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Media e reagenti

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Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

IVA e spese di spedizione escluse

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

IVA e spese di spedizione escluse

Cytion Endothelial cell growth medium, advanced, kit with 500 ml basal medium bottle plus supplement tubes and vials, REF 850006

Terreno di coltura avanzato per cellule endoteliali

Il terreno di coltura avanzato per cellule endoteliali viene utilizzato per la coltura di cellule endoteliali umane provenienti da grandi vasi. I fattori di crescita ricombinanti umani definiti, tra cui il VEGF e l’IGF-1 Long R3, sostituiscono il supplemento grezzo per la crescita delle cellule endoteliali. Il terreno completo contiene siero fetale bovino, L-glutammina, eparina, EGF, bFGF, VEGF, IGF-1 Long R3, acido ascorbico e idrocortisone. Per una proliferazione più rapida con un contenuto di siero più elevato, scegliere il Terreno di proliferazione per cellule endoteliali. Per una formulazione senza VEGF, scegliere il Terreno di Crescita per Cellule Endoteliali. Offriamo il terreno in confezioni da 500 ml di terreno basale, da solo o insieme agli integratori, sia come componenti singoli che come miscela premiscelata (Supplement-Mix). I singoli componenti consentono di regolare o omettere singoli fattori, mentre la miscela di integratori viene aggiunta in un unico passaggio. Il terreno di base è disponibile anche senza rosso fenolo negli stessi formati, il che evita interferenze con le letture a fluorescenza e colorimetriche, nonché la debole attività estrogeno-simile del rosso fenolo. Per l’uso sono necessari i supplementi, entrambi i formati dei quali sono disponibili anche separatamente. Una volta integrato, il terreno completo contiene il 2 % di FCS (10 ml per 500 ml di terreno di base).

€180.00

IVA e spese di spedizione escluse

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

IVA e spese di spedizione escluse

DMEM:F12 di Ham (1:1), p: 3,1 g/L di glucosio, p: 2,5 mM di L-glutammina, p: 15 mM di HEPES, p: 0,5 mM di piruvato di sodio, p: 1,2 g/L di NaHCO₃

Il DMEM:Ham's F12 è un terreno di coltura basale ampiamente riconosciuto e ampiamente utilizzato nella coltura cellulare per la ricerca biologica. Costituisce una fonte fondamentale di nutrienti per la crescita di varie linee cellulari di mammiferi, in particolare se integrato con siero fetale bovino (FBS). Questa formulazione unica combina il Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) e l’Ham’s F-12 (Ham’s Nutrient Mixture F-12) in un preciso rapporto 1:1. L’aggiunta di L-glutammina ne migliora ulteriormente la composizione. Il DMEM, derivato dal Medium Essenziale Minimo di Eagle (EMEM), offre una maggiore concentrazione di aminoacidi e vitamine rispetto al suo predecessore. Al contrario, l’F-12 di Ham si basa sul terreno F-10 di Ham, fornendo una serie complementare di componenti essenziali. Per favorire una crescita cellulare ottimale, è prassi comune integrare il DMEM:Ham's F12 con FBS a una concentrazione tipica del 5-10%. Tale aggiunta è necessaria poiché il terreno è privo di ormoni della crescita, lipidi e proteine fondamentali per lo sviluppo cellulare. Il DMEM:Ham's F12 incorpora un sistema tampone per il pH ed è spesso integrato con rosso fenolo, un indicatore di pH. Le cellule coltivate in DMEM:Ham's F12, o in qualsiasi terreno che utilizzi il sistema tampone a base di bicarbonato, richiedono un ambiente con CO₂ controllata al 5-10% per mantenere livelli di pH adeguati. Controllo di qualità • Filtrato asetticamente Conservazione e durata di conservazione • Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C, al riparo dalla luce. • Una volta aperto, conservare a 4 °C e utilizzare entro 6–8 settimane. Condizioni di spedizione • Temperatura ambiente Conservazione • Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37 °C, poiché ciò riduce la qualità del prodotto. • Non riscaldare il terreno oltre i 37 °C né utilizzare fonti di calore non controllate, come i forni a microonde. • Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare la quantità necessaria e portarla a temperatura ambiente prima dell’uso. Composizione Categoria Componenti Concentrazione (mg/L) Aminoacidi Glicina 18,75 L-alanina 4,45 L-arginina HCl 147,50 L-asparagina H₂O 7,50 Acido L-aspartico 6,65 L-cisteina HCl H₂O 17,56 L-cistina 2 HCl 31,29 Acido L-glutammico 7,35 L-glutammina 365,00 L-istidina HCl H₂O 31,48 L-isoleucina 54,47 L-leucina 59,05 L-lisina HCl 91,25 L-metionina 17,24 L-fenilalanina 35,48 L-prolina 17,25 L-serina 26,25 L-treonina 53,45 L-triptofano 9,02 L-tirosina 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valina 52,85 Vitamine D-biotina 0,0035 Cloruro di colina 8,98 D-pantotenato di calcio 2,24 Acido folico 2,66 mio-inositolo 12,60 Nicotinamide 2,02 Piridossina HCl 0,031 Piridossal cloridrato 2,00 Riboflavina 0,219 Tiamina HCl 2,17 Vitamina B12 0,68 Sali inorganici CaCl₂·2 H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄ 7 H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Altri componenti D-glucosio 3151,00 Ipoxantina 2,40 HEPES 3574,50 Acido linoleico 0,042 Acido lipoico 0,105 Sale sodico del rosso fenolo 8,63 Putrescina 2 HCl 0,081 Piruvato di sodio 55,00 Timidina 0,365

