Ga naar de inhoud

Media en reagentia

40 producten

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

excl. btw en verzendkosten

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

excl. btw en verzendkosten

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

excl. btw en verzendkosten

DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glucose, w: 2,5 mM L-glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaat, w: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 is een algemeen erkend en veelgebruikt basismedium in celculturen voor biologisch onderzoek. Het dient als fundamentele bron van voedingsstoffen voor de groei van diverse zoogdiercellijnen, met name wanneer het wordt aangevuld met foetaal runderserum (FBS). Deze unieke samenstelling combineert Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham’s F-12 (Ham’s Nutrient Mixture F-12) in een precieze verhouding van 1:1. De toevoeging van L-glutamine versterkt de samenstelling nog verder. DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een hogere concentratie aan aminozuren en vitamines in vergelijking met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op het Ham's F-10-medium en levert een aanvullende reeks essentiële componenten. Om een optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een concentratie van doorgaans 5-10%. Deze toevoeging is noodzakelijk omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de celontwikkeling. DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Gekweekte cellen in DMEM:Ham's F12, of elk ander medium dat gebruikmaakt van het bicarbonaatbuffersysteem, vereisen een gecontroleerde CO₂-omgeving van 5-10% om de juiste pH-waarden te handhaven. Kwaliteitscontrole • Steriel gefilterd Opslag en houdbaarheid • Bewaren bij +2 °C tot +8 °C, beschermd tegen licht. • Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6–8 weken gebruiken. Verzendvoorwaarden • Omgevingstemperatuur Onderhoud • Bewaar gekoeld bij +2 °C tot +8 °C in het donker. Vermijd bevriezing en herhaaldelijk opwarmen tot +37 °C, aangezien dit de productkwaliteit vermindert. • Verwarm het medium niet boven 37 °C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons. • Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, neem dan de benodigde hoeveelheid eruit en breng deze vóór gebruik op kamertemperatuur. Samenstelling Categorie Bestanddelen Concentratie (mg/L) Aminozuren Glycine 18,75 L-alanine 4,45 L-arginine HCl 147,50 L-asparagine H₂O 7,50 L-asparaginezuur 6,65 L-cysteïne HCl H₂O 17,56 L-cystine-2-HCl 31,29 L-glutaminezuur 7,35 L-glutamine 365,00 L-histidine HCl H₂O 31,48 L-isoleucine 54,47 L-Leucine 59,05 L-lysine HCl 91,25 L-methionine 17,24 L-fenylalanine 35,48 L-proline 17,25 L-serine 26,25 L-threonine 53,45 L-tryptofaan 9,02 L-tyrosine 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valine 52,85 Vitaminen D-biotine 0,0035 Cholinechloride 8,98 D-calciumpantothenaat 2,24 Foliumzuur 2,66 myo-inositol 12,60 Nicotinamide 2,02 Pyridoxine-HCl 0,031 Pyridoxal-HCl 2,00 Riboflavine 0,219 Thiamine HCl 2,17 Vitamine B12 0,68 Anorganische zouten CaCl₂·2 H₂O 154,50 CuSO₄·5 H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄·7 H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2 H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Overige bestanddelen D-glucose 3151,00 Hypoxanthine 2,40 HEPES 3574,50 Linolzuur 0,042 Liponzuur 0,105 Fenolrood-natriumzout 8,63 Putrescine-2-HCl 0,081 Natriumpyruvaat 55,00 Thymidine 0,365

€25.00

excl. btw en verzendkosten

DMEM, w: 4,5 g/l glucose, w: 4 mM L-glutamine, w: 3,7 g/l NaHCO₃, w: 1,0 mM natriumpyruvaat

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) is een zeer veelzijdig en veelgebruikt basismedium dat is ontwikkeld om de groei van een breed scala aan zoogdiercellen in biologisch onderzoek te ondersteunen. Het dient als een ideaal medium voor het kweken van primaire fibroblasten, neuronen, gliacellen, HUVEC's, gladde spiercellen, evenals populaire cellijnen zoals HeLa, 293, Cos-7 en PC-12. Wat DMEM onderscheidt van andere media is de unieke samenstelling. Het bevat een indrukwekkende viervoudige toename in de concentratie van aminozuren en vitamines in vergelijking met het oorspronkelijke Eagle's Minimal Essential Medium. Oorspronkelijk ontwikkeld met een laag glucosegehalte (1 g/L) en natriumpyruvaat, wordt DMEM vaak gebruikt met hogere glucoseconcentraties, al dan niet in combinatie met natriumpyruvaat. Opvallend is dat DMEM geen eiwitten, lipiden of groeifactoren bevat, waardoor aanvulling noodzakelijk is. Om een optimale groei te bereiken, is het gebruikelijk om DMEM aan te vullen met 10% foetaal runderserum (FBS). Bovendien maakt DMEM gebruik van een natriumbicarbonaat-buffersysteem, waardoor een omgeving met 5-10% CO₂ nodig is om een fysiologische pH te handhaven. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) staat hoog aangeschreven onder de gedefinieerde media voor cel- en weefselkweek en voorziet in de groeibehoeften van diverse fenotypes van hechtende cellen. Het overtreft het oorspronkelijke Eagle’s Medium, dat in de jaren vijftig werd ontwikkeld voor het kweken van kippencellen, dankzij de verbeterde aanvullende samenstelling die bekendstaat als de Dulbecco-modificatie. Deze modificatie verhoogt het gehalte aan bepaalde aminozuren en vitamines aanzienlijk, tot wel vier keer zo hoog als in het oorspronkelijke medium. Op het gebied van celkweek speelt DMEM een cruciale rol als groeimedium voor verschillende celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en getransformeerde cellen. Onderzoekers maken ook gebruik van de gemodificeerde versie van DMEM voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen, zoals geneesmiddelenontwikkeling, weefselengineering en de studie van celsignaleringsroutes. Kwaliteitscontrole • Steriel gefilterd Opslag en houdbaarheid • Bewaren bij +2 °C tot +8 °C, beschermd tegen licht. • Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6–8 weken gebruiken. Verzendvoorwaarden • Omgevingstemperatuur Onderhoud • Bewaar gekoeld bij +2 °C tot +8 °C in het donker. Vermijd bevriezing en herhaaldelijk opwarmen tot +37 °C, aangezien dit de productkwaliteit vermindert. • Verwarm het medium niet tot boven 37 °C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons. • Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, neem dan de benodigde hoeveelheid eruit en breng deze vóór gebruik op kamertemperatuur. Samenstelling Categorie Bestanddelen Concentratie (mg/L) Aminozuren Glycine 30,00 L-arginine HCl 84,00 L-cystine-2-HCl 62,57 L-glutamine 584,00 L-histidine HCl H₂O 42,00 L-isoleucine 105,00 L-Leucine 105,00 L-Lysine HCl 146,00 L-methionine 30,00 L-fenylalanine 66,00 L-serine 42,00 L-threonine 95,00 L-tryptofaan 16,00 L-tyrosine 2 Na 2H₂O 103,79 L-valine 94,00 Vitaminen Cholinechloride 4,00 D-calciumpantothenaat 4,00 Foliumzuur 4,00 myo-inositol 7,20 Nicotinamide 4,00 Pyridoxal-HCl 4,00 Riboflavine 0,40 Thiamine HCl 4,00 Anorganische zouten CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Overige componenten D-glucose 4500,00 Fenolrood-natriumzout 15,90 Natriumpyruvaat 110,00

