Mine otse sisu juurde

Meedia ja reagendid

40 tooted

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES-i, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 on bioloogilistes uuringutes rakukultuurides laialdaselt tunnustatud ja laialdaselt kasutatav baaskeskkond. See on erinevate imetajate rakuliinide kasvu jaoks oluline toitainete allikas, eriti kui seda täiendatakse loote veise seerumiga (FBS). See ainulaadne koostis ühendab Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonna (DMEM) ja Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) täpses 1:1 suhtes. L-glutamiini lisamine täiustab selle koostist veelgi. DMEM, mis on tuletatud Eagle’i minimaalse essentsiaalse keskkonna (EMEM) baasil, pakub võrreldes oma eelkäijaga suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni. Seevastu Ham’i F-12 põhineb Ham’i F-10 keskkonnal, pakkudes täiendavat komplekti olulisi komponente. Optimaalse rakkude kasvu toetamiseks on tavaline lisada DMEM:Ham's F12-le FBS-i, mille tüüpiline kontsentratsioon on 5–10%. See lisand on vajalik, kuna keskkonnas puuduvad rakkude arenguks olulised kasvuhormoonid, lipiidid ja valgud. DMEM:Ham's F12 sisaldab pH-puhversüsteemi ja seda täiendatakse sageli pH-indikaatoriga fenoolpunasega. DMEM:Ham's F12-s või mis tahes bikarbonaatpuhversüsteemi kasutavas keskkonnas kasvatatavad rakud vajavad sobiva pH-taseme säilitamiseks kontrollitud CO₂-keskkonda (5–10%). Kvaliteedikontroll • Steriilselt filtreeritud Säilitamine ja kõlblikkusaeg • Säilitada temperatuuril +2 °C kuni +8 °C, valguse eest kaitstult. • Pärast avamist hoida temperatuuril 4 °C ja kasutada 6–8 nädala jooksul. Transporditingimused • Ümbritseva õhu temperatuur Hooldus • Hoida külmikus temperatuuril +2 °C kuni +8 °C pimedas kohas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist temperatuurini +37 °C, kuna see halvendab toote kvaliteeti. • Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, nagu näiteks mikrolaineahju. • Kui kasutatakse vaid osa keskkonnast, võtke välja vajalik kogus ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini. Koostis Kategooria Komponendid Kontsentratsioon (mg/l) Aminohapped Glütsiin 18,75 L-alaniin 4,45 L-arginiin HCl 147,50 L-asparagiin H₂O 7,50 L-asparagiinhape 6,65 L-tsüsteiin HCl H₂O 17,56 L-tsüstiin-2-HCl 31,29 L-glutamiinhape 7,35 L-glutamiin 365,00 L-histidiini HCl H₂O 31,48 L-isoleutsiin 54,47 L-leutsiin 59,05 L-lüsiin HCl 91,25 L-metioniin 17,24 L-fenüülalaniin 35,48 L-proliin 17,25 L-seriin 26,25 L-treoniin 53,45 L-trüptofaan 9,02 L-türosiin 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valiin 52,85 Vitamiinid D-biotiin 0,0035 Koliinkloriid 8,98 D-kaltsiumpantotenaat 2,24 Foolhape 2,66 müo-inositool 12,60 Nikotiinamiid 2,02 Püridoksiin-HCl 0,031 Püridoksaal-HCl 2,00 Riboflaviin 0,219 Tiamiin-HCl 2,17 B12-vitamiin 0,68 Anorgaanilised soolad CaCl₂·2H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄·7H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Muud koostisosad D-glükoos 3151,00 Hüpoksantiin 2,40 HEPES 3574,50 Linoolhape 0,042 Lipoehape 0,105 Fenoolpunase naatriumsool 8,63 Putreskiin-2-HCl 0,081 Na-püruvaat 55,00 Tümidiin 0,365

€25.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

DMEM, massiprotsent: 4,5 g/l glükoosi, massiprotsent: 4 mM L-glutamiini, massiprotsent: 3,7 g/l NaHCO₃, massiprotsent: 1,0 mM naatriumpüruvaati

DMEM (Dulbecco modifitseeritud Eagle’i keskkond) on väga mitmekülgne ja laialdaselt kasutatav baaskeskkond, mis on mõeldud mitmesuguste imetajate rakkude kasvu toetamiseks bioloogilistes uuringutes. See on ideaalne keskkond primaarsete fibroblastide, neuronite, glia-rakkude, HUVEC-rakkude, silelihasrakkude ning populaarsete rakuliinide, nagu HeLa, 293, Cos-7 ja PC-12, kasvatamiseks. DMEM eristub teistest keskkondadest oma ainulaadse koostise poolest. Selles on aminohapete ja vitamiinide kontsentratsioon võrreldes algse Eagle'i minimaalse essentsiaalse keskkonnaga (Eagle's Minimal Essential Medium) muljetavaldavalt neljakordne. Esialgu arendati DMEM välja madala glükoosisisaldusega (1 g/l) ja naatriumpüruvaadiga, kuid seda kasutatakse sageli ka kõrgemate glükoositasemetega, kas naatriumpüruvaadiga või ilma. Tähelepanuväärne on, et DMEM ei sisalda valke, lipiide ega kasvufaktoreid, mistõttu on vaja seda täiendada. Optimaalse kasvu saavutamiseks on tavaline lähenemisviis täiendada DMEM-i 10% veise loote seerumiga (FBS). Lisaks kasutab DMEM naatriumvesinikkarbonaadi puhversüsteemi, mis nõuab 5–10% CO₂ sisaldusega keskkonda füsioloogilise pH säilitamiseks. Dulbecco modifitseeritud Eagle’i keskkond (DMEM) on rakkude ja kudede kultiveerimiseks mõeldud määratletud keskkondade seas kõrgelt hinnatud, vastates erinevate adhesiivsete rakkude fenotüüpide kasvuvajadustele. See ületab algset Eagle’i keskkonda, mis töötati välja 1950. aastatel kanarakkude kasvatamiseks, tänu täiustatud lisandite koostisele, mida tuntakse Dulbecco modifikatsioonina. See modifikatsioon suurendab oluliselt valitud aminohapete ja vitamiinide sisaldust kuni neljakordselt võrreldes algse keskkonnaga. Rakukultuuri valdkonnas mängib DMEM olulist rolli erinevate rakutüüpide, sealhulgas primaarrakkude, tüvirakkude ja transformeeritud rakkude kasvukeskkonnana. Teadlased kasutavad DMEM-i modifitseeritud versiooni ka mitmesugustes uurimisrakendustes, nagu ravimite avastamine, koetehnoloogia ja rakkude signaaliteede uurimine. Kvaliteedikontroll • Steriilselt filtreeritud Säilitamine ja kõlblikkusaeg • Säilitada temperatuuril +2 °C kuni +8 °C, valguse eest kaitstult. • Pärast avamist hoida temperatuuril 4 °C ja kasutada 6–8 nädala jooksul. Transporditingimused • Ümbritseva õhu temperatuur Hooldus • Hoida külmikus temperatuuril +2 °C kuni +8 °C pimedas kohas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist temperatuurini +37 °C, kuna see halvendab toote kvaliteeti. • Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, nagu näiteks mikrolaineahju. • Kui kasutatakse vaid osa keskkonnast, võtke välja vajalik kogus ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini. Koostis Kategooria Komponendid Kontsentratsioon (mg/l) Aminohapped Glütsiin 30,00 L-arginiini HCl 84,00 L-tsüstiin-2-HCl 62,57 L-glutamiin 584,00 L-histidiin HCl H₂O 42,00 L-isoleutsiin 105,00 L-leutsiin 105,00 L-lüsiin HCl 146,00 L-metioniin 30,00 L-fenüülalaniin 66,00 L-seriin 42,00 L-treoniin 95,00 L-trüptofaan 16,00 L-türosiin 2 Na 2H₂O 103,79 L-valiin 94,00 Vitamiinid Koliinkloriid 4,00 D-kaltsiumpantotenaat 4,00 Foolhape 4,00 müo-inositool 7,20 Nikotiinamiid 4,00 Püridoksaal-HCl 4,00 Riboflaviin 0,40 Tiamiin-HCl 4,00 Anorgaanilised soolad CaCl₂·2H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Muud koostisosad D-glükoos 4500,00 Fenoolpunase naatriumsool 15,90 Na-püruvaat 110,00

