Įvadas

Šis 3T3-Šveicarijos albinų ląstelės Ši ląstelių linija — taip pat žinoma pagal sinonimus „Swiss 3T3“, „Swiss-3T3“, „3T3 Swiss Albino“ ir „Swiss3T3“ — yra viena iš ilgiausiai naudojamų ir plačiausiai taikomų ląstelių linijų biomedicininiuose tyrimuose. Šią liniją 1962 m. iš išsklaidytų „Swiss Albino“ pelių embrionų sukūrė George Todaro ir Howard Green, o 1963 m. straipsnyje aprašė, kad ji atsirado taikant serijinio perkėlimo protokolą, pagal kurį beveik visos embrionų kultūros galiausiai davė pradžią įsitvirtinusioms, savaime nemirtingoms linijoms [1]. Per ateinančius šešis dešimtmečius 3T3-Swiss albino ląstelės tapo nepakeičiamu modeliu, skirtu ląstelių ciklo reguliavimo, augimo faktorių signalizacijos, citoskeleto dinamikos ir žaizdų gijimo biologijos tyrimams. Dėl aiškiai apibrėžto kontaktinio slopinimo elgesio, jautrumo mitogenams, pavyzdžiui, trombocitų kilmės augimo faktoriui ir bradikininui, bei genetinio modifikavimo galimybių jos tapo pagrindiniu etaloniniu modeliu daugybėje signalinių kelių tyrimų ir vaistų atrankos bandymų.

Svarbiausi dalykai

• 3T3-Swiss albino – tai savaime nemirtinga pelių embrioninių fibroblastų linija, kurią 1962 m. sukūrė Todaro ir Green (Cellosaurus registracijos numeris CVCL_0120, patinas donoras, visas embrionas) [25].
• Ši linija pasižymi augimo slopinimu dėl sąlyčio, todėl ji yra puikus modelis, leidžiantis tirti perėjimą iš ramybės būsenos į proliferaciją — nors šio fenotipo intensyvumas priklauso nuo kultivavimo sąlygų, o ne yra fiksuota šios linijos savybė [22] [23].
• Jis labai jautriai reaguoja į įvairius mitogenus, įskaitant trombocitų kilmės augimo faktorių, bombesiną, bradikininą ir insulino tipo augimo faktorių I.
• 3T3-Swiss albinosų ląstelės atliko svarbų vaidmenį tiriant citoskeleto struktūrą, Rho šeimos GTPazių signalizavimą ir fokalinės adhezijos dinamiką.
• Iš šios linijos išsivystė didelė išvestinių sublinijų šeima — įskaitant 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 ir maitinančiojo sluoksnio subliniją 3T3-J2 — naudojamų adipogenezės, onkologijos ir bendros kultūros tyrimams [25].
• Tarp laboratorijų patvirtintas daugialypis STR tyrimas (19 pelių žymeklių ir du žmogaus žymekliai, skirti tarprūšiniam atrankiniam tyrimui; 18 iš 19 pelių žymeklių pasirodė tinkami rūšies vidaus atskyrimui) dabar leidžia patikimai identifikuoti pelių ląstelių linijas, įskaitant 3T3-Swiss albino [2].

Kas yra 3T3-Swiss albino?

3T3-Swiss albino ląstelės buvo išgautos iš vyriškos Šveicarijos albino pelės viso embriono audinio embrioninėje stadijoje; donoras neturėjo jokių su liga susijusių sutrikimų [25]. Pavadinimas „3T3“ reiškia pradinį perkelimo protokolą: ląstelės buvo perkeliamos kas tris dienas, naudojant 3 × 10⁵ ląstelių skaičius 20 cm plote² indas. Todaro ir Green parodė, kad pelės embrionų kultūrų augimo tempas mažėjo po kiekvieno perkėlimo – mažėjimo tempas iš dalies priklausė nuo inokuliacijos tankio – kol beveik visos kultūros per tris mėnesius išsivystė į nusistovėjusias linijas, ir kad naudojamos kultivavimo sąlygos lėmė, kokias savybes įgijo susidariusi linija; 3T3 režimas davė liniją, kuri yra ypač jautri kontaktiniam slopinimui [1]. Gauta ląstelių linija pasižymi fibroblastine morfologija, auga kaip prisitvirtinęs monosluoksnis ir, pasiekus konfluenciją, patiria proliferacijos slopinimą dėl sąlyčio – šis bruožas ją išskiria iš transformuotų linijų ir daro ją idealiu modeliu, skirtu tirti perėjimus iš ramybės būsenos į proliferaciją.

