Prejsť na obsah

Médiá a reagencie

40 výrobky

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

bez DPH a poštovného

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

bez DPH a poštovného

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

bez DPH a poštovného

DMEM:Ham's F12 (1:1), hmotnostný podiel: 3,1 g/l glukózy, hmotnostný podiel: 2,5 mM L-glutamínu, hmotnostný podiel: 15 mM HEPES, hmotnostný podiel: 0,5 mM pyruvátu sodného, hmotnostný podiel: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 je všeobecne uznávané a široko používané základné médium v bunkových kultúrach pre biologický výskum. Slúži ako základný zdroj živín pre rast rôznych línií cicavčích buniek, najmä ak je doplnené o fetálne hovädzie sérum (FBS). Toto jedinečné zloženie kombinuje Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) a Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v presnom pomere 1:1. Pridanie L-glutamínu ďalej vylepšuje jeho zloženie. DMEM, odvodené od Eagleovho minimálneho esenciálneho média (EMEM), ponúka v porovnaní so svojím predchodcom zvýšenú koncentráciu aminokyselín a vitamínov. Naopak, Hamovo F-12 vychádza z Hamovho F-10 média a poskytuje doplnkový súbor esenciálnych zložiek. Na podporu optimálneho rastu buniek je bežnou praxou dopĺňať DMEM:Ham's F12 o FBS v typickej koncentrácii 5–10 %. Toto doplnenie je nevyhnutné, pretože médiu chýbajú rastové hormóny, lipidy a bielkoviny, ktoré sú kľúčové pre vývoj buniek. DMEM:Ham's F12 obsahuje systém pH pufrov a často sa doň pridáva fenolová červená, indikátor pH. Kultivované bunky v DMEM:Ham's F12 alebo v akomkoľvek médiu využívajúcom bikarbonátový pufrový systém vyžadujú kontrolované prostredie s obsahom CO₂ v rozmedzí 5–10 %, aby sa udržali primerané hodnoty pH. Kontrola kvality • Sterilne filtrované Skladovanie a trvanlivosť • Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom. • Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6–8 týždňov. Prepravné podmienky • Okolitá teplota Uchovávanie • Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Vyhnite sa zmrazeniu a častému otepľovaniu na +37 °C, pretože to znižuje kvalitu produktu. • Nezahrievajte médium nad 37 °C a nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, ako sú mikrovlnné rúry. • Ak sa má použiť len časť média, odoberte potrebné množstvo a pred použitím ho zahrejte na izbovú teplotu. Zloženie Kategória Zložky Koncentrácia (mg/l) Aminokyseliny Glycín 18,75 L-alanín 4,45 L-arginín HCl 147,50 L-asparagín H₂O 7,50 Kyselina L-asparagová 6,65 L-cysteín HCl H₂O 17,56 L-cystín 2 HCl 31,29 Kyselina L-glutámová 7,35 L-glutamín 365,00 L-histidín HCl H₂O 31,48 L-izoleucín 54,47 L-leucín 59,05 L-lyzín HCl 91,25 L-metionín 17,24 L-fenylalanín 35,48 L-prolín 17,25 L-serín 26,25 L-treonín 53,45 L-tryptofán 9,02 L-tyrozín 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valín 52,85 Vitamíny D-biotín 0,0035 Cholínchlorid 8,98 D-pantotenát vápenatý 2,24 Kyselina listová 2,66 myo-inozitol 12,60 Nikotínamid 2,02 Pyridoxín HCl 0,031 Pyridoxal HCl 2,00 Riboflavín 0,219 Tiamín HCl 2,17 Vitamín B12 0,68 Anorganické soli CaCl₂·2 H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄·7H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Ostatné zložky D-glukóza 3151,00 Hypoxantín 2,40 HEPES 3574,50 Kyselina linolová 0,042 Kyselina lipoová 0,105 Fenolová červená, sodná soľ 8,63 Putrescín 2 HCl 0,081 Pyruvát sodný 55,00 Tymidín 0,365

€25.00

bez DPH a poštovného

DMEM, hmotnostný podiel: 4,5 g/l glukózy, hmotnostný podiel: 4 mM L-glutamínu, hmotnostný podiel: 3,7 g/l NaHCO₃, hmotnostný podiel: 1,0 mM pyruvátu sodného