€25.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

EMEM (MEM Eagle), sisaldab: 2 mM L-glutamiini, sisaldab: 2,2 g/l NaHCO₃, sisaldab: EBSS

Eagle’i minimaalne essentsiaalne kasvukeskkond (EMEM) on üks laialdasemalt kasutatavaid baaskeskkondi mitmesuguste imetajate rakkude, eriti adhesiivsete rakuliinide kasvatamiseks. Algselt Harry Eagle’i poolt välja töötatud klassikaline koostis sisaldab olulisi aminohappeid, vitamiine ja anorgaanilisi sooli, mis on vajalikud nii esmaste rakkude kui ka väljakujunenud rakuliinide kasvu toetamiseks standardsetes kultiveerimistingimustes. Seda kasutusvalmis, steriilselt filtreeritud vedelat koostist on täiendatud Earle’i tasakaalustatud soolalahusega (EBSS), 2 mM L-glutamiini, D-glükoosi (1,0 g/l) ja 2,2 g/l naatriumvesinikkarbonaadiga (NaHCO₃), mistõttu sobib see kasutamiseks CO₂-kontrollitud inkubaatori keskkonnas (tavaliselt 5 % CO₂). Koostisesse kuuluv fenoolpunane toimib pH-indikaatorina, võimaldades rakukultuuri ajal keskkonna seisundi mugavat visuaalset jälgimist. Peamised omadused • Klassikaline Eagle’i MEM-koostis Earle’i tasakaalustatud soolalahusega (EBSS) • Sisaldab 2 mM L-glutamiini – valmis koheseks kasutamiseks • 2,2 g/l naatriumvesinikkarbonaati – puhverdatud 5 % CO₂ inkubeerimiseks • Peamise süsinikuallikana D-glükoos (1,0 g/l) • pH-indikaatorina fenoolpunane • Ilma HEPES-ita ja ilma naatriumpüruvaadita • Steriilselt filtreeritud vedel kasvukeskkond, valmis kasutamiseks • pH 7,0–7,6 Tüüpilised rakendused EMEM sobib mitmesuguste imetajate rakuliinide kasvatamiseks, sealhulgas HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 ja paljude primaarrakkude kasvatamiseks. Tüüpilised rakendused hõlmavad: • Adherentsete rakuliinide rutiinne hooldus ja paljundamine • Viiruste paljundamine ja vaktsiinide tootmise töövood • Tsütotoksilisuse ja biotestide rakendused • Transfektsiooni- ja valgu ekspressiooni uuringud • Rakubioloogia ja molekulaarbioloogia alusuuringud Optimaalse rakkude kasvu tagamiseks lisatakse EMEM-ile tavaliselt 5–10 % veise loote seerumit (FBS) ning sõltuvalt rakuliinist ka mitteolulisi aminohappeid (NEAA) ja antibiootikume, nagu penitsilliin/streptomütsiin. Käsitsemine ja säilitamine Hoida avamata pudelit temperatuuril +2 °C kuni +8 °C, valguse eest kaitstult. Pärast avamist kasutada aseptilistes tingimustes. Lahuses olev L-glutamiin laguneb järk-järgult – parima tulemuse saavutamiseks soovitame keskkonda kasutada 4 nädala jooksul pärast avamist või pikema säilitamise korral lisada enne kasutamist värsket L-glutamiini. Enne rakkudele lisamist laske keskkonnal soojeneda 37 °C-ni. Kvaliteet Valmistatud rangete kvaliteedistandardite kohaselt. Iga partii steriilsust, pH-väärtust, osmolalisust ja endotoksiinitaset kontrollitakse, et tagada ühtlane toimivus rakukultuuri rakendustes. Toote spetsifikatsioonid Spetsifikatsioon Üksikasjad TootetüüpMEM TootekategooriaRakukultuuri kasvukeskkonnad VormVedelik SteriilneJah Maht500 ml L-glutamiinL-glutamiiniga (2 mM) GlükoosSisaldab glükoosi (1,0 g/l) NaHCO3NaHCO₃-ga (2,2 g/l) HEPESIlma HEPES-ita Na-püruvaatIlma naatriumpüruvaadita FenoolpunaneFenoolpunaga SoolalahusEarle’i tasakaalustatud soolalahus (EBSS) pH7,0 – 7,6 EndotoksiinisisaldusEi ole määratud Säilitamine+2 °C kuni +8 °C Koostis (koostis ühe liitri kohta)