3T3-Swiss albino buvo viena iš pelių linijų, įtrauktų į didelio masto SNP mikromatricos tyrimą, kurio tikslas buvo patikrinti nurodytą veislių genetinį foną ir nustatyti chromosomų kopijų skaičiaus pokyčius, kurių neįmanoma nustatyti naudojant STR profiliavimą; iš 99 ištirtų linijų 98 atitiko joms nurodytą genetinį foną [3] [25]. Siekiant išspręsti autentiškumo patvirtinimo klausimus kasdieninėje praktikoje, dvylika laboratorijų sudarantis tarplaboratorinis konsorciumas patvirtino daugialypį STR profiliavimo tyrimą, skirtą pelių ląstelių linijų identifikavimui tos pačios rūšies ribose, remiantis 50 dažniausiai naudojamų pelių linijų; gauti profiliai bus paskelbti NCBI „BioSample“ duomenų bazėje; „Cellosaurus“ duomenų bazėje dabar nurodytas 3T3-Swiss albino STR profilis yra gautas būtent iš to tyrimo [2] [25]. Šie pasiekimai žymiai pagerino šia plačiai paplitusia linija atliekamų tyrimų pakartojamumą.

Informacija apie ląstelių kultūrą

3T3-Swiss albinosų ląstelių privalumai

Vienas iš įspūdingiausių 3T3-Swiss albinosų ląstelių privalumų yra jų gerai apibūdinta reakcija į augimo faktorių stimuliaciją po serumo pašalinimo. Ląstelių perėjimas į ramybės būseną dėl serumo trūkumo ir vėlesnis pakartotinis stimuliavimas apibrėžtais mitogenais leidžia mokslininkams tirti atskirus signalizacijos procesus su didele laiko skiriamąja geba. Ši eksperimentinė paradigma buvo panaudota tyrinėjant reakcijas į trombocitų kilmės augimo faktorių, bombesiną, bradikininą, insulino tipo augimo faktorių-I ir bazinį fibroblastų augimo faktorių – taip apimant neįprastai platų receptorių klasių ir pasroviui einančių signalinių kelių spektrą vienoje nuoseklioje ląstelių aplinkoje. [4] [5] [6].

Antrasis svarbus privalumas yra šios linijos kontaktinio slopinimo fenotipas. Skirtingai nuo daugelio transformuotų vėžio ląstelių linijų, 3T3-Swiss albinų ląstelės, pasiekusios konfluenciją, sustabdo augimą, o ne toliau auga. Dėl to jos yra puikus etaloninis modelis žaizdų gijimo „įbrėžimo“ tyrimams, kuriuose apibrėžtomis sąlygomis galima kiekybiškai įvertinti ląstelių migraciją į nuogą zoną. Tačiau svarbiausia yra tai, kad šis fenotipas priklauso nuo to, kaip ląstelės yra auginamos, o ne yra fiksuota šios linijos savybė. Aaronson ir Todaro parodė, kad pelių embrionų linijos, išlaikomos sąlygomis, kuriose ląstelių tarpusavio kontaktas yra minimalus, išliko netumorogeninės daugiau nei 200 kartų, tuo tarpu linijos, auginamos esant intensyviam ląstelių kontaktui, tapo navikų formuojančios per 30 kartų — ir kad kultūrinė savybė, kuri labiausiai koreliuoja su navikų formavimosi gebėjimu, buvo būtent ląstelių dalijimosi slopinimo dėl kontakto praradimas [22]. Vėlesni tyrimai nustatė konkrečius veikiančius veiksnius: spontaniškai transformuoti židiniai atsiranda 3T3 tipo kultūrose, kurios buvo laikomos konfluencijos būsenoje ilgiau nei dešimt dienų, o jų dažnumas priklauso nuo naudojamo serumo tipo ir koncentracijos, taip pat nuo kultūros pasėlių skaičiaus istorijos [23]. Šis poveikis gali būti stebėtinai greitas — klonas, kuris per 21 savaitę penkiasdešimtyje iš eilės atliktų tyrimų nesukūrė jokių židinių, pradėjo juos formuoti jau po dviejų dienų terpėje su mažu serumo kiekiu [24]. Šie eksperimentai buvo atlikti su BALB/c ir NIH kilmės 3T3 linijomis, o ne su pačia 3T3-Swiss albino linija, tačiau juose aprašoma 3T3 tipo fibroblastų linijoms būdinga priklausomybė nuo auginimo sąlygų, o tai turi konkrečią praktinę reikšmę: laboratorijos, kurios konkrečiai remiasi kontaktiniu slopinimu, turėtų dirbti su mažu ir dokumentuotu pasėlių skaičiumi, laikydamosi nustatytų serumo sąlygų, vengti laikyti kultūras konfluencijos būsenoje ilgiau, nei to reikalauja tyrimas, ir pačios patikrinti fenotipą.

