึ่งเป็นความเชื่อมโยงในระยะแรกเริ่มระหว่างการขนส่งเมมเบรนที่ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการเจริญเติบโตกับการเข้าสู่รอบเซลล์ ซึ่งได้รับการยืนยันเป็นหลักในระบบเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ [7] การศึกษาต่อมาได้ใช้แบบจำลองการถอนเซรั่ม/การกระตุ้นใหม่เพื่อจัดวางโมเลกุลสัญญาณแต่ละตัวให้อยู่ในเส้นทางที่มีระเบียบแบบแผน ซึ่งอยู่ด้านล่างของการกระตุ้นตัวรับ

ฟอสฟาทิดิลอิโนซิทอล 3-ไคเนส (PI3K) ได้ปรากฏตัวเป็นจุดศูนย์กลางในปฏิกิริยาที่ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการเจริญเติบโต Johanson และเพื่อนร่วมงานได้แสดงให้เห็นว่ากลุ่ม p110α PI3K ที่ไม่ขึ้นอยู่กับหน่วยย่อย p85 อยู่ร่วมกันกับ p70 S6 kinase บนเส้นใยความเครียดแอคติน และว่ากิจกรรมของ PI3K เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการก่อตัวของเส้นใยความเครียดที่ถูกกระตุ้นโดยทรอมบินในเซลล์ Swiss 3T3 [8]. บทบาทที่คล้ายกันของ PI3K ในการดูดซึมสารอาหารได้รับการอธิบายโดย Higaki และ Shimokado ซึ่งแสดงให้เห็นว่าสารยับยั้ง PI3K ทำให้การดูดซึมกรดอะมิโนที่ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการเจริญเติบโตจากเกล็ดเลือด (PDGF) ในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือดหยุดลง และรายงานผลของสารยับยั้งที่คล้ายกันในเซลล์ Swiss 3T3 [9].

โปรตีนไคเนส D (PKD) ถูกกระตุ้นในเซลล์ Swiss 3T3 ที่สมบูรณ์โดยฟอร์โบลเอสเทอร์ ไดอะซิลกลีเซอรอลที่ซึมผ่านเซลล์ได้ ไบรอสตาติน นิวโรเปปไทด์ และปัจจัยการเจริญเติบโต ผ่านกลไกที่ขึ้นอยู่กับการฟอสโฟรีเลชันและต้องการโปรตีนไคเนส C ตามการทบทวนของ Waldron, Iglesias และ Rozengurt การสร้างการกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนเซรีน 744 และเซรีน 748 ในลูปการกระตุ้นของ PKD ที่แสดงออกในเซลล์ COS-7 ได้แสดงให้เห็นโดยตรงว่า การฟอสโฟรีเลชันของกรดอะมิโนทั้งสองนี้โดย PKC เป็นพื้นฐานของการกระตุ้น PKD [10]. ในเวลาเดียวกัน Lim และคณะได้แสดงให้เห็นว่าไอโซฟอร์ม PKC ที่ไม่ปกติ ได้แก่ PKCλ และ PKCζ จับตัวกับโปรตีนด็อกเกอร์ FRS2 ในเซลล์ Swiss 3T3 ที่ถูกกระตุ้นด้วยปัจจัยการเจริญเติบโตของไฟโบรบลาสต์แบบเบสิก (basic fibroblast growth factor) ซึ่งทำให้ PKC ที่ไม่ปกติอยู่ในคอมเพล็กซ์สัญญาณของตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของไฟโบรบลาสต์ [6].