€25.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Külmutuskeskkond CM-1 – 100 ml

Cytioni külmutuskeskkond CM-1 on tipptasemel krüokonserveerimiskeskkond, mis on loodud tagama rakkude kõrgeima eluvõime ja funktsionaalsuse pärast sulatamist. See mitmekülgne keskkond sobib laiale rakutüüpide spektrile, sealhulgas nii inim- kui ka loomarakkudele, mistõttu on see oluline vahend mitmesugusteks teadusuuringuteks. Freeze Medium CM-1 sisaldab hoolikalt tasakaalustatud kombinatsiooni krüoprotektante ja olulisi toitaineid, mis vähendab külmutamisprotsessi käigus jääkristallide teket ja rakkude stressi, säilitades seeläbi rakkude terviklikkuse. Freeze Medium CM-1 peamised omadused on järgmised: • Lai ühilduvus: Tõhus mitmesuguste rakutüüpide puhul, sealhulgas esmasrakkude, tüvirakkude ja väljakujunenud rakuliinide puhul. • Kõrge eluvõime: Optimeeritud, et maksimeerida rakkude taastumist ja eluvõimet sulatamise järel, tagades usaldusväärsed eksperimenditulemused. • Kasutusvalmis: mugavalt ette valmistatud ja steriliseeritud koheseks kasutamiseks, vähendades ettevalmistusaega ja saastumisriski. • Suurem stabiilsus: säilitab ühtlase toimivuse standardsetes krüokonserveerimistingimustes, tagades korratavad tulemused. • Pikk säilivusaeg: CM-1 on seerumit sisaldav, kasutusvalmis krüokonserveerimiskeskkond, mida võib külmkapis säilitada kuni ühe aasta. CM-1 kasutamine rakkude külmutamiseks CM-1 kasutamiseks nii adheseeruvate kui ka suspensioonrakkude külmutamisel järgige järgmisi samme: • Adherentsete rakkude puhul peske need ja eraldage need kultuurisubstraatilt. Suspensioonrakkude puhul jätkake otse järgmise sammuga. • Loendage rakud, et veenduda, et nende kontsentratsioon on õige. • Tsentrifuugige rakke, et need settiksid, ja suspendeerige need seejärel uuesti CM-1 külmutuskeskkonnas. • Kandke resuspendeeritud rakud üle krüovialidesse. • Kasutage aeglast külmutamismeetodit enne rakkude ülekanne pikaajalisesse säilitamisse. Meetod Kirjeldus Etapid ❄️ Käsitsi külmutamine Samm-sammuline meetod, mis hõlmab järkjärgulist temperatuuri alandamist, et tagada rakkude eluvõime. 1️⃣ Asetage rakud külmutuskeskkonnas 4 °C külmikusse 40 minutiks. 2️⃣ Viige seejärel üle -80 °C külmikusse 24 tunniks. 3️⃣ Säilitage rakke vedelas lämmastikus pikaajaliseks säilitamiseks. ❄️ Mr. Frosty kasutamine Mugav seade, mis võimaldab kontrollida külmutamise kiirust ilma elektrita. 1️⃣ Valmistage rakud ette külmutuskeskkonnaga krüovialides. 2️⃣ Asetage krüovialid Mr. Frosty konteinerisse. 3️⃣ Säilitage -80 °C juures 24 tundi enne vedelasse lämmastikku üleviimist. ❄️ Kontrollitud külmutamiskiirusega külmik Thermo Fisheri või teiste tootjate valmistatud ülitäpne külmutusseade, mis on mõeldud kontrollitud temperatuuri alandamiseks. 1️⃣ Programmeerige seade temperatuuri järkjärguliseks alandamiseks. 2️⃣ Asetage ettevalmistatud rakud külmutisse. 3️⃣ Pärast külmutustsüklit viige rakud üle vedelasse lämmastikku. • Säilitage krüoviaale pikaajaliseks säilitamiseks temperatuuril alla -130 °C või vedelas lämmastikus. Koostisosad • Sisaldab FBS-i, DMSO-d, glükoosi, sooli • Puhvervõime: pH = 7,2–7,6 Cytioni külmutuskeskkond CM-1 pakub usaldusväärset lahendust krüokonserveerimiseks, tagades rakkude kõrge eluvõime ja funktsionaalsuse pärast sulatamist mitmesugusteks teadusuuringuteks.

€99.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Külmutuskeskkond CM-1 – 50 ml