Šios ląstelių linijos fibroblastinė kilmė taip pat tiesiogiai susijusi su ekstraląstelinio matrikso pertvarkymo, integrinų signalizacijos ir odos atsinaujinimo tyrimais – tai suteikia fiziologinį kontekstą, kurio negali pasiūlyti grynai epitelinės ar vėžinės ląstelių linijos. Be to, išsamus iš 3T3-Swiss albino linijos sukurtų išvestinių sublinijų sąrašas praplečia eksperimentinių priemonių rinkinį, kuriuo gali naudotis mokslininkai, dirbantys adipogenezės, onkologijos ir kamieninių ląstelių bendros kultūros srityse [25].

3T3-Swiss albino ląstelių apribojimai

Nepaisant jų naudingumo, 3T3-Swiss albino ląstelės turi būdingų apribojimų, kylančių iš jų pelinių kilmės ir savaiminio nemirtingumo. Kariotipinė dreifo tendencija buvo užfiksuota jau pirminiame tyrime, kuriame populiacijos – dažnai labai greitai – perėjo iš diploidinio į tetraploidinį diapazoną dar prieš atsirandant žymėjimo chromosomoms [1]. Šis nestabilumas nėra būdingas tik šiai ląstelių linijai: atlikus 99 dažniausiai naudojamų pelių ląstelių linijų SNP mikromatricos profiliavimą, 42 % jų buvo nustatyti kopijų skaičiaus pokyčiai, įskaitant 24 % linijų, gautų iš normalių, o ne iš navikinių audinių, todėl aneuploidija laikoma plačiai paplitusia pelių ląstelių kultūrų savybe, o ne specifine vėžiui [3]. Toks genominis nestabilumas reiškia, kad rezultatai, gauti po daugelio pasėlių, gali netiksliai atspindėti ankstyvųjų pasėlių ląstelių savybes, o laboratorijų tarpusavio palyginimus gali iškreipti nepastebėta genomo dreifo tendencija. Todėl mokslininkai turėtų patvirtinti savo ląstelių atsargas naudodami patvirtintus STR metodus ir tvarkyti nuoseklius pasėlių įrašus [2].

Su tuo susijęs trūkumas – tai tai, kad mokslo bendruomenėje anksčiau dažnai pasitaikydavo neteisingai identifikuotų arba kryžminio užteršimo paveiktų ląstelių atsargų, o ši problema plačiai užfiksuota pelių ląstelių linijų atveju [3]. Viena konkreti ir dažnai nepastebima klaida susijusi su nomenklatūra: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, paskelbta 1963 m.) ir NIH 3T3 (CVCL_0594, išvestos iš NIH Swiss pelės ir paskelbtos 1969 m.) literatūroje dažnai sutrumpinamos iki „3T3“ arba „Swiss 3T3“. Jei straipsnyje nenurodytas kolekcijos, iš kurios paimtos ląstelės, katalogo numeris, šių dviejų linijų dažnai visiškai neįmanoma atskirti, jei nesikreipiama tiesiogiai į autorius [26]. Ši dviprasmybė apima didžiąją dalį toliau apibendrinamos klasikinės signalizacijos literatūros: straipsniuose, kuriuose aprašomi tyrimai su „Swiss 3T3“, retai nurodoma, apie kurią liniją kalbama, todėl gautus rezultatus reikėtų vertinti kaip taikomus 3T3 tipo pelių fibroblastams, nebent šaltinyje linija būtų aiškiai nurodyta. Kadangi „3T3-Swiss albino“ nėra kloninis izoliatas, o polikloninė populiacija, funkcinis skirtingų šaltinių atsargų heterogeniškumas taip pat gali daryti papildomą įtaką eksperimentų rezultatams. Galiausiai, kaip pelių fibroblastų linija, „3T3-Swiss albino“ be kruopštaus patvirtinimo gali neatspindėti signalizacijos niuansų, svarbių žmogaus biologijai, todėl prieš darant transliacines išvadas šio modelio rezultatai turėtų būti patvirtinti rūšiai tinkamose pirminėse ląstelėse arba in vivo sistemose.