€25.00

excl. btw en verzendkosten

EMEM (MEM Eagle), met: 2 mM L-glutamine, met: 2,2 g/l NaHCO₃, met: EBSS

Eagle’s Minimum Essential Medium (EMEM) is een van de meest gebruikte basismedia voor de kweek van een breed scala aan zoogdiercellen, met name hechtende cellijnen. Deze klassieke formulering, oorspronkelijk ontwikkeld door Harry Eagle, bevat de essentiële aminozuren, vitamines en anorganische zouten die nodig zijn om de groei van zowel primaire cellen als gevestigde cellijnen onder standaard kweekomstandigheden te ondersteunen. Deze gebruiksklare, steriel gefilterde vloeibare formulering is aangevuld met Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS), 2 mM L-glutamine, D-glucose (1,0 g/l) en 2,2 g/l natriumbicarbonaat (NaHCO₃), waardoor het geschikt is voor gebruik in een CO₂-geregelde incubatoromgeving (doorgaans 5 % CO₂). Het toegevoegde fenolrood fungeert als pH-indicator, waardoor de toestand van het medium tijdens de celkweek gemakkelijk visueel kan worden gecontroleerd. Belangrijkste kenmerken • Klassieke Eagle’s MEM-formule met Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS) • Inclusief 2 mM L-glutamine – klaar voor onmiddellijk gebruik • 2,2 g/L natriumbicarbonaat – gebufferd voor incubatie bij 5 % CO₂ • Met D-glucose (1,0 g/l) als primaire koolstofbron • Met fenolrood als pH-indicator • Zonder HEPES en zonder natriumpyruvaat • Steriel gefilterd vloeibaar medium, klaar voor gebruik • pH 7,0 – 7,6 Typische toepassingen EMEM ondersteunt de kweek van een breed scala aan zoogdiercellijnen, waaronder HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 en vele primaire cellen. Veelvoorkomende toepassingen zijn onder meer: • Routinematig onderhoud en vermeerdering van hechtende cellijnen • Werkprocessen voor virusvermeerdering en vaccinproductie • Toepassingen op het gebied van cytotoxiciteit en bioassays • Transfectie- en eiwitexpressieonderzoeken • Fundamenteel onderzoek in de celbiologie en moleculaire biologie Voor optimale celgroei wordt EMEM doorgaans aangevuld met 5–10 % foetaal runderserum (FBS) en, afhankelijk van de cellijn, met niet-essentiële aminozuren (NEAA) en antibiotica zoals penicilline/streptomycine. Behandeling en opslag Bewaar de ongeopende fles bij +2 °C tot +8 °C, beschermd tegen licht. Na opening onder aseptische omstandigheden gebruiken. L-glutamine in oplossing is onderhevig aan geleidelijke afbraak – voor optimale prestaties raden wij aan het medium binnen 4 weken na opening te gebruiken, of het voor gebruik aan te vullen met verse L-glutamine indien het langer wordt bewaard. Laat het medium opwarmen tot 37 °C voordat u het aan de cellen toevoegt. Kwaliteit Vervaardigd volgens strenge kwaliteitsnormen. Elke batch wordt getest op steriliteit, pH, osmolaliteit en endotoxineniveaus om consistente prestaties bij celkweektoepassingen te garanderen. Productspecificaties Specificatie Details ProducttypeMEM ProductcategorieCelkweekmedia FormaatVloeibaar SterielJa Inhoud500 ml L-glutamineMet L-glutamine (2 mM) GlucoseMet glucose (1,0 g/l) NatriumbicarbonaatMet NaHCO₃ (2,2 g/L) HEPESZonder HEPES Natrium-pyruvaatZonder natriumpyruvaat FenolroodMet fenolrood ZoutoplossingEarle’s Balanced Salt Solution (EBSS) pH7,0 – 7,6 EndotoxinegehalteNiet gespecificeerd Opslag+2 °C tot +8 °C Samenstelling (per liter)