พลวัตของโครงร่างเซลล์และสัญญาณ GTPase ครอบครัว Rho

ความตอบสนองของโครงกระดูกเซลล์ในเซลล์ 3T3-Swiss albino ต่อสิ่งกระตุ้นที่กำหนดไว้ได้ทำให้เซลล์เหล่านี้กลายเป็นแบบจำลองหลักสำหรับการวิจัยเกี่ยวกับ GTPase ในตระกูล Rho Ohta และเพื่อนร่วมงานได้แสดงให้เห็นว่า RalA ซึ่งเป็น GTPase ขนาดเล็กที่เกี่ยวข้องกับ Ras จับกับ filamin ในลักษณะที่เฉพาะเจาะจงต่อ GTP และกระตุ้นการก่อตัวของ filopodia ที่อุดมด้วยแอคตินบนพื้นผิวเซลล์ Swiss 3T3 โดยการดึง filamin เข้าสู่โครงร่างเซลล์ของ filopodia [11]. ที่สำคัญคือ RalA แบบ dominant-negative หรือโดเมนจับ RalA ของ filamin ได้ขัดขวางการก่อตัวของ filopod ที่ถูกกระตุ้นโดย Cdc42 ซึ่งทำให้ RalA กลายเป็นตัวกลางในขั้นตอนถัดไปของกระบวนการจัดระเบียบใหม่ของโครงร่างเซลล์ที่ Cdc42 เป็นตัวกลาง ในทำนองเดียวกัน Granés และคณะได้แสดงให้เห็นในการศึกษาการทรานส์เฟคชันในเซลล์ COS-1 และ Swiss 3T3 ว่า การแสดงออกเกินของ syndecan-2 ซึ่งเป็นโปรตีโอไกลแคนเฮพารันซัลเฟตแบบข้ามเยื่อหุ้มเซลล์ ได้กระตุ้นให้เกิดโครงสร้างคล้ายฟิลโพเดียที่ยาว ผ่านกลไกที่ขึ้นอยู่กับ Cdc42 ที่อยู่ในสถานะทำงาน [12]

ทั้งบอมเบซินและปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (PDGF) ต่างก็แสดงให้เห็นว่าสามารถกระตุ้นการเชื่อมโยงระหว่างโฟคัล แอดเฮชัน คินาส (FAK) และสมาชิกในตระกูล Src ในเซลล์ Swiss 3T3 ได้ แต่ผ่านทางที่ต่างกัน การตอบสนองต่อบอมเบซินสามารถตรวจพบได้ภายในหนึ่งนาทีหลังการกระตุ้น ถึงจุดสูงสุดหลังจากสิบนาที และดำเนินไปอย่างอิสระจาก ^Ca2+ และฟอสฟาทิดิลอิโนซิทอล 3'-ไคเนส (PI3K) ในขณะที่การตอบสนองต่อปัจจัยการเจริญเติบโตที่สกัดจากเกล็ดเลือดในความเข้มข้นต่ำจำเป็นต้องมี PI3K; ทั้งสองกระบวนการนี้ขึ้นอยู่กับความสมบูรณ์ของเครือข่ายเส้นใยแอคติน [4]. Hotchin และเพื่อนร่วมงานได้ใช้เซลล์ Swiss 3T3 ร่วมกับไฟโบรบลาสต์ BHK เพื่อวิเคราะห์บทบาทที่แตกต่างกันของโดเมนที่ 9 และ 10 ของไฟโบรเนคตินประเภท III (FIII) ต่อการฟอสโฟรีเลชันของ FAK และการกระตุ้น Rho/Rac โดยแสดงให้เห็นว่า FIII10 สนับสนุนการยึดติดของเซลล์โดยไม่ก่อให้เกิดการฟอสโฟรีเลชันของ FAK [13]. Li และเพื่อนร่วมงานได้กำหนดตำแหน่งทางชีวเคมีของบริเวณที่ระบุ PAK1, WASP และ IQGAP1 ของ Cdc42 จากนั้นจึงใช้เทคนิคไมโครอินเจกชันเพื่อฉีด Cdc42/RhoA ที่มีความสามารถทำงานอย่างต่อเนื่อง เข้าสู่เซลล์ Swiss 3T3 ที่ถูกตัดขาดจากเซรั่ม ซึ่งแสดงให้เห็นว่าโดเมน Switch I เป็นปัจจัยสำคัญในการจับกับตัวส่งสัญญาณ ในขณะที่ตัวส่งสัญญาณแต่ละตัวถูกรับรู้ผ่านกลไกที่แตกต่างกัน [14].

