Inleiding

De 3T3-Zwitserse albino-cellen Deze celijn — ook bekend onder de synoniemen Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino en Swiss3T3 — is een van de meest duurzame en meest gebruikte cellijnen in het biomedisch onderzoek. De lijn werd in 1962 door George Todaro en Howard Green opgezet uit gedisaggregeerde Swiss-albino-muizenembryo’s en beschreven in hun artikel uit 1963. De lijn is ontstaan uit een protocol voor seriële overdracht, waarbij bijna alle embryokulturen uiteindelijk leidden tot gevestigde, spontaan onsterfelijk gemaakte lijnen [1]. In de daaropvolgende zes decennia groeiden 3T3-Swiss-albino-cellen uit tot een onmisbaar model voor onderzoek naar de regulering van de celcyclus, signaaloverdracht door groeifactoren, de dynamiek van het cytoskelet en de biologie van wondgenezing. Hun duidelijk gedefinieerde contactremmingsgedrag, hun reactievermogen op mitogenen zoals de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor en bradykinine, en hun genetische manipuleerbaarheid hebben deze cellen tot een hoeksteen en referentiemodel gemaakt in talloze onderzoeken naar signaalroutes en tests voor het screenen van geneesmiddelen.

Belangrijkste punten

• 3T3-Swiss albino is een spontaan onsterfelijk gemaakte lijn van embryonale fibroblasten van de muis, die in 1962 door Todaro en Green is opgezet (Cellosaurus-toegangsnummer CVCL_0120, mannelijke donor, volledig embryo) [25].
• De stam vertoont contactremming van de groei, waardoor deze een krachtig model vormt voor het bestuderen van de overgang tussen rusttoestand en proliferatie — hoewel de mate waarin dit fenotype tot uiting komt, afhankelijk is van de kweekomstandigheden en geen vaste eigenschap van de stam is [22] [23].
• Het reageert zeer sterk op diverse mitogenen, waaronder de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor, bombesine, bradykinine en insuline-achtige groeifactor-I.
• 3T3-Zwitserse albino-cellen hebben een cruciale rol gespeeld bij het ontrafelen van de organisatie van het cytoskelet, de signaaloverdracht via GTPasen van de Rho-familie en de dynamiek van focale adhesies.
• Deze lijn heeft geleid tot een grote familie van afgeleide sublijnen — waaronder 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 en de feederlaag-sublijn 3T3-J2 — die worden gebruikt bij adipogenese, oncologie en co-cultuurtoepassingen [25].
• Dankzij een tussen laboratoria gevalideerde multiplex-STR-test (19 muizenmarkers plus twee menselijke markers voor screening tussen soorten; 18 van de 19 muizenmarkers bleken geschikt voor onderscheid binnen de soort) is het nu mogelijk om muizencellijnen, waaronder 3T3-Swiss albino, betrouwbaar te authenticeren [2].

Wat is 3T3-Swiss albino?

3T3-Swiss albino is afgeleid van het weefsel van het gehele embryo van een mannelijke Swiss albino-muis in het embryonale stadium, waarbij de donor geen ziekte vertoonde [25]. De naam „3T3“ verwijst naar het oorspronkelijke overdrachtsprotocol: de cellen werden om de drie dagen gepasseerd met een inoculum van 3 × 10⁵ cellen per 20 cm² schaal. Todaro en Green toonden aan dat de groeisnelheid van muizenembryokweken afnam bij opeenvolgende overbrengingen — waarbij de mate van afname deels afhankelijk was van de inoculatiedichtheid — voordat bijna alle kweken zich binnen drie maanden tot gevestigde lijnen ontwikkelden, en dat de gebruikte kweekomstandigheden bepaalden welke eigenschappen de resulterende lijn verkreeg; het 3T3-regime leverde een lijn op die uiterst gevoelig is voor contactremming [1]. De resulterende celijn vertoont een fibroblastische morfologie, groeit als een aanhechtende monolaag en ondergaat bij confluentie contactremming van de proliferatie — een eigenschap die deze celijn onderscheidt van getransformeerde cellijnen en haar tot een ideaal model maakt voor het bestuderen van overgangen van rust naar proliferatie.

