Přejít na obsah

Média a reagencie

40 výrobky

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

bez DPH a poštovného

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

bez DPH a poštovného

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

bez DPH a poštovného

DMEM:Hamův F12 (1:1), hmotnostní: 3,1 g/l glukózy, hmotnostní: 2,5 mM L-glutaminu, hmotnostní: 15 mM HEPES, hmotnostní: 0,5 mM pyruvátu sodného, hmotnostní: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 je široce uznávané a hojně používané základní médium v buněčných kulturách pro biologický výzkum. Slouží jako základní zdroj živin pro růst různých savčích buněčných linií, zejména pokud je doplněno fetálním bovinním sérem (FBS). Toto jedinečné složení kombinuje Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) a Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v přesném poměru 1:1. Přidání L-glutaminu dále vylepšuje jeho složení. DMEM, odvozené od Eagleova minimálního esenciálního média (EMEM), nabízí ve srovnání se svým předchůdcem vyšší koncentraci aminokyselin a vitamínů. Naproti tomu Hamovo F-12 vychází z média Ham F-10 a poskytuje doplňující sadu esenciálních složek. Pro podporu optimálního buněčného růstu je běžnou praxí doplňovat DMEM:Ham's F12 o FBS v typické koncentraci 5–10 %. Tento přídavek je nezbytný, protože médiu chybí růstové hormony, lipidy a bílkoviny, které jsou pro buněčný vývoj zásadní. DMEM:Ham's F12 obsahuje systém pH pufru a je často doplňováno fenolovou červení, indikátorem pH. Kultivované buňky v DMEM:Ham's F12 nebo v jakémkoli médiu využívajícím bikarbonátový pufrovací systém vyžadují kontrolované prostředí s obsahem CO₂ v rozmezí 5–10 % k udržení odpovídající úrovně pH. Kontrola kvality • Sterilně filtrované Skladování a trvanlivost • Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chráněno před světlem. • Po otevření skladujte při teplotě 4 °C a spotřebujte do 6–8 týdnů. Přepravní podmínky • Okolní teplota Skladování • Skladujte v chladničce při teplotě +2 °C až +8 °C na tmavém místě. Zabraňte zamrznutí a častému ohřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu produktu. • Nezahřívejte médium nad 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné trouby. • Pokud má být použita pouze část média, odeberte potřebné množství a před použitím jej ohřejte na pokojovou teplotu. Složení Kategorie Složky Koncentrace (mg/l) Aminokyseliny Glycin 18,75 L-alanin 4,45 L-arginin HCl 147,50 L-asparagin H₂O 7,50 Kyselina L-asparagová 6,65 L-cystein HCl H₂O 17,56 L-cystin 2 HCl 31,29 Kyselina L-glutamová 7,35 L-glutamin 365,00 L-histidin HCl H₂O 31,48 L-isoleucin 54,47 L-leucin 59,05 L-lysin HCl 91,25 L-metionin 17,24 L-fenylalanin 35,48 L-prolin 17,25 L-serin 26,25 L-threonin 53,45 L-tryptofan 9,02 L-tyrosin 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valin 52,85 Vitamíny D-biotin 0,0035 Cholin chlorid 8,98 D-pantothenát vápenatý 2,24 Kyselina listová 2,66 myo-inositol 12,60 Nikotinamid 2,02 Pyridoxin HCl 0,031 Pyridoxal HCl 2,00 Riboflavin 0,219 Thiamin HCl 2,17 Vitamin B12 0,68 Anorganické soli CaCl₂·2H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄·7H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄·7H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄·7H₂O 0,432 Ostatní složky D-glukóza 3151,00 Hypoxanthin 2,40 HEPES 3574,50 Kyselina linolová 0,042 Kyselina lipoová 0,105 Fenolová červená, sodná sůl 8,63 Putrescin 2 HCl 0,081 Pyruvát sodný 55,00 Thymidin 0,365

€25.00

bez DPH a poštovného

DMEM, hmotnostní: 4,5 g/l glukózy, hmotnostní: 4 mM L-glutaminu, hmotnostní: 3,7 g/l NaHCO₃, hmotnostní: 1,0 mM pyruvátu sodného