พบว่าสถานะการฟอสโฟรีเลชันของ WAVE — โปรตีนในตระกูล WASP ที่ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการสร้างริ้วบนเยื่อหุ้มเซลล์ (membrane-ruffling) ในขั้นตอนถัดไปของ Rac — เพิ่มขึ้นในเซลล์ Swiss 3T3 ที่ถูกกระตุ้นด้วยปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (platelet-derived growth factor) และการฟอสโฟรีเลชันที่มากเกินไปนี้ถูกยับยั้งโดยสารยับยั้ง MEK PD98059 [15]. Martelli และเพื่อนร่วมงานได้แสดงให้เห็นว่า การกระตุ้นกิจกรรมของฟอสโฟลิเปส C-β1 ในนิวเคลียสที่ขึ้นอยู่กับอินซูลิน-ไลค์ โกรท แฟกเตอร์-I (IGF-I) จำเป็นต้องมีโครงร่างเซลล์ไมโครทูบูลที่สมบูรณ์ เนื่องจากการรบกวนด้วยโคลชิซีนทำให้การเพิ่มขึ้นของไดอะซิลกลีเซอรอลในนิวเคลียสหายไป โดยไม่ส่งผลต่อการฟอสโฟรีเลชันของตัวรับ IGF-I หรือกิจกรรมของ PI3K [5]. Critchley และเพื่อนร่วมงานได้ทบทวนการเชื่อมโยงระหว่างอินทิกรินและแอคติน ซึ่งเกี่ยวข้องกับทาลิน, α-แอคตินิน, ฟิลาไมน์ และวินคูลิน และรายงานว่าผลการทดลองในเซลล์ Swiss 3T3 ที่ถูกทำให้ซึมผ่านได้ด้วยสเตรปโตไลซิน-O ชี้ให้เห็นว่าโปรตีนจับ GTP ARF-1 มีบทบาทในการกำหนดเป้าหมายให้แพกซิลินไปยังจุดยึดโฟคัล [16].

การควบคุมวงจรเซลล์

พฤติกรรมการเจริญเติบโตที่ถูกยับยั้งจากการสัมผัสของเซลล์ 3T3-Swiss albino ได้ทำให้เซลล์เหล่านี้กลายเป็นแบบจำลองคลาสสิกสำหรับการศึกษาวงจรเซลล์ Wang และเพื่อนร่วมงานได้ค้นพบข้อสังเกตที่น่าประหลาดใจว่า ในการทดลองแยกส่วนย่อยของเซลล์ ตัวยับยั้งไคเนสที่ขึ้นอยู่กับไซคลิน p27Kip¹ ถูกพบอยู่เฉพาะในไซโทซอลของเซลล์ Swiss/3T3 ตลอดช่วง G1 และเข้าสู่ช่วง S ต้น แทนที่จะอยู่ในนิวเคลียสอย่างที่เคยสันนิษฐานไว้ [17]. หลังจากการกระตุ้นด้วยเซรั่มของเซลล์ที่อยู่ในภาวะพักตัว ^p27Kip1 ในไซโทซอลลดลงอย่างชัดเจนในช่วงปลาย G1 ซึ่งสอดคล้องกับช่วงเวลาที่ระดับของ Cdk2 และไซคลิน E ในนิวเคลียสเพิ่มขึ้น

ระบบเซลล์ Swiss 3T3 ที่อยู่ในภาวะพักตัวช่วยให้ผู้วิจัยสามารถแสดงให้เห็นว่า Cdk2 ที่ไม่ทำงานจะตกตะกอนร่วมกับ p27Kip¹ ในเซลล์ที่อยู่ในภาวะพักตัว ในขณะที่การกระตุ้นด้วยเซรั่มจะกระตุ้น Cdk2 ทั้งในนิวเคลียสและไซโทซอล เมื่อระดับ p27^Kip1 ลดลง; p27Kip¹ ที่ถูกแสดงออกเกินระดับปกติจะสะสมในนิวเคลียสและขัดขวางการเข้าสู่ของ Cdk2 [17]. บนพื้นฐานนี้ ผู้วิจัยได้เสนอว่า p27^Kip1 ในไซโตซอลมีบทบาททางหน้าที่ในการดำเนินวงจรเซลล์ ซึ่งอาจเกิดขึ้นโดยการจำกัดการนำเข้าของคอมเพล็กซ์ไซคลิน E-Cdk2 เข้าสู่นิวเคลียส — ซึ่งเป็นแบบจำลองการแบ่งส่วนที่ทำงานควบคู่ไปกับการควบคุมปริมาณ p27Kip1 ผ่านกระบวนการแปลโปรตีนและโปรตีโอโซม ความสามารถในการทำให้เซลล์ 3T3-Swiss albino ซิงโครไนซ์ได้อย่างสม่ำเสมอโดยการขาดเซรั่ม ยังคงเป็นปัจจัยสำคัญต่อความน่าเชื่อถือทางทดลองของผลการวิจัยเหล่านี้