De 3T3-Swiss albino behoorde tot de muizenlijnen die deel uitmaakten van een grootschalig SNP-array-onderzoek dat was opgezet om de gerapporteerde stamachtergronden te verifiëren en om veranderingen in het aantal chromosomale kopieën op te sporen die met STR-profilering niet kunnen worden vastgesteld; van de 99 onderzochte lijnen kwamen er 98 overeen met de genetische achtergrond die voor hen was gerapporteerd [3] [25]. Om de bezorgdheid over authenticatie in de dagelijkse praktijk weg te nemen, heeft een interlaboratoriumconsortium bestaande uit twaalf laboratoria een multiplex STR-profileringsmethode gevalideerd voor de intraspecies-identificatie van muizencellijnen, op basis van 50 van de meest gebruikte muizenlijnen, waarbij de resulterende profielen zullen worden gepubliceerd in de NCBI BioSample-database; het STR-profiel dat nu voor 3T3-Swiss albino in Cellosaurus wordt vermeld, is afkomstig uit dat onderzoek [2] [25]. Deze vorderingen hebben de reproduceerbaarheid van onderzoek dat met deze wijdverspreide lijn wordt uitgevoerd, aanzienlijk verbeterd.

Informatie over celculturen

Voordelen van 3T3-Swiss-albino-cellen

Een van de meest opvallende sterke punten van 3T3-Swiss-albino-cellen is hun goed gekarakteriseerde reactie op stimulatie door groeifactoren na het weglaten van serum. Door de cellen in een rusttoestand te brengen door serumonttrekking en ze vervolgens opnieuw te stimuleren met gedefinieerde mitogenen, kunnen onderzoekers afzonderlijke signaalgebeurtenissen met een hoge temporele resolutie bestuderen. Dit experimentele paradigma is gebruikt om reacties op de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor, bombesine, bradykinine, insuline-achtige groeifactor-I en basische fibroblastgroeifactor te onderzoeken — waarmee een ongewoon breed spectrum aan receptorklassen en stroomafwaartse signaalwegen binnen één enkele, consistente cellulaire context wordt bestreken [4] [5] [6].

Een tweede belangrijk voordeel is het fenotype van contactremming van deze celijn. In tegenstelling tot veel getransformeerde kankercellijnen stoppen 3T3-Swiss-albino-cellen met groeien zodra ze confluent zijn, in plaats van door te groeien. Dit maakt ze tot een uitstekend referentiemodel voor wondgenezingstests met krasjes, waarbij de migratie naar een ontblote zone onder gedefinieerde omstandigheden kan worden gekwantificeerd. Cruciaal is echter dat dit fenotype afhangt van de manier waarop de cellen worden gekweekt, en niet een vast kenmerk van de lijn is. Aaronson en Todaro toonden aan dat muizenembryolijnen die werden gekweekt onder omstandigheden waarbij cel-tot-celcontact tot een minimum werd beperkt, gedurende meer dan 200 generaties niet-tumorigenisch bleven, terwijl lijnen die onder omstandigheden met uitgebreid celcontact werden gekweekt, binnen 30 generaties tumoren gingen produceren — en dat de kweekkenmerk dat het sterkst correleerde met tumorigeniciteit juist het verlies van contactremming van de celdeling was [22]. Uit later onderzoek is gebleken welke specifieke factoren hierbij een rol spelen: spontane getransformeerde haarden ontstaan in 3T3-achtige culturen die langer dan tien dagen in confluentie zijn gehouden, en de frequentie ervan hangt af van het type en de concentratie van het gebruikte serum, evenals van het aantal passages van de cultuur [23]. Het effect kan opvallend snel optreden — een kloon die gedurende 21 weken in vijftig opeenvolgende testen geen foci had gevormd, begon deze al na twee dagen te vormen in medium met een laag serumgehalte [24]. Deze experimenten werden uitgevoerd op van BALB/c en NIH afgeleide 3T3-lijnen in plaats van op de 3T3-Swiss-albino zelf, maar ze beschrijven een regimeafhankelijkheid die kenmerkend is voor fibroblastlijnen van het 3T3-type, en ze hebben een concrete praktische implicatie: laboratoria die specifiek vertrouwen op contactremming, moeten werken met lage en gedocumenteerde passageaantallen onder gedefinieerde serumomstandigheden, moeten vermijden dat culturen langer dan voor de test vereist in confluentie worden gehouden, en moeten het fenotype zelf verifiëren.