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) je vysoce univerzální a široce používané základní médium určené k podpoře růstu široké škály savčích buněk v biologickém výzkumu. Slouží jako ideální médium pro kultivaci primárních fibroblastů, neuronů, gliových buněk, HUVEC, buněk hladkého svalstva, stejně jako populárních buněčných linií, jako jsou HeLa, 293, Cos-7 a PC-12. To, co odlišuje DMEM od ostatních médií, je jeho jedinečné složení. Obsahuje až čtyřnásobně vyšší koncentraci aminokyselin a vitamínů ve srovnání s původním Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM, původně vyvinuté s nízkým obsahem glukózy (1 g/l) a pyruvátem sodným, se často používá s vyššími hladinami glukózy, a to buď s pyruvátem sodným, nebo bez něj. Je třeba poznamenat, že DMEM neobsahuje bílkoviny, lipidy ani růstové faktory, což vyžaduje jeho doplnění. Pro dosažení optimálního růstu se běžně používá doplnění DMEM o 10 % fetálního bovinního séra (FBS). Kromě toho DMEM využívá pufrovací systém na bázi hydrogenuhličitanu sodného, který pro udržení fyziologického pH vyžaduje prostředí s 5–10 % CO₂. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) je vysoce ceněno mezi definovanými médii pro buněčné a tkáňové kultury, protože vyhovuje růstovým potřebám různých fenotypů adhezivních buněk. Díky vylepšenému složení doplňkových látek, známému jako Dulbeccova modifikace, předčí původní Eagleovo médium, které bylo vyvinuto v 50. letech 20. století pro kultivaci kuřecích buněk. Tato modifikace významně zvyšuje obsah vybraných aminokyselin a vitamínů až čtyřnásobně ve srovnání s původním médiem. V oblasti buněčné kultury hraje DMEM zásadní roli jako růstové médium pro různé typy buněk, včetně primárních buněk, kmenových buněk a transformovaných buněk. Vědci také využívají modifikovanou verzi DMEM pro širokou škálu výzkumných aplikací, jako je vývoj léčiv, tkáňové inženýrství a studium buněčných signálních drah. Kontrola kvality • Sterilně filtrované Skladování a trvanlivost • Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chráněno před světlem. • Po otevření skladujte při teplotě 4 °C a spotřebujte do 6–8 týdnů. Přepravní podmínky • Okolní teplota Skladování • Skladujte v chladničce při teplotě +2 °C až +8 °C na tmavém místě. Vyhněte se zmrazení a častému ohřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu produktu. • Nezahřívejte médium nad 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné trouby. • Pokud má být použita pouze část média, odeberte potřebné množství a před použitím jej ohřejte na pokojovou teplotu. Složení Kategorie Složky Koncentrace (mg/l) Aminokyseliny Glycin 30,00 L-arginin HCl 84,00 L-cystin 2 HCl 62,57 L-glutamin 584,00 L-histidin HCl H₂O 42,00 L-isoleucin 105,00 L-leucin 105,00 L-lysin HCl 146,00 L-metionin 30,00 L-fenylalanin 66,00 L-serin 42,00 L-threonin 95,00 L-tryptofan 16,00 L-tyrosin 2 Na 2H₂O 103,79 L-valin 94,00 Vitamíny Cholin chlorid 4,00 D-pantothenát vápenatý 4,00 Kyselina listová 4,00 myo-inositol 7,20 Nikotinamid 4,00 Pyridoxal HCl 4,00 Riboflavin 0,40 Thiamin HCl 4,00 Anorganické soli CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Ostatní složky D-glukóza 4500,00 Fenolová červeň, sodná sůl 15,90 Pyruvát sodný 110,00

€25.00

bez DPH a poštovného

EMEM (MEM Eagle), obsah: 2 mM L-glutaminu, obsah: 2,2 g/l NaHCO₃, obsah: EBSS

Eagleovo minimální esenciální médium (EMEM) je jedním z nejčastěji používaných bazálních médií pro kultivaci široké škály savčích buněk, zejména adhezivních buněčných linií. Toto klasické médium, původně vyvinuté Harrym Eaglem, obsahuje esenciální aminokyseliny, vitamíny a anorganické soli nezbytné pro růst jak primárních buněk, tak zavedených buněčných linií za standardních kultivačních podmínek. Tato tekutá formulace připravená k okamžitému použití a sterilizovaná filtrací je doplněna o Earleův vyvážený solný roztok (EBSS), 2 mM L-glutaminu, D-glukózy (1,0 g/l) a 2,2 g/l hydrogenuhličitanu sodného (NaHCO₃), díky čemuž je vhodná pro použití v atmosféře inkubátoru s regulovaným obsahem CO₂ (obvykle 5 % CO₂). Součástí přípravku je fenolová červeň, která slouží jako indikátor pH a umožňuje pohodlné vizuální sledování stavu média během buněčné kultury. Hlavní vlastnosti • Klasické složení Eagle’s MEM s Earleovým vyváženým solným roztokem (EBSS) • Obsahuje 2 mM L-glutaminu – připraveno k okamžitému použití • 2,2 g/l hydrogenuhličitanu sodného – pufrováno pro inkubaci s 5 % CO₂ • S D-glukózou (1,0 g/l) jako primárním zdrojem uhlíku • S fenolovou červení jako indikátorem pH • Bez HEPES a bez pyruvátu sodného • Sterilně filtrované tekuté médium, připravené k použití • pH 7,0 – 7,6 Typické aplikace EMEM podporuje kultivaci široké škály savčích buněčných linií, včetně HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 a mnoha primárních buněk. Mezi běžné aplikace patří: • Rutinní udržování a expanze adhezivních buněčných linií • Pracovní postupy pro množení virů a výrobu vakcín • Aplikace v oblasti cytotoxicity a biologických testů • Studie transfekce a exprese proteinů • Základní výzkum v oblasti buněčné a molekulární biologie Pro optimální růst buněk se EMEM obvykle doplňuje 5–10 % fetálního bovinního séra (FBS) a, v závislosti na buněčné linii, neesenciálními aminokyselinami (NEAA) a antibiotiky, jako je penicilin/streptomycin. Manipulace a skladování Neotevřenou lahvičku skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chráněnou před světlem. Po otevření používejte za aseptických podmínek. L-glutamin v roztoku podléhá postupné degradaci – pro dosažení nejlepších výsledků doporučujeme médium spotřebovat do 4 týdnů od otevření, nebo v případě delšího skladování před použitím doplnit čerstvý L-glutamin. Před přidáním k buňkám nechte médium ohřát na 37 °C. Kvalita Vyrobeno podle přísných standardů kvality. Každá šarže je testována na sterilitu, pH, osmolalitu a hladinu endotoxinů, aby byla zajištěna konzistentní účinnost při použití v buněčných kulturách. Specifikace produktu Specifikace Podrobnosti Typ produktuMEM Kategorie produktuMédia pro buněčné kultury FormátKapalina SterilníAno Objem500 ml L-glutaminS L-glutaminem (2 mM) GlukózaS glukózou (1,0 g/l) Hydrogenuhličitan sodnýS NaHCO₃ (2,2 g/l) HEPESBez HEPES Pyruvát sodnýBez pyruvátu sodného Fenolová červeňS fenolovou červení Solný roztokEarleův vyvážený solný roztok (EBSS) pH7,0 – 7,6 Obsah endotoxinůNení uvedeno Skladování+2 °C až +8 °C Složení (na litr)