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) je veľmi univerzálne a široko používané bazálne médium určené na podporu rastu širokého spektra cicavčích buniek v biologickom výskume. Slúži ako ideálne médium na kultiváciu primárnych fibroblastov, neurónov, gliových buniek, HUVEC, buniek hladkého svalstva, ako aj populárnych bunkových línií, ako sú HeLa, 293, Cos-7 a PC-12. To, čo odlišuje DMEM od iných médií, je jeho jedinečné zloženie. Obsahuje až štvornásobne vyššiu koncentráciu aminokyselín a vitamínov v porovnaní s pôvodným Eagleovým minimálnym esenciálnym médiom (Eagle's Minimal Essential Medium). Hoci bolo pôvodne vyvinuté s nízkym obsahom glukózy (1 g/l) a pyruvátom sodným, DMEM sa často používa s vyššou hladinou glukózy, a to buď s pyruvátom sodným, alebo bez neho. Je potrebné poznamenať, že DMEM neobsahuje bielkoviny, lipidy ani rastové faktory, čo si vyžaduje jeho doplnenie. Na dosiahnutie optimálneho rastu sa bežne používa doplnenie DMEM o 10 % fetálneho bovinného séra (FBS). Okrem toho DMEM využíva pufrovací systém na báze hydrogenuhličitanu sodného, ktorý na udržanie fyziologického pH vyžaduje prostredie s obsahom 5–10 % CO₂. Dulbeccovo modifikované Eagleovo médium (DMEM) je medzi definovanými médiami pre kultiváciu buniek a tkanív vysoko cenené, keďže spĺňa požiadavky na rast rôznych fenotypov adhezívnych buniek. Prekonáva pôvodné Eagleovo médium, vyvinuté v 50. rokoch 20. storočia na kultiváciu kuracích buniek, vďaka vylepšenému doplnkovému zloženiu známemu ako Dulbeccova modifikácia. Táto modifikácia výrazne zvyšuje obsah vybraných aminokyselín a vitamínov až štvornásobne v porovnaní s pôvodným médiom. V oblasti bunkovej kultúry zohráva DMEM kľúčovú úlohu ako rastové médium pre rôzne typy buniek, vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a transformovaných buniek. Výskumníci tiež využívajú modifikovanú verziu DMEM pre širokú škálu výskumných aplikácií, ako je vývoj liekov, tkanivové inžinierstvo a štúdium bunkových signálnych dráh. Kontrola kvality • Sterilne filtrované Skladovanie a trvanlivosť • Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom. • Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6–8 týždňov. Prepravné podmienky • Okolitá teplota Uchovávanie • Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Vyhnite sa zmrazeniu a častému otepľovaniu na +37 °C, pretože to znižuje kvalitu produktu. • Nezahrievajte médium nad 37 °C a nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, ako sú mikrovlnné rúry. • Ak sa má použiť len časť média, odoberte potrebné množstvo a pred použitím ho zahrejte na izbovú teplotu. Zloženie Kategória Zložky Koncentrácia (mg/l) Aminokyseliny Glycín 30,00 L-arginín HCl 84,00 L-cystín 2 HCl 62,57 L-glutamín 584,00 L-histidín HCl H₂O 42,00 L-izoleucín 105,00 L-leucín 105,00 L-lyzín HCl 146,00 L-metionín 30,00 L-fenylalanín 66,00 L-serín 42,00 L-treonín 95,00 L-tryptofán 16,00 L-tyrozín 2 Na 2H₂O 103,79 L-valín 94,00 Vitamíny Cholínchlorid 4,00 D-pantotenát vápenatý 4,00 Kyselina listová 4,00 myo-inozitol 7,20 Nikotínamid 4,00 Pyridoxal HCl 4,00 Riboflavín 0,40 Tiamín HCl 4,00 Anorganické soli CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Ostatné zložky D-glukóza 4500,00 Fenolová červená, sodná soľ 15,90 Pyruvát sodný 110,00

€25.00

bez DPH a poštovného

EMEM (MEM Eagle), obsah: 2 mM L-glutamínu, obsah: 2,2 g/l NaHCO₃, obsah: EBSS

Eagleovo minimálne esenciálne médium (EMEM) je jedným z najčastejšie používaných bazálnych médií na kultiváciu širokého spektra cicavčích buniek, najmä adhezívnych bunkových línií. Toto klasické zloženie, pôvodne vyvinuté Harrym Eaglom, obsahuje esenciálne aminokyseliny, vitamíny a anorganické soli potrebné na podporu rastu primárnych buniek aj etablovaných bunkových línií za štandardných kultivačných podmienok. Táto pripravená na použitie, sterilne filtrovaná tekutá zmes je doplnená o Earleho vyvážený soľný roztok (EBSS), 2 mM L-glutamínu, D-glukózy (1,0 g/l) a 2,2 g/l hydrogenuhličitanu sodného (NaHCO₃), vďaka čomu je vhodné na použitie v atmosfére inkubátora s regulovaným obsahom CO₂ (zvyčajne 5 % CO₂). Súčasťou prípravku je fenolová červená, ktorá slúži ako indikátor pH, čo umožňuje pohodlné vizuálne sledovanie stavu kultivačného média počas kultivácie buniek. Kľúčové vlastnosti • Klasické zloženie Eagle’s MEM s Earleho vyváženým soľným roztokom (EBSS) • Obsahuje 2 mM L-glutamínu – pripravené na okamžité použitie • 2,2 g/l hydrogenuhličitanu sodného – pufrované pre inkubáciu pri 5 % CO₂ • S D-glukózou (1,0 g/l) ako primárnym zdrojom uhlíka • S fenolovou červenou ako indikátorom pH • Bez HEPES a bez pyruvátu sodného • Sterilne filtrované tekuté médium, pripravené na použitie • pH 7,0 – 7,6 Typické použitie EMEM podporuje kultiváciu širokej škály cicavčích bunkových línií, vrátane HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 a mnohých primárnych buniek. Medzi bežné použitia patria: • Rutinnú údržbu a expanziu adhezívnych bunkových línií • Pracovné postupy pri šírení vírusov a výrobe vakcín • Aplikácie v oblasti cytotoxicity a biologických testov • Štúdie transfekcie a expresie proteínov • Základný výskum v oblasti bunkovej a molekulárnej biológie Pre optimálny rast buniek sa EMEM zvyčajne dopĺňa 5–10 % fetálnym bovinným sérom (FBS) a v závislosti od bunkovej línie aj neesenciálnymi aminokyselinami (NEAA) a antibiotikami, ako je penicilín/streptomycín. Manipulácia a skladovanie Neotvorenú fľašu skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránenú pred svetlom. Po otvorení používajte za aseptických podmienok. L-glutamín v roztoku podlieha postupnej degradácii – pre dosiahnutie najlepších výsledkov odporúčame médium spotrebovať do 4 týždňov od otvorenia alebo v prípade dlhšieho skladovania ho pred použitím doplniť čerstvým L-glutamínom. Pred pridaním k bunkám nechajte médium zohriať na 37 °C. Kvalita Vyrobené podľa prísnych noriem kvality. Každá šarža je testovaná na sterilitu, pH, osmolalitu a hladiny endotoxínov, aby sa zabezpečil konzistentný výkon pri aplikáciách v bunkových kultúrach. Špecifikácie produktu Špecifikácia Podrobnosti Typ produktuMEM Kategória produktuMédiá pre bunkovú kultúru FormátTekuté SterilnéÁno Veľkosť500 ml L-glutamínS obsahom L-glutamínu (2 mM) GlukózaS glukózou (1,0 g/l) Hydrogénuhličitan sodnýS NaHCO₃ (2,2 g/l) HEPESBez HEPES Pyruvát sodnýBez pyruvátu sodného Fenolová červenáS fenolovou červenou Soľný roztokEarleho vyvážený soľný roztok (EBSS) pH7,0 – 7,6 Obsah endotoxínovNešpecifikované Skladovanie+2 °C až +8 °C Zloženie (zloženie na liter)