€25.00

IVA e spese di spedizione escluse

DMEM, p/v: 4,5 g/L di glucosio, p/v: 4 mM di L-glutammina, p/v: 3,7 g/L di NaHCO₃, p/v: 1,0 mM di piruvato di sodio

Il DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) è un terreno di coltura di base altamente versatile e ampiamente utilizzato, progettato per favorire la crescita di un'ampia gamma di cellule mammifere nella ricerca biologica. È un terreno ideale per la coltura di fibroblasti primari, neuroni, cellule gliali, HUVEC, cellule muscolari lisce, nonché di linee cellulari comunemente utilizzate come HeLa, 293, Cos-7 e PC-12. Ciò che distingue il DMEM dagli altri terreni è la sua composizione unica. Contiene una concentrazione di aminoacidi e vitamine quattro volte superiore rispetto al terreno originale Eagle's Minimal Essential Medium. Sviluppato inizialmente con un basso contenuto di glucosio (1 g/L) e piruvato di sodio, il DMEM viene spesso utilizzato con livelli di glucosio più elevati, con o senza piruvato di sodio. In particolare, il DMEM non contiene proteine, lipidi o fattori di crescita, rendendo necessaria l’integrazione. Per ottenere una crescita ottimale, un approccio comune consiste nell’integrare il DMEM con il 10% di siero fetale bovino (FBS). Inoltre, il DMEM utilizza un sistema tampone a base di bicarbonato di sodio, che richiede un ambiente con il 5-10% di CO₂ per mantenere un pH fisiologico. Il Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) è molto apprezzato tra i terreni definiti per la coltura cellulare e tissutale, in quanto soddisfa le esigenze di crescita di vari fenotipi di cellule aderenti. Esso supera il mezzo di Eagle originale, sviluppato negli anni ’50 per la coltura di cellule di pollo, grazie alla formulazione integrativa potenziata nota come modifica di Dulbecco. Questa modifica aumenta significativamente il contenuto di determinati aminoacidi e vitamine, fino a quadruplicarlo rispetto al mezzo originale. Nel campo della coltura cellulare, il DMEM svolge un ruolo fondamentale come terreno di crescita per diversi tipi di cellule, tra cui cellule primarie, cellule staminali e cellule trasformate. I ricercatori utilizzano inoltre la versione modificata del DMEM per un’ampia gamma di applicazioni di ricerca, quali la scoperta di nuovi farmaci, l’ingegneria tissutale e lo studio delle vie di segnalazione cellulare. Controllo di qualità • Filtrato in modo sterile Conservazione e durata di conservazione • Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C, al riparo dalla luce. • Una volta aperta, conservare a 4 °C e utilizzare entro 6–8 settimane. Condizioni di spedizione • Temperatura ambiente Conservazione • Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37 °C, poiché ciò riduce la qualità del prodotto. • Non riscaldare il terreno oltre i 37 °C né utilizzare fonti di calore non controllate, come i forni a microonde. • Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare la quantità necessaria e portarla a temperatura ambiente prima dell’uso. Composizione Categoria Componenti Concentrazione (mg/L) Aminoacidi Glicina 30,00 L-arginina HCl 84,00 L-cistina 2 HCl 62,57 L-glutammina 584,00 L-istidina HCl H₂O 42,00 L-isoleucina 105,00 L-leucina 105,00 L-lisina HCl 146,00 L-metionina 30,00 L-fenilalanina 66,00 L-serina 42,00 L-treonina 95,00 L-triptofano 16,00 L-tirosina 2 Na 2H₂O 103,79 L-valina 94,00 Vitamine Cloruro di colina 4,00 D-pantotenato di calcio 4,00 Acido folico 4,00 mio-inositolo 7,20 Nicotinamide 4,00 Piridossale HCl 4,00 Riboflavina 0,40 Tiamina HCl 4,00 Sali inorganici CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄ 7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Altri componenti D-glucosio 4500,00 Sale sodico del rosso fenolo 15,90 Piruvato di sodio 110,00