€25.00

excl. btw en verzendkosten

Bevriezingsmedium CM-1 - 100 ml

Freeze Medium CM-1 van Cytion is een geavanceerd cryopreservatiemedium dat is ontworpen om na het ontdooien de hoogste mate van celviabiliteit en functionaliteit te garanderen. Dit veelzijdige medium is geschikt voor een breed spectrum aan celtypen, waaronder zowel menselijke als dierlijke cellen, waardoor het een onmisbaar hulpmiddel is voor diverse onderzoekstoepassingen. Freeze Medium CM-1 is samengesteld uit een zorgvuldig uitgebalanceerde combinatie van cryoprotectanten en essentiële voedingsstoffen en minimaliseert de vorming van ijskristallen en cellulaire stress tijdens het invriesproces, waardoor de cellulaire integriteit behouden blijft. De belangrijkste kenmerken van Freeze Medium CM-1 zijn: • Brede compatibiliteit: effectief voor een breed scala aan celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en gevestigde cellijnen. • Hoge levensvatbaarheid: geoptimaliseerd om het herstel en de levensvatbaarheid van de cellen na het ontdooien te maximaliseren, wat betrouwbare experimentele resultaten garandeert. • Klaar voor gebruik: handig bereid en gesteriliseerd voor onmiddellijke toepassing, waardoor de voorbereidingstijd en het risico op besmetting worden verminderd. • Verbeterde stabiliteit: Biedt consistente prestaties onder standaard cryopreservatieomstandigheden, wat reproduceerbare resultaten garandeert. • Lange houdbaarheid: CM-1 is een serumhoudend, gebruiksklaar cryopreservatiemedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard. CM-1 gebruiken voor het invriezen van cellen Volg deze stappen om CM-1 te gebruiken voor het invriezen van zowel hechtende als suspensiecellen: • Was hechtende cellen en maak ze los van het kweeksubstraat. Ga bij suspensiecellen direct door naar de volgende stap. • Tel de cellen om er zeker van te zijn dat ze de juiste concentratie hebben. • Centrifugeer de cellen om ze te pelletiseren en resuspendeer ze vervolgens in CM-1-invriesmedium. • Breng de opnieuw gesuspendeerde cellen over in cryoflesjes. • Gebruik een langzame invriesmethode voordat u de cellen overbrengt naar langetermijnopslag. Methode Beschrijving Stappen ❄️ Handmatig invriezen Een stapsgewijze methode waarbij de temperatuur geleidelijk wordt verlaagd om de levensvatbaarheid van de cellen te waarborgen. 1️⃣ Plaats de cellen in invriesmedium in een vriezer bij 4 °C gedurende 40 minuten. 2️⃣ Breng ze vervolgens over naar een vriezer bij -80 °C voor 24 uur. 3️⃣ Bewaar de cellen in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring. ❄️ Met behulp van Mr. Frosty Een handig apparaat waarmee je de invriessnelheid kunt regelen zonder stroom. 1️⃣ Bereid de cellen voor in cryobuisjes met invriesmedium. 2️⃣ Plaats de cryobuisjes in de Mr. Frosty-container. 3️⃣ Bewaar ze 24 uur bij -80 °C voordat u ze overbrengt naar vloeibare stikstof. ❄️ Vriezer met gecontroleerde invriessnelheid Een uiterst nauwkeurige vriezer van Thermo Fisher of andere fabrikanten, ontworpen voor gecontroleerde temperatuurdaling. 1️⃣ Programmeer het apparaat om de temperatuur geleidelijk te verlagen. 2️⃣ Plaats de voorbereide cellen in de vriezer. 3️⃣ Breng de cellen na de invriescyclus over naar vloeibare stikstof. • Bewaar de cryovials bij temperaturen onder -130 °C of in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring. Ingrediënten • Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten • Buffercapaciteit: pH = 7,2 tot 7,6 Cytion’s Freeze Medium CM-1 biedt een betrouwbare oplossing voor cryopreservatie en garandeert een hoge celviabiliteit en functionaliteit na ontdooien voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen.

€99.00

excl. btw en verzendkosten

Bevriezingsmedium CM-1 - 50 ml

Freeze Medium CM-1 van Cytion is een geavanceerd cryopreservatiemedium dat is ontworpen om na het ontdooien de hoogste mate van celviabiliteit en functionaliteit te garanderen. Dit veelzijdige medium is geschikt voor een breed spectrum aan celtypen, waaronder zowel menselijke als dierlijke cellen, waardoor het een onmisbaar hulpmiddel is voor diverse onderzoekstoepassingen. Freeze Medium CM-1 is samengesteld uit een zorgvuldig uitgebalanceerde combinatie van cryoprotectiva en essentiële voedingsstoffen en minimaliseert de vorming van ijskristallen en cellulaire stress tijdens het invriesproces, waardoor de cellulaire integriteit behouden blijft. De belangrijkste kenmerken van Freeze Medium CM-1 zijn: • Brede compatibiliteit: effectief voor een breed scala aan celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en gevestigde cellijnen. • Hoge levensvatbaarheid: Geoptimaliseerd om het herstel en de levensvatbaarheid van cellen na het ontdooien te maximaliseren, waardoor betrouwbare experimentele resultaten worden gegarandeerd. • Klaar voor gebruik: handig bereid en gesteriliseerd voor onmiddellijke toepassing, waardoor de voorbereidingstijd en het risico op besmetting worden verminderd. • Verbeterde stabiliteit: Biedt consistente prestaties onder standaard cryopreservatieomstandigheden, wat reproduceerbare resultaten garandeert. • Lange houdbaarheid: CM-1 is een serumhoudend, gebruiksklaar cryopreservatiemedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard. CM-1 gebruiken voor het invriezen van cellen Volg deze stappen om CM-1 te gebruiken voor het invriezen van zowel hechtende als suspensiecellen: • Was hechtende cellen en maak ze los van het kweeksubstraat. Ga bij suspensiecellen direct door naar de volgende stap. • Tel de cellen om er zeker van te zijn dat ze de juiste concentratie hebben. • Centrifugeer de cellen om ze te pelletiseren en resuspendeer ze vervolgens in CM-1-invriesmedium. • Breng de opnieuw gesuspendeerde cellen over in cryoflesjes. • Gebruik een langzame invriesmethode voordat u de cellen overbrengt naar langetermijnopslag. Methode Beschrijving Stappen ❄️ Handmatig invriezen Een stapsgewijze methode waarbij de temperatuur geleidelijk wordt verlaagd om de levensvatbaarheid van de cellen te waarborgen. 1️⃣ Plaats de cellen in invriesmedium in een vriezer bij 4 °C gedurende 40 minuten. 2️⃣ Breng ze vervolgens over naar een vriezer bij -80 °C voor 24 uur. 3️⃣ Bewaar de cellen in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring. ❄️ Met behulp van Mr. Frosty Een handig apparaat waarmee je de invriessnelheid kunt regelen zonder stroom. 1️⃣ Bereid de cellen voor in cryobuisjes met invriesmedium. 2️⃣ Plaats de cryobuisjes in de Mr. Frosty-container. 3️⃣ Bewaar ze 24 uur bij -80 °C voordat u ze overbrengt naar vloeibare stikstof. ❄️ Vriezer met gecontroleerde invriesnelheid Een uiterst nauwkeurige vriezer van Thermo Fisher of andere fabrikanten, ontworpen voor een gecontroleerde temperatuurdaling. 1️⃣ Programmeer het apparaat om de temperatuur geleidelijk te verlagen. 2️⃣ Plaats de voorbereide cellen in de vriezer. 3️⃣ Breng de cellen na de invriescyclus over naar vloeibare stikstof. • Bewaar de cryovials bij temperaturen onder -130 °C of in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring. Ingrediënten • Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten • Buffercapaciteit: pH = 7,2 tot 7,6 Cytion’s Freeze Medium CM-1 biedt een betrouwbare oplossing voor cryopreservatie en garandeert een hoge celviabiliteit en functionaliteit na ontdooien voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen.