€25.00

bez DPH a poštovného

Mrazové médium CM-1 – 100 ml

Freeze Medium CM-1 od spoločnosti Cytion je najmodernejšie kryokonzervačné médium navrhnuté tak, aby zabezpečilo najvyššiu úroveň životaschopnosti a funkčnosti buniek po rozmrazení. Toto univerzálne médium je vhodné pre široké spektrum typov buniek, vrátane ľudských aj zvieracích buniek, čo z neho robí nevyhnutný nástroj pre rôznorodé výskumné aplikácie. Vďaka starostlivo vyváženému zloženiu kryoprotektantov a esenciálnych živín Freeze Medium CM-1 minimalizuje tvorbu ľadových kryštálov a bunkový stres počas procesu zmrazovania, čím zachováva integritu buniek. Kľúčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 zahŕňajú: • Široká kompatibilita: Účinné pre širokú škálu typov buniek, vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a etablovaných bunkových línií. • Vysoká životaschopnosť: Optimalizované na maximalizáciu regenerácie a životaschopnosti buniek po rozmrazení, čím sa zabezpečujú spoľahlivé výsledky experimentov. • Pripravené na použitie: Pohodlne pripravené a sterilizované na okamžité použitie, čím sa skracuje čas prípravy a znižuje riziko kontaminácie. • Zvýšená stabilita: Udržuje konzistentný výkon za štandardných podmienok kryokonzervácie, čím zabezpečuje reprodukovateľné výsledky. • Dlhá trvanlivosť: CM-1 je kryokonzervačné médium obsahujúce sérum, pripravené na okamžité použitie, ktoré možno skladovať v chladničke až jeden rok. Použitie CM-1 na zmrazenie buniek Ak chcete použiť CM-1 na zmrazenie adhezívnych aj suspenzných buniek, postupujte podľa týchto krokov: • V prípade adhezívnych buniek ich premyte a oddeľte od kultivačného substrátu. V prípade suspenzných buniek prejdite priamo k ďalšiemu kroku. • Zrátajte bunky, aby ste sa uistili, že majú správnu koncentráciu. • Bunky odstreďte, aby sa usadili na dno, a potom ich resuspendujte v kryokonzervačnom médiu CM-1. • Resuspendované bunky preneste do kryovialiek. • Pred premiestnením buniek do dlhodobého skladovania použite metódu pomalého zmrazovania. Metóda Popis Kroky ❄️ Ručné zmrazenie Postup krok za krokom zahŕňajúci postupné znižovanie teploty s cieľom zabezpečiť životaschopnosť buniek. 1️⃣ Umístite bunky v mraziacom médiu do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minút. 2️⃣ Preložte do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodín. 3️⃣ Bunky uchovávajte v tekutom dusíku na dlhodobé uchovanie. ❄️ Použitie zariadenia Mr. Frosty Praktické zariadenie, ktoré umožňuje kontrolovať rýchlosť zmrazovania bez potreby elektrickej energie. 1️⃣ Pripravte bunky v kryovialkách s mraziacim médiom. 2️⃣ Vložte kryovialky do nádoby Mr. Frosty. 3️⃣ Skladujte pri teplote -80 °C po dobu 24 hodín pred presunutím do tekutého dusíka. ❄️ Mraznička s kontrolovanou rýchlosťou Vysoko presná mraznička od spoločnosti Thermo Fisher alebo iných výrobcov určená na kontrolované znižovanie teploty. 1️⃣ Naprogramujte zariadenie tak, aby postupne znižovalo teplotu. 2️⃣ Vložte pripravené bunky do mrazničky. 3️⃣ Po ukončení mraziaceho cyklu preneste bunky do tekutého dusíka. • Kryovialy skladujte pri teplotách pod -130 °C alebo v tekutom dusíku na dlhodobé uchovávanie. Zložky • Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli • Pufrovacia kapacita: pH = 7,2 až 7,6 Mrazové médium CM-1 od spoločnosti Cytion ponúka spoľahlivé riešenie pre kryokonzerváciu, ktoré zabezpečuje vysokú životaschopnosť a funkčnosť buniek po rozmrazení pre širokú škálu výskumných aplikácií.