€25.00

IVA e spese di spedizione escluse

EMEM (MEM Eagle), contenente: 2 mM di L-glutammina, contenente: 2,2 g/L di NaHCO₃, contenente: EBSS

Il Minimum Essential Medium (EMEM) di Eagle è uno dei terreni di base più utilizzati per la coltura di un’ampia gamma di cellule di mammiferi, in particolare delle linee cellulari aderenti. Sviluppata originariamente da Harry Eagle, questa formulazione classica contiene gli aminoacidi essenziali, le vitamine e i sali inorganici necessari per sostenere la crescita sia delle cellule primarie che delle linee cellulari stabilizzate in condizioni di coltura standard. Questa formulazione liquida pronta all’uso e filtrata in modo sterile è integrata con la soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS), 2 mM di L-glutammina, D-glucosio (1,0 g/L) e 2,2 g/L di bicarbonato di sodio (NaHCO₃), rendendola adatta all’uso in un’incubatrice con atmosfera a CO₂ controllata (tipicamente 5 % di CO₂). Il fenolo rosso incluso funge da indicatore di pH, consentendo un comodo monitoraggio visivo delle condizioni del terreno di coltura durante la coltura cellulare. Caratteristiche principali • Formulazione classica del MEM di Eagle con soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS) • 2 mM di L-glutammina inclusi – pronto all’uso immediato • 2,2 g/L di bicarbonato di sodio – tamponato per l’incubazione al 5% di CO₂ • Con D-glucosio (1,0 g/L) come fonte primaria di carbonio • Con rosso fenolo come indicatore di pH • Senza HEPES e senza piruvato di sodio • Terreno liquido filtrato sterilmente, pronto all’uso • pH 7,0 – 7,6 Applicazioni tipiche L'EMEM supporta la coltura di un'ampia varietà di linee cellulari di mammiferi, tra cui HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 e molte cellule primarie. Le applicazioni più comuni includono: • Mantenimento di routine ed espansione di linee cellulari aderenti • Fasi operative relative alla propagazione virale e alla produzione di vaccini • Applicazioni di citotossicità e bioanalisi • Studi di trasfezione ed espressione proteica • Ricerca di base in biologia cellulare e biologia molecolare Per una crescita cellulare ottimale, l’EMEM viene tipicamente integrato con il 5–10 % di siero fetale bovino (FBS) e, a seconda della linea cellulare, con aminoacidi non essenziali (NEAA) e antibiotici quali penicillina/streptomicina. Manipolazione e conservazione Conservare il flacone chiuso a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C, al riparo dalla luce. Una volta aperto, utilizzare in condizioni asettiche. La L-glutammina in soluzione è soggetta a graduale degradazione: per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia di utilizzare il terreno entro 4 settimane dall’apertura oppure, in caso di conservazione per periodi più lunghi, di integrarlo con L-glutammina fresca prima dell’uso. Lasciare che il terreno si riscaldi a 37 °C prima di aggiungerlo alle cellule. Qualità Prodotto secondo rigorosi standard di qualità. Ogni lotto viene testato per verificare sterilità, pH, osmolalità e livelli di endotossine, al fine di garantire prestazioni costanti nelle applicazioni di coltura cellulare. Specifiche del prodotto Specifiche Dettaglio Tipo di prodottoMEM Categoria del prodottoTerreni di coltura cellulare FormatoLiquido SterileSì Dimensioni500 ml L-glutamminaCon L-glutammina (2 mM) GlucosioCon glucosio (1,0 g/L) Bicarbonato di sodioCon NaHCO₃ (2,2 g/L) HEPESSenza HEPES Piruvato di sodioSenza piruvato di sodio Rosso fenoloCon rosso fenolo Soluzione salinaSoluzione salina bilanciata di Earle (EBSS) pH7,0 – 7,6 Contenuto di endotossineNon specificato ConservazioneDa +2 °C a +8 °C Formulazione (composizione per litro)