Peržiūrėti visas specifikacijas ir užsisakyti

Taikymo sritys

Augimo faktorių signalizacija ir ląstelių proliferacija

3T3-Swiss albinosų ląstelės tapo puikiu modeliu, leidžiančiu išnagrinėti mitogenines signalų kaskadas, kurias sukelia įvairūs augimo faktoriai ir neuropeptidai. Ankstyvosiose Davieso ir Rosso studijose Swiss 3T3 ląstelės buvo naudojamos kartu su beždžionių aortos lygiųjų raumenų ląstelėmis ir galvijų aortos endotelio ląstelėmis, siekiant parodyti, kad plazmos kilmės serumo pakeitimas visos kraujo serumu arba iš dalies išgrynintu trombocitų kilmės augimo faktoriumi žymiai stimuliuoja pinocitozę bei proliferaciją ramybės būsenos kultūrose — tai buvo ankstyvas ryšys tarp augimo faktorių sukelto membranų transportavimo ir įėjimo į ląstelių ciklą, nustatytas daugiausia lygiųjų raumenų ląstelių sistemoje [7]. Vėlesniuose tyrimuose buvo pasinaudota serumo pašalinimo ir pakartotinės stimuliacijos paradigma, siekiant priskirti atskiras signalines molekules prie tvarkingų signalinių kelių, esančių žemyn nuo receptorių aktyvacijos.

Fosfatidilinozitolo 3-kinazė (PI3K) tapo pagrindiniu mazgu augimo faktorių stimuliuojamose reakcijose. Johansonas ir kolegos parodė, kad p85 subvieneto nepriklausomas p110α PI3K rezervas kolokalizuojasi su p70 S6 kinaze ant aktino streso skaidulų ir kad PI3K aktyvumas yra būtinas trombino indukuotam streso skaidulų formavimuisi „Swiss 3T3“ ląstelėse [8]. Panašų PI3K vaidmenį maistinių medžiagų įsisavinime aprašė Higaki ir Shimokado, kurie parodė, kad PI3K inhibitoriai sustabdė trombocitų augimo faktoriaus stimuliuojamą aminorūgščių įsisavinimą kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėse, ir pranešė apie panašų inhibitorių poveikį „Swiss 3T3“ ląstelėse [9].

Baltyminė kinazė D (PKD) nepažeistose „Swiss 3T3“ ląstelėse aktyvuojama forbolio esteriais, ląstelių membraną prasiskverbiančiais diacilgliceroliais, briostatinu, neuropeptidais ir augimo faktoriais per fosforilinimui priklausomą mechanizmą, kuriam reikalinga baltyminė kinazė C. Kaip apžvelgė Waldron, Iglesias ir Rozengurt, aktyvacijos kilpos likučių serino 744 ir serino 748 mutagenezė PKD konstruktuose, ekspresuojamuose COS-7 ląstelėse, tiesiogiai parodė, kad PKC tarpininkaujamas šių dviejų likučių fosforilinimas yra PKD aktyvacijos pagrindas [10]. Tuo pačiu metu Lim ir kolegos įrodė, kad netipinės PKC izoformos PKCλ ir PKCζ sąveikauja su „docker“ baltymu FRS2 „Swiss 3T3“ ląstelėse, stimuliuotose baziniu fibroblastų augimo faktoriumi, taip įtraukdamos netipines PKC į fibroblastų augimo faktoriaus receptoriaus signalizacijos kompleksą [6].

Citoskeleto dinamika ir Rho šeimos GTPazių signalizacija

3T3-Swiss albinų ląstelių citoskeleto reaktyvumas į apibrėžtus dirgiklius padarė jas pagrindiniu Rho šeimos GTPazės tyrimų modeliu. Ohta ir kolegos įrodė, kad su Ras susijusi maža GTPazė RalA jungiasi prie filamino GTP-specifiniu būdu ir indukuoja aktino turtingų filopodijų susidarymą ant „Swiss 3T3“ ląstelių paviršių, įtraukdama filaminą į filopodijų cito-skeletą [11]. Svarbiausia, dominuojančiai neigiamas RalA arba filamino RalA-siejimosi domenas blokavo Cdc42 indukuotą filopodijų susidarymą, o tai reiškia, kad RalA yra pasroviui esantis tarpinis elementas Cdc42 mediuojamoje citoskeleto reorganizacijoje. Panašiai Granés ir kolegos transfekcijos tyrimuose su COS-1 ir „Swiss 3T3“ ląstelėmis parodė, kad transmembraninio heparano sulfato proteoglikano sindekano-2 perprodukcija indukavo ilgas filopodijoms panašias struktūras per mechanizmą, priklausantį nuo aktyviojo Cdc42 [12].