€99.00

bez DPH a poštovného

Mrazové médium CM-1 – 50 ml

Freeze Medium CM-1 od spoločnosti Cytion je najmodernejšie kryokonzervačné médium navrhnuté tak, aby zabezpečilo najvyššiu úroveň životaschopnosti a funkčnosti buniek po rozmrazení. Toto univerzálne médium je vhodné pre široké spektrum typov buniek, vrátane ľudských aj zvieracích buniek, čo z neho robí nevyhnutný nástroj pre rôznorodé výskumné aplikácie. Vďaka starostlivo vyváženému zloženiu kryoprotektantov a esenciálnych živín Freeze Medium CM-1 minimalizuje tvorbu ľadových kryštálov a bunkový stres počas procesu zmrazovania, čím zachováva integritu buniek. Kľúčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 zahŕňajú: • Široká kompatibilita: Účinné pre širokú škálu typov buniek, vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a etablovaných bunkových línií. • Vysoká životaschopnosť: Optimalizované na maximalizáciu regenerácie a životaschopnosti buniek po rozmrazení, čím sa zabezpečujú spoľahlivé výsledky experimentov. • Pripravené na použitie: Pohodlne pripravené a sterilizované na okamžité použitie, čím sa skracuje čas prípravy a znižuje riziko kontaminácie. • Zvýšená stabilita: Udržuje konzistentný výkon za štandardných podmienok kryokonzervácie, čím zabezpečuje reprodukovateľné výsledky. • Dlhá trvanlivosť: CM-1 je kryokonzervačné médium obsahujúce sérum, pripravené na okamžité použitie, ktoré možno skladovať v chladničke až jeden rok. Použitie CM-1 na zmrazenie buniek Ak chcete použiť CM-1 na zmrazenie adhezívnych aj suspenzných buniek, postupujte podľa týchto krokov: • V prípade adhezívnych buniek ich premyte a oddeľte od kultivačného substrátu. V prípade suspenzných buniek prejdite priamo k ďalšiemu kroku. • Zrátajte bunky, aby ste sa uistili, že majú správnu koncentráciu. • Bunky odstreďte, aby sa usadili na dno, a potom ich resuspendujte v kryokonzervačnom médiu CM-1. • Resuspendované bunky preneste do kryovialiek. • Pred premiestnením buniek do dlhodobého skladovania použite metódu pomalého zmrazovania. Metóda Popis Kroky ❄️ Ručné zmrazenie Postup krok za krokom zahŕňajúci postupné znižovanie teploty s cieľom zabezpečiť životaschopnosť buniek. 1️⃣ Umístite bunky v mraziacom médiu do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minút. 2️⃣ Preložte do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodín. 3️⃣ Bunky uchovávajte v tekutom dusíku na dlhodobé uchovanie. ❄️ Použitie zariadenia Mr. Frosty Praktické zariadenie, ktoré umožňuje kontrolovať rýchlosť zmrazovania bez potreby elektrickej energie. 1️⃣ Pripravte bunky v kryovialkách s mraziacim médiom. 2️⃣ Vložte kryovialky do nádoby Mr. Frosty. 3️⃣ Skladujte pri teplote -80 °C po dobu 24 hodín pred presunutím do tekutého dusíka. ❄️ Mraznička s kontrolovanou rýchlosťou Vysoko presná mraznička od spoločnosti Thermo Fisher alebo iných výrobcov určená na kontrolované znižovanie teploty. 1️⃣ Naprogramujte zariadenie tak, aby postupne znižovalo teplotu. 2️⃣ Vložte pripravené bunky do mrazničky. 3️⃣ Po ukončení mraziaceho cyklu preneste bunky do tekutého dusíka. • Kryovialy skladujte pri teplotách pod -130 °C alebo v tekutom dusíku na dlhodobé uchovávanie. Zložky • Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli • Pufrovacia kapacita: pH = 7,2 až 7,6 Mrazové médium CM-1 od spoločnosti Cytion ponúka spoľahlivé riešenie pre kryokonzerváciu, ktoré zabezpečuje vysokú životaschopnosť a funkčnosť buniek po rozmrazení pre širokú škálu výskumných aplikácií.

€59.00

bez DPH a poštovného

Hamovo médium F12K, obsah: 2,0 mM L-glutamínu, obsah: 2,0 mM pyruvátu sodného, obsah: 2,5 g/l NaHCO₃

Predstavujeme Hamovo médium F-12K (Kaighnovo), špecializovanú modifikáciu Hamovho média F-12, navrhnutú tak, aby spĺňala špecifické požiadavky biologického výskumu. Toto pokrokové médium ponúka výrazné výhody a zlepšuje kultiváciu primárnych ľudských hepatocytov, ako aj pečeňových buniek potkanov a kurčiat, najmä v podmienkach so zníženým obsahom séra. Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) je starostlivo vyvinuté s cieľom optimalizovať podmienky kultivácie buniek. Vyznačuje sa obohateným zložením, ktoré poskytuje zvýšené hladiny esenciálnych zložiek, ako sú aminokyseliny a pyruvát sodný, ako aj ďalších prvkov vrátane putrescínu, tymidínu, hypoxantínu a zinku. Tieto prísady umožňujú výskumníkom doplniť médium minimálnym množstvom séra alebo definovanými zložkami pre špecifické typy buniek, čím sa uľahčuje dosiahnutie presných experimentálnych podmienok. Je potrebné poznamenať, že Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) neobsahuje bielkoviny ani rastové faktory. V dôsledku toho je často potrebné doplniť rastové faktory a fetálne bovinné sérum (FBS), čo umožňuje výskumníkom prispôsobiť médium požiadavkám ich konkrétnych bunkových línií. Pre dosiahnutie optimálnych výsledkov je potrebné starostlivo optimalizovať koncentráciu FBS pre každú bunkovú líniu, čím sa zabezpečí optimálny rast a funkčnosť buniek. Na udržanie fyziologického pH sa v médiu Ham's F-12K (Kaighn's) používa pufrovací systém na báze hydrogenuhličitanu sodného (2,5 g/l), čo si počas kultivácie vyžaduje kontrolované prostredie s obsahom 5–10 % CO₂. Tým sa zabezpečí, že pH média zostane v ideálnom rozmedzí pre rast a životaschopnosť buniek. Kontrola kvality • pH = 7,2 ± 0,02 pri 20–25 °C. • Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií. Skladovanie • Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C na tmavom mieste. Zmrazenie, ako aj ohriatie na teplotu až +37 °C znižujú kvalitu produktu. • Nezahrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné rúry). • Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a nechajte ho zohriať na izbovú teplotu. • Skladovateľnosť všetkých médií okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby. Zloženie Zložky mg/l Anorganické soli Chlorid vápenatý x 2H₂O 135,24 Síran meďnatý (II) x 5H₂O 0,00 Síran železnatý x 7H₂O 0,83 Chlorid horečnatý x 6H₂O 105,72 Síran horečnatý x 7H₂O 394,49 Chlorid draselný 283,29 Dihydrogénfosforečnan draselný 58,52 Chlorid sodný 7597,20 bezvodý di-hydrogénfosforečnan sodný 115,02 Síran zinočnatý x 7H₂O 0,14 Ostatné zložky D(+)-glukóza bezvodá 1260,00 Hypoxantín 4,08 Kyselina DL-α-lipoová 0,21 Fenolová červená 3,00 Putrescín x 2HCl 0,32 Pyruvát sodný 220,00 NaHCO₃ 2500,00 Tymidín 0,73 Aminokyseliny L-alanín 17,82 L-arginín x HCl 421,40 L-asparagín x H₂O 30,02 Kyselina L-asparagová 26,62 L-cysteín x HCl x H₂O 70,24 L-glutamín 292,20 Kyselina L-glutámová 29,42 Glycín 15,01 L-histidín x HCl x H₂O 41,92 L-izoleucín 7,87 L-leucín 26,24 L-lyzín x HCl 73,04 L-metionín 8,95 L-fenylalanín 9,91 L-prolín 69,06 L-serín 21,02 L-treonín 23,82 L-tryptofán 4,08 L-tyrozín 10,87 L-valín 23,42 Vitamíny D(+)-biotín 0,07 D-pantotenát vápenatý 0,48 Cholínchlorid 13,96 Kyselina listová 1,32 myo-inozitol 18,02 Nikotínamid 0,04 Pyridoxín x HCl 0,06 Riboflavín 0,04 Tiamín x HCl 0,34 Vitamín B12 1,36