€25.00

bez DPH a poštovného

Mrazicí médium CM-1 – 100 ml

Freeze Medium CM-1 od společnosti Cytion je špičkové kryokonzervační médium, které bylo vyvinuto s cílem zajistit nejvyšší úroveň životaschopnosti a funkčnosti buněk po rozmrazení. Toto univerzální médium je vhodné pro široké spektrum buněčných typů, včetně lidských i zvířecích buněk, což z něj činí nepostradatelný nástroj pro nejrůznější výzkumné aplikace. Díky pečlivě vyváženému složení kryoprotektantů a nezbytných živin minimalizuje Freeze Medium CM-1 tvorbu ledových krystalů a buněčný stres během procesu zmrazování, čímž zachovává buněčnou integritu. Mezi klíčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 patří: • Široká kompatibilita: Účinné pro širokou škálu typů buněk, včetně primárních buněk, kmenových buněk a zavedených buněčných linií. • Vysoká životaschopnost: Optimalizováno pro maximalizaci regenerace a životaschopnosti buněk po rozmrazení, což zajišťuje spolehlivé výsledky experimentů. • Připraveno k použití: Pohodlně připraveno a sterilizováno pro okamžité použití, což snižuje dobu přípravy a riziko kontaminace. • Zvýšená stabilita: Udržuje konzistentní výkon za standardních podmínek kryokonzervace, čímž zajišťuje reprodukovatelné výsledky. • Dlouhá skladovatelnost: CM-1 je kryptační médium obsahující sérum a připravené k okamžitému použití, které lze skladovat v chladničce až jeden rok. Použití CM-1 pro zmrazení buněk Chcete-li použít CM-1 k zmrazení adhezivních i suspenzních buněk, postupujte podle těchto kroků: • V případě adhezivních buněk je promyjte a oddělte od kultivačního substrátu. V případě suspenzních buněk přejděte přímo k dalšímu kroku. • Spočítejte buňky, abyste se ujistili, že mají správnou koncentraci. • Buňky odstřeďte, aby se usadily na dno, a poté je resuspendujte v kryokonzervačním médiu CM-1. • Resuspendované buňky přeneste do kryozkumavek. • Před přemístěním buněk do dlouhodobého skladování použijte metodu pomalého zmrazování. Postup Popis Kroky ❄️ Ruční zmrazování Postup krok za krokem zahrnující postupné snižování teploty, aby byla zajištěna životaschopnost buněk. 1️⃣ Umístěte buňky v mrazicím médiu do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minut. 2️⃣ Přeneste do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodin. 3️⃣ Buňky uchovávejte v tekutém dusíku pro dlouhodobé uchování. ❄️ Použití zařízení Mr. Frosty Praktické zařízení, které umožňuje řízené rychlosti zmrazování bez elektrického napájení. 1️⃣ Připravte buňky v kryozkumavkách s mrazicím médiem. 2️⃣ Vložte kryozkumavky do nádoby Mr. Frosty. 3️⃣ Skladujte při teplotě -80 °C po dobu 24 hodin před přenesením do tekutého dusíku. ❄️ Mrazicí komora s řízenou rychlostí Vysoce přesný mrazák od společnosti Thermo Fisher nebo jiných výrobců určený pro řízené snižování teploty. 1️⃣ Naprogramujte zařízení tak, aby postupně snižovalo teplotu. 2️⃣ Vložte připravené buňky do mrazničky. 3️⃣ Po dokončení mrazicího cyklu přemístěte buňky do kapalného dusíku. • Pro dlouhodobé uchování skladujte kryozkumavky při teplotách pod -130 °C nebo v kapalném dusíku. Složení • Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli • Pufrovací kapacita: pH = 7,2 až 7,6 Mrazicí médium CM-1 od společnosti Cytion nabízí spolehlivé řešení pro kryokonzervaci, které zajišťuje vysokou životaschopnost a funkčnost buněk po rozmrazení pro širokou škálu výzkumných aplikací.