€25.00

IVA e spese di spedizione escluse

Terreno di congelamento CM-1 - 100 ml

Il Freeze Medium CM-1 di Cytion è un mezzo di crioconservazione all’avanguardia, progettato per garantire il massimo livello di vitalità e funzionalità cellulare dopo lo scongelamento. Questo mezzo versatile è adatto a un’ampia gamma di tipi cellulari, comprese sia le cellule umane che quelle animali, rendendolo uno strumento essenziale per diverse applicazioni di ricerca. Formulato con una combinazione meticolosamente bilanciata di crioprotettori e nutrienti essenziali, il Freeze Medium CM-1 riduce al minimo la formazione di cristalli di ghiaccio e lo stress cellulare durante il processo di congelamento, preservando così l’integrità cellulare. Le caratteristiche principali di Freeze Medium CM-1 includono: • Ampia compatibilità: efficace per un’ampia gamma di tipi di cellule, tra cui cellule primarie, cellule staminali e linee cellulari consolidate. • Elevata vitalità: ottimizzato per massimizzare il recupero e la vitalità delle cellule dopo lo scongelamento, garantendo risultati sperimentali affidabili. • Pronto all’uso: comodamente preparato e sterilizzato per l’applicazione immediata, riduce i tempi di preparazione e il rischio di contaminazione. • Maggiore stabilità: mantiene prestazioni costanti in condizioni standard di crioconservazione, garantendo risultati riproducibili. • Lunga durata di conservazione: il CM-1 è un mezzo di crioconservazione pronto all’uso contenente siero che può essere conservato in frigorifero fino a un anno. Utilizzo di CM-1 per il congelamento delle cellule Per utilizzare il CM-1 per il congelamento sia di cellule aderenti che in sospensione, seguire questi passaggi: • Per le cellule aderenti, lavarle e dissociarle dal substrato di coltura. Per le cellule in sospensione, passare direttamente al passaggio successivo. • Contare le cellule per assicurarsi che abbiano la concentrazione corretta. • Centrifugare le cellule per ottenere un pellet, quindi risospenderle nel mezzo di congelamento CM-1. • Trasferire le cellule risospese in crioviali. • Utilizzare un metodo di congelamento lento prima di trasferire le cellule alla conservazione a lungo termine. Metodo Descrizione Fasi ❄️ Congelamento manuale Un metodo passo dopo passo che prevede una riduzione graduale della temperatura per garantire la vitalità delle cellule. 1️⃣ Collocare le cellule nel mezzo di congelamento in un congelatore a 4 °C per 40 minuti. 2️⃣ Trasferirle in un congelatore a -80 °C per 24 ore. 3️⃣ Conservare le cellule in azoto liquido per la conservazione a lungo termine. ❄️ Utilizzo di Mr. Frosty Un pratico dispositivo che consente di controllare la velocità di congelamento senza bisogno di alimentazione elettrica. 1️⃣ Preparare le cellule in crioviali con mezzo di congelamento. 2️⃣ Collocare i crioviali nel contenitore di Mr. Frosty. 3️⃣ Conservare a -80 °C per 24 ore prima di trasferirle nell’azoto liquido. ❄️ Congelatore a velocità controllata Un congelatore ad alta precisione prodotto da Thermo Fisher o da altri produttori, progettato per una riduzione controllata della temperatura. 1️⃣ Programmare il dispositivo per diminuire gradualmente la temperatura. 2️⃣ Inserire le cellule preparate nel congelatore. 3️⃣ Al termine del ciclo di congelamento, trasferire le cellule nell’azoto liquido. • Conservare le criovial a temperature inferiori a -130 °C o in azoto liquido per la conservazione a lungo termine. Ingredienti • Contiene FBS, DMSO, glucosio, sali • Capacità tampone: pH = da 7,2 a 7,6 Il mezzo di congelamento CM-1 di Cytion offre una soluzione affidabile per la crioconservazione, garantendo un’elevata vitalità cellulare e funzionalità post-scongelamento per un’ampia gamma di applicazioni di ricerca.