€108.00

bez DPH a poštovného

Hamovo médium F12, obsah: 1,0 mM stabilného glutamínu, obsah: 1,0 mM pyruvátu sodného, obsah: 1,176 g/l NaHCO₃

Hamovo médium F-12, známe aj ako Hamova živná zmes F-12, je široko používané základné médium určené špeciálne pre bunkové kultúry. Rozsiahlo sa využíva na bezsérumové kultivovanie jednotlivých buniek z vaječníkov čínskeho škrečka (CHO), pľúcnych buniek a myších L-buniek. Okrem toho je Ham's F-12 preferovaným médiom pre test klonálnej toxicity (CTA). Jednou z jeho významných výhod je schopnosť podporovať rast buniek bez potreby dopĺňania séra. Tým sa eliminuje potenciálny vplyv zložiek séra, čo zaručuje konzistentné a spoľahlivé výsledky experimentov. Vďaka bezsérovému kultivačnému prostrediu poskytuje médium Ham's F-12 výskumníkom väčšiu kontrolu nad ich výskumom. Ďalšou kľúčovou vlastnosťou kultivačného média Ham's F-12 je jeho vhodnosť na kultiváciu jednotlivých buniek. Vďaka tomu je vynikajúcou voľbou pre širokú škálu bunkových línií, vrátane buniek CHO, pľúcnych buniek a myších L-buniek. Optimalizované zloženie živín v médiu uľahčuje efektívne priľnutie a rast jednotlivých buniek, čo umožňuje vytvorenie homogénnych bunkových kultúr s lepšou reprodukovateľnosťou. Okrem toho sa médium Ham's F-12 presadilo ako preferované médium pre test klonálnej toxicity (CTA). Tento test zohráva kľúčovú úlohu pri hodnotení cytotoxických účinkov látok na bunky. Využitím média Ham's F-12 v teste CTA môžu výskumníci presne vyhodnotiť vplyv rôznych zlúčenín alebo ošetrení na jednotlivé bunky, čím získajú cenné poznatky o toxikologických profiloch. Kontrola kvality • pH = 7,2 ± 0,02 pri 20–25 °C. • Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií. Skladovanie • Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C na tmavom mieste. Zmrazenie a ohrievanie na teplotu až +37 °C znižujú kvalitu produktu. • Nezahrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné rúry). • Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a nechajte ho zohriať na izbovú teplotu. • Doba použiteľnosti všetkých médií s výnimkou základného média je 8 týždňov od dátumu výroby. Zloženie Zložky mg/l Anorganické soli Chlorid vápenatý x 2H₂O 44,00 Síran meďnatý (II) x 5H₂O 0,00 Síran železnatý x 7H₂O 0,83 Chlorid horečnatý x 6H₂O 122,00 Chlorid draselný 223,65 Chlorid sodný 7599,00 bezvodý hydrogénfosforečnan disodný 142,04 Síran zinočnatý x 7H₂O 0,86 Ostatné zložky D(+)-glukóza bezvodá 1801,60 Hypoxantín 4,08 Kyselina linolová 0,08 Kyselina DL-α-lipoová 0,21 Fenolová červená 1,20 Putrescín x 2HCl 0,16 Pyruvát sodný 110,00 Tymidín 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminokyseliny L-alanín 8,91 L-arginín x HCl 210,70 L-asparagín x H₂O 15,01 Kyselina L-asparagová 13,31 L-cysteín x HCl x H₂O 35,12 L-alanyl-L-glutamín 217,30 Kyselina L-glutámová 14,71 Glycín 7,51 L-histidín x HCl x H₂O 20,96 L-izoleucín 3,94 L-leucín 13,12 L-lyzín x HCl 36,54 L-metionín 4,48 L-fenylalanín 4,96 L-prolín 34,53 L-serín 10,51 L-treonín 11,91 L-tryptofán 2,04 L-tyrozín 5,44 L-valín 11,71 Vitamíny D(+)-biotín 0,01 D-pantotenát vápenatý 0,24 Cholínchlorid 13,96 Kyselina listová 1,32 myo-inozitol 18,02 Nikotínamid 0,04 Pyridoxín x HCl 0,06 Riboflavín 0,04 Tiamín x HCl 0,34 Vitamín B12 1,36

€25.00

bez DPH a poštovného

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

bez DPH a poštovného

Kultivačné médiá: Prehľad

V oblasti prírodných vied patrí medzi najdôležitejšie metodiky kultivácia buniek. Pod pojmom „kultivácia buniek“ sa rozumie odber buniek, tkanív alebo orgánov zo zvieraťa alebo rastliny a ich následná implantácia do umelého prostredia, ktoré je priaznivé pre ich prežitie a/alebo rast. Základnými environmentálnymi požiadavkami pre optimálny vývoj buniek sú kontrolovaná teplota, substrát pre priľnutie buniek, vhodné kultivačné médium a inkubátor, ktorý udržiava optimálne pH a osmolalitu. Bunky musia mať tieto podmienky, aby mohli rásť na plný potenciál.