€59.00

excl. btw en verzendkosten

Ham's F12K Medium, met: 2,0 mM L-glutamine, met: 2,0 mM natriumpyruvaat, met: 2,5 g/l NaHCO₃

Maak kennis met Ham's F-12K (Kaighn's) Medium, een gespecialiseerde aanpassing van Ham's F-12-medium, ontworpen om te voldoen aan de specifieke eisen van biologisch onderzoek. Dit geavanceerde medium biedt duidelijke voordelen en bevordert de kweek van primaire menselijke hepatocyten, evenals levercellen van ratten en kippen, met name onder omstandigheden met een verlaagd serumgehalte. Ham's F-12K (Kaighn's) Medium is zorgvuldig samengesteld om de celkweekomstandigheden te optimaliseren. Het medium heeft een verrijkte samenstelling met verhoogde concentraties van essentiële componenten zoals aminozuren en natriumpyruvaat, evenals aanvullende elementen zoals putrescine, thymidine, hypoxanthine en zink. Dankzij deze toevoegingen kunnen onderzoekers het medium aanvullen met een minimale hoeveelheid serum of met gedefinieerde componenten voor specifieke celtypen, waardoor nauwkeurige experimentele omstandigheden mogelijk worden. Opvallend is dat Ham's F-12K (Kaighn's) Medium geen eiwitten of groeifactoren bevat. Daarom is aanvulling met groeifactoren en foetaal runderserum (FBS) vaak noodzakelijk, waardoor onderzoekers het medium kunnen afstemmen op de behoeften van hun specifieke cellijnen. Voor optimale prestaties moet de concentratie van FBS zorgvuldig worden afgestemd op elke cellijn, om optimale groei en functionaliteit te waarborgen. Om de fysiologische pH te handhaven, maakt Ham's F-12K (Kaighn's) Medium gebruik van een natriumbicarbonaatbuffersysteem (2,5 g/l), waardoor tijdens de kweek een gecontroleerde CO₂-omgeving van 5-10% vereist is. Dit zorgt ervoor dat de pH van het medium binnen het ideale bereik voor celgroei en levensvatbaarheid blijft. Kwaliteitscontrole • pH = 7,2 ± 0,02 bij 20-25 °C. • Elke partij is getest op steriliteit en de afwezigheid van mycoplasma en bacteriën. Bewaring • In het donker gekoeld bewaren bij +2 °C tot +8 °C. Zowel invriezen als opwarmen tot +37 °C tast de kwaliteit van het product aan. • Verwarm het medium niet tot meer dan 37 °C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons). • Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, neem dan deze hoeveelheid uit de fles en breng deze op kamertemperatuur. • De houdbaarheid van alle media, met uitzondering van het basismedium, bedraagt 8 weken vanaf de productiedatum. Samenstelling Bestanddelen mg/l Anorganische zouten Calciumchloride x 2H₂O 135,24 Koper(II)sulfaat x 5H₂O 0,00 IJzer(II)sulfaat x 7H₂O 0,83 Magnesiumchloride x 6H₂O 105,72 Magnesiumsulfaat x 7H₂O 394,49 Kaliumchloride 283,29 Kaliumdihydrogeenfosfaat 58,52 Natriumchloride 7597,20 watervrij dinatriumwaterstoffosfaat 115,02 Zinksulfaat x 7H₂O 0,14 Overige bestanddelen D(+)-glucose, watervrij 1260,00 Hypoxanthine 4,08 DL-α-liponzuur 0,21 Fenolrood 3,00 Putrescine x 2HCl 0,32 Natrium-pyruvaat 220,00 NaHCO₃ 2500,00 Thymidine 0,73 Aminozuren L-alanine 17,82 L-arginine x HCl 421,40 L-asparagine x H₂O 30,02 L-asparaginezuur 26,62 L-cysteïne x HCl x H₂O 70,24 L-glutamine 292,20 L-glutaminezuur 29,42 Glycine 15,01 L-histidine x HCl x H₂O 41,92 L-isoleucine 7,87 L-Leucine 26,24 L-lysine x HCl 73,04 L-methionine 8,95 L-fenylalanine 9,91 L-proline 69,06 L-serine 21,02 L-threonine 23,82 L-tryptofaan 4,08 L-tyrosine 10,87 L-valine 23,42 Vitaminen D(+)-Biotine 0,07 D-Calciumpantothenaat 0,48 Cholinechloride 13,96 Foliumzuur 1,32 myo-inositol 18,02 Nicotinamide 0,04 Pyridoxine x HCl 0,06 Riboflavine 0,04 Thiamine x HCl 0,34 Vitamine B12 1,36

€108.00

excl. btw en verzendkosten

Ham's F12 Medium, met: 1,0 mM stabiel glutamine, met: 1,0 mM natriumpyruvaat, met: 1,176 g/L NaHCO₃