การรักษาแผลและการทดสอบวัสดุชีวภาพ

ลักษณะของเซลล์ไฟโบรบลาสต์และการเติบโตที่ถูกยับยั้งเมื่อสัมผัสของเซลล์ 3T3-Swiss albino ทำให้เซลล์เหล่านี้เป็นแบบจำลองอ้างอิงมาตรฐานในการวิจัยการสมานแผลและการประเมินความเข้ากันได้ทางชีวภาพของวัสดุชีวภาพ การศึกษาหนึ่งที่มีประโยชน์อย่างยิ่งได้ตรวจสอบประสิทธิภาพของเรสเวอราทรอล (RES) ในกระบวนการรักษาแผล โดยใช้เซลล์ไฟโบรบลาสต์ 3T3 Swiss Albino เป็นแบบจำลองเซลล์หลัก [19]. ความเครียดออกซิเดชันถูกก่อให้เกิดโดยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ และใช้ RES ในปริมาณตั้งแต่ 1 ถึง 100 µM เป็นระยะเวลาสูงสุด 48 ชั่วโมง เพื่อประเมินผลกระทบต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ การเคลื่อนที่ของเซลล์ และระดับความเครียดออกซิเดชัน — ซึ่งเป็นปัจจัยสำคัญที่กำหนดประสิทธิภาพการปิดแผล

ในการศึกษานั้น ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ทำให้ดัชนีการเพิ่มจำนวนเซลล์ลดลง ในขณะที่การใช้เรสเวอราทรอลทำให้ดัชนีนี้เพิ่มขึ้น ลดระดับความเครียดออกซิเดทีฟ และปรับปรุงอัตราการเคลื่อนที่ของเซลล์รวมถึงการรักษาโครงสร้างระดับจุลภาค; ที่สำคัญคือ ไม่พบความแตกต่างในการแสดงออกของ mRNA ของคอลลาเจน-I (COL1A2) ซึ่งบ่งชี้ว่าประโยชน์ที่สังเกตได้ไม่ได้เกิดจากการเพิ่มขึ้นของการถอดรหัสคอลลาเจน [19]. การใช้เซลล์ 3T3-Swiss albino ในบริบทนี้สะท้อนให้เห็นว่าเซลล์ดังกล่าวได้รับการยอมรับเป็นสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ปกติที่เป็นตัวแทน ซึ่งสามารถใช้เป็นการเปรียบเทียบสำหรับการประเมินผลของการรักษาแผลได้ การคัดกรองความเข้ากันได้ทางเซลล์ที่เทียบเคียงได้นี้เป็นพื้นฐานสำคัญในการพัฒนาวัสดุปิดแผล: ตัวอย่างเช่น ไฮโดรเจลอัลจิเนตที่มีสารสกัดกลีโคลิกจากดอกคาเลนดูลา ตัวอย่างเช่น ได้รับการประเมินความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ในไฟโบรบลาสต์ 3T3 โดยใช้การทดสอบ MTT และ SRB ก่อนที่จะนำไปทดสอบในแบบจำลองแผลผ่าตัดในหนู ซึ่งพบว่าช่วยปรับปรุงการปิดแผลและการสะสมคอลลาเจน [21].

สายเซลล์นี้ยังถูกใช้เป็นสารตั้งต้นอ้างอิงในการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมด้วย การศึกษาเปรียบเทียบด้วยวิธีคอมเมตแอสเซย์ (comet assay) ที่ใช้สายเซลล์ 3T3-Swiss albino เป็นหลัก ได้ประเมินพลวัตการซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ขึ้นอยู่กับเวลา หลังจากสัมผัสกับสารก่อพิษทางพันธุกรรมที่ใช้กันทั่วไป 6 ชนิด — ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ โพแทสเซียมโบรเมต เอทิลเมทานซัลโฟเนต เมทิลเมทานซัลโฟเนต, เอ็น-เอทิล-เอ็น-ไนโตรโซยูเรีย และเอโทโพไซด์ — และพบรูปแบบการซ่อมแซมที่เฉพาะตัวต่อสารแต่ละชนิด โดยความเสียหายที่เกิดจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และ EMS ได้รับการซ่อมแซมอย่างรวดเร็ว ในขณะที่ความเสียหายที่เกิดจาก ENU และเอโทโพไซด์ยังคงอยู่เกิน 24 ชั่วโมง [20]. การศึกษาประเภทนี้ให้ข้อมูลอ้างอิงที่จำเป็นสำหรับการมาตรฐานและการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีทดสอบคอมเมตในหลอดทดลอง (in vitro comet assay) สำหรับการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมตามข้อกำหนดของหน่วยงานกำกับดูแล