Cytioni külmutuskeskkond CM-1 on tipptasemel krüokonserveerimiskeskkond, mis on loodud tagama rakkude kõrgeima eluvõime ja funktsionaalsuse pärast sulatamist. See mitmekülgne keskkond sobib laiale rakutüüpide spektrile, sealhulgas nii inim- kui ka loomarakkudele, mistõttu on see oluline vahend mitmesugusteks teadusuuringuteks. Freeze Medium CM-1 sisaldab hoolikalt tasakaalustatud kombinatsiooni krüoprotektante ja olulisi toitaineid, mis vähendab külmutamisprotsessi käigus jääkristallide teket ja rakkude stressi, säilitades seeläbi rakkude terviklikkuse. Freeze Medium CM-1 peamised omadused on järgmised: • Lai ühilduvus: Tõhus mitmesuguste rakutüüpide puhul, sealhulgas esmasrakkude, tüvirakkude ja väljakujunenud rakuliinide puhul. • Kõrge eluvõime: Optimeeritud, et maksimeerida rakkude taastumist ja eluvõimet sulatamise järel, tagades usaldusväärsed eksperimenditulemused. • Kasutusvalmis: mugavalt ette valmistatud ja steriliseeritud koheseks kasutamiseks, vähendades ettevalmistusaega ja saastumisriski. • Suurem stabiilsus: säilitab ühtlase toimivuse standardtingimustes krüokonserveerimisel, tagades korratavad tulemused. • Pikk säilivusaeg: CM-1 on seerumit sisaldav, kasutusvalmis krüokonserveerimiskeskkond, mida võib külmkapis säilitada kuni ühe aasta. CM-1 kasutamine rakkude külmutamiseks CM-1 kasutamiseks nii adheseeruvate kui ka suspensioonrakkude külmutamisel järgige järgmisi samme: • Adherentsete rakkude puhul peske need ja eraldage need kultuurisubstraadist. Suspensioonrakkude puhul jätkake otse järgmise sammuga. • Loendage rakke, et veenduda, et nende kontsentratsioon on õige. • Tsentrifuugige rakke, et need settiksid, ja suspendeerige need seejärel uuesti CM-1 külmutuskeskkonnas. • Kandke resuspendeeritud rakud üle krüovialidesse. • Kasutage aeglast külmutamismeetodit enne rakkude ülekanne pikaajalisesse säilitamisse. Meetod Kirjeldus Etapid ❄️ Käsitsi külmutamine Samm-sammuline meetod, mis hõlmab järkjärgulist temperatuuri alandamist, et tagada rakkude eluvõime. 1️⃣ Asetage rakud külmutuskeskkonnas 4 °C külmikusse 40 minutiks. 2️⃣ Viige seejärel üle -80 °C külmikusse 24 tunniks. 3️⃣ Säilitage rakke vedelas lämmastikus pikaajaliseks säilitamiseks. ❄️ Mr. Frosty kasutamine Mugav seade, mis võimaldab kontrollida külmutamise kiirust ilma elektrita. 1️⃣ Valmistage rakud ette külmutuskeskkonnaga krüovialides. 2️⃣ Asetage krüovialid Mr. Frosty konteinerisse. 3️⃣ Säilitage -80 °C juures 24 tundi enne vedelasse lämmastikku üleviimist. ❄️ Kontrollitud külmutamiskiirusega külmik Thermo Fisheri või teiste tootjate valmistatud ülitäpne külmutusseade, mis on mõeldud kontrollitud temperatuuri langetamiseks. 1️⃣ Programmeerige seade temperatuuri järkjärguliseks alandamiseks. 2️⃣ Asetage ettevalmistatud rakud külmutisse. 3️⃣ Pärast külmutustsüklit viige rakud üle vedelasse lämmastikku. • Säilitage krüoviaale pikaajaliseks säilitamiseks temperatuuril alla -130 °C või vedelas lämmastikus. Koostisosad • Sisaldab FBS-i, DMSO-d, glükoosi, sooli • Puhvervõime: pH = 7,2–7,6 Cytioni külmutuskeskkond CM-1 pakub usaldusväärset lahendust krüokonserveerimiseks, tagades rakkude kõrge eluvõime ja funktsionaalsuse pärast sulatamist mitmesugusteks teadusuuringuteks.

€59.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Ham's F12K Medium, w: 2.0 mM L-Glutamine, w: 2.0 mM Sodium pyruvate, w: 2.5 g/L NaHCO3

Introducing Ham's F-12K (Kaighn's) Medium, a specialized modification of Ham's F-12 medium designed to meet the unique requirements of biological research. This advanced medium offers distinct advantages, enhancing the cultivation of primary human hepatocytes, as well as rat and chicken liver cells, particularly in reduced serum conditions. Ham's F-12K (Kaighn's) Medium is carefully formulated to optimize cell culture conditions. It features an enriched composition, providing elevated levels of essential components such as amino acids and sodium pyruvate, as well as additional elements including putrescine, thymidine, hypoxanthine, and zinc. These additions enable researchers to supplement the medium with minimal serum or defined components for specific cell types, facilitating precise experimental conditions. Notably, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium does not contain proteins or growth factors. Consequently, supplementation with growth factors and Fetal Bovine Serum (FBS) is often necessary, allowing researchers to tailor the medium to the requirements of their specific cell lines. For optimal performance, the concentration of FBS must be carefully optimized for each cell line, ensuring optimal growth and functionality. To maintain physiological pH, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium employs a sodium bicarbonate buffer system (2.5 g/L), necessitating a controlled 5-10% CO2 environment during cultivation. This ensures the medium's pH remains within the ideal range for cell growth and viability. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing as well as warming up to +37°C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37°C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium but the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2H2O 135,24 Copper(II) sulfate x 5H2O 0,00 Iron (II) sulfate x 7H2O 0,83 Magnesium chloride x 6H2O 105,72 Magnesium sulfate x 7H2O 394,49 Potassium chloride 283,29 Potassium dihydrogen phosphate 58,52 Sodium chloride 7597,20 di-Sodium hydrogen phosphate anhydrous 115,02 Zinc sulfate x 7H2O 0,14 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 1260,00 Hypoxanthine 4,08 DL-α-Lipoic acid 0,21 Phenol red 3,00 Putrescine x 2HCl 0,32 Sodium pyruvate 220,00 NaHCO3 2500,00 Thymidine 0,73 Amino Acids L-Alanine 17,82 L-Arginine x HCl 421,40 L-Asparagine x H2O 30,02 L-Aspartic acid 26,62 L-Cysteine x HCl x H2O 70,24 L-Glutamine 292,20 L-Glutamic acid 29,42 Glycine 15,01 L-Histidine x HCl x H2O 41,92 L-Isoleucine 7,87 L-Leucine 26,24 L-Lysine x HCl 73,04 L-Methionine 8,95 L-Phenylalanine 9,91 L-Proline 69,06 L-Serine 21,02 L-Threonine 23,82 L-Tryptophan 4,08 L-Tyrosine 10,87 L-Valine 23,42 Vitamins D(+)-Biotin 0,07 D-Calcium pantothenate 0,48 Choline chloride 13,96 Folic acid 1,32 myo-Inositol 18,02 Nicotinamide 0,04 Pyridoxine x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 Thiamine x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€108.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Ham's F12 Medium, sisaldab: 1,0 mM stabiilset glutamiini, sisaldab: 1,0 mM naatriumpüruvaati, sisaldab: 1,176 g/l NaHCO₃