Ham's F-12-medium, ook bekend als Ham's F-12-voedingsmengsel, is een veelgebruikt basismedium dat speciaal is ontwikkeld voor celkweek. Het wordt op grote schaal toegepast voor serumvrije, enkelvoudige celkweek van Chinese hamster-ovariumcellen (CHO-cellen), longcellen en L-cellen van muizen. Bovendien is Ham's F-12 het medium bij uitstek voor een klonale toxiciteitstest (CTA). Een van de opvallende voordelen is dat het de celgroei ondersteunt zonder dat er serum hoeft te worden toegevoegd. Dit voorkomt mogelijke verstoring door serumcomponenten, waardoor consistente en betrouwbare experimentele resultaten worden gegarandeerd. Door een serumvrije kweekomgeving te bieden, geeft Ham's F-12-medium onderzoekers meer controle over hun onderzoeken. Een ander belangrijk kenmerk van Ham's F-12-medium is dat het geschikt is voor het uitplaten van afzonderlijke cellen. Dit maakt het een uitstekende keuze voor diverse cellijnen, waaronder CHO-cellen, longcellen en L-cellen van muizen. De geoptimaliseerde voedingssamenstelling van het medium bevordert een efficiënte hechting en groei van individuele cellen, waardoor het mogelijk wordt om homogene celculturen op te zetten met een verbeterde reproduceerbaarheid. Bovendien wordt Ham's F-12-medium algemeen erkend als het voorkeursmedium voor de Clonal Toxicity Assay (CTA). Deze test speelt een cruciale rol bij het beoordelen van de cytotoxische effecten van stoffen op cellen. Door Ham's F-12-medium te gebruiken bij de CTA kunnen onderzoekers de invloed van verschillende verbindingen of behandelingen op individuele cellen nauwkeurig evalueren, wat waardevolle inzichten oplevert in toxicologische profielen. Kwaliteitscontrole • pH = 7,2 ± 0,02 bij 20-25 °C. • Elke partij is getest op steriliteit en de afwezigheid van mycoplasma en bacteriën. Bewaring • In het donker gekoeld bewaren bij +2 °C tot +8 °C. Invriezen en opwarmen tot +37 °C tasten de kwaliteit van het product aan. • Verwarm het medium niet tot meer dan 37 °C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons). • Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, neem dan deze hoeveelheid uit de fles en breng deze op kamertemperatuur. • De houdbaarheid van alle media, met uitzondering van het basismedium, bedraagt 8 weken vanaf de productiedatum. Samenstelling Bestanddelen mg/l Anorganische zouten Calciumchloride x 2H₂O 44,00 Koper(II)sulfaat x 5H₂O 0,00 IJzer(II)sulfaat x 7H₂O 0,83 Magnesiumchloride x 6H₂O 122,00 Kaliumchloride 223,65 Natriumchloride 7599,00 watervrij dinatriumwaterstoffosfaat 142,04 Zinksulfaat x 7H₂O 0,86 Overige bestanddelen D(+)-glucose, watervrij 1801,60 Hypoxanthine 4,08 Linolzuur 0,08 DL-α-liponzuur 0,21 Fenolrood 1,20 Putrescine x 2HCl 0,16 Natriumpyruvaat 110,00 Thymidine 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminozuren L-alanine 8,91 L-arginine x HCl 210,70 L-asparagine x H₂O 15,01 L-asparaginezuur 13,31 L-cysteïne x HCl x H₂O 35,12 L-Alanyl-L-glutamine 217,30 L-glutaminezuur 14,71 Glycine 7,51 L-histidine x HCl x H₂O 20,96 L-isoleucine 3,94 L-Leucine 13,12 L-Lysine x HCl 36,54 L-methionine 4,48 L-fenylalanine 4,96 L-proline 34,53 L-serine 10,51 L-threonine 11,91 L-tryptofaan 2,04 L-tyrosine 5,44 L-valine 11,71 Vitaminen D(+)-Biotine 0,01 D-Calciumpantothenaat 0,24 Cholinechloride 13,96 Foliumzuur 1,32 myo-inositol 18,02 Nicotinamide 0,04 Pyridoxine x HCl 0,06 Riboflavine 0,04 Thiamine x HCl 0,34 Vitamine B12 1,36

€25.00

excl. btw en verzendkosten

HEPES Buffer Solution (1M)

Volume: 100 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered HEPES Buffer Solution (1 M), also known as N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, is a zwitterionic organic buffering agent widely used in cell culture media. It is designed to maintain stable pH conditions in the physiological range of 6.7 to 8.6, supporting optimal cellular function during in vitro applications. Application and Benefits HEPES provides reliable buffering capacity in cell culture systems, particularly when cells are handled outside a CO₂ incubator. The addition of 10–25 mM HEPES to culture media offers enhanced pH stability during extended manipulation periods, helping to maintain consistent experimental conditions. This buffer is membrane-impermeable, has minimal interference with biochemical reactions, and demonstrates strong chemical and enzymatic stability. These properties make it suitable for a wide range of cell culture and biochemical applications. Formulation and Usage The solution is supplied as a 1 M concentrate prepared in cell culture–grade water and is sterile-filtered for use in contamination-sensitive environments. It can be diluted to the desired working concentration depending on application requirements. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to preserve product integrity. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

excl. btw en verzendkosten

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

excl. btw en verzendkosten

Celkweekmedia: een overzicht

Op het gebied van de levenswetenschappen is celkweek een van de belangrijkste methoden. Onder de term 'celkweek' wordt verstaan: het verwijderen van cellen, weefsels of organen uit een dier of plant en het vervolgens implanteren van die cellen, weefsels of organen in een kunstmatige omgeving die gunstig is voor hun overleving en/of groei. De fundamentele omgevingsvereisten voor een optimale celontwikkeling zijn een geregelde temperatuur, een substraat waaraan de cellen zich kunnen hechten, een geschikt groeimedium en een incubator die de optimale pH-waarde en osmolaliteit handhaaft. Cellen hebben deze omstandigheden nodig om zich optimaal te kunnen ontwikkelen.