€99.00

IVA e spese di spedizione escluse

Terreno di congelamento CM-1 - 50 ml

Il Freeze Medium CM-1 di Cytion è un mezzo di crioconservazione all’avanguardia, progettato per garantire il massimo livello di vitalità e funzionalità cellulare dopo lo scongelamento. Questo mezzo versatile è adatto a un’ampia gamma di tipi cellulari, comprese sia le cellule umane che quelle animali, rendendolo uno strumento essenziale per diverse applicazioni di ricerca. Formulato con una combinazione meticolosamente bilanciata di crioprotettori e nutrienti essenziali, il Freeze Medium CM-1 riduce al minimo la formazione di cristalli di ghiaccio e lo stress cellulare durante il processo di congelamento, preservando così l’integrità cellulare. Le caratteristiche principali di Freeze Medium CM-1 includono: • Ampia compatibilità: efficace per una vasta gamma di tipi di cellule, tra cui cellule primarie, cellule staminali e linee cellulari consolidate. • Elevata vitalità: ottimizzato per massimizzare il recupero e la vitalità delle cellule dopo lo scongelamento, garantendo risultati sperimentali affidabili. • Pronto all’uso: comodamente preparato e sterilizzato per l’applicazione immediata, riduce i tempi di preparazione e il rischio di contaminazione. • Stabilità migliorata: mantiene prestazioni costanti in condizioni standard di crioconservazione, garantendo risultati riproducibili. • Lunga durata di conservazione: CM-1 è un mezzo di crioconservazione pronto all’uso contenente siero che può essere conservato in frigorifero fino a un anno. Utilizzo di CM-1 per il congelamento delle cellule Per utilizzare il CM-1 per il congelamento sia di cellule aderenti che in sospensione, seguire questi passaggi: • Per le cellule aderenti, lavarle e dissociarle dal substrato di coltura. Per le cellule in sospensione, passare direttamente al passaggio successivo. • Contare le cellule per assicurarsi che abbiano la concentrazione corretta. • Centrifugare le cellule per ottenere un pellet, quindi risospenderle nel mezzo di congelamento CM-1. • Trasferire le cellule risospese in crioviali. • Utilizzare un metodo di congelamento lento prima di trasferire le cellule alla conservazione a lungo termine. Metodo Descrizione Fasi ❄️ Congelamento manuale Un metodo passo dopo passo che prevede una riduzione graduale della temperatura per garantire la vitalità delle cellule. 1️⃣ Collocare le cellule nel mezzo di congelamento in un congelatore a 4 °C per 40 minuti. 2️⃣ Trasferirle in un congelatore a -80 °C per 24 ore. 3️⃣ Conservare le cellule in azoto liquido per la conservazione a lungo termine. ❄️ Utilizzo di Mr. Frosty Un pratico dispositivo che consente di controllare la velocità di congelamento senza bisogno di alimentazione elettrica. 1️⃣ Preparare le cellule in crioviali con mezzo di congelamento. 2️⃣ Collocare i crioviali nel contenitore di Mr. Frosty. 3️⃣ Conservare a -80 °C per 24 ore prima di trasferirle nell’azoto liquido. ❄️ Congelatore a velocità controllata Un congelatore ad alta precisione prodotto da Thermo Fisher o da altri produttori, progettato per una riduzione controllata della temperatura. 1️⃣ Programmare il dispositivo per diminuire gradualmente la temperatura. 2️⃣ Inserire le cellule preparate nel congelatore. 3️⃣ Al termine del ciclo di congelamento, trasferire le cellule nell’azoto liquido. • Conservare le criovial a temperature inferiori a -130 °C o in azoto liquido per la conservazione a lungo termine. Ingredienti • Contiene FBS, DMSO, glucosio, sali • Capacità tampone: pH = da 7,2 a 7,6 Il mezzo di congelamento CM-1 di Cytion offre una soluzione affidabile per la crioconservazione, garantendo un’elevata vitalità cellulare e funzionalità dopo lo scongelamento per un’ampia gamma di applicazioni di ricerca.

€59.00

IVA e spese di spedizione escluse

Ham's F12K Medium, contenente: 2,0 mM di L-glutammina, 2,0 mM di piruvato di sodio, 2,5 g/L di NaHCO₃