เวสิเคิลนอกเซลล์และเทคโนโลยีใหม่

เซลล์ 3T3-Swiss albino ได้มีบทบาทสำคัญในฐานะเซลล์ปกติที่ใช้เป็นมาตรฐานอ้างอิงในการศึกษาชีววิทยาของเวสิเคิลนอกเซลล์ (EV) Fukuta และเพื่อนร่วมงานได้ใช้เซลล์เมลาโนมาของหนู B16F1 ร่วมกับเซลล์ 3T3 Swiss Albino เป็นสายเซลล์มะเร็งและเซลล์ปกติที่เป็นตัวแทนตามลำดับ เพื่อศึกษาว่าการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าในระดับต่ำ (0.34 mA/cm) สามารถเพิ่มการหลั่ง EV จากเซลล์ที่เพาะเลี้ยงได้หรือไม่ [18] การออกแบบการทดลองแบบคู่เช่นนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในการแยกแยะการตอบสนองของเซลล์ทั่วไปต่อการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าออกจากผลกระทบเฉพาะของเซลล์มะเร็งต่อการปล่อย EV การรักษาด้วยไฟฟ้าทำให้จำนวนอนุภาค EV เพิ่มขึ้นในทั้งสองสายเซลล์ — 1.7 เท่าใน 3T3 Swiss Albino และ 1.26 เท่าใน B16F1 — โดยไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เห็นได้ชัด [18].

การออกแบบการทดลองแบบคู่ยังเผยให้เห็นความแตกต่างทางกลไกระหว่างสองชนิดเซลล์: การยับยั้งทางเภสัชวิทยาของ Rho GTPase ได้ยับยั้งการเพิ่มขึ้นของการหลั่ง EV ที่เกิดจากกระแสไฟฟ้าในสายเซลล์เมลาโนมาอย่างขึ้นกับขนาดยา แต่มีผลน้อยในเซลล์ 3T3 Swiss Albino ซึ่งบ่งชี้ว่าความต้องการในการส่งสัญญาณพื้นฐานไม่เหมือนกันระหว่างเซลล์มะเร็งและเซลล์ปกติ [18] ตัวบ่งชี้เอกโซโซมที่เป็นตัวแทน ได้แก่ CD9, HSP70 และ CD81 ถูกตรวจพบใน EV จากทั้งสองสายพันธุ์ และแทบไม่เปลี่ยนแปลงจากการรักษา (HSP70 มีระดับต่ำอย่างสม่ำเสมอใน EV ที่มาจาก 3T3) ซึ่ง — ร่วมกับอัตราส่วนอนุภาคต่อโปรตีนที่ไม่เปลี่ยนแปลง — ชี้ให้เห็นว่าการรักษาเพิ่มปริมาณ EV โดยไม่เปลี่ยนแปลงคุณภาพของ EV เมื่อการวิจัยเกี่ยวกับ EV ขยายตัวไปสู่การส่งมอบการรักษา การค้นพบไบโอมาร์เกอร์ และการสื่อสารระหว่างเซลล์ การมีสายพันธุ์ไฟโบรบลาสต์ที่ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องอย่างดีและไม่มาจากเนื้องอก เช่น 3T3-Swiss albino จึงมีคุณค่ามากขึ้นเรื่อยๆ ในการวางผลลัพธ์จากแบบจำลองเซลล์มะเร็งหรือเซลล์ที่ถูกดัดแปลงให้อยู่ในบริบทที่เหมาะสม