De keuze van een geschikt groeimedium voor in-vitro-kweek is de fase in de celkweek die zowel het meest cruciaal als het meest essentieel is. Een groeimedium, ook wel kweekmedium genoemd, is een vloeistof of gel die is samengesteld om de ontwikkeling van organismen op microscopisch, cellulair of plantachtig niveau te bevorderen. Het medium dat wordt gebruikt voor het kweken van cellen bevat vaak een voldoende voorraad energie en stoffen die de celcyclus regelen. De belangrijkste bestanddelen van een kweekmedium zijn onder meer aminozuren, vitamines, anorganische zouten, glucose en serum. Het serum wordt aan het medium toegevoegd omdat het fungeert als bron van groeifactoren, hormonen en hechtingsfactoren. Naast het leveren van voedingsstoffen draagt het medium ook bij aan het handhaven van de pH- en osmolaliteitsniveaus.

Soorten media die worden gebruikt in celcultuur

Zowel menselijke als dierlijke cellen kunnen worden gekweekt in een kunstmatig of synthetisch medium, of in een volledig natuurlijk medium dat is aangevuld met natuurlijke elementen. Hieronder geven we u een overzicht van de verschillende momenteel beschikbare mediatypen.

Natuurlijke media

In natuurlijke media komen uitsluitend biologische vloeistoffen voor die in hun natuurlijke staat voorkomen. Natuurlijke media zijn zeer geschikt en eenvoudig te gebruiken voor de kweek van een breed scala aan dierlijke celtypen. Het gebrek aan inzicht in de precieze samenstelling van natuurlijke media is de belangrijkste factor die bijdraagt aan de lage herhaalbaarheid van resultaten die met natuurlijke media worden verkregen.

Kunstmatige media

Bij de bereiding van kunstmatige of synthetische media worden voedingsstoffen (zowel organische als anorganische), serumproteïnen, koolhydraten, cofactoren, vitamines en zouten toegevoegd, evenals O₂- en CO₂-gasfasen [1].

Er zijn verschillende soorten kunstmatige media ontwikkeld om aan een of meer van de volgende functies te voldoen: 1) Onmiddellijke overleving (een uitgebalanceerde zoutoplossing met een nauwkeurige pH-waarde en osmotische druk). 2) Langdurige overleving (een uitgebalanceerde zoutoplossing aangevuld met verschillende samenstellingen van organische chemicaliën en/of serum). 3) Onbeperkte ontwikkeling. 4) Gespecialiseerde functies.

Er zijn vier verschillende classificaties voor kunstmatige media:

Media die serum bevatten

Het meest voorkomende supplement in media voor de kweek van dierlijke cellen is foetaal runderserum. Dit wordt als goedkoop supplement aan het kweekmedium toegevoegd om de best mogelijke groeiomstandigheden te bereiken. Het serum fungeert niet alleen als drager of chelaatvormer voor voedingsstoffen die onstabiel of niet in water oplosbaar zijn, hormonen en groeifactoren, proteaseremmers en andere stoffen, maar bindt en neutraliseert ook schadelijke moleculen.

Serumvrij medium

De aanwezigheid van serum in het medium heeft een aantal nadelen en kan leiden tot ernstige interpretatiefouten in immunologisch onderzoek [2, 3]. Er zijn diverse serumvrije media ontwikkeld [4, 5]. Deze media zijn over het algemeen specifiek samengesteld om de kweek van één bepaald celtype te ondersteunen, zoals Knockout Serum Replacement en Knockout DMEM van Thermo Fisher Scientific, en mTESR-medium van Stem Cell Technologies [6], voor stamcellen [7].

Bovendien bevatten deze media vastgestelde hoeveelheden gezuiverde groeifactoren, lipoproteïnen en andere eiwitten, die anders doorgaans door het serum worden geleverd [8]. Deze media worden vaak „gedefinieerde kweekmedia“ genoemd, aangezien de componenten waaruit deze media bestaan goed bekend zijn.

Chemisch gedefinieerde media

Deze media bevatten ultrazuivere anorganische en organische componenten die niet door enige vorm van verontreiniging zijn aangetast. Ze kunnen ook toevoegingen van zuivere eiwitten bevatten, zoals groeifactoren.

 De genetische modificatie van bacteriën of gist, in combinatie met de toevoeging van bepaalde vetzuren, vitamines, cholesterol en aminozuren, leidt tot de productie van hun samenstellende delen [9].

Eiwitvrije media

Eiwitvrije media zijn media die helemaal geen eiwitten bevatten, maar uitsluitend niet-eiwitelementen. In vergelijking met media waaraan serum is toegevoegd, bevordert het gebruik van media zonder toegevoegde eiwitten een grotere celproliferatie en eiwitexpressie en maakt het het zuiveren van producten die in een downstream-proces worden gegenereerd eenvoudiger [10-12]. Eiwit is niet opgenomen in formuleringen zoals MEM en RPMI-1640. Indien nodig kan echter een eiwitsupplement worden toegediend.

Kweekmedia en hun basiscomponenten

Commercieel kweekmedium is verkrijgbaar in poeder- of vloeibare vorm en bevat vaak diverse voedingsstoffen, zoals aminozuren, glucose, zouten, vitamines en andere voedingssupplementen. 

De behoefte aan deze componenten verschilt per cellijn, en deze variaties zijn verantwoordelijk voor het grote aantal verschillende samenstellingen van media. Elke component vervult een bepaalde functie, die in de volgende paragrafen wordt beschreven:

Buffersystemen

Om optimale groeiomstandigheden te handhaven, moet de pH worden geregeld, wat vaak gebeurt door middel van een van de twee volgende buffersystemen:

Natuurlijk buffersysteem

De CO₂/H₂CO₃-verhouding in de atmosfeer is gelijk aan die van het medium, waardoor een natuurlijk buffermechanisme ontstaat. Om dit natuurlijke buffermechanisme te behouden, moeten culturen worden gehouden in een luchtomgeving met 5-10% CO₂, wat vaak wordt bereikt door gebruik te maken van een CO₂-incubator. Een van de grootste voordelen van het gebruik van een natuurlijke buffer is dat deze goedkoop en veilig is.