Vi presentiamo il terreno Ham's F-12K (Kaighn's), una versione specializzata del terreno Ham's F-12 progettata per soddisfare le esigenze specifiche della ricerca biologica. Questo terreno avanzato offre vantaggi distintivi, migliorando la coltura degli epatociti umani primari, nonché delle cellule epatiche di ratto e di pollo, in particolare in condizioni di sieroprenia. Il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) è stato accuratamente formulato per ottimizzare le condizioni di coltura cellulare. È caratterizzato da una composizione arricchita, che fornisce livelli elevati di componenti essenziali quali aminoacidi e piruvato di sodio, oltre a elementi aggiuntivi tra cui putrescina, timidina, ipoxantina e zinco. Queste aggiunte consentono ai ricercatori di integrare il terreno con una quantità minima di siero o con componenti definiti per specifici tipi di cellule, facilitando la creazione di condizioni sperimentali precise. In particolare, il terreno di coltura Ham's F-12K (Kaighn's) non contiene proteine né fattori di crescita. Di conseguenza, è spesso necessaria l’integrazione con fattori di crescita e siero fetale bovino (FBS), consentendo ai ricercatori di adattare il terreno alle esigenze delle loro specifiche linee cellulari. Per ottenere prestazioni ottimali, la concentrazione di FBS deve essere attentamente ottimizzata per ciascuna linea cellulare, garantendo una crescita e una funzionalità ottimali. Per mantenere il pH fisiologico, il terreno di coltura Ham's F-12K (Kaighn's) impiega un sistema tampone a base di bicarbonato di sodio (2,5 g/L), che richiede un ambiente con concentrazione controllata di CO₂ compresa tra il 5% e il 10% durante la coltura. Ciò garantisce che il pH del terreno rimanga entro l’intervallo ideale per la crescita e la vitalità cellulare. Controllo di qualità • pH = 7,2 ± 0,02 a 20-25 °C. • Ogni lotto è stato testato per verificarne la sterilità e l’assenza di micoplasmi e batteri. Conservazione • Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37 °C compromettono la qualità del prodotto. • Non riscaldare il terreno oltre i 37 °C né utilizzare fonti di calore non controllabili (ad es. forni a microonde). • Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare tale quantità dal flacone e portarla a temperatura ambiente. • La durata di conservazione di tutti i terreni, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione. Composizione Componenti mg/L Sali inorganici Cloruro di calcio x 2H₂O 135,24 Solfato di rame (II) x 5H₂O 0,00 Solfato di ferro (II) x 7H₂O 0,83 Cloruro di magnesio x 6H₂O 105,72 Solfato di magnesio x 7H₂O 394,49 Cloruro di potassio 283,29 Dihidrogenofosfato di potassio 58,52 Cloruro di sodio 7597,20 Idrogenofosfato disodico anidro 115,02 Solfato di zinco x 7H₂O 0,14 Altri componenti D(+)-glucosio anidro 1260,00 Ipoxantina 4,08 Acido DL-α-lipoico 0,21 Rosso fenolo 3,00 Putrescina x 2HCl 0,32 Piruvato di sodio 220,00 NaHCO₃ 2500,00 Timidina 0,73 Aminoacidi L-alanina 17,82 L-arginina x HCl 421,40 L-asparagina x H₂O 30,02 Acido L-aspartico 26,62 L-cisteina x HCl x H₂O 70,24 L-glutammina 292,20 Acido L-glutammico 29,42 Glicina 15,01 L-istidina x HCl x H₂O 41,92 L-isoleucina 7,87 L-leucina 26,24 L-lisina x HCl 73,04 L-metionina 8,95 L-fenilalanina 9,91 L-prolina 69,06 L-serina 21,02 L-treonina 23,82 L-triptofano 4,08 L-tirosina 10,87 L-valina 23,42 Vitamine D(+)-biotina 0,07 D-pantotenato di calcio 0,48 Cloruro di colina 13,96 Acido folico 1,32 mio-inositolo 18,02 Nicotinamide 0,04 Piridossina x HCl 0,06 Riboflavina 0,04 Tiamina x HCl 0,34 Vitamina B12 1,36

€108.00

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Ham's F12 Medium, contenente: 1,0 mM di glutammina stabile, contenente: 1,0 mM di piruvato di sodio, contenente: 1,176 g/L di NaHCO₃

Il terreno Ham's F-12, noto anche come Ham's F-12 Nutrient Mix, è un terreno di base ampiamente utilizzato, progettato specificamente per la coltura cellulare. È stato ampiamente impiegato per la semina in condizioni prive di siero di cellule di ovaio di criceto cinese (CHO), cellule polmonari e cellule L di topo. Inoltre, l’Ham’s F-12 è il terreno di coltura di elezione per il test di tossicità clonale (CTA). Uno dei suoi notevoli vantaggi è la capacità di sostenere la crescita cellulare senza la necessità di integrazione con siero. Ciò elimina potenziali interferenze causate dai componenti del siero, garantendo risultati sperimentali coerenti e affidabili. Fornendo un ambiente di coltura privo di siero, il terreno Ham's F-12 offre ai ricercatori un maggiore controllo sulle loro ricerche. Un’altra caratteristica fondamentale del terreno Ham’s F-12 è la sua idoneità alla semina di singole cellule. Ciò lo rende una scelta eccellente per una varietà di linee cellulari, tra cui le cellule CHO, le cellule polmonari e le cellule L di topo. La composizione nutrizionale ottimizzata del terreno facilita l’adesione e la crescita efficienti delle singole cellule, consentendo la creazione di colture cellulari omogenee con una migliore riproducibilità. Inoltre, il terreno Ham's F-12 è ormai riconosciuto come il terreno preferito per il test di tossicità clonale (CTA). Questo test svolge un ruolo fondamentale nella valutazione degli effetti citotossici delle sostanze sulle cellule. Utilizzando il terreno Ham's F-12 nel CTA, i ricercatori possono valutare con precisione l'impatto di vari composti o trattamenti sulle singole cellule, fornendo preziose informazioni sui profili tossicologici. Controllo di qualità • pH = 7,2 ± 0,02 a 20-25 °C. • Ogni lotto è stato testato per verificare la sterilità e l’assenza di micoplasmi e batteri. Conservazione • Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37 °C compromettono la qualità del prodotto. • Non riscaldare il terreno oltre i 37 °C né utilizzare fonti di calore non controllabili (ad es. forni a microonde). • Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare tale quantità dal flacone e portarla a temperatura ambiente. • La durata di conservazione di tutti i terreni, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione. Composizione Componenti mg/L Sali inorganici Cloruro di calcio x 2H₂O 44,00 Solfato di rame (II) x 5H₂O 0,00 Solfato di ferro (II) x 7H₂O 0,83 Cloruro di magnesio x 6H₂O 122,00 Cloruro di potassio 223,65 Cloruro di sodio 7599,00 Idrogenofosfato disodico anidro 142,04 Solfato di zinco x 7H₂O 0,86 Altri componenti D(+)-glucosio anidro 1801,60 Ipoxantina 4,08 Acido linoleico 0,08 Acido DL-α-lipoico 0,21 Rosso fenolo 1,20 Putrescina x 2HCl 0,16 Piruvato di sodio 110,00 Timidina 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminoacidi L-alanina 8,91 L-arginina x HCl 210,70 L-asparagina x H₂O 15,01 Acido L-aspartico 13,31 L-cisteina x HCl x H₂O 35,12 L-alanil-L-glutammina 217,30 Acido L-glutammico 14,71 Glicina 7,51 L-istidina x HCl x H₂O 20,96 L-isoleucina 3,94 L-leucina 13,12 L-lisina x HCl 36,54 L-metionina 4,48 L-fenilalanina 4,96 L-prolina 34,53 L-serina 10,51 L-treonina 11,91 L-triptofano 2,04 L-tirosina 5,44 L-valina 11,71 Vitamine D(+)-biotina 0,01 D-pantotenato di calcio 0,24 Cloruro di colina 13,96 Acido folico 1,32 mio-inositolo 18,02 Nicotinamide 0,04 Piridossina x HCl 0,06 Riboflavina 0,04 Tiamina x HCl 0,34 Vitamina B12 1,36