De fibroblastische oorsprong van deze celijn is ook van direct belang voor onderzoek naar de hermodellering van de extracellulaire matrix, integrinesignalering en huidherstel — en biedt daarmee een fysiologische context die puur epitheliale of kankercellijnen niet kunnen bieden. Bovendien breidt de uitgebreide catalogus van afgeleide sublijnen, gegenereerd uit 3T3-Swiss albino, het experimentele instrumentarium uit dat beschikbaar is voor onderzoekers op het gebied van adipogenese, oncologie en toepassingen met stamcelco-culturen [25].

Beperkingen van 3T3-Swiss-albino-cellen

Ondanks hun bruikbaarheid hebben 3T3-Swiss-albino-cellen inherente beperkingen die voortvloeien uit het feit dat ze van muizen afkomstig zijn en spontaan onsterfelijk zijn geworden. Karyotypische drift werd al vastgesteld in het oorspronkelijke onderzoek, waarin populaties — vaak zeer snel — van het diploïde naar het tetraploïde bereik verschoven, nog voordat er markerchromosomen verschenen [1]. Die instabiliteit is niet eigen aan deze lijn: uit SNP-array-profilering van 99 veelgebruikte muizencellijnen bleek dat bij 42% daarvan veranderingen in het aantal kopieën waren vastgesteld, waaronder bij 24% van de lijnen die afkomstig waren van normaal weefsel in plaats van tumorweefsel, waarmee werd aangetoond dat aneuploïdie een wijdverbreid kenmerk is van muizencelculturen en geen kenmerk dat specifiek is voor kanker [3]. Deze genomische instabiliteit houdt in dat resultaten die bij een hoog aantal passages worden verkregen, mogelijk geen getrouw beeld geven van de eigenschappen van cellen uit vroege passages, en dat vergelijkingen tussen laboratoria kunnen worden verstoord door onopgemerkte afwijkingen. Onderzoekers dienen hun celkweeklijnen daarom te authenticeren met behulp van gevalideerde STR-methoden en een consistente registratie van de passages bij te houden [2].

Een daarmee samenhangende beperking is het feit dat er in de onderzoekswereld van oudsher vaak sprake is van verkeerd geïdentificeerde of onderling besmette celkweekstammen, een probleem dat in het algemeen is vastgesteld bij muizencellijnen [3]. Een specifieke en vaak over het hoofd geziene valkuil betreft de naamgeving: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, gepubliceerd in 1963) en NIH 3T3 (CVCL_0594, afgeleid van een NIH Swiss-muis en gepubliceerd in 1969) worden in de literatuur beide vaak afgekort tot „3T3” of „Swiss 3T3”. Wanneer in een artikel het catalogusnummer van de collectie waaruit de cellen afkomstig zijn niet wordt vermeld, kunnen de twee lijnen vaak helemaal niet van elkaar worden onderscheiden zonder rechtstreeks contact op te nemen met de auteurs [26]. Deze onduidelijkheid geldt ook voor een groot deel van de hieronder samengevatte klassieke literatuur over signaaloverdracht: in rapporten waarin onderzoek naar „Swiss 3T3“ wordt beschreven, wordt zelden gespecificeerd welke lijn wordt bedoeld, en de bevindingen moeten dan ook worden opgevat als van toepassing op fibroblasten van het 3T3-type bij muizen, tenzij de bron de lijn expliciet vermeldt. Omdat 3T3-Swiss albino bovendien geen klonaal isolaat is, maar een polyklonale populatie, kan functionele heterogeniteit tussen stammen uit verschillende bronnen de experimentele resultaten extra beïnvloeden. Ten slotte is het mogelijk dat 3T3-Swiss albino, als muizenfibroblastlijn, zonder zorgvuldige validatie de signaalnuances die relevant zijn voor de menselijke biologie niet correct weergeeft, en moeten resultaten van dit model worden bevestigd in soortspecifieke primaire cel- of in vivo-systemen voordat translationele conclusies worden getrokken.