HEPES

Chemische buffering met behulp van het zwitterion HEPES heeft een groter bufferend vermogen in het pH-bereik van 7,2–7,4 en vereist geen gereguleerde gasomgeving. Voor bepaalde celtypen kan een hogere dosis HEPES schadelijk zijn. Media die HEPES bevatten, zijn eveneens veel gevoeliger voor de fototoxische effecten van fluorescentielicht [13].

Fenolrood

De pH-indicator fenolrood wordt vaak toegevoegd aan in de handel verkrijgbare kweekmedia, waardoor de pH continu kan worden gecontroleerd. Naarmate de cellen zich vermenigvuldigen, veroorzaken de door deze cellen geproduceerde metabolieten een verschuiving in de pH en daarmee een kleurverandering van het medium. Fenolrood heeft een dubbel effect op de kleur van het medium: bij een zure pH kleurt het geel en bij een basische pH paars. Bij een pH van 7,4 – de optimale waarde voor celkweek – krijgt het medium een fluorescerende rode kleur.

Maar fenolrood heeft enkele nadelen: ten eerste kan fenolrood de werking van een aantal steroïde hormonen nabootsen, met name oestrogeen [14]. Daarom wordt bij het bestuderen van oestrogeengevoelige cellen, zoals borstweefsel, een medium zonder fenolrood aanbevolen. De natrium-kaliumbalans wordt in verschillende serumvrije formuleringen verstoord door de aanwezigheid van fenolrood. Het toevoegen van serum of runderhypofysehormoon aan de media kan dit effect tegengaan [15]. Ten derde wordt de detectie bij flowcytometrische experimenten belemmerd door de aanwezigheid van fenolrood.

Anorganische zouten

Media die anorganische zouten bevatten, zoals natrium-, kalium- en calciumionen, helpen bij het handhaven van het osmotisch evenwicht en het reguleren van de membraanpotentiaal.

Aminozuren

Aangezien aminozuren de fundamentele bouwstenen van eiwitten zijn, vormen ze een essentieel onderdeel van elk celgroeimedium dat ooit is ontwikkeld. Omdat cellen bepaalde aminozuren niet zelf kunnen aanmaken, is het belangrijk dat het kweekmedium essentiële aminozuren bevat. Ze zijn noodzakelijk voor de celproliferatie, en de concentratie waarin ze aanwezig zijn, bepaalt de maximale celdichtheid die kan worden bereikt. Met name L-glutamine, een essentieel aminozuur, is van cruciaal belang.

L-glutamine fungeert als een secundaire energiebron voor het metabolisme en levert stikstof voor de productie van NAD, NADPH en nucleotiden. Aangezien L-glutamine een onstabiel aminozuur is dat na verloop van tijd verandert in een vorm die cellen niet kunnen benutten, moet het aan het medium worden toegevoegd.

Daarnaast kunnen niet-essentiële aminozuren aan het medium worden toegevoegd om de aminozuren aan te vullen die tijdens het groeiproces zijn verbruikt. De groei van de cellen wordt gestimuleerd en hun levensvatbaarheid neemt toe wanneer het groeimedium wordt aangevuld met niet-essentiële aminozuren.

Koolhydraten

Koolhydraten in de vorm van suikers vormen de belangrijkste energiebron. Veel media bevatten naast de meer gangbare suikers glucose en galactose ook maltose en fructose.

Eiwitten en peptiden

Albumine, transferrine en fibronectine zijn de meest gebruikte eiwitten en peptiden. Ze zijn vooral van belang in media die geen serum bevatten. Albumine, transferrine, aprotinine, fetuine en fibronectine zijn enkele van de eiwitten die in serum kunnen worden aangetroffen, dat een rijke bron van eiwitten is.

Albumine is het belangrijkste eiwit in het bloed en heeft als functie het binden en transporteren van diverse stoffen, waaronder water, zouten, vrije vetzuren, hormonen en vitamines, tussen verschillende organen en cellen. Het vermogen van albumine om zich aan chemische stoffen te binden, maakt het een geschikte kandidaat voor het verwijderen van schadelijke verbindingen uit het medium waarin cellen worden gekweekt.

Aprotinine is een beschermend middel in celkweeksystemen, aangezien het stabiel is bij een neutrale en zure pH, en bovendien bestand is tegen hoge temperaturen en de afbraak die kan worden veroorzaakt door proteolytische enzymen. Het is in staat om een aantal serineproteasen te remmen, waaronder onder andere trypsine.

Fetuïne is een glycoproteïne dat in hogere concentraties kan worden aangetroffen in het serum van foetale en pasgeboren dieren in vergelijking met serum van volwassen dieren. Daarnaast fungeert het als een serineproteaseremmer. Het eiwit fibronectine is een essentieel onderdeel van het proces van celadhesie. Transferrine is een eiwit dat ijzer transporteert en verantwoordelijk is voor de afgifte van ijzer aan de celmembranen.

Vetzuren en lipiden

Ze spelen een cruciale rol in serumvrij medium wanneer er geen serum aanwezig is.

Vitaminen

Talrijke vitamines zijn noodzakelijk voor de celontwikkeling en -proliferatie. Vitamines kunnen niet in voldoende hoeveelheden door cellen worden aangemaakt en zijn daarom in weefselcultuur onmisbaar als voedingssupplementen.

In celcultuur is serum de belangrijkste bron van vitamines; media worden echter ook verrijkt met diverse vitamines om ze geschikt te maken voor een specifiek celtype. Meestal worden de vitamines uit de B-groep gebruikt om de celgroei te stimuleren.

Sporenelementen

Chemische elementen zoals koper, zink, selenium en tricarbonzuur-tussenproducten staan bekend als sporenelementen. Sporenelementen worden vaak toegevoegd aan media die geen serum bevatten, ter vervanging van de elementen die doorgaans in serum aanwezig zijn. Deze elementen zijn belangrijke chemische componenten die nodig zijn voor een gezonde celontwikkeling. Veel biochemische reacties zijn afhankelijk van bepaalde micronutriënten, zoals enzymactiviteit.