€99.00

bez DPH a poštovného

Mrazicí médium CM-1 – 50 ml

Freeze Medium CM-1 od společnosti Cytion je špičkové kryokonzervační médium, které bylo vyvinuto s cílem zajistit nejvyšší úroveň životaschopnosti a funkčnosti buněk po rozmrazení. Toto univerzální médium je vhodné pro široké spektrum buněčných typů, včetně lidských i zvířecích buněk, což z něj činí nepostradatelný nástroj pro nejrůznější výzkumné aplikace. Díky pečlivě vyváženému složení kryoprotektantů a esenciálních živin minimalizuje Freeze Medium CM-1 tvorbu ledových krystalů a buněčný stres během procesu zmrazování, čímž zachovává buněčnou integritu. Mezi klíčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 patří: • Široká kompatibilita: Účinné pro širokou škálu typů buněk, včetně primárních buněk, kmenových buněk a zavedených buněčných linií. • Vysoká životaschopnost: Optimalizováno pro maximalizaci regenerace a životaschopnosti buněk po rozmrazení, což zajišťuje spolehlivé výsledky experimentů. • Připraveno k použití: Pohodlně připraveno a sterilizováno pro okamžité použití, což snižuje dobu přípravy a riziko kontaminace. • Zvýšená stabilita: Udržuje konzistentní výkon za standardních podmínek kryokonzervace, čímž zajišťuje reprodukovatelné výsledky. • Dlouhá skladovatelnost: CM-1 je kryptační médium obsahující sérum a připravené k okamžitému použití, které lze skladovat v chladničce až jeden rok. Použití CM-1 pro zmrazení buněk Chcete-li použít CM-1 k zmrazení adhezivních i suspenzních buněk, postupujte podle těchto kroků: • V případě adhezivních buněk je promyjte a oddělte od kultivačního substrátu. V případě suspenzních buněk přejděte přímo k dalšímu kroku. • Spočítejte buňky, abyste se ujistili, že mají správnou koncentraci. • Buňky odstřeďte, aby se usadily na dno, a poté je resuspendujte v kryokonzervačním médiu CM-1. • Resuspendované buňky přeneste do kryozkumavek. • Před přemístěním buněk do dlouhodobého skladování použijte metodu pomalého zmrazování. Postup Popis Kroky ❄️ Ruční zmrazování Postup krok za krokem zahrnující postupné snižování teploty, aby byla zajištěna životaschopnost buněk. 1️⃣ Umístěte buňky v mrazicím médiu do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minut. 2️⃣ Přeneste do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodin. 3️⃣ Buňky uchovávejte v tekutém dusíku pro dlouhodobé uchování. ❄️ Použití zařízení Mr. Frosty Praktické zařízení, které umožňuje řízené rychlosti zmrazování bez elektrického napájení. 1️⃣ Připravte buňky v kryozkumavkách s mrazicím médiem. 2️⃣ Vložte kryozkumavky do nádoby Mr. Frosty. 3️⃣ Skladujte při teplotě -80 °C po dobu 24 hodin před přenesením do kapalného dusíku. ❄️ Mraznička s řízenou rychlostí zmrazování Vysoce přesný mrazák od společnosti Thermo Fisher nebo jiných výrobců určený pro řízené snižování teploty. 1️⃣ Naprogramujte zařízení tak, aby postupně snižovalo teplotu. 2️⃣ Vložte připravené buňky do mrazničky. 3️⃣ Po dokončení mrazicího cyklu přemístěte buňky do kapalného dusíku. • Pro dlouhodobé uchování skladujte kryozkumavky při teplotách pod -130 °C nebo v kapalném dusíku. Složení • Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli • Pufrovací kapacita: pH = 7,2 až 7,6 Mrazicí médium CM-1 od společnosti Cytion nabízí spolehlivé řešení pro kryokonzervaci, které zajišťuje vysokou životaschopnost a funkčnost buněk po rozmrazení pro širokou škálu výzkumných aplikací.

€59.00

bez DPH a poštovného

Hamovo médium F12K, obsah: 2,0 mM L-glutaminu, obsah: 2,0 mM pyruvátu sodného, obsah: 2,5 g/l NaHCO₃

Představujeme Hamovo médium F-12K (Kaighnovo), specializovanou modifikaci Hamova média F-12, které bylo vyvinuto tak, aby splňovalo specifické požadavky biologického výzkumu. Toto pokročilé médium nabízí zřetelné výhody a zlepšuje kultivaci primárních lidských hepatocytů, stejně jako jaterních buněk potkanů a kuřat, zejména v podmínkách se sníženým obsahem séra. Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) je pečlivě sestaveno tak, aby optimalizovalo podmínky buněčné kultury. Vyznačuje se obohaceným složením, které poskytuje zvýšené hladiny esenciálních složek, jako jsou aminokyseliny a pyruvát sodný, stejně jako další prvky, včetně putrescinu, thymidinu, hypoxanthinu a zinku. Tyto přísady umožňují výzkumníkům doplnit médium minimálním množstvím séra nebo definovanými složkami pro konkrétní typy buněk, což usnadňuje vytvoření přesných experimentálních podmínek. Je třeba poznamenat, že Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) neobsahuje bílkoviny ani růstové faktory. V důsledku toho je často nutné doplnění růstovými faktory a fetálním bovinním sérem (FBS), což výzkumníkům umožňuje přizpůsobit médium požadavkům jejich konkrétních buněčných linií. Pro dosažení optimálních výsledků je nutné koncentraci FBS pečlivě optimalizovat pro každou buněčnou linii, čímž se zajistí optimální růst a funkčnost. K udržení fyziologického pH využívá médium Ham's F-12K (Kaighn's) pufrovací systém na bázi hydrogenuhličitanu sodného (2,5 g/l), což vyžaduje kontrolované prostředí s obsahem 5–10 % CO₂ během kultivace. Tím je zajištěno, že pH média zůstává v ideálním rozmezí pro růst a životaschopnost buněk. Kontrola kvality • pH = 7,2 ± 0,02 při 20–25 °C. • Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmat a bakterií. Skladování • Skladujte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C na tmavém místě. Zmrazení i ohřátí na teplotu vyšší než +37 °C snižují kvalitu produktu. • Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné trouby). • Pokud se má použít pouze část média, odeberte toto množství z lahve a ohřejte jej na pokojovou teplotu. • Doba použitelnosti všech médií s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby. Složení Složky mg/l Anorganické soli Chlorid vápenatý x 2H₂O 135,24 Síran měďnatý x 5H₂O 0,00 Síran železnatý x 7H₂O 0,83 Chlorid hořečnatý x 6H₂O 105,72 Síran hořečnatý x 7H₂O 394,49 Chlorid draselný 283,29 Dihydrogenfosforečnan draselný 58,52 Chlorid sodný 7597,20 bezvodý hydrogenfosforečnan disodný 115,02 Síran zinečnatý x 7H₂O 0,14 Ostatní složky D(+)-glukóza bezvodá 1260,00 Hypoxantin 4,08 Kyselina DL-α-lipoová 0,21 Fenolová červeň 3,00 Putrescin x 2HCl 0,32 Pyruvát sodný 220,00 NaHCO₃ 2500,00 Thymidin 0,73 Aminokyseliny L-alanin 17,82 L-arginin x HCl 421,40 L-asparagin x H₂O 30,02 Kyselina L-asparagová 26,62 L-cystein x HCl x H₂O 70,24 L-glutamin 292,20 Kyselina L-glutamová 29,42 Glycin 15,01 L-histidin x HCl x H₂O 41,92 L-isoleucin 7,87 L-leucin 26,24 L-lysin x HCl 73,04 L-methionin 8,95 L-fenylalanin 9,91 L-prolin 69,06 L-serin 21,02 L-threonin 23,82 L-tryptofan 4,08 L-tyrosin 10,87 L-valin 23,42 Vitamíny D(+)-biotin 0,07 D-pantothenát vápenatý 0,48 Cholin chlorid 13,96 Kyselina listová 1,32 myo-inositol 18,02 Nikotinamid 0,04 Pyridoxin x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 Thiamin x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€108.00