Bekijk de volledige specificaties en bestel

Toepassingen

Groeifactorsignalering en celproliferatie

3T3-Swiss-albino-cellen hebben gediend als een uitstekend model voor het ontrafelen van mitogene signaalcascades die worden geactiveerd door diverse groeifactoren en neuropeptiden. In vroeg onderzoek van Davies en Ross werden Swiss 3T3-cellen samen met gladde spiercellen uit de aorta van apen en endotheelcellen uit de aorta van runderen gebruikt om aan te tonen dat het vervangen van uit plasma afkomstig serum door serum uit volbloed of gedeeltelijk gezuiverde, uit bloedplaatjes afkomstige groeifactor zowel de pinocytose als de proliferatie in rustende culturen aanzienlijk stimuleerde — een vroeg verband tussen door groeifactoren geïnduceerd membraantransport en het betreden van de celcyclus, dat voornamelijk in het gladde-spiercelsysteem werd vastgesteld [7]. In latere studies werd gebruikgemaakt van het paradigma van serumonttrekking en herstimulatie om individuele signaalmoleculen in geordende routes stroomafwaarts van de receptoractivering te plaatsen.

Fosfatidylinositol-3-kinase (PI3K) bleek een centraal knooppunt te zijn in door groeifactoren gestimuleerde reacties. Johanson en collega’s toonden aan dat een p85-subeenheid-onafhankelijke pool van p110α PI3K zich samen met p70 S6-kinase op actine-stressvezels bevindt en dat PI3K-activiteit noodzakelijk is voor de door trombine geïnduceerde vorming van stressvezels in Swiss 3T3-cellen [8]. Een vergelijkbare rol voor PI3K bij de opname van voedingsstoffen werd beschreven door Higaki en Shimokado, die aantoonden dat PI3K-remmers de door de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor gestimuleerde opname van aminozuren in vasculaire gladde spiercellen tenietdeden en een soortgelijk remmend effect rapporteerden in Swiss 3T3-cellen [9].

Proteïnekinase D (PKD) wordt in intacte Swiss 3T3-cellen geactiveerd door forbolesters, celpermeabele diacylglycerolen, bryostatine, neuropeptiden en groeifactoren via een fosforylatieafhankelijk mechanisme waarbij proteïnekinase C nodig is. Zoals beschreven door Waldron, Iglesias en Rozengurt, toonde mutagenese van de residuen serine 744 en serine 748 in de activeringslus van PKD-constructen, tot expressie gebracht in COS-7-cellen, rechtstreeks aan dat PKC-gemedieerde fosforylatie van deze twee residuen ten grondslag ligt aan de activering van PKD [10]. Tegelijkertijd toonden Lim en collega’s aan dat de atypische PKC-isovormen PKCλ en PKCζ zich binden aan het docker-eiwit FRS2 in Swiss 3T3-cellen die werden gestimuleerd met basische fibroblastgroeifactor, waardoor atypische PKC binnen het signaalcomplex van de fibroblastgroeifactorreceptor werd geplaatst [6].