Ham's F-12 kasvukeskkond, tuntud ka kui Ham's F-12 toitainete segu, on laialdaselt kasutatav baaskeskkond, mis on spetsiaalselt välja töötatud rakukultuuride jaoks. Seda on laialdaselt kasutatud Hiina hamstri munasarja (CHO) rakkude, kopsurakkude ja hiire L-rakkude seerumivabaks üherakulise külvamiseks. Lisaks on Ham's F-12 eelistatud kasvukeskkond kloonilise toksilisuse analüüsi (CTA) läbiviimiseks. Üks selle märkimisväärseid eeliseid on võime toetada rakkude kasvu ilma seerumi lisamiseta. See välistab seerumi komponentidest tingitud võimaliku häire, tagades järjepidevad ja usaldusväärsed katsetulemused. Pakkudes seerumivaba kasvatuskeskkonda, võimaldab Ham's F-12 keskkond teadlastel oma uuringuid paremini kontrollida. Hami F-12 keskkonna teine oluline omadus on selle sobivus üksikrakkude külvamiseks. See teeb sellest suurepärase valiku mitmesuguste rakuliinide jaoks, sealhulgas CHO-rakkude, kopsurakkude ja hiire L-rakkude jaoks. Keskkonna optimeeritud toitainete koostis soodustab üksikute rakkude tõhusat kinnitumist ja kasvu, võimaldades luua homogeenseid rakukultuure, mille reprodutseeritavus on parem. Lisaks on Ham's F-12 keskkond pälvinud tunnustust kui eelistatud keskkond kloonilise toksilisuse testiks (CTA). Sellel testil on otsustav roll ainete tsütotoksilise mõju hindamisel rakkudele. Kasutades CTA-s Ham's F-12 keskkonda, saavad teadlased täpselt hinnata erinevate ühendite või ravimeetodite mõju üksikutele rakkudele, mis annab väärtuslikku teavet toksikoloogiliste profiilide kohta. Kvaliteedikontroll • pH = 7,2 ± 0,02 temperatuuril 20–25 °C. • Iga partii on kontrollitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes. Säilitamine • Hoida pimedas külmikus temperatuuril +2–+8 °C. Külmutamine ja soojendamine temperatuurini +37 °C vähendavad toote kvaliteeti. • Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahju). • Kui kasutatakse ainult osa keskkonnast, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril. • Kõigi keskkondade, välja arvatud põhikeskkonna, kõlblikkusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast. Koostis Koostisosad mg/l Anorgaanilised soolad Kaltsiumkloriid x 2H₂O 44,00 Vask(II)sulfaat x 5H₂O 0,00 Raud(II)sulfaat x 7H₂O 0,83 Magneesiumkloriid x 6H₂O 122,00 Kaaliumkloriid 223,65 Naatriumkloriid 7599,00 veevaba dinaatriumvesinikfosfaat 142,04 Tsinksulfaat x 7H₂O 0,86 Muud koostisosad D(+)-glükoos, veevaba 1801,60 Hüpoksantiin 4,08 Linoolhape 0,08 DL-α-lipohape 0,21 Fenoolpunane 1,20 Putreskiin x 2HCl 0,16 Na-püruvaat 110,00 Tümidiin 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminohapped L-alaniin 8,91 L-arginiin x HCl 210,70 L-asparagiin x H₂O 15,01 L-asparagiinhape 13,31 L-tsüsteiin x HCl x H₂O 35,12 L-alüül-L-glutamiin 217,30 L-glutamiinhape 14,71 Glütsiin 7,51 L-histidiin x HCl x H₂O 20,96 L-isoleutsiin 3,94 L-leutsiin 13,12 L-lüsiin x HCl 36,54 L-metioniin 4,48 L-fenüülalaniin 4,96 L-proliin 34,53 L-seriin 10,51 L-treoniin 11,91 L-trüptofaan 2,04 L-türosiin 5,44 L-valiin 11,71 Vitamiinid D(+)-biotiin 0,01 D-kaltsiumpantotenaat 0,24 Koliinkloriid 13,96 Foolhape 1,32 müo-inositool 18,02 Nikotiinamiid 0,04 Püridoksiin x HCl 0,06 Riboflaviin 0,04 Tiamiin x HCl 0,34 B12-vitamiin 1,36

€25.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

HEPES Buffer Solution (1M)

Volume: 100 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered HEPES Buffer Solution (1 M), also known as N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, is a zwitterionic organic buffering agent widely used in cell culture media. It is designed to maintain stable pH conditions in the physiological range of 6.7 to 8.6, supporting optimal cellular function during in vitro applications. Application and Benefits HEPES provides reliable buffering capacity in cell culture systems, particularly when cells are handled outside a CO₂ incubator. The addition of 10–25 mM HEPES to culture media offers enhanced pH stability during extended manipulation periods, helping to maintain consistent experimental conditions. This buffer is membrane-impermeable, has minimal interference with biochemical reactions, and demonstrates strong chemical and enzymatic stability. These properties make it suitable for a wide range of cell culture and biochemical applications. Formulation and Usage The solution is supplied as a 1 M concentrate prepared in cell culture–grade water and is sterile-filtered for use in contamination-sensitive environments. It can be diluted to the desired working concentration depending on application requirements. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to preserve product integrity. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Rakukultuurikeskkonnad: ülevaade

Eluteaduste valdkonnas on üks olulisemaid meetodeid rakukultuur. Mõiste „rakukultuur” tähendab rakkude, kudede või organite eemaldamist loomalt või taimelt ning nende rakkude, kudede või organite järgnevat siirdamist kunstlikku keskkonda, mis soodustab nende ellujäämist ja/või kasvu. Rakkude optimaalse arengu põhilised keskkonnatingimused on reguleeritud temperatuur, substraat rakkude kinnitumiseks, sobiv kasvukeskkond ning inkubaator, mis hoiab optimaalset pH-taset ja osmolalisust. Rakud vajavad neid tingimusi, et kasvada oma täieliku potentsiaali ulatuses.

Sobiva kasvukeskkonna valik in vitro kasvatamiseks on rakukultuuri protsessis kõige kriitilisem ja olulisem etapp. Kasvukeskkond, mida nimetatakse ka kultuurikeskkonnaks, on vedelik või geel, mis on koostatud soodustama organismide arengut mikroskoopilisel, rakulisel või taimelaadsel tasandil. Rakukultuuri kasvatamiseks kasutatav keskkond sisaldab sageli piisavat energiavarustust ja aineid, mis reguleerivad rakutsüklit. Kultuurikeskkonna peamised koostisosad on aminohapped, vitamiinid, anorgaanilised soolad, glükoos ja seerum. Seerum lisatakse keskkonnale, kuna see toimib kasvufaktorite, hormoonide ja kinnitumisfaktorite allikana. Lisaks toitainete pakkumisele aitab keskkond kaasa ka pH-taseme ja osmolalisuse säilitamisele.

Rakukultuuris kasutatavad keskkonna tüübid

Nii inim- kui ka loomarakke on võimalik kasvatada kas kunstlikus või sünteetilises keskkonnas või täiesti looduslikus keskkonnas, mida on täiendatud looduslike elementidega. Järgnevalt anname ülevaate erinevatest praegu kättesaadavatest keskkonnatüüpidest.