Výber vhodného rastového média pre kultiváciu in vitro je fázou v bunkovej kultúre, ktorá je zároveň najkritickejšia aj najdôležitejšia. Rastové médium, známe aj ako kultivačné médium, je kvapalina alebo gél vyvinutý na podporu vývoja organizmov v mikroskopickom, bunkovom alebo rastlinnom meradle. Médium používané na kultiváciu buniek často obsahuje dostatočný prísun energie a látok, ktoré regulujú bunkový cyklus. Medzi hlavné zložky kultivačného média patria aminokyseliny, vitamíny, anorganické soli, glukóza a sérum. Sérum sa do média pridáva, pretože slúži ako zdroj rastových faktorov, hormónov a adhéznych faktorov. Okrem dodávania živín prispieva médium aj k udržiavaniu úrovne pH a osmolality.

Druhy médií používaných v bunkovej kultúre

Ľudské aj živočíšne bunky je možné kultivovať buď v umelom alebo syntetickom médiu, alebo v úplne prírodnom médiu, ktoré je doplnené prírodnými prvkami. V nasledujúcom texte vám poskytneme prehľad rôznych typov médií, ktoré sú v súčasnosti k dispozícii.

Prírodné kultivačné médiá

V prírodných médiách sa nachádzajú iba biologické tekutiny, ktoré existujú v ich prirodzenom stave. Prírodné médiá sú veľmi užitočné a vhodné na kultiváciu širokej škály typov živočíšnych buniek. Nedostatočné poznanie presných zložiek, z ktorých sa prírodné médiá skladajú, je hlavným faktorom prispievajúcim k nízkej opakovateľnosti výsledkov získaných pri použití prírodných médií.

Umelé živné prostredia

Príprava umelých alebo syntetických médií zahŕňa pridávanie živín (organických aj anorganických), sérových proteínov, sacharidov, kofaktorov, vitamínov a solí, ako aj plynných fáz O₂ a CO₂ [1].

Boli vyvinuté rôzne typy umelých médií s cieľom splniť jednu alebo viaceré z nasledujúcich funkcií: 1) Okamžité prežitie (vyvážený soľný roztok s presným pH a osmotickým tlakom). 2) Predĺžené prežitie (vyvážený soľný roztok doplnený rôznymi zložkami organických chemikálií a/alebo séra). 3) Neobmedzený vývoj. 4) Špecializované funkcie.

Existujú štyri odlišné klasifikácie umelých médií:

Kultivačné médiá obsahujúce sérum

Najčastejším doplnkom v kultivačných médiách používaných na kultiváciu živočíšnych buniek je fetálne bovinné sérum. Pridáva sa do kultivačného média ako lacný doplnok s cieľom dosiahnuť čo najlepšie podmienky rastu. Okrem toho, že pôsobí ako transportér alebo chelátor živín, ktoré sú nestále alebo nerozpustné vo vode, hormónov a rastových faktorov, inhibítorov proteáz a iných látok, sérum tiež viaže a neutralizuje škodlivé molekuly.

Prostredie bez séra

Prítomnosť séra v kultivačných médiách má viacero nevýhod a môže spôsobiť závažné chyby pri interpretácii výsledkov v imunologickom výskume [2, 3]. Bolo vyvinutých množstvo rôznych bezsérumových médií [4, 5]. Tieto kultivačné médiá sú vo všeobecnosti špecificky formulované na podporu kultivácie jediného typu buniek, ako napríklad Knockout Serum Replacement a Knockout DMEM od spoločnosti Thermo Fisher Scientific a médium mTESR od spoločnosti Stem Cell Technologies [6] určené pre kmeňové bunky [7].

Okrem toho tieto kultivačné médiá obsahujú definované množstvá purifikovaných rastových faktorov, lipoproteínov a iných proteínov, ktoré by inak typicky poskytovalo sérum [8]. Tieto kultivačné médiá sa často označujú ako „definované kultivačné médiá“, keďže zložky, z ktorých sa skladajú, sú dobre známe.

Chemicky definované kultivačné médiá

Tieto kultivačné médiá obsahujú ultračisté anorganické a organické zložky, ktoré neboli kontaminované žiadnym druhom znečistenia. Môžu tiež obsahovať prísady v podobe čistých proteínov, ako sú rastové faktory.

 Genetická modifikácia baktérií alebo kvasiniek spolu s pridaním konkrétnych mastných kyselín, vitamínov, cholesterolu a aminokyselín vedie k produkcii ich zložiek [9].

Prostredia bez bielkovín

Médiá bez bielkovín sú také, ktoré neobsahujú žiadne bielkoviny a namiesto toho obsahujú iba neproteínové zložky. V porovnaní s médiami s pridaným sérom podporuje použitie médií bez pridaných bielkovín väčšiu proliferáciu buniek a expresiu bielkovín a uľahčuje purifikáciu akéhokoľvek produktu vytvoreného v nadväzujúcom procese [10–12]. Bielkoviny nie sú súčasťou zloženia médií ako MEM a RPMI-1640. V prípade potreby je však možné pridať bielkovinový doplnok.

Kultivačné médiá a ich základné zložky

Komerčné kultivačné médium je možné zakúpiť vo forme prášku alebo kvapaliny a často obsahuje rôzne živiny, ako sú aminokyseliny, glukóza, soli, vitamíny a iné výživové doplnky. 

Potreby týchto zložiek sa líšia pre každú bunkovú líniu a práve tieto rozdiely sú zodpovedné za širokú škálu rôznych zložení médií. Každá zložka plní určitú funkciu, ktorá bude opísaná v nasledujúcich odsekoch:

Pufrovacie systémy

Na udržanie optimálnych podmienok rastu je potrebné regulovať hodnotu pH, čo sa často vykonáva pomocou jedného z dvoch pufrovacích systémov:

Prirodzený pufrovací systém

Pomer CO₂/H₂CO₃ v atmosfére je rovnaký ako v kultivačnom médiu, čím vzniká prirodzený pufrovací mechanizmus. S cieľom zachovať tento prirodzený pufrovací mechanizmus musia byť kultúry udržiavané v prostredí so 5–10 % CO₂, čo sa často dosahuje použitím CO₂ inkubátora. Jednou z najväčších výhod používania prírodného pufru je jeho nízka cena a bezpečnosť.