€25.00

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HEPES Buffer Solution (1M)

Volume: 100 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered HEPES Buffer Solution (1 M), also known as N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, is a zwitterionic organic buffering agent widely used in cell culture media. It is designed to maintain stable pH conditions in the physiological range of 6.7 to 8.6, supporting optimal cellular function during in vitro applications. Application and Benefits HEPES provides reliable buffering capacity in cell culture systems, particularly when cells are handled outside a CO₂ incubator. The addition of 10–25 mM HEPES to culture media offers enhanced pH stability during extended manipulation periods, helping to maintain consistent experimental conditions. This buffer is membrane-impermeable, has minimal interference with biochemical reactions, and demonstrates strong chemical and enzymatic stability. These properties make it suitable for a wide range of cell culture and biochemical applications. Formulation and Usage The solution is supplied as a 1 M concentrate prepared in cell culture–grade water and is sterile-filtered for use in contamination-sensitive environments. It can be diluted to the desired working concentration depending on application requirements. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to preserve product integrity. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

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IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

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Terreni di coltura cellulare: una panoramica

Nel campo delle scienze della vita, una delle metodologie più importanti è la coltura cellulare. Con l'espressione "coltura cellulare" si intende il prelievo di cellule, tessuti o organi da un animale o da una pianta e il successivo impianto di tali cellule, tessuti o organi in un ambiente artificiale favorevole alla loro sopravvivenza e/o crescita. I requisiti ambientali fondamentali per uno sviluppo cellulare ottimale sono: temperatura controllata, un substrato per l’adesione cellulare, un terreno di coltura adeguato e un’incubatrice che mantenga il pH e l’osmolalità ottimali. Le cellule devono disporre di queste condizioni per poter crescere al massimo del loro potenziale.

La scelta di un terreno di coltura adeguato per la coltivazione in vitro rappresenta la fase più critica e al contempo più vitale della coltura cellulare. Un terreno di coltura, noto anche come mezzo di coltura, è un liquido o un gel formulato per favorire lo sviluppo degli organismi su scala microscopica, cellulare o vegetale. Il terreno utilizzato per la coltura delle cellule contiene spesso un apporto adeguato di energia e sostanze che regolano il ciclo cellulare. I componenti principali di un terreno di coltura includono aminoacidi, vitamine, sali inorganici, glucosio e siero. Il siero viene aggiunto al terreno perché funge da fonte di fattori di crescita, ormoni e fattori di adesione. Oltre a fornire nutrienti, il terreno contribuisce anche al mantenimento dei livelli di pH e osmolalità.

Tipi di terreno utilizzati nella coltura cellulare

Sia le cellule umane che quelle animali possono essere coltivate in un terreno artificiale o sintetico oppure in un terreno interamente naturale, integrato con elementi naturali. Di seguito vi forniremo una panoramica dei diversi tipi di terreni attualmente disponibili.

Terreni naturali

Nei terreni naturali si trovano solo fluidi biologici presenti allo stato naturale. I terreni naturali sono molto utili e semplici da utilizzare per la coltura di un’ampia varietà di tipi di cellule animali. La scarsa comprensione dei componenti precisi che costituiscono i terreni naturali è il fattore principale che contribuisce alla bassa ripetibilità dei risultati ottenuti utilizzando tali terreni.