Looduslikud kasvukeskkonnad

Looduslikes kasvukeskkondades leidub ainult looduslikus olekus esinevaid bioloogilisi vedelikke. Looduslikud kasvukeskkonnad on väga kasulikud ja lihtsad mitmesuguste loomarakutüüpide kasvatamiseks. Looduslikke kasvukeskkondi moodustavate täpsete komponentide puudulik mõistmine on peamine tegur, mis mõjutab looduslike kasvukeskkonna kasutamisel saadud tulemuste madalat korratavust.

Kunstlikud kasvukeskkonnad

Kunstlike või sünteetiliste kasvukeskkonna valmistamisel lisatakse toitaineid (nii orgaanilisi kui ka anorgaanilisi), seerumvalke, süsivesikuid, kofaktoreid, vitamiine ja sooli, samuti O₂ ja CO₂ gaasifaase [1].

On välja töötatud mitmesuguseid kunstlikke kasvukeskkondi, et täita ühte või mitut järgmistest funktsioonidest: 1) Vahetu ellujäämine (tasakaalustatud soolalahus täpse pH-väärtuse ja osmootse rõhuga). 2) Pikendatud ellujäämine (tasakaalustatud soolalahus, millele on lisatud erinevaid orgaaniliste kemikaalide ja/või seerumi koostisi). 3) Piiramatu areng. 4) Spetsiifilised funktsioonid.

Kunstlikud kasvukeskkonnad jagunevad neljaks erinevaks klassiks:

Seerumit sisaldavad keskkonnad

Loomarakkude kasvatamiseks kasutatavates keskkondades leiduvaim lisand on veise loote seerum. Seda lisatakse kultuurikeskkonnale odava lisandina, et saavutada parimad võimalikud kasvutingimused. Lisaks sellele, et seerum toimib ebastabiilsete või vees lahustumatute toitainete, hormoonide ja kasvufaktorite, proteaasi inhibiitorite ning muude ainete transportijana või kelaatorina, seob ja neutraliseerib see ka kahjulikke molekule.

Seerumivaba kasvukeskkond

Seerumi olemasolul keskkonnas on mitmeid puudusi ning see võib põhjustada suuri tõlgendusvigu immunoloogilistes uuringutes [2, 3]. On loodud mitmesuguseid seerumivabasid keskkondi [4, 5]. Need kasvukeskkonnad on üldjuhul spetsiaalselt koostatud ühe rakutüübi kultiveerimiseks, näiteks Thermo Fisher Scientificu tooted „Knockout Serum Replacement“ ja „Knockout DMEM“ ning Stem Cell Technologiesi mTESR-kasvukeskkond [6] tüvirakkude jaoks [7].

Lisaks sisaldavad need keskkonnad kindlaksmääratud koguseid puhastatud kasvufaktoreid, lipoproteiine ja muid valke, mida muidu tavaliselt annab seerum [8]. Neid keskkondi nimetatakse sageli „määratletud kultuurikeskkondadeks”, kuna nende koostisosad on hästi teada.

Keemiliselt määratletud kasvukeskkonnad

Need keskkonnad sisaldavad ülipuhasteid anorgaanilisi ja orgaanilisi komponente, mida ei ole saastanud mingisugune saaste. Need võivad sisaldada ka puhtaid valkude lisandeid, näiteks kasvufaktoreid.

 Bakterite või pärmi geneetiline modifitseerimine koos teatud rasvhapete, vitamiinide, kolesterooli ja aminohapete lisamisega viib nende koostisosade tootmiseni [9].

Valguvabad kasvukeskkonnad

Valguvabad kasvukeskkonnad on sellised, mis ei sisalda üldse valku, vaid ainult valguväliseid elemente. Võrreldes seerumilisandiga kasvukeskkondadega soodustab valguvaba keskkonna kasutamine suuremat rakkude paljunemist ja valgu ekspressiooni ning hõlbustab järgnevas protsessis tekkinud toote puhastamist [10–12]. Valgu ei sisaldu sellistes koostistes nagu MEM ja RPMI-1640. Vajaduse korral võib siiski manustada valgu lisandit.

Kasvatuskeskkond ja selle põhikomponendid

Kaubanduslikku kultuurikeskkonna saab osta pulbri või vedeliku kujul ning see sisaldab sageli mitmesuguseid toitaineid, nagu aminohapped, glükoos, soolad, vitamiinid ja muud toidulisandid. 

Nende komponentide vajadus on iga rakuliini puhul erinev ning need erinevused on põhjuseks, miks on olemas nii palju erinevaid kasvukeskkonna koostisi. Igal komponendil on oma kindel funktsioon, mida kirjeldatakse järgmistes lõikudes:

Puhversüsteemid

Optimaalsete kasvutingimuste säilitamiseks tuleb reguleerida pH-väärtust, mida tehakse sageli ühe kahest puhverdamissüsteemist:

Looduslik puhverdamissüsteem

CO₂/H₂CO₃ suhe atmosfääris on võrdne sellega, mis on kasvukeskkonnas, luues loodusliku puhvermehhanismi. Selle loodusliku puhvermehhanismi säilitamiseks tuleb kultuure hoida õhukeskkonnas, kus CO₂ sisaldus on 5–10%, mida saavutatakse sageli CO₂-inkubaatori abil. Loodusliku puhvri kasutamise üks suurimaid eeliseid on selle odavus ja ohutus.

HEPES

Zwitterioonil HEPES põhinev keemiline puhverdamine omab suuremat puhverdamisvõimet pH-vahemikus 7,2–7,4 ega vaja reguleeritud gaasikeskkonda. Teatavate rakutüüpide puhul võib suurem HEPES-i annus olla kahjulik. HEPES-i sisaldavad kasvukeskkonnad on samuti palju tundlikumad fluorestsentsvalguse fototoksilise mõju suhtes [13].

Fenoolpunane

pH-indikaator fenoolpunane on sageli lisatud kaubanduslikult kättesaadavatesse kultuurikeskkondadesse, võimaldades pH-väärtuse pidevat jälgimist. Rakude paljunemisel põhjustavad nende poolt toodetud metaboliidid pH-väärtuse muutust ja seega ka keskkonna värvimuutust. Fenoolpunasel on keskkonna värvile kahepoolne mõju: happelise pH juures muutub see kollaseks ja aluselise pH juures lillaks. pH 7,4, mis on rakukultuuri jaoks optimaalne väärtus, muudab keskkonna fluorestsentspunaseks.