bez DPH a poštovného

Hamovo médium F12, obsah: 1,0 mM stabilního glutaminu, obsah: 1,0 mM pyruvátu sodného, obsah: 1,176 g/l NaHCO₃

Hamovo médium F-12, známé také jako Hamova živná směs F-12, je široce používané základní médium určené speciálně pro buněčné kultury. Je hojně využíváno pro bezsérové kultivace jednotlivých buněk z vaječníků čínského křečka (CHO), plicních buněk a myších L-buněk. Kromě toho je Ham's F-12 preferovaným médiem pro test klonální toxicity (CTA). Jednou z jeho významných výhod je schopnost podporovat růst buněk bez nutnosti přidávání séra. Tím se eliminuje potenciální interference způsobená složkami séra, což zajišťuje konzistentní a spolehlivé výsledky experimentů. Díky bezsérovému kultivačnímu prostředí poskytuje médium Ham's F-12 výzkumníkům větší kontrolu nad jejich výzkumem. Další klíčovou vlastností média Ham’s F-12 je jeho vhodnost pro výsev jednotlivých buněk. Díky tomu je vynikající volbou pro celou řadu buněčných linií, včetně buněk CHO, plicních buněk a myších L-buněk. Optimalizované složení živin v médiu usnadňuje účinnou adhezi a růst jednotlivých buněk, což umožňuje vytvoření homogenních buněčných kultur s lepší reprodukovatelností. Kromě toho si médium Ham's F-12 získalo uznání jako preferované médium pro test klonální toxicity (CTA). Tento test hraje klíčovou roli při hodnocení cytotoxických účinků látek na buňky. Použitím média Ham's F-12 v testu CTA mohou výzkumníci přesně vyhodnotit dopad různých sloučenin nebo ošetření na jednotlivé buňky, což poskytuje cenné poznatky o toxikologických profilech. Kontrola kvality • pH = 7,2 ± 0,02 při teplotě 20–25 °C. • Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmat a bakterií. Skladování • Skladujte v chladničce při teplotě +2 °C až +8 °C na tmavém místě. Zmrazení a ohřátí na teplotu vyšší než +37 °C snižují kvalitu produktu. • Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné trouby). • Pokud se má použít pouze část média, odeberte toto množství z láhve a ohřejte jej na pokojovou teplotu. • Doba použitelnosti všech médií s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby. Složení Složky mg/l Anorganické soli Chlorid vápenatý x 2H₂O 44,00 Síran měďnatý x 5H₂O 0,00 Síran železnatý x 7H₂O 0,83 Chlorid hořečnatý x 6H₂O 122,00 Chlorid draselný 223,65 Chlorid sodný 7599,00 bezvodý hydrogenfosforečnan disodný 142,04 Síran zinečnatý x 7H₂O 0,86 Ostatní složky D(+)-glukóza bezvodá 1801,60 Hypoxantin 4,08 Kyselina linolová 0,08 Kyselina DL-α-lipoová 0,21 Fenolová červeň 1,20 Putrescin x 2HCl 0,16 Pyruvát sodný 110,00 Thymidin 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminokyseliny L-alanin 8,91 L-arginin x HCl 210,70 L-asparagin x H₂O 15,01 Kyselina L-asparagová 13,31 L-cystein x HCl x H₂O 35,12 L-alanyl-L-glutamin 217,30 Kyselina L-glutamová 14,71 Glycin 7,51 L-histidin x HCl x H₂O 20,96 L-isoleucin 3,94 L-leucin 13,12 L-lysin x HCl 36,54 L-metionin 4,48 L-fenylalanin 4,96 L-prolin 34,53 L-serin 10,51 L-threonin 11,91 L-tryptofan 2,04 L-tyrosin 5,44 L-valin 11,71 Vitamíny D(+)-biotin 0,01 D-pantothenát vápenatý 0,24 Cholin chlorid 13,96 Kyselina listová 1,32 myo-inositol 18,02 Nikotinamid 0,04 Pyridoxin x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 Thiamin x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€25.00

bez DPH a poštovného

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

bez DPH a poštovného

Buněčná kultivační média: přehled

V oblasti biologických věd patří mezi nejdůležitější metodiky buněčná kultura. Pod pojmem „buněčná kultura“ se rozumí odebrání buněk, tkání nebo orgánů ze zvířete či rostliny a jejich následné umístění do umělého prostředí, které je příznivé pro jejich přežití a/nebo růst. Základními podmínkami pro optimální vývoj buněk jsou regulovaná teplota, substrát pro přilnutí buněk, vhodné růstové médium a inkubátor, který udržuje optimální pH a osmolalitu. Buňky musí mít tyto podmínky, aby mohly růst na plný potenciál.