HEPES

Chemická pufrovanie pomocou zwitteriónu HEPES má väčšiu pufrovaciu schopnosť v rozmedzí pH 7,2–7,4 a nevyžaduje regulované plynné prostredie. Pre niektoré typy buniek môže byť vyššia dávka HEPES škodlivá. Kultivačné médiá obsahujúce HEPES sú tiež oveľa citlivejšie na fototoxické účinky fluorescenčného svetla [13].

Fenolová červená

Indikátor pH fenolová červená je často súčasťou komerčne dostupných kultivačných médií, čo umožňuje nepretržité monitorovanie pH. Pri rozmnožovaní buniek spôsobujú metabolity produkované týmito bunkami zmenu pH a tým aj zmenu farby média. Fenolová červená má dvojitý vplyv na farbu kultivačného média – pri kyslom pH ho zafarbí na žlto a pri zásaditom pH na fialovo. Pri pH 7,4, čo je optimálna hodnota pre bunkovú kultúru, sa médium javí ako fluorescenčne červené.

Fenolová červená má však niekoľko nevýhod: Po prvé, fenolová červená je schopná simulovať pôsobenie viacerých steroidných hormónov, predovšetkým estrogénu [14]. Preto sa pri štúdiu buniek citlivých na estrogén, ako je tkanivo prsníka, odporúča médium bez fenolovej červenej. Prítomnosť fenolovej červenej v niektorých bezsérumových zloženiach narúša rovnováhu sodíka a draslíka. Pridanie séra alebo hormónu z hypofýzy hovädzieho do živného média môže tento účinok vyvážiť [15]. Po tretie, prítomnosť fenolovej červenej sťažuje detekciu v prietokových cytometrických experimentoch.

Anorganické soli

Kultivačné médiá obsahujúce anorganické soli, ako sú ióny sodíka, draslíka a vápnika, pomáhajú udržiavať osmotickú rovnováhu a regulovať membránový potenciál.

Aminokyseliny

Keďže aminokyseliny sú základnými zložkami bielkovín, sú nevyhnutnou súčasťou každého kultivačného média pre rast buniek, aké kedy bolo vyvinuté. Keďže bunky nie sú schopné samy produkovať určité aminokyseliny, je dôležité, aby kultivačné médium obsahovalo esenciálne aminokyseliny. Sú nevyhnutné pre proliferáciu buniek a koncentrácia, v akej sú prítomné, určuje maximálnu hustotu buniek, ktorú je možné dosiahnuť. Obzvlášť dôležitá je esenciálna aminokyselina L-glutamín.

L-glutamín funguje ako sekundárny zdroj energie pre metabolizmus a dodáva dusík na produkciu NAD, NADPH a nukleotidov. Vzhľadom na to, že L-glutamín je nestála aminokyselina, ktorá sa časom mení na formu, ktorú bunky nedokážu využiť, musí sa do média dodávať.

Okrem toho je možné do živného média pridať neesenciálne aminokyseliny, aby sa doplnili tie, ktoré sa počas rastového procesu spotrebovali. Pridaním neesenciálnych aminokyselín do rastového média sa urýchli rast buniek a zvýši sa ich životaschopnosť.

Sacharidy

Sacharidy vo forme cukrov sú hlavným zdrojom energie. Mnohé kultivačné médiá obsahujú okrem bežnejších cukrov, ako sú glukóza a galaktóza, aj maltózu a fruktózu.

Bielkoviny a peptidy

Albumín, transferín a fibronektín sú najčastejšie používané bielkoviny a peptidy. Majú osobitný význam v kultivačných médiách, ktoré neobsahujú sérum. Albumín, transferín, aprotinín, fetuín a fibronektín patria medzi bielkoviny, ktoré sa môžu nachádzať v sére, ktoré je bohatým zdrojom bielkovín.

Albumín je hlavná bielkovina nachádzajúca sa v krvi a jeho funkciou je viazať a transportovať rôzne látky, vrátane vody, solí, voľných mastných kyselín, hormónov a vitamínov, medzi rôznymi orgánmi a bunkami. Schopnosť albumínu viazať sa na chemické látky z neho robí účinný prostriedok na odstraňovanie škodlivých zlúčenín z kultivačného média, v ktorom sa bunky kultivujú.

Aprotinín je ochranná látka v systémoch bunkových kultúr, keďže je stabilný pri neutrálnom aj kyslom pH a je odolný voči vysokým teplotám a deštrukcii, ktorú môžu spôsobiť proteolytické enzýmy. Je schopný inhibovať celý rad serínových proteáz, medzi inými aj trypsín.

Fetuín je glykoproteín, ktorý sa môže vyskytovať vo vyšších množstvách v sére plodov a novorodencov v porovnaní so sérom dospelých jedincov. Okrem toho pôsobí ako inhibítor serínových proteáz. Proteín fibronektín je nevyhnutnou zložkou procesu bunkovej adhézie. Transferín je bielkovina, ktorá transportuje železo a zodpovedá za jeho dodávanie do bunkových membrán.

Mastné kyseliny a lipidy

Hrajú kľúčovú úlohu v bezsérovom médiu, keď chýba sérum.

Vitamíny

Pre vývoj a proliferáciu buniek je potrebných množstvo vitamínov. Bunky nedokážu produkovať vitamíny v dostatočnom množstve, a preto sú v tkanivových kultúrach nevyhnutné ako výživové doplnky.

V bunkovej kultúre je sérum primárnym zdrojom vitamínov; kultivačné médiá sa však tiež obohacujú o rôzne vitamíny, aby boli vhodné pre konkrétny typ buniek. Najčastejšie sa na stimuláciu rastu používajú vitamíny skupiny B.

Stopové prvky

Chemické prvky, ako sú meď, zinok, selén a medziprodukty trikarboxylových kyselín, sa nazývajú stopové prvky. Stopové prvky sa často pridávajú do médií, ktoré neobsahujú sérum, aby nahradili tie, ktoré sa zvyčajne nachádzajú v sére. Tieto prvky sú dôležitými chemickými zložkami, ktoré sú potrebné pre zdravý vývoj buniek. Mnohé biochemické reakcie závisia od určitých mikroživín, napríklad od enzýmovej aktivity.