Cytoskeletdynamica en Rho-familie GTPase-signalering

De reactie van het cytoskelet van 3T3-Swiss-albino-cellen op gedefinieerde prikkels heeft deze cellen tot een hoeksteenmodel gemaakt voor onderzoek naar GTPasen uit de Rho-familie. Ohta en collega’s toonden aan dat het Ras-gerelateerde kleine GTPase RalA op een GTP-specifieke manier aan filamine bindt en de vorming van actine-rijke filopodia op het celoppervlak van Swiss 3T3-cellen induceert door filamine in het filopodiale cytoskelet te rekruteren [11]. Cruciaal is dat dominant-negatief RalA of het RalA-bindingsdomein van filamine de door Cdc42 geïnduceerde filopodievorming blokkeerde, waardoor RalA als een stroomafwaartse tussenstap in de door Cdc42 gemedieerde reorganisatie van het cytoskelet werd aangemerkt. Evenzo toonden Granés en collega’s in transfectiestudies in COS-1- en Swiss 3T3-cellen aan dat overexpressie van het transmembraan-heparansulfaatproteoglycaan syndecan-2 lange filopodia-achtige structuren induceerde via een mechanisme dat afhankelijk is van actief Cdc42 [12].

Van zowel bombesine als de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor werd aangetoond dat ze in Swiss 3T3-cellen een associatie tussen focale-adhesiekinase (FAK) en leden van de Src-familie induceerden, maar via verschillende routes. De reactie op bombesine was binnen één minuut na stimulatie waarneembaar, bereikte na tien minuten een piek en verliep onafhankelijk van ^Ca²⁺ en fosfatidylinositol-3'-kinase, terwijl de reactie op lage concentraties van de van bloedplaatjes afkomstige groeifactor PI3K vereiste; beide waren afhankelijk van de integriteit van het actinefilamentnetwerk [4]. Hotchin en collega’s gebruikten Swiss 3T3-cellen naast BHK-fibroblasten om de afzonderlijke bijdragen van het negende en tiende fibronectine type III (FIII)-domein aan FAK-fosforylatie en Rho/Rac-activering te ontrafelen, waarbij ze aantoonden dat FIII10 celhechting ondersteunt zonder FAK-fosforylatie te induceren [13]. Li en collega’s brachten de PAK1-, WASP- en IQGAP1-specifieke regio’s van Cdc42 biochemisch in kaart en micro-injecteerden vervolgens constitutief actief Cdc42/RhoA-chimeren geïnjecteerd in Swiss 3T3-cellen die geen serum hadden gekregen, waaruit bleek dat het switch I-domein essentiële determinanten biedt voor de binding van effectoren, terwijl elke effector via een afzonderlijk mechanisme wordt herkend [14].

De fosforylatietoestand van WAVE, een eiwit uit de WASP-familie dat stroomafwaarts van Rac membraanruffling medieert, bleek toe te nemen in Swiss 3T3-cellen die werden gestimuleerd met van bloedplaatjes afkomstige groeifactor, en deze hyperfosforylatie werd geremd door de MEK-remmer PD98059 [15]. Martelli en collega’s toonden aan dat de insuline-achtige groeifactor-I-afhankelijke stimulatie van de activiteit van nucleaire fosfolipase C-β1 een intact microtubulair cytoskelet vereiste, aangezien verstoring met colchicine de toename van diacylglycerol in de celkern tenietdeed zonder de fosforylatie van de IGF-I-receptor of de PI3K-activiteit te beïnvloeden [5]. Critchley en collega’s gaven een overzicht van de integrine-actine-koppeling waarbij taline, α-actinine, filamine en vinculine betrokken zijn, en rapporteerden dat experimenten in met streptolysine-O gepermeabiliseerde Swiss 3T3-cellen erop wijzen dat het GTP-bindende eiwit ARF-1 betrokken is bij het richten van paxilline op focale adhesies [16].

Regulatie van de celcyclus

Het door contact geremde groeigedrag van 3T3-Swiss-albino-cellen heeft ervoor gezorgd dat deze cellen een klassiek model zijn geworden voor celcyclusonderzoek. Wang en collega’s deden de verrassende waarneming dat, in subcellulaire fractioneringsexperimenten, de cycline-afhankelijke kinaseremmer p27^Kip1 uitsluitend in het cytosol van Swiss/3T3-cellen werd aangetroffen gedurende de G1-fase en tot in de vroege S-fase, in plaats van in de kern zoals was aangenomen [17]. Na serumstimulatie van rustende cellen nam ^het cytosolische ^p27Kip1 tegen het einde van de G1-fase aanzienlijk af, wat in de tijd samenviel met een toename van de nucleaire concentraties van zowel Cdk2 als cycline E.