Výběr vhodného růstového média pro kultivaci in vitro je ve buněčné kultuře fází, která je zároveň nejkritičtější i nejdůležitější. Růstové médium, známé také jako kultivační médium, je kapalina nebo gel sestavený tak, aby podporoval vývoj organismů v mikroskopickém, buněčném nebo rostlinném měřítku. Médium používané pro kultivaci buněk často obsahuje dostatečný přísun energie a látek, které regulují buněčný cyklus. Mezi hlavní složky kultivačního média patří aminokyseliny, vitamíny, anorganické soli, glukóza a sérum. Sérum se do média přidává, protože slouží jako zdroj růstových faktorů, hormonů a adhezivních faktorů. Kromě dodávání živin přispívá médium také k udržení správné hodnoty pH a osmolality.

Typy médií používaných v buněčné kultuře

Lidské i živočišné buňky lze pěstovat buď v umělém či syntetickém médiu, nebo ve zcela přírodním médiu doplněném o přírodní prvky. Níže vám poskytneme přehled různých typů médií, která jsou v současné době k dispozici.

Přírodní média

V přírodních médiích se vyskytují pouze biologické tekutiny, které existují ve svém přirozeném stavu. Přírodní média jsou velmi užitečná a snadno použitelná pro kultivaci široké škály typů živočišných buněk. Nedostatečné porozumění přesnému složení přírodních médií je hlavním faktorem, který přispívá k nízké opakovatelnosti výsledků získaných při použití přírodních médií.

Umělá média

Příprava umělých nebo syntetických médií zahrnuje přidání živin (organických i anorganických), sérových proteinů, sacharidů, kofaktorů, vitamínů a solí, stejně jako plynných fází O₂ a CO₂ [1].

Byly vyvinuty různé typy umělých médií, aby splňovaly jednu nebo více z následujících funkcí: 1) Okamžité přežití (vyvážený solný roztok s přesnou hodnotou pH a osmotickým tlakem). 2) Prodloužené přežití (vyvážený solný roztok doplněný různými složeními organických chemikálií a/nebo séra). 3) Neomezený vývoj. 4) Specializované funkce.

Existují čtyři odlišné klasifikace umělých médií:

Média obsahující sérum

Nejčastějším druhem doplňku v médiu používaném pro kultivaci živočišných buněk je fetální bovinní sérum. Do kultivačního média se přidává jako levný doplněk za účelem dosažení co nejlepších podmínek pro růst. Kromě toho, že sérum působí jako transportér nebo chelátor pro živiny, které jsou nestabilní nebo nerozpustné ve vodě, hormony a růstové faktory, inhibitory proteáz a další látky, také váže a neutralizuje škodlivé molekuly.

Prostředky bez séra

Přítomnost séra v kultivačních médiích má řadu nevýhod a může způsobit závažné chyby při interpretaci výsledků v imunologickém výzkumu [2, 3]. Byla vyvinuta řada různých bezsérových médií [4, 5]. Tato média jsou obecně speciálně formulována tak, aby podporovala kultivaci jediného typu buněk, jako jsou například Knockout Serum Replacement a Knockout DMEM od společnosti Thermo Fisher Scientific a médium mTESR od společnosti Stem Cell Technologies [6] určené pro kmenové buňky [7].

Kromě toho tato média obsahují definovaná množství purifikovaných růstových faktorů, lipoproteinů a dalších proteinů, které by jinak obvykle dodávalo sérum [8]. Tato média se často označují jako „definovaná kultivační média“, protože složky, z nichž se skládají, jsou dobře známy.

Chemicky definovaná média

Tato média obsahují ultračisté anorganické a organické složky, které nebyly kontaminovány žádným druhem nečistot. Mohou také obsahovat přísady v podobě čistých proteinů, jako jsou růstové faktory.

 Genetická modifikace bakterií nebo kvasinek spolu s přidáním konkrétních mastných kyselin, vitamínů, cholesterolu a aminokyselin vede k produkci jejich složek [9].

Prostředí bez bílkovin

Média bez bílkovin jsou taková, která neobsahují vůbec žádné bílkoviny, ale pouze neproteinové složky. Ve srovnání s médii s přidaným sérem podporuje použití médií bez přidaných bílkovin větší buněčnou proliferaci a expresi bílkovin a usnadňuje čištění jakéhokoli produktu vzniklého v následném procesu [10–12]. Proteiny nejsou součástí složení médií, jako jsou MEM a RPMI-1640. V případě potřeby však lze přidat proteinový doplněk.

Kultivační média a jejich základní složky

Komerční kultivační média lze zakoupit v práškové nebo tekuté formě a často obsahují řadu živin, jako jsou aminokyseliny, glukóza, soli, vitamíny a další doplňky stravy. 

Potřeby těchto složek se u jednotlivých buněčných linií liší a právě tyto rozdíly jsou příčinou velkého množství různých složení médií. Každá složka plní určitou funkci, která bude popsána v následujících odstavcích:

Pufrovací systémy

Pro udržení optimálních podmínek pro růst je nutné regulovat pH, což se často provádí pomocí jednoho ze dvou pufrovacích systémů:

Přírodní pufrovací systém

Poměr CO₂/H₂CO₃ v atmosféře se rovná poměru v médiu, čímž vzniká přirozený pufrovací mechanismus. Aby se zachoval tento přirozený pufrovací mechanismus, musí být kultury udržovány v prostředí s obsahem 5–10 % CO₂, čehož se často dosahuje použitím CO₂ inkubátoru. Jednou z největších výhod používání přírodního pufru je jeho nízká cena a bezpečnost.