สรุป

เซลล์ 3T3-Swiss albino ถือเป็นหนึ่งในสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ของหนูที่มีความหลากหลายสูงที่สุดและมีความสำคัญทางประวัติศาสตร์มากที่สุดที่ชุมชนนักวิจัยสามารถเข้าถึงได้ ตั้งแต่การวิจัยพื้นฐานเกี่ยวกับกระบวนการพินอไซโทซิสและการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่ได้รับการควบคุมโดยปัจจัยการเจริญเติบโตจากเกล็ดเลือด (PDGF) ไปจนถึงการวิจัยปัจจุบันเกี่ยวกับการหลั่งเวสิเคิลนอกเซลล์ที่ได้รับการเสริมประสิทธิภาพจากกระแสไฟฟ้าระดับต่ำ [18] สายเซลล์ที่ถูกทำให้เป็นอมตะโดยธรรมชาติสายนี้ได้พิสูจน์ความสำคัญอย่างต่อเนื่องในหลายสาขาวิชา การเปลี่ยนผ่านระหว่างภาวะพักตัวและการเพิ่มจำนวนที่ชัดเจน ความตอบสนองต่อมิโทเจนที่กว้างขวาง ความยืดหยุ่นของโครงร่างเซลล์ และการยอมรับให้เป็นมาตรฐานอ้างอิงของเซลล์ปกติสำหรับการรักษาแผลและการทดสอบวัสดุชีวภาพ ล้วนรับประกันว่าเซลล์ 3T3-Swiss albino จะยังคงเป็นศูนย์กลางของชีววิทยาเซลล์ต่อไปอีกหลายปีข้างหน้า — โดยมีเงื่อนไขว่าสต็อกเซลล์ต้องได้รับการยืนยันความแท้ผ่านการวิเคราะห์ STR ประวัติการเพาะเลี้ยงต้องได้รับการบันทึกไว้อย่างครบถ้วน และต้องเลือกวิธีการเพาะเลี้ยงอย่างระมัดระวัง โดยเฉพาะเมื่อลักษณะการยับยั้งการติดต่อ (contact inhibition) มีความสำคัญต่อผลการทดลอง นักวิจัยที่กำลังมองหาแหล่งที่มาที่เชื่อถือได้และได้รับการยืนยันความแท้จริงของเซลล์ 3T3-Swiss albino สำหรับการศึกษาต่อไปเกี่ยวกับสัญญาณชีวภาพ โครงสร้างเซลล์ หรือการสมานแผล ขอแนะนำให้ศึกษาข้อมูลจำเพาะของผลิตภัณฑ์และสั่งซื้อได้ที่ cytion.com