Doplnky kultivačného média

Kompletné rastové médium odporúčané pre určité bunkové línie vyžaduje dodatočné zložky, ktoré chýbajú v základných médiách a sére. Tieto doplnky podporujú rast buniek a správnu metabolickú funkciu.

Hoci sú hormóny, rastové faktory a signálne molekuly nevyhnutné pre správnu proliferáciu konkrétnych bunkových línií, vždy by sa mali dodržiavať nasledujúce opatrenia: Keďže pridanie doplnkov môže zmeniť osmolalitu kompletného rastového média, čo môže inhibovať vývoj buniek, vždy sa odporúča overiť osmolalitu po pridaní doplnkov. Pre väčšinu bunkových línií sa optimálna osmolalita pohybuje v rozmedzí 260 až 320 mOSM/kg.

Antibiotiká

Antibiotiká sa často používajú na potlačenie rozvoja bakteriálnych a plesňových kontaminantov [16], hoci nie sú nevyhnutné pre rast buniek. Keďže antibiotiká môžu zakryť kontamináciu mykoplazmami a rezistentnými baktériami, ich rutinné používanie sa v bunkových kultúrach neodporúča [17, 18].

Okrem toho môžu antibiotiká narušiť metabolizmus citlivých buniek. Často sa používajú kombinácie penicilínu a streptomycínu od spoločností MilliporeSigma a Life Technologies. Plasmocin sa používal pri kultivácii gliómových bunkových línií TS603, TS516 a BT260 [19] a preukázalo sa, že je účinný pri odstraňovaní kontaminácie mykoplazmami (20).

Sérum

V sére sa nachádzajú albumíny, rastové faktory aj inhibítory rastu. Sérum je jednou z najdôležitejších zložiek kultivačného média, pretože poskytuje aminokyseliny, bielkoviny, vitamíny (najmä vitamíny rozpustné v tukoch, ako sú A, D, E a K), sacharidy, lipidy, hormóny, rastové faktory, minerály a stopové prvky.

Na podporu vývoja kultivovaných buniek sa často využíva sérum z fetálnych a teľacích zdrojov. Fetálne sérum je bohatým zdrojom rastových faktorov a je vhodné na klonovanie buniek a vývoj citlivých buniek. Vzhľadom na svoje znížené schopnosti podporovať rast sa teľacie sérum používa v experimentoch s inhibíciou kontaktu. Bežné rastové médiá často obsahujú 2 % až 10 % séra. Pridanie séra do kultivačného média slúži na nasledujúce účely [21]:

  • Sérum dodáva bunkám esenciálne živiny (ako v roztoku, tak viazané na bielkoviny).

  • Sérum obsahuje viacero rastových faktorov a hormónov, ktoré sa podieľajú na podpore rastu a špecializovanej činnosti buniek.

  • Obsahuje mnoho viažucich proteínov, ako je albumín a transferín, ktoré transportujú iné chemické látky do buniek. Napríklad albumín dodáva do buniek tuky, vitamíny, hormóny atď.

  • Poskytuje tiež proteíny, ako je fibronektín, ktoré zvyšujú adhéziu buniek k substrátu. Okrem toho produkuje prvky podporujúce šírenie, ktoré pomáhajú pri expanzii buniek pred delením.

  • Dodáva inhibítory proteáz, ktoré zabraňujú proteolýze v bunkách.

  • Obsahuje tiež minerály, ako sú Na+, K+, Zn2+ a Fe2+.

  • Zvyšuje viskozitu kultivačného média, čím chráni bunky pred mechanickým poškodením počas premiešavania suspenznej kultúry.

  • Pôsobí tiež ako pufr.

Referencie

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Výživa živočíšnych buniek v tkanivovej kultúre; počiatočné štúdie na syntetickom médiu. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rýchla adsorpcia zložky fetálneho teľacieho séra bunkami cicavcov v kultúre. Potenciálny zdroj artefaktov v štúdiách antisér proti bunkovo-špecifickým antigénom. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Pridanie séra do média používaného na prípravu bunkových suspenzií ako možný zdroj artefaktov v bunkovo sprostredkovaných reakciách skúmaných pomocou testu popliteálnej lymfatickej uzliny. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komerčné bezsérumové živné prostredia: rast hybridómov a produkcia monoklonálnych protilátok. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Metódy kultivácie buniek v bezsérumovom médiu. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. Chaperóny HSP70 transportujú TDP-43 bez RNA do anizotropných intranukleárnych tekutých sférických obalov. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, a kol. Senescencia vyvolaná Downovým syndrómom narúša architektúru jadra neurálnych progenitorových buniek. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Úplné nahradenie séra albumínom, transferínom a sójovým lipidom v kultúrach B-lymfocytov reagujúcich na lipopolysacharidy. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematické zdokonaľovanie chemicky definovaného prostredia bez bielkovín pre rast hybridómov a produkciu monoklonálnych protilátok. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Bezproteínové médium pre rast hybridóm a iných buniek imunitného systému. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Kultivácia buniek bez séra: jednotný prístup. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Klonálny rast bunkových línií čínskeho škrečka v prostrediach bez bielkovín. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analýza cytotoxických účinkov kultivačného média obsahujúceho HEPES vystaveného pôsobeniu svetla. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolová červená v kultivačných médiách pre tkanivové kultúry je slabý estrogén: dôsledky pre štúdium buniek citlivých na estrogén v kultúre. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Vývoj bezsérumových médií. In: Master JRW, editor. Kultivácia živočíšnych buniek, 3. vyd. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Použitie antibiotík v kultivačných médiách. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Šírenie a kontrola mykoplazmatickej infekcie bunkových kultúr. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Výmena živného média a pasážovanie bunkových línií. Nat Protoc. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Histónová demetyláza KDM6A priamo vníma kyslík na reguláciu chromatínu a osudu buniek. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Účinnosť prípravku Plasmocin™ na rôznych bunkových líniách cicavcov infikovaných mollicutami v porovnaní s bežne používanými antibiotikami v bunkovej kultúre: miestne skúsenosti. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Molekulárne aspekty väzby liganda na sérový albumín. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53