Buvo įrodyta, kad tiek bombesinas, tiek trombocitų kilmės augimo faktorius skatina fokalinės adhezijos kinazės (FAK) ir Src šeimos narių sąveiką „Swiss 3T3“ ląstelėse, tačiau skirtingais būdais. Bombesino reakcija buvo aptinkama jau po vienos minutės nuo stimuliacijos, pasiekė maksimumą po dešimties minučių ir vyko nepriklausomai nuo ^Ca2+ ir fosfatidilinozitolo 3'-kinazės, tuo tarpu reakcija į mažas trombocitų kilmės augimo faktoriaus koncentracijas reikalavo PI3K; abi reakcijos priklausė nuo aktino filamentų tinklo vientisumo [4]. Hotchin ir kolegos, naudodami „Swiss 3T3“ ląsteles kartu su BHK fibroblastais, išnagrinėjo devintojo ir dešimtojo fibronektino III tipo (FIII) domenų skirtingą indėlį į FAK fosforilinimą ir Rho/Rac aktyvaciją, įrodydami, kad FIII10 palaiko ląstelių prisijungimą nesukeldamas FAK fosforilinimo [13]. Li ir kolegos biochemiškai nustatė Cdc42 regionus, specifikuojančius PAK1, WASP ir IQGAP1, o vėliau mikroinjektavo konstituciniu būdu aktyvius Cdc42/RhoA chimeras į serumo badą patyrusias „Swiss 3T3“ ląsteles, atskleisdami, kad „switch I“ domenas suteikia esminius veiksnius efektorių prisijungimui, o kiekvienas efektorius atpažįstamas per savitą mechanizmą [14].

Nustatyta, kad WAVE – WASP šeimos baltymo, tarpininkaujančio membranos raukšlėjimui pasroviui nuo Rac – fosforilinimo lygis padidėja „Swiss 3T3“ ląstelėse, stimuliuotose trombocitų kilmės augimo faktoriumi, o šią hiperfosforilinimą slopino MEK inhibitorius PD98059 [15]. Martelli ir kolegos įrodė, kad insulino tipo augimo faktoriaus-I (IGF-I) priklausoma branduolinės fosfolipazės C-β1 aktyvumo stimuliacija reikalauja nepažeisto mikrotubulių citoскеleto, nes jo sutrikdymas kolchicinu panaikino diacilglicerolio kiekio padidėjimą branduolyje, nepaveikdamas IGF-I receptoriaus fosforilinimo ar PI3K aktyvumo [5]. Critchley ir kolegos apžvelgė integrino ir aktino sąsają, kurioje dalyvauja talinas, α-aktininas, filaminas ir vinkulinas, ir pranešė, kad eksperimentai su streptolizinu-O permeabilizuotomis „Swiss 3T3“ ląstelėmis rodo, jog GTP-surišantis baltymas ARF-1 dalyvauja nukreipiant paksiliną į fokalinę adheziją [16].

Ląstelių ciklo reguliavimas

Dėl augimo slopinimo sąlyčio metu 3T3-Swiss albinų ląstelės tapo klasikinis ląstelių ciklo tyrimų modelis. Wangas ir kolegos padarė netikėtą pastebėjimą, kad subląstelinio frakcionavimo eksperimentuose ciklinu priklausomas kinazės inhibitorius p27K^ip1 buvo aptiktas išskirtinai „Swiss/3T3“ ląstelių citosole per visą G1 fazę ir ankstyvąją S fazę, o ne branduolyje, kaip buvo manoma [17]. Po ramybės būsenoje esančių ląstelių stimuliacijos serumu ^{p27Kip1 kiekis} citosole žymiai sumažėjo vėlyvojoje G1 fazėje, o tai laiko atžvilgiu sutapo su Cdk2 ir ciklino E koncentracijos padidėjimu branduolyje.