HEPES

Chemické pufrování pomocí zwitteriontu HEPES má větší pufrovací schopnost v rozmezí pH 7,2–7,4 a nevyžaduje regulované plynné prostředí. U některých typů buněk může být vyšší dávka HEPES škodlivá. Média obsahující HEPES jsou rovněž mnohem náchylnější k fototoxickým účinkům fluorescenčního světla [13].

Fenolová červeň

Indikátor pH fenolová červeň je často součástí komerčně dostupných kultivačních médií, což umožňuje průběžné sledování pH. Při množení buněk způsobují metabolity produkované těmito buňkami posun pH a tím i změnu barvy média. Fenolová červeň má dvojí účinek na barvu média: při kyselém pH ho zbarvuje do žluta a při zásaditém pH do fialova. Při pH 7,4, což je optimální hodnota pro buněčnou kulturu, se médium jeví jako fluorescenčně červené.

Fenolová červeň má však několik nevýhod: Zaprvé je schopna napodobovat působení řady steroidních hormonů, především estrogenu [14]. Proto se při studiu buněk citlivých na estrogen, jako je prsní tkáň, doporučuje používat médium bez fenolové červene. Přítomnost fenolové červeně v několika bezsérových formulacích narušuje rovnováhu sodíku a draslíku. Tomuto účinku lze zabránit přidáním séra nebo hovězího hypofyzárního hormonu do média [15]. Za třetí, přítomnost fenolové červeně ztěžuje detekci v experimentech s průtokovou cytometrií.

Anorganické soli

Média obsahující anorganické soli, jako jsou ionty sodíku, draslíku a vápníku, pomáhají udržovat osmotickou rovnováhu a regulovat membránový potenciál.

Aminokyseliny

Jelikož jsou aminokyseliny základními složkami bílkovin, představují nezbytnou složku každého kultivačního média, které kdy bylo vyvinuto. Protože buňky nejsou schopny některé aminokyseliny samy produkovat, je důležité, aby kultivační médium obsahovalo esenciální aminokyseliny. Jsou nezbytné pro proliferaci buněk a jejich koncentrace určuje maximální hustotu buněk, které lze dosáhnout. Zvláště důležitá je esenciální aminokyselina L-glutamin.

L-glutamin funguje jako sekundární zdroj energie pro metabolismus a dodává dusík pro tvorbu NAD, NADPH a nukleotidů. Vzhledem k tomu, že L-glutamin je nestabilní aminokyselina, která se časem mění na formu, kterou buňky nedokážou využít, musí být do média přidáván.

Kromě toho lze do růstového média přidávat neesenciální aminokyseliny, aby se doplnily ty, které byly během růstového procesu spotřebovány. Doplnění růstového média o neesenciální aminokyseliny podporuje růst buněk a zvyšuje jejich životaschopnost.

Sacharidy

Sacharidy ve formě cukrů jsou hlavním zdrojem energie. Mnohá média kromě běžnějších cukrů, jako jsou glukóza a galaktóza, obsahují také maltózu a fruktózu.

Bílkoviny a peptidy

Nejčastěji používanými bílkovinami a peptidy jsou albumin, transferin a fibronektin. Mají zvláštní význam v médiích, která neobsahují sérum. Albumin, transferin, aprotinin, fetuin a fibronektin patří mezi bílkoviny, které se vyskytují v séru, jenž je bohatým zdrojem bílkovin.

Albumin je hlavní bílkovina v krvi a jeho funkcí je vázat a transportovat různé látky, včetně vody, solí, volných mastných kyselin, hormonů a vitamínů, mezi různými orgány a buňkami. Schopnost albuminu vázat se na chemické látky z něj činí účinný prostředek pro odstraňování škodlivých sloučenin z média, ve kterém se buňky kultivují.

Aprotinin je ochranná látka v systémech buněčných kultur, protože je stabilní při neutrálním i kyselém pH a odolává vysokým teplotám i destrukci, kterou mohou způsobit proteolytické enzymy. Je schopen inhibovat řadu serinových proteáz, mimo jiné i trypsin.

Fetuin je glykoprotein, který lze v séru plodů a novorozenců zvířat detekovat ve vyšších množstvích než v séru dospělých jedinců. Kromě toho působí jako inhibitor serinových proteáz. Protein fibronektin je nezbytnou složkou procesu buněčné adheze. Transferin je protein, který transportuje železo a je zodpovědný za jeho dodávání do buněčných membrán.

Mastné kyseliny a lipidy

Hrají klíčovou roli v bezsérovém médiu, pokud není k dispozici sérum.

Vitamíny

Pro vývoj a proliferaci buněk je nezbytná řada vitamínů. Buňky nedokážou vitamíny produkovat v dostatečném množství, a proto jsou v tkáňových kulturách nezbytné jako doplňky stravy.

V buněčné kultuře je sérum primárním zdrojem vitamínů; média se však také obohacují o různé vitamíny, aby byla vhodná pro konkrétní typ buněk. K stimulaci růstu se nejčastěji používají vitamíny skupiny B.

Stopové prvky

Chemické prvky, jako je měď, zinek, selen a meziprodukty trikarboxylových kyselin, se označují jako stopové prvky. Stopové prvky se často přidávají do médií, která neobsahují sérum, aby nahradily ty, které jsou obvykle přítomny v séru. Tyto prvky jsou důležité chemické složky, které jsou nezbytné pro zdravý vývoj buněk. Mnoho biochemických reakcí závisí na určitých mikroživinách, například na enzymatické aktivitě.