Terreni artificiali

La preparazione di terreni di coltura artificiali o sintetici comporta l’aggiunta di nutrienti (sia organici che inorganici), proteine sieriche, carboidrati, cofattori, vitamine e sali, nonché delle fasi gassose di O₂ e CO₂ [1].

Sono stati sviluppati vari tipi di terreni di coltura artificiali al fine di soddisfare una o più delle seguenti funzioni: 1) Sopravvivenza immediata (una soluzione salina bilanciata con pH e pressione osmotica precisi). 2) Sopravvivenza prolungata (una soluzione salina bilanciata integrata con diverse formulazioni di sostanze chimiche organiche e/o siero). 3) Sviluppo a tempo indeterminato. 4) Funzioni specializzate.

Esistono quattro classificazioni distinte per i terreni di coltura artificiali:

Terreni contenenti siero

Il tipo più comune di integratore presente nei terreni di coltura utilizzati per la crescita delle cellule animali è il siero fetale bovino. Viene aggiunto al terreno di coltura come integratore a basso costo al fine di ottenere le migliori condizioni di crescita possibili. Oltre a fungere da trasportatore o chelante per nutrienti instabili o insolubili in acqua, ormoni e fattori di crescita, inibitori della proteasi e altre sostanze, il siero lega e neutralizza anche le molecole nocive.

Terreni privi di siero

La presenza di siero nei terreni di coltura presenta una serie di svantaggi e può causare gravi errori di interpretazione nella ricerca immunologica [2, 3]. Sono stati sviluppati diversi tipi di terreni di coltura privi di siero [4, 5]. Questi terreni sono generalmente formulati in modo specifico per supportare la coltura di un singolo tipo di cellula, come il Knockout Serum Replacement e il Knockout DMEM di Thermo Fisher Scientific, e il terreno mTESR di Stem Cell Technologies [6], destinati alle cellule staminali [7].

Inoltre, questi terreni incorporano quantità definite di fattori di crescita purificati, lipoproteine e altre proteine, che altrimenti sarebbero tipicamente fornite dal siero [8]. Questi terreni vengono spesso definiti «terreni di coltura definiti», poiché i componenti che li costituiscono sono ben noti.

Terreni chimicamente definiti

Questi terreni includono componenti inorganici e organici ultrapuri che non sono stati contaminati da alcun tipo di contaminante. Possono anche includere aggiunte di proteine pure, come i fattori di crescita.

 La modificazione genetica di batteri o lieviti, insieme all’aggiunta di particolari acidi grassi, vitamine, colesterolo e aminoacidi, porta alla produzione dei loro componenti [9].

Terreni privi di proteine

I terreni privi di proteine sono quelli che non contengono alcuna proteina, ma solo elementi non proteici. Rispetto ai terreni con aggiunta di siero, l’uso di terreni privi di proteine aggiunte favorisce una maggiore proliferazione cellulare e l’espressione proteica e facilita la purificazione di qualsiasi prodotto generato in un processo a valle [10-12]. Le proteine non sono incluse in formulazioni quali MEM e RPMI-1640. Tuttavia, se necessario, è possibile somministrare un integratore proteico.

Terreni di coltura e loro componenti di base

I terreni di coltura commerciali possono essere acquistati in polvere o in forma liquida e spesso includono una varietà di nutrienti quali aminoacidi, glucosio, sali, vitamine e altri integratori alimentari. 

Il fabbisogno di questi componenti varia a seconda della linea cellulare e tali variazioni sono all’origine dell’ampia varietà di formulazioni dei terreni di coltura. Ciascun componente svolge una determinata funzione, che verrà illustrata nei paragrafi seguenti:

Sistemi tampone

Per mantenere condizioni di crescita ottimali, è necessario controllare il pH, cosa che spesso avviene tramite uno dei due sistemi tampone:

Sistema tampone naturale

Il rapporto CO₂/H₂CO₃ nell’atmosfera è uguale a quello del terreno di coltura, creando un meccanismo tampone naturale. Per preservare il loro meccanismo tampone naturale, le colture devono essere mantenute in un ambiente con il 5-10% di CO₂, cosa che spesso si ottiene utilizzando un’incubatrice a CO₂. Uno dei principali vantaggi dell’utilizzo di un tampone naturale è il suo costo contenuto e la sua sicurezza.

HEPES

Il tamponamento chimico che utilizza lo zwitterione HEPES presenta una maggiore capacità tampone nell’intervallo di pH compreso tra 7,2 e 7,4 e non richiede un ambiente gassoso regolato. Per particolari tipi di cellule, una dose maggiore di HEPES può risultare dannosa. Allo stesso modo, i terreni contenenti HEPES sono molto più sensibili agli effetti fototossici della luce fluorescente [13].