Het systeem van rustende Swiss 3T3-cellen stelde de auteurs in staat aan te tonen dat inactief Cdk2 in rustende cellen samen met p27Kip1 neerslaat, terwijl serumstimulatie zowel nucleair als cytosolisch Cdk2 activeert naarmate p27Kip1 afneemt; Overexpressie van p27Kip1 leidde tot accumulatie in de kern en blokkeerde de toegang van Cdk2 [17]. Op basis hiervan stelden de auteurs voor dat cytosolisch p27^Kip1 een functionele rol speelt in de voortgang van de celcyclus, mogelijk door de nucleaire import van cycline E-Cdk2-complexen te beperken — een compartimenteringsmodel dat samenwerkt met de translationele en door het proteasoom gemedieerde regulering van de p27Kip1-abundantie. Het vermogen om 3T3-Swiss-albino-cellen op reproduceerbare wijze te synchroniseren door middel van serumuitputting blijft cruciaal voor de experimentele kracht van deze bevindingen.

Wondgenezing en het testen van biomaterialen

De fibroblastische identiteit en de door contact geremde groei van 3T3-Swiss-albino-cellen maken ze tot een standaardreferentiemodel in onderzoek naar wondgenezing en de beoordeling van de biocompatibiliteit van biomaterialen. Een bijzonder leerzaam onderzoek bestudeerde de werkzaamheid van resveratrol (RES) in het wondgenezingsproces met behulp van 3T3 Swiss Albino-fibroblasten als primair celmodel [19]. Oxidatieve stress werd opgewekt door waterstofperoxide, en er werden RES-doseringen variërend van 1 tot 100 µM gedurende maximaal 48 uur toegediend om de effecten op celproliferatie, migratie en oxidatieve stressniveaus te beoordelen — belangrijke determinanten voor de efficiëntie van wondsluiting.

In dat onderzoek verlaagde waterstofperoxide de proliferatie-index, terwijl de toepassing van resveratrol deze juist verhoogde, de oxidatieve stressniveaus verlaagde en de migratiesnelheden en het behoud van de ultrastructuur verbeterde; opvallend was dat er geen verschil in de mRNA-expressie van collageen-I (COL1A2) werd waargenomen, wat erop wijst dat het waargenomen voordeel niet werd gemedieerd door verhoogde collageentranscriptie [19]. Het gebruik van 3T3-Swiss-albino-cellen in deze context weerspiegelt hun aanvaarding als een representatieve normale fibroblastlijn waaraan wondgenezingsinterventies kunnen worden getoetst. Vergelijkbare cytocompatibiliteitsonderzoeken vormen de basis voor de ontwikkeling van wondverbanden: een alginaathydrogel met bijvoorbeeld Calendula-glycolzuurextract, werd bijvoorbeeld eerst beoordeeld op celviabiliteit in 3T3-fibroblasten met behulp van MTT- en SRB-testen, voordat het werd getest in een incisie-wondmodel bij ratten, waar het de wondsluiting en de collageenafzetting verbeterde [21].

De lijn wordt eveneens gebruikt als referentiesubstraat bij genotoxiciteitstesten. Een vergelijkende comet-assay-studie, waarbij expliciet met de 3T3-Swiss-albino-lijn werd gewerkt, beoordeelde de tijdsafhankelijke kinetiek van DNA-herstel na blootstelling aan zes veelgebruikte genotoxische stoffen — waterstofperoxide, kaliumbromaat, ethylmethaansulfonaat, methylmethaansulfonaat, N-ethyl-N-nitrosoureum en etoposide — en er werden agent-specifieke herstelprofielen vastgesteld, waarbij door waterstofperoxide en EMS veroorzaakte schade snel werd hersteld, terwijl door ENU en etoposide veroorzaakte laesies langer dan 24 uur aanhielden [20]. Dit soort onderzoeken levert de referentiegegevens die nodig zijn om de in-vitro-comet-test te standaardiseren en te valideren voor genotoxiciteitstests in het kader van regelgeving.