Ramybės būsenos „Swiss 3T3“ ląstelių sistema leido autoriams įrodyti, kad neaktyvus Cdk2 ramybės būsenos ląstelėse nusėda kartu su p27Kip1, o serumo stimuliacija aktyvuoja tiek branduolio, tiek citosolio Cdk2, kai p27Kip1 kiekis mažėja; perteklinis p27^Kip1 kaupėsi branduolyje ir blokavo Cdk2 patekimą į jį [17]. Remdamiesi šiais duomenimis, autoriai pasiūlė hipotezę, kad citosolinis p27K^ip1 atlieka funkcinį vaidmenį ląstelių ciklo eigai, galbūt ribodamas ciklinų E-Cdk2 kompleksų importą į branduolį – tai kompartmentalizacijos modelis, veikiantis kartu su p27Kip1 kiekio kontrole, kurią lemia transliacija ir proteasomų veikla. Gebėjimas pakartotinai sinchronizuoti 3T3-Swiss albinų ląsteles, jas laikant be serumo, išlieka esminis šių rezultatų eksperimentinio patikimumo veiksnys.

Žaizdų gijimas ir biomedžiagų tyrimai

Dėl fibroblastinio pobūdžio ir kontaktiniu būdu slopinamo augimo 3T3-Swiss albino ląstelės yra standartinis etaloninis modelis žaizdų gijimo tyrimuose ir biomedžiagų biokompatibilumo vertinime. Ypač informatyviame tyrime buvo tiriamas resveratrolo (RES) veiksmingumas žaizdų gijimo procese, naudojant 3T3 Swiss Albino fibroblastus kaip pirminį ląstelių modelį [19]. Oksidacinis stresas buvo sukeltas vandenilio peroksidu, o RES dozės, svyruojančios nuo 1 iki 100 µM, buvo taikomos iki 48 valandų, siekiant įvertinti poveikį ląstelių proliferacijai, migracijai ir oksidacinio streso lygiams – pagrindiniams žaizdos užgijimo efektyvumo veiksniams.

Tame tyrime vandenilio peroksidas sumažino proliferacijos indeksą, o resveratrolo taikymas jį padidino, sumažino oksidacinio streso lygį ir pagerino migracijos greitį bei ultrastruktūrinį išsaugojimą; svarbu pažymėti, kad kolageno-I (COL1A2) mRNR ekspresijos skirtumų nebuvo nustatyta, o tai rodo, kad stebėtas teigiamas poveikis nebuvo susijęs su padidėjusia kolageno transkripcija [19]. 3T3-Swiss albinų ląstelių naudojimas šiame kontekste rodo, kad jos pripažįstamos kaip tipinė normalių fibroblastų linija, su kuria galima lyginti žaizdų gijimo intervencijas. Palyginamas citokompatibilumo tyrimas yra žaizdų tvarsčių kūrimo pagrindas: pavyzdžiui, kalendulos glikolio ekstraktą turintis alginato hidrogelis pavyzdžiui, pirmiausia buvo įvertintas ląstelių gyvybingumas 3T3 fibroblastuose taikant MTT ir SRB tyrimus, prieš jį išbandant žiurkių pjūvio žaizdos modelyje, kur jis pagerino žaizdos užsidarymą ir kolageno nusėdimą [21].

Ši linija taip pat naudojama kaip etaloninis substratas genotoksiškumo tyrimuose. Lyginamasis „kometos“ testas, atliktas būtent su 3T3-Swiss albinosų linija, leido įvertinti laiko priklausomą DNR remonto kinetiką po sąlyčio su šešiais dažniausiai naudojamais genotoksiškais agentais — vandenilio peroksidu, kalio bromatu, etilmetansulfonatu, metilmetansulfonatu, N-etil-N-nitrozourea ir etopozido – ir nustatyti kiekvienai medžiagai būdingi atstatymo profiliai: vandenilio peroksido ir EMS sukeltos žalos buvo greitai atstatytos, o ENU ir etopozido sukeltos pažeidimų liekanos išliko ilgiau nei 24 valandas [20]. Tokio pobūdžio tyrimai suteikia atskaitos duomenis, reikalingus in vitro kometų testo standartizavimui ir patvirtinimui reguliavimo tikslais atliekamiems genotoksiškumo tyrimams.