Kuid fenoolpunasel on mõned puudused: esiteks suudab fenoolpunane imiteerida mitmete steroidhormoonide, eelkõige östrogeeni toimet [14]. Seetõttu soovitatakse östrogeenitundlike rakkude, nagu rinnakoe, uurimisel kasutada fenoolpunast mittesisaldavat kasvatuskeskkonda. Mitmes seerumivabas koostises häirib fenoolpunase olemasolu naatrium-kaaliumi tasakaalu. Selle mõju võib neutraliseerida, lisades keskkonnale seerumit või veise hüpofüüsi hormooni [15]. Kolmandaks takistab fenoolpunase olemasolu tuvastamist voolutsütomeetrilistes katsetes.

Anorgaanilised soolad

Anorgaanilisi sooli, nagu naatrium-, kaalium- ja kaltsiumioone, sisaldavad kasvukeskkonnad aitavad säilitada osmootilist tasakaalu ja reguleerida membraanipotentsiaali.

Aminohapped

Kuna aminohapped on valkude põhikomponendid, on need oluline osa igast kunagi välja töötatud rakukasvatuskeskkonnast. Kuna rakud ei suuda teatud aminohappeid ise toota, on oluline, et kultuurikeskkonnas oleksid olemas asendamatud aminohapped. Need on vajalikud rakkude paljunemiseks ning nende kontsentratsioon määrab ära maksimaalse saavutatava rakutiheduse. Eriti oluline on asendamatu aminohape L-glutamiin.

L-glutamiin toimib ainevahetuse teisese energiaallikana ja annab lämmastikku NAD-i, NADPH-i ja nukleotiidide tootmiseks. Kuna L-glutamiin on ebastabiilne aminohape, mis aja jooksul muutub vormiks, mida rakud ei suuda ära kasutada, tuleb seda kasvukeskkonnale lisada.

Lisaks võib kasvukeskkonnale lisada mitteolulisi aminohappeid, et asendada kasvu käigus ära kasutatud aminohappeid. Rakke kasvu kiirendatakse ja nende elujõulisust suurendatakse, kui kasvukeskkonnale lisatakse mitteolulisi aminohappeid.

Süsivesikud

Suhkrute kujul esinevad süsivesikud on peamine energiaallikas. Paljudes kasvukeskkondades sisaldub lisaks levinumatele suhkrutele – glükoosile ja galaktoosile – ka maltoosi ja fruktoosi.

Valgud ja peptiidid

Albumiin, transferriin ja fibronektiin on kõige sagedamini kasutatavad valgud ja peptiidid. Need on eriti olulised keskkondades, mis ei sisalda seerumit. Albumiin, transferriin, aprotiniin, fetuiin ja fibronektiin on mõned valgud, mida võib leida seerumist, mis on rikkalik valguallikas.

Albumiin on veres leiduva peamine valk, mille ülesanne on siduda ja transportida erinevaid aineid, sealhulgas vett, sooli, vabu rasvhappeid, hormoone ja vitamiine, erinevate organite ja rakkude vahel. Albumiini võime seonduda kemikaalidega teeb sellest tõhusa vahendi kahjulike ühendite eemaldamiseks rakukultuuri kasvukeskkonnast.

Aprotiniin on rakukultuuri süsteemides kasutatav kaitseaine, kuna see on stabiilne nii neutraalses kui ka happelises pH-keskkonnas ning vastupidav kõrgetele temperatuuridele ja proteolüütiliste ensüümide poolt põhjustatavale lagunemisele. See suudab pärssida mitmeid seriinproteaase, sealhulgas muu hulgas trüpsiini.

Fetuin on glükoproteiin, mida võib loomade loote ja vastsündinute seerumis leida suuremas koguses võrreldes täiskasvanute seerumiga. Lisaks sellele toimib see seriinproteaasi inhibiitorina. Valgu fibronektiin on rakkude adhesiiooni protsessis oluline komponent. Transferriin on valk, mis transportib rauda ja vastutab raua toimetamise eest rakumembraanidesse.

Rasvhapped ja lipiidid

Need mängivad olulist rolli seerumivabas keskkonnas, kui seerum puudub.

Vitamiinid

Rakkude arenguks ja paljunemiseks on vaja arvukaid vitamiine. Rakud ei suuda vitamiine piisavas koguses toota ning seetõttu on need koekultuuris toidulisanditena hädavajalikud.

Rakukultuuris on seerum vitamiinide peamine allikas; samas lisatakse kasvukeskkondadele ka erinevaid vitamiine, et need sobiksid konkreetse rakutüübiga. Kasvu stimuleerimiseks kasutatakse kõige sagedamini B-grupi vitamiine.

Mikroelemendid

Keemilisi elemente, nagu vask, tsink, seleen ja trikarboksüülhappe vaheühendid, nimetatakse mikroelementideks. Mikroelemente lisatakse sageli seerumivabadele kasvukeskkondadele, et asendada neid, mis tavaliselt seerumis esinevad. Need elemendid on olulised keemilised komponendid, mis on vajalikud tervete rakkude arenguks. Paljud biokeemilised reaktsioonid, näiteks ensüümide aktiivsus, sõltuvad teatud mikrotoitainetest.

Kasvukeskkonna lisandid

Teatavatele rakuliinidele soovitatav täielik kasvukeskkond vajab lisakomponente, mida baaskeskkonnas ja seerumis ei ole. Need toidulisandid toetavad rakkude kasvu ja nõuetekohast ainevahetust.

Kuigi hormoonid, kasvufaktorid ja signaalmolekulid on teatud rakuliinide nõuetekohaseks paljunemiseks hädavajalikud, tuleks alati järgida järgmisi ettevaatusabinõusid: kuna lisandite lisamine võib muuta täieliku kasvukeskkonna osmolalisust, mis võib pärssida rakkude arengut, on alati soovitatav kontrollida osmolalisust pärast lisandite lisamist. Enamiku rakuliinide puhul on optimaalne osmolalisus vahemikus 260–320 mOSM/kg.