Extracellulaire vesikels en opkomende technologieën

3T3-Swiss-albino-cellen hebben een belangrijke rol gekregen als referentie voor normale cellen in studies naar de biologie van extracellulaire vesikels (EV’s). Fukuta en collega’s gebruikten B16F1-muizenmelanoomcellen naast 3T3-Swiss-albino-cellen als respectievelijk representatieve kanker- en normale cellijnen, om te onderzoeken of elektrische stimulatie op laag niveau (0,34 mA/cm) de EV-afscheiding uit gekweekte cellen kon versterken [18]. Deze gepaarde experimentele opzet was essentieel om algemene cellulaire reacties op elektrische stimulatie te onderscheiden van kankercel-specifieke effecten op de afgifte van EV’s. De elektrische behandeling verhoogde het aantal EV-deeltjes in beide lijnen — 1,7-voudig in 3T3 Swiss Albino en 1,26-voudig in B16F1 — zonder duidelijke cytotoxiciteit [18].

De gepaarde opzet bracht ook een mechanistisch verschil tussen de twee celtypen aan het licht: farmacologische remming van Rho-GTPase onderdrukte de elektrisch geïnduceerde toename in EV-afgifte in de melanoomlijn op een dosisafhankelijke manier, maar had weinig effect in 3T3 Swiss Albino-cellen, wat aangeeft dat de onderliggende signaalvereisten niet identiek zijn in kankercellen en normale cellen [18]. De representatieve exosoommarkers CD9, HSP70 en CD81 werden aangetroffen in EV’s van beide lijnen en bleven door de behandeling in wezen onveranderd (waarbij HSP70 consistent laag was in EV’s afkomstig van 3T3), wat — samen met een onveranderde deeltjes-eiwitverhouding — erop wijst dat de behandeling de hoeveelheid EV’s verhoogde zonder de kwaliteit ervan te veranderen. Naarmate het onderzoek naar EV’s zich uitbreidt naar therapeutische toediening, de ontdekking van biomarkers en celcommunicatie, wordt de beschikbaarheid van een goed gevalideerde, niet uit tumoren afkomstige fibroblastlijn zoals 3T3-Swiss Albino steeds waardevoller voor het in context plaatsen van resultaten uit kanker- of gemanipuleerde celmodellen.

Conclusie

3T3-Swiss-albino-cellen behoren tot de meest veelzijdige en historisch belangrijke muizenfibroblastlijnen die de onderzoeksgemeenschap ter beschikking staan. Van baanbrekend werk over door bloedplaatjesafgeleide groeifactor gemedieerde pinocytose en proliferatie tot huidig onderzoek naar de afscheiding van extracellulaire vesikels, versterkt door een zwakke elektrische stroom [18], heeft deze spontaan onsterfelijk gemaakte lijn voortdurend haar relevantie in verschillende disciplines bewezen. De duidelijk gedefinieerde overgang tussen rust- en proliferatiefase, de brede respons op mitogenen, de plasticiteit van het cytoskelet en de acceptatie als referentiecel voor wondgenezing en biomateriaaltesten zorgen ervoor dat 3T3-Swiss-albino-cellen de komende jaren een centrale rol zullen blijven spelen in de celbiologie — mits de cellijnen zijn geauthenticeerd door middel van STR-profilering, de passagegeschiedenis is gedocumenteerd en het kweekregime bewust is gekozen wanneer het fenotype van contactremming van belang is voor het experiment. Onderzoekers die op zoek zijn naar een betrouwbare, geauthenticeerde bron van 3T3-Swiss-albino-cellen voor hun volgende onderzoek naar signaaloverdracht, het cytoskelet of wondgenezing, worden aangemoedigd om de productspecificaties te bekijken en een bestelling te plaatsen op cytion.com.