Ląstelių išorės vezikulai ir naujos technologijos

3T3-Swiss albino ląstelės atlieka svarbų vaidmenį kaip normalių ląstelių etalonas ekstraląstelinės vezikulos (EV) biologijos tyrimuose. Fukuta ir kolegos naudojo pelių melanomos ląsteles B16F1 kartu su 3T3 Swiss Albino ląstelėmis kaip atitinkamai tipines vėžio ir normalių ląstelių linijas, siekdami ištirti, ar silpna elektrinė stimuliacija (0,34 mA/cm) gali sustiprinti EV sekreciją iš kultivuojamų ląstelių [18]. Šis porinis eksperimentinis modelis buvo būtinas, norint atskirti bendrąsias ląstelių reakcijas į elektrinę stimuliaciją nuo vėžio ląstelėms būdingų poveikių EV išsiskyrimui. Elektrinis poveikis padidino EV dalelių skaičių abiejose linijose — 1,7 karto 3T3 „Swiss Albino“ ir 1,26 karto B16F1 — be akivaizdaus citotoksiškumo [18].

Šis porinis tyrimo planas taip pat atskleidė mechanistinį skirtumą tarp šių dviejų ląstelių tipų: farmakologinis Rho GTPazės slopinimas dozės priklausomu būdu slopino elektros sukeltą EV sekrecijos padidėjimą melanomos ląstelių linijoje, tačiau turėjo mažai įtakos 3T3 Swiss Albino ląstelėms, o tai rodo, kad pagrindiniai signalizacijos reikalavimai vėžinėse ir normaliose ląstelėse nėra identiški [18]. Tipiniai eksosomų žymekliai CD9, HSP70 ir CD81 buvo aptikti abiejų linijų EV ir iš esmės nepakito po gydymo (HSP70 lygis 3T3 kilmės EV buvo nuosekliai žemas), o tai — kartu su nepakitusiu dalelių ir baltymų santykiu — rodo, kad gydymas padidino EV kiekį nepakeisdamas jų kokybės. Kadangi EV tyrimai plečiasi į terapinių preparatų pristatymo, biomarkerių atradimo ir ląstelių komunikacijos sritis, gerai patvirtintos, iš naviko nekilusios fibroblastų linijos, tokios kaip „3T3-Swiss Albino“, prieinamumas tampa vis vertingesnis siekiant kontekstualizuoti vėžio ar modifikuotų ląstelių modelių rezultatus.

Išvada

3T3-Swiss albino ląstelės yra viena iš universaliausių ir istoriškai reikšmingiausių pelių fibroblastų linijų, prieinamų mokslo bendruomenei. Nuo pagrindinių tyrimų apie trombocitų augimo faktoriaus mediatorių pinocitozę ir proliferaciją iki dabartinių tyrimų apie ekstraląstelinės vezikulos sekreciją, sustiprintą silpna elektros srove [18], ši savaime nemirtinga linija nuolat įrodė savo aktualumą įvairiose mokslo srityse. Jos aiškiai apibrėžtas perėjimas iš ramybės į proliferacijos būseną, platus jautrumas mitogenams, citoskeleto plastiškumas ir pripažinimas kaip normalių ląstelių etalono žaizdų gijimo ir biomedžiagų tyrimams užtikrina, kad 3T3-Swiss albino ląstelės ir toliau liks esminės ląstelių biologijoje ateinančiais metais — su sąlyga, kad atsargos yra autentiškos ir patvirtintos STR profiliavimu, kad pasėlių istorija yra dokumentuota, o kultivavimo režimas yra pasirinktas sąmoningai tais atvejais, kai eksperimentui svarbus kontaktinio slopinimo fenotipas. Mokslininkai, ieškantys patikimo, autentiško 3T3-Swiss albino ląstelių šaltinio savo būsimiems signalizacijos, citoskeleto ar žaizdų gijimo tyrimams, raginami susipažinti su produkto specifikacijomis ir pateikti užsakymą svetainėje cytion.com.