Antibiootikumid

Antibiootikume kasutatakse sageli bakteriaalsete ja seenhaiguste tekitajate arengu pärssimiseks [16], kuigi need ei ole rakkude kasvu jaoks hädavajalikud. Kuna antibiootikumid võivad varjata mükoplasma ja resistentsete bakterite põhjustatud saastumist, ei soovitata nende rutiinset kasutamist rakukultuurides [17, 18].

Lisaks võivad antibiootikumid häirida ülitundlike rakkude ainevahetust. Sageli kasutatakse MilliporeSigma ja Life Technologiesi toodetud penitsilliini-streptomütsiini kombinatsioone. Plasmocini on kasutatud glioomi rakuliinide TS603, TS516 ja BT260 kultiveerimisel [19] ning see on osutunud efektiivseks mükoplasma saastumise kõrvaldamisel (20).

Seerum

Seerumis leidub albumiine, kasvufaktoreid ja kasvuinhibiitoreid. Seerum on üks rakukultuurikeskkonna olulisemaid komponente, kuna see varustab rakke aminohapete, valkude, vitamiinide (eriti rasvlahustuvate vitamiinidega nagu A, D, E ja K), süsivesikute, lipiidide, hormoonide, kasvufaktorite, mineraalide ja mikroelementidega.

Kultiveeritud rakkude arengu soodustamiseks kasutatakse sageli veiste loote- ja vasikaserumit. Loote seerum on rikkalik kasvufaktorite allikas ning sobib rakkude kloonimiseks ja tundlike rakkude arendamiseks. Vasikaserumit kasutatakse kontaktinhibitsiooni katsetes, kuna selle kasvut soodustav toime on vähenenud. Tavalised kasvukeskkonnad sisaldavad sageli 2–10% seerumit. Seerumi lisamine kultuurikeskkonnale teenib järgmisi eesmärke [21]:

  • Seerum varustab rakke oluliste toitainetega (nii lahuses kui ka valkudega seotuna).

  • Seerumis sisalduvad mitmed kasvufaktorid ja hormoonid, mis osalevad kasvu soodustamises ja spetsiifilises rakutegevuses.

  • See pakub palju seonduvaid valke, nagu albumiin ja transferriin, mis transportivad teisi kemikaale rakku. Näiteks toimetab albumiin rakkudesse rasvu, vitamiine, hormoone jne.

  • Samuti pakub see valke, nagu fibronektiin, mis suurendavad rakkude adhesiooni substraadile. Lisaks toodab see levimiselemente, mis aitavad kaasa rakkude laienemisele enne jagunemist.

  • See toodab proteaasi inhibiitoreid, mis takistavad proteolüüsi rakkudes.

  • See sisaldab ka mineraalaineid, nagu Na+, K+, Zn2+ ja Fe2+.

  • See suurendab kasvatuskeskkonda viskoossust, kaitstes seega rakke mehaaniliste vigastuste eest suspensioonikultuuri segamise ajal.

  • See toimib ka puhvrina.

Viited

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Loomarakkude toitumine koekultuuris; esialgsed uuringud sünteetilise keskkonna kohta. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1–8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Loote vasikaserumi komponendi kiire adsorptsioon kultuuris olevate imetajarakkude poolt. Potentsiaalne artefaktide allikas rakuspetsiifiliste antigeenide vastaseerumite uuringutes. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Seerumi lisamine rakususpensioonide valmistamiseks kasutatavasse keskkonnasse kui võimalik artefaktide allikas rakkude vahendatud reaktsioonide uurimisel põlvelümfisõlme testi abil. J Immunogenet. 1980;7:483–9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Kaubanduslikud seerumivabad kasvukeskkonnad: hübriidoma kasvatamine ja monoklonaalsete antikehade tootmine. J Immunol Methods. 1991;145:175–83

[5] Barnes D, Sato G. Meetodid kultiveeritud rakkude kasvatamiseks seerumivabas keskkonnas. Anal Biochem. 1980;102:255–70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O jt. HSP70 juhib RNA-vaba TDP-43-d anisotroopsetesse tuuma-sisestesse vedelatesse sfäärilistesse kestadesse. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J jt. Downi sündroomist tingitud vananemine häirib närvirakkude eellaste tuuma arhitektuuri. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Seerumi täielik asendamine albumiini, transferriini ja soja lipiididega lipopolüsahhariidile reageerivate B-lümfotsüütide kultuurides. J Exp Med. 1978;147:923–33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Hübriidoma kasvu ja monoklonaalsete antikehade tootmise jaoks mõeldud keemiliselt määratletud valguvaba keskkonna süstemaatiline täiustamine. J Biotechnol. 1996;45:111–23

[10] Darfler F. Valguvaba kasvukeskkond hübriidomide ja muude immuunsüsteemi rakkude kasvatamiseks. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769–78

[11] Barnes D, Sato G. Seerumivaba rakukultuur: ühtne lähenemisviis. Cell. 1980;22:649–55

[12] Hamilton W, Ham R. Hiina hamstri rakuliinide klooniline kasvatamine valguvabas keskkonnas. In Vitro. 1977;13:537–47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Valgusele eksponeeritud HEPES-i sisaldava kultuurikeskkonna tsütotoksiliste mõjude analüüs. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282–7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenoolpunane kudekultuurikeskkonnas on nõrk östrogeen: mõju östrogeenile reageerivate rakkude uurimisele kultuuris. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496–500

[15] Karmiol S. Seerumivabade keskkondade arendamine. In: Master JRW, toim. Animal Cell culture, 3. trükk. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Antibiootikumide kasutamine rakukultuurikeskkondades. Methods Enzymol. 1979;58:110–6

[17] McGarrity G. Rakukultuuride mükoplasmainfektsiooni levik ja kontroll. In Vitro. 1976;12:643–8

[18] Masters J, Stacey G. Kasvukeskkonna vahetamine ja rakuliinide passaažimine. „Nat Protoc”. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M jt. Histooni demetülaas KDM6A tajub otseselt hapnikku, et reguleerida kromatiini ja raku saatust. Science. 2019;363:1217–1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M jt. Plasmocin™i tõhusus mitmesugustel mollicutega nakatunud imetajate rakuliinidel võrreldes rakukultuuris tavaliselt kasutatavate antibiootikumidega: kohalik kogemus. Cytotechnology. 2011;63:609–20

[21] Kragh Hansen U. Ligandi seondumise molekulaarsed aspektid seerumalbumiiniga. Pharmacol Rev. 1981;33:17–53