Doplňky kultivačního média

Kompletní růstové médium doporučené pro určité buněčné linie vyžaduje další složky, které v základním médiu a séru chybí. Tyto doplňky stravy podporují buněčný růst a správnou metabolickou funkci.

Ačkoli jsou hormony, růstové faktory a signální molekuly nezbytné pro správnou proliferaci konkrétních buněčných linií, je třeba vždy dodržovat následující opatření: Vzhledem k tomu, že přidání doplňků může změnit osmolalitu kompletního růstového média, což může bránit buněčnému vývoji, je vždy vhodné osmolalitu po přidání doplňků ověřit. U většiny buněčných linií se optimální osmolalita pohybuje v rozmezí 260 až 320 mOSM/kg.

Antibiotika

Antibiotika se často používají k potlačení růstu bakteriálních a plísňových kontaminantů [16], ačkoli pro růst buněk nejsou nezbytná. Vzhledem k tomu, že antibiotika mohou zakrýt kontaminaci mykoplazmami a rezistentními bakteriemi, nedoporučuje se jejich rutinní použití v buněčných kulturách [17, 18].

Kromě toho mohou antibiotika narušit metabolismus hypersenzitivních buněk. Často se používají kombinace penicilinu a streptomycinu od společností MilliporeSigma a Life Technologies. Plasmocin byl použit při kultivaci gliomových buněčných linií TS603, TS516 a BT260 [19] a ukázal se jako účinný při odstraňování kontaminace mykoplazmami (20).

Sérová složka

V séru jsou přítomny albuminy, růstové faktory i inhibitory růstu. Sérum je jednou z nejvýznamnějších složek buněčného kultivačního média, protože poskytuje aminokyseliny, bílkoviny, vitamíny (zejména vitamíny rozpustné v tucích, jako jsou A, D, E a K), sacharidy, lipidy, hormony, růstové faktory, minerály a stopové prvky.

K podpoře vývoje kultivovaných buněk se často využívá sérum z fetálních a telatích zdrojů. Fetální sérum je bohatým zdrojem růstových faktorů a je vhodné pro klonování buněk a vývoj citlivých buněk. Vzhledem ke svým sníženým schopnostem podporovat růst se telátčí sérum používá v experimentech s kontaktní inhibicí. Běžná růstová média často obsahují 2 % až 10 % séra. Přidání séra do kultivačního média slouží k následujícím účelům [21]:

  • Sérová složka dodává buňkám nezbytné živiny (jak ve formě roztoku, tak vázané na bílkoviny).

  • V séru je obsaženo několik růstových faktorů a hormonů podílejících se na podpoře růstu a specializované buněčné činnosti.

  • Obsahuje mnoho vazebných proteinů, jako je albumin a transferin, které transportují další chemické látky do buňky. Například albumin dodává do buněk tuky, vitamíny, hormony atd.

  • Poskytuje také proteiny, jako je fibronektin, které zvyšují adhezi buněk k substrátu. Navíc produkuje prvky podporující šíření, které napomáhají expanzi buněk před dělením.

  • Dodává inhibitory proteáz, které zabraňují proteolýze v buňkách.

  • Obsahuje také minerály, jako jsou Na+, K+, Zn2+ a Fe2+.

  • Zvyšuje viskozitu média, čímž chrání buňky před mechanickým poškozením během míchání suspenzní kultury.

  • Působí také jako pufr.

Odkazy

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Výživa živočišných buněk v tkáňové kultuře; počáteční studie na syntetickém médiu. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rychlá adsorpce složky fetálního telecího séra savčími buňkami v kultuře. Potenciální zdroj artefaktů ve studiích antisér proti buněčně specifickým antigenům. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Přidání séra do média používaného k přípravě buněčných suspenzí jako možný zdroj artefaktů v buněčně zprostředkovaných reakcích studovaných pomocí testu popliteální lymfatické uzliny. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komerční bezsérumová média: růst hybridomů a produkce monoklonálních protilátek. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Metody pro růst kultivovaných buněk v bezsérovém médiu. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. Chaperony HSP70 transportují TDP-43 bez RNA do anisotropních intranukleárních tekutých sférických obalů. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, a kol. Senescence vyvolaná Downovým syndromem narušuje jadernou architekturu nervových progenitorů. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Úplná náhrada séra albuminem, transferinem a sójovými lipidy v kulturách B lymfocytů reagujících na lipopolysacharidy. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematické zdokonalování chemicky definovaného bezproteinového média pro růst hybridomů a produkci monoklonálních protilátek. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Bezproteinové médium pro růst hybridomů a dalších buněk imunitního systému. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Buněčná kultura bez séra: sjednocující přístup. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Klonální růst buněčných linií čínského křečka v médiích bez bílkovin. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analýza cytotoxických účinků kultivačního média obsahujícího HEPES vystaveného světlu. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolová červeň v tkáňových kultivačních médiích je slabý estrogen: důsledky pro studium buněk reagujících na estrogen v kultuře. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Vývoj bezsérových médií. In: Master JRW, ed. Animal Cell culture, 3. vyd. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Použití antibiotik v kultivačních médiích. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Šíření a kontrola mykoplazmatické infekce buněčných kultur. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Výměna média a pasážování buněčných linií. Nat Protoc. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Histonová demethyláza KDM6A přímo vnímá kyslík a reguluje chromatin a osud buněk. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, a kol. Účinnost přípravku Plasmocin™ na různých savčích buněčných liniích infikovaných mollicuty ve srovnání s běžně používanými antibiotiky v buněčné kultuře: místní zkušenosti. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Molekulární aspekty vazby ligandů na sérový albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53