Mediumsupplementen

Het volledige groeimedium dat voor bepaalde cellijnen wordt aanbevolen, heeft extra componenten nodig die ontbreken in de basismedia en het serum. Deze voedingssupplementen ondersteunen de celgroei en een goede stofwisseling.

Hoewel hormonen, groeifactoren en signaalmoleculen essentieel zijn voor de juiste proliferatie van bepaalde cellijnen, moeten altijd de volgende voorzorgsmaatregelen worden genomen: Aangezien de toevoeging van supplementen de osmolaliteit van het volledige groeimedium kan veranderen, wat de celontwikkeling kan remmen, is het altijd raadzaam om de osmolaliteit te controleren na het toevoegen van supplementen. Voor de meeste cellijnen ligt de optimale osmolaliteit tussen 260 en 320 mOSM/kg.

Antibiotica

Antibiotica worden vaak ingezet om de groei van bacteriële en schimmelverontreinigingen te remmen [16], hoewel ze niet essentieel zijn voor de celgroei. Aangezien antibiotica besmetting met mycoplasma en resistente bacteriën kunnen maskeren, wordt routinematig gebruik ervan bij celculturen afgeraden [17, 18].

Bovendien kunnen antibiotica het metabolisme van overgevoelige cellen verstoren. De penicilline-streptomycine-combinaties van MilliporeSigma en Life Technologies worden vaak gebruikt. Plasmocin is gebruikt bij de kweek van de glioomcellijnen TS603, TS516 en BT260 [19], en is effectief gebleken bij het verwijderen van mycoplasma-besmetting (20).

Serum

Albumine, groeifactoren en groeiremmers zijn allemaal aanwezig in serum. Serum is een van de belangrijkste componenten van celkweekmedium omdat het aminozuren, eiwitten, vitamines (met name in vet oplosbare vitamines zoals A, D, E en K), koolhydraten, lipiden, hormonen, groeifactoren, mineralen en sporenelementen levert.

Serum afkomstig van foetussen en kalveren wordt vaak gebruikt om de ontwikkeling van gekweekte cellen te bevorderen. Foetaal serum is een rijke bron van groeifactoren en is geschikt voor het klonen van cellen en de ontwikkeling van gevoelige cellen. Vanwege zijn verminderde groeibevorderende eigenschappen wordt kalfsserum gebruikt in contactinhibitie-experimenten. Normale kweekmedia bevatten vaak 2% tot 10% serum. De toevoeging van serum aan kweekmedium dient de volgende doelen [21]:

  • Het serum levert de essentiële voedingsstoffen voor cellen (zowel in oplossing als gebonden aan eiwitten).

  • Serum bevat verschillende groeifactoren en hormonen die betrokken zijn bij groeibevordering en gespecialiseerde celactiviteit.

  • Het biedt talrijke bindende eiwitten, zoals albumine en transferrine, die andere stoffen naar de cel transporteren. Albumine brengt bijvoorbeeld vetten, vitamines, hormonen enz. naar de cellen.

  • Het levert ook eiwitten, zoals fibronectine, die de celhechting aan het substraat vergroten. Daarnaast produceert het spreidingselementen die helpen bij de celuitbreiding vóór de deling.

  • Het levert proteaseremmers die proteolyse in cellen voorkomen.

  • Het bevat ook mineralen zoals Na+, K+, Zn2+ en Fe2+.

  • Het verhoogt de viscositeit van het medium, waardoor de cellen worden beschermd tegen mechanische beschadiging tijdens het roeren van de suspensiecultuur.

  • Het fungeert tevens als buffer.

Referenties

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Voeding van dierlijke cellen in weefselkweek; eerste onderzoeken naar een synthetisch medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Snelle adsorptie van een component van foetaal kalfsserum door zoogdiercellen in kweek. Een mogelijke bron van artefacten in onderzoeken naar antiserum tegen celspecifieke antigenen. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Toevoeging van serum aan het medium dat wordt gebruikt voor de bereiding van celsuspensies als mogelijke bron van artefacten bij celgemedieerde reacties, onderzocht met behulp van de popliteale lymfeklierproef. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Commerciële serumvrije media: groei van hybridomen en productie van monoklonale antilichamen. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Methoden voor de kweek van gekweekte cellen in serumvrij medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. HSP70 begeleidt RNA-vrij TDP-43 naar anisotrope intranucleaire vloeibare bolvormige schillen. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. Door het Down-syndroom geïnduceerde senescentie verstoort de nucleaire architectuur van neurale voorlopercellen. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Volledige vervanging van serum door albumine, transferrine en sojalipiden in culturen van lipopolysaccharide-reactieve B-lymfocyten. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematische verbetering van een chemisch gedefinieerd eiwitvrij medium voor de groei van hybridomen en de productie van monoklonale antilichamen. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Een eiwitvrij medium voor de groei van hybridomen en andere cellen van het immuunsysteem. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Serumvrije celkweek: een uniforme aanpak. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Klonale groei van Chinese hamstercellijnen in eiwitvrije media. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analyse van de cytotoxische effecten van aan licht blootgesteld HEPES-bevattend kweekmedium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolrood in weefselkweekmedia is een zwak oestrogeen: implicaties voor het onderzoek naar oestrogeen-responsieve cellen in kweek. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Ontwikkeling van serumvrije media. In: Master JRW, red. Animal Cell culture, 3e druk. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Het gebruik van antibiotica in celkweekmedia. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Verspreiding en bestrijding van mycoplasma-infecties in celculturen. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Het verversen van medium en het passeren van cellijnen. Nat Protoc. 2007;2:2276-84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Histon-demethylase KDM6A detecteert zuurstof direct om het chromatine en het lot van de cel te regelen. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. De werkzaamheid van Plasmocin™ op diverse zoogdiercellijnen die zijn geïnfecteerd met mollicutes, vergeleken met veelgebruikte antibiotica in celcultuur: een lokale ervaring. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Moleculaire aspecten van ligandbinding aan serumalbumine. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53