บทความสำคัญ

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) การศึกษาเชิงปริมาณเกี่ยวกับการเติบโตของเซลล์ตัวอ่อนหนูในวัฒนธรรมและการพัฒนาเป็นสายพันธุ์ที่มั่นคง. The Journal of cell biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) การศึกษาข้ามห้องปฏิบัติการเพื่อตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการวิเคราะห์โปรไฟล์ STR สำหรับการระบุสายพันธุ์ภายในชนิดของสายเซลล์หนู. PloS one. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) การวิเคราะห์โปรไฟล์ SNP array ของสายเซลล์หนูช่วยระบุสายพันธุ์ต้นกำเนิดและเปิดเผยการปนเปื้อนข้ามสายพันธุ์ รวมถึงภาวะแอนูพลอยดีที่แพร่หลาย. BMC genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Bombesin และปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด (PDGF) กระตุ้นการรวมตัวของเอนโดเจน ฟอคัล แอดเฮชัน คินาส (FAK) กับ Src ในเซลล์ Swiss 3T3 ที่ยังไม่ถูกทำลาย The Journal of biological chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) การกระตุ้นกิจกรรมของนิวเคลียร์ฟอสโฟลิเปส C-beta1 ที่ขึ้นอยู่กับอินซูลิน-ไลค์ โกรท แฟคเตอร์-I ในเซลล์ Swiss 3T3 จำเป็นต้องมีไซโตสเกเลตันที่สมบูรณ์ และเกิดขึ้นพร้อมกับการเพิ่มระดับการฟอสโฟรีเลชันของฟอสโฟลิเปสดังกล่าว Journal of cellular biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) ความสัมพันธ์ระหว่างไอโซไทป์ของโปรตีนไคเนสซีแบบไม่ปกติกับโปรตีนด็อกเกอร์ FRS2 ในกระบวนการส่งสัญญาณของปัจจัยการเจริญเติบโตของไฟโบรบลาสต์. The Journal of biological chemistry. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) การสื่อกลางการพินโอไซโทซิสในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบและเซลล์เยื่อบุหลอดเลือดแดงที่เพาะเลี้ยง โดยปัจจัยการเจริญเติบโตที่มาจากเกล็ดเลือด. The Journal of cell biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) เอนไซม์ p110alpha PI 3-kinase ที่ไม่พึ่งพายูนิตย่อย p85 อยู่ร่วมกับ p70 S6 kinase บนเส้นใยแอคตินที่เกิดจากความเครียด และควบคุมการก่อตัวของเส้นใยแอคตินที่เกิดจากความเครียดซึ่งถูกกระตุ้นโดยทรอมบินในเซลล์ Swiss 3T3. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) ฟอสฟาทิดิลอิโนซิทอล 3-ไคเนส เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการดูดซึมกรดอะมิโนที่ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการเจริญเติบโตในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือด Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) การกระตุ้นโปรตีนไคเนส D ที่ขึ้นอยู่กับการฟอสโฟรีเลชัน [บทวิจารณ์]. Electrophoresis. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) GTPase ขนาดเล็ก RalA มุ่งเป้าไปที่ filamin เพื่อกระตุ้นการเกิด filopodia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) Syndecan-2 กระตุ้นการเกิด filopodia โดย cdc42Hs ที่ทำงานอยู่. Experimental cell research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) การกระตุ้นที่แตกต่างกันของโฟกัส แอดเฮชัน คินาส์ (Focal Adhesion Kinase), Rho และ Rac โดยโดเมน FIII ที่ 9 และ 10 ของไฟโบรเนคติน. วารสารวิทยาศาสตร์เซลล์ (Journal of Cell Science). PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) การกำหนดตำแหน่งของบริเวณที่ระบุ PAK1, WASP และ IQGAP1 ของ Cdc42. The Journal of biological chemistry. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) การฟอสโฟรีเลชันของ WAVE ในขั้นตอนถัดไปของสัญญาณจาก mitogen-activated protein kinase. The Journal of biological chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) การยึดติดของเซลล์ที่ผ่านทางอินเทกริน: ความเชื่อมโยงกับโครงกระดูกเซลล์ [บทวิจารณ์]. Biochemical Society symposium. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) ตัวยับยั้งไซคลิน-ดีเพนเดนท์ คินาส p27Kip1 ถูกจัดวางอยู่ในไซโทซอลของเซลล์ Swiss/3T3. Oncogene. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) กระแสไฟฟ้าแรงต่ำเพิ่มการหลั่งของเวสิเคิลนอกเซลล์จากเซลล์ที่เพาะเลี้ยง. Biochemistry and biophysics reports. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) ประสิทธิภาพของเรสเวอราทรอลในกระบวนการสมานแผล โดยการลดความเครียดออกซิเดทีฟ และส่งเสริมการเพิ่มจำนวนและการเคลื่อนที่ของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ Dermatologic therapy. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) จลนศาสตร์การซ่อมแซม DNA ที่เฉพาะตัวสารในเซลล์ 3T3: การศึกษาเปรียบเทียบโดยใช้การทดสอบคอมเมตในหลอดทดลอง. Toxicology research. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) สารสกัดกลีโคลิกจากดอกคาเลนดูลาช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการสมานแผลของไฮโดรเจลอัลจิเนต Acta cirurgica brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) พื้นฐานสำหรับการพัฒนาศักยภาพมะเร็งของเซลล์หนูที่เพาะเลี้ยงในหลอดทดลอง. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) หลักฐานเกี่ยวกับธรรมชาติที่ก้าวหน้าและปรับตัวได้ของการเปลี่ยนแปลงแบบสุ่มในสายเซลล์ NIH 3T3. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) การปรับตัวและการคัดเลือกเป็นปัจจัยในการเปลี่ยนแปลงแบบสุ่มของเซลล์ NIH-3T3. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. ข้อมูล Cellosaurus 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Swiss Institute of Bioinformatics. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Cellosaurus FAQ, Q21: ทำไมใน Cellosaurus จึงมีรายการต่างกันสำหรับสายเซลล์ 3T3? cellosaurus.org/faq