Pagrindiniai leidiniai

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Pelės embrionų ląstelių augimo kultūroje ir jų vystymosi į nusistovėjusias linijas kiekybiniai tyrimai. „The Journal of cell biology“. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Tarp Laboratorijų tyrimas, skirtas patvirtinti STR profiliavimo metodą pelių ląstelių linijų identifikavimui tos pačios rūšies ribose. „PLoS One“. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Pelės ląstelių linijų SNP mikromatricos profiliavimas leidžia nustatyti jų kilmės kamienus ir atskleidžia kryžminį užteršimą bei plačiai paplitusią aneuploidiją. „BMC Genomics“. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Bombesinas ir trombocitų kilmės augimo faktorius skatina endogeninės fokalinės adhezijos kinazės sąveiką su Src nepažeistose „Swiss 3T3“ ląstelėse. „The Journal of biological chemistry“. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) Insulino tipo augimo faktoriui I priklausoma branduolinės fosfolipazės C-beta1 aktyvumo stimuliacija „Swiss 3T3“ ląstelėse reikalauja nepažeisto citoскеleto ir yra susijusi su padidėjusiu fosfolipazės fosforilinimu. „Journal of cellular biochemistry“. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Netipinių proteinkinazės C izotipų sąsaja su „docker“ baltymu FRS2 fibroblastų augimo faktoriaus signalizacijos procese. Biologinės chemijos žurnalas. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Trombocitų kilmės augimo faktoriaus tarpininkavimas pinocitozėje kultivuotose arterijų lygiųjų raumenų ir endotelio ląstelėse. „Ląstelių biologijos žurnalas“. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) Nuo p85 subvieneto nepriklausoma p110alfa PI 3-kinazė kolokalizuojasi su p70 S6 kinaze ant aktino streso skaidulų ir reguliuoja trombino stimuliuotą streso skaidulų formavimąsi „Swiss 3T3“ ląstelėse. „Experimental Cell Research“. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) Fosfatidilinozitolo 3-kinazė yra būtina augimo faktorių indukuotam aminorūgščių įsisavinimui kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėse. Arteriosklerozė, trombozė ir kraujagyslių biologija. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) Nuo fosforilinimo priklausoma baltymų kinazės D aktyvacija [Apžvalga]. „Electrophoresis“. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) Mažoji GTPazė RalA veikia filaminą, kad indukuotų filopodijų susidarymą. Jungtinių Amerikos Valstijų Nacionalinės mokslų akademijos leidinys. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) „Syndecan-2“ indukuoja filopodijas per aktyvų „cdc42Hs“. „Experimental cell research“. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Fokalinės adhezijos kinazės, Rho ir Rac diferencinė aktyvacija, kurią sukelia devintas ir dešimtasis fibronektino FIII domenai. „Journal of cell science“. PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) Cdc42 baltymo PAK1, WASP ir IQGAP1 specifikuojančių sričių lokalizacija. Biologinės chemijos žurnalas. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) WAVE fosforilinimas mitogeno aktyvuotos proteinkinazės signalizacijos pasroviui. Biologinės chemijos žurnalas. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Integrinų tarpininkaujama ląstelių adhezija: ryšys su cito skeletu [Apžvalga]. Biocheminės draugijos simpoziumas. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) Ciklinu priklausomo kinazės inhibitorius p27Kip1 Swiss/3T3 ląstelėse lokalizuojasi citosole. „Oncogene“. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) Žemo lygio elektros srovė padidina ekstraląstelinės vezikulių sekreciją iš kultivuotų ląstelių. „Biochemistry and biophysics reports“. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) Resveratrolo veiksmingumas žaizdų gijimo procese mažinant oksidacinį stresą ir skatinant fibroblastų ląstelių proliferaciją bei migraciją. Dermatologinė terapija. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Agentui būdinga DNR remonto kinetika 3T3 ląstelėse: lyginamasis tyrimas naudojant in vitro kometos testą. Toksikologijos tyrimai. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) Calendulos glikolio ekstraktas pagerina žaizdų gijimą naudojant alginato hidrogelį. „Acta cirurgica brasileira“. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Pagrindas, kuriuo remiantis in vitro kultivuotos pelių ląstelės įgyja piktybinį potencialą. „Science“. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Įrodymai, patvirtinantys NIH 3T3 ląstelių linijos spontaniškos transformacijos progresyvų ir adaptacinį pobūdį. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Adaptacija ir atranka kaip NIH-3T3 ląstelių spontaniškos transformacijos veiksniai. „Carcinogenesis“. PMID: 1423847
25. „Cellosaurus“ įrašas „3T3-Swiss albino“ (RRID:CVCL_0120). Šveicarijos bioinformatikos institutas (SIB). cellosaurus.org/CVCL_0120
26. „Cellosaurus“ DUK, klausimas Nr. 21: Kodėl „Cellosaurus“ duomenų bazėje yra skirtingi įrašai apie 3T3 ląstelių liniją? cellosaurus.org/faq