Belangrijke publicaties

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Kwantitatieve studies naar de groei van muizenembryocellen in kweek en hun ontwikkeling tot gevestigde lijnen. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Interlaboratoriumonderzoek ter validatie van een STR-profileringsmethode voor de intraspecies-identificatie van muizencellijnen. PloS One. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) SNP-arrayprofilering van muizencellijnen identificeert hun oorspronkelijke stammen en brengt kruisbesmetting en wijdverspreide aneuploïdie aan het licht. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Bombesine en van bloedplaatjes afkomstige groeifactor induceren associatie van endogeen focale-adhesiekinase met Src in intacte Swiss 3T3-cellen. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) Insuline-achtige groeifactor-I-afhankelijke stimulatie van de activiteit van nucleaire fosfolipase C-beta1 in Swiss 3T3-cellen vereist een intact cytoskelet en gaat gepaard met verhoogde fosforylatie van de fosfolipase. Journal of Cellular Biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Associatie van atypische proteïnekinase C-isotypes met het docker-eiwit FRS2 in de signaaloverdracht van de fibroblastgroeifactor. The Journal of biological chemistry. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Mediatie van pinocytose in gekweekte arteriële gladde spiercellen en endotheelcellen door van bloedplaatjes afkomstige groeifactor. The Journal of Cell Biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) Een p85-subeenheid-onafhankelijke p110-alfa PI 3-kinase colokaliseert met p70 S6-kinase op actine-stressvezels en reguleert de door trombine gestimuleerde vorming van stressvezels in Swiss 3T3-cellen. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) Fosfatidylinositol-3-kinase is noodzakelijk voor de door groeifactoren geïnduceerde opname van aminozuren door vasculaire gladde spiercellen. Arteriosclerose, trombose en vasculaire biologie. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) Fosforylatie-afhankelijke activering van proteïnekinase D [Overzicht]. Electrophoresis. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) Het kleine GTPase RalA richt zich op filamine om filopodia te induceren. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) Syndecan-2 induceert filopodia via actief cdc42Hs. Experimental Cell Research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Differentiële activering van focale-adhesiekinase, Rho en Rac door het negende en tiende FIII-domein van fibronectine. Journal of Cell Science. PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) Lokalisatie van de PAK1-, WASP- en IQGAP1-specifieke regio’s van Cdc42. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) Fosforylatie van WAVE stroomafwaarts van de mitogeen-geactiveerde proteïnekinase-signaalroute. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Door integrines gemedieerde celadhesie: de verbinding met het cytoskelet [Overzicht]. Biochemical Society Symposium. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) De cycline-afhankelijke kinaseremmer p27Kip1 bevindt zich in het cytosol van Swiss/3T3-cellen. Oncogene. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) Een lage elektrische spanning verhoogt de afscheiding van extracellulaire vesikels uit gekweekte cellen. Biochemistry and biophysics reports. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) De werkzaamheid van resveratrol in het wondgenezingsproces door oxidatieve stress te verminderen en de proliferatie en migratie van fibroblasten te bevorderen. Dermatologic Therapy. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Agent-specifieke kinetiek van DNA-herstel in 3T3-cellen: een vergelijkende studie met behulp van de in-vitro-comet-test. Toxicology Research. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) Glycolisch extract van calendula bevordert de wondgenezing van alginaathydrogel. Acta Cirurgica Brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Grondslag voor het verwerven van kwaadaardig potentieel door in vitro gekweekte muizencellen. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Bewijs voor het progressieve en adaptieve karakter van spontane transformatie in de NIH 3T3-cellijn. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Aanpassing en selectie als factoren bij de spontane transformatie van NIH-3T3-cellen. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Cellosaurus-vermelding 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Swiss Institute of Bioinformatics. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Cellosaurus FAQ, V21: Waarom zijn er verschillende vermeldingen voor de 3T3-cellijn in Cellosaurus? cellosaurus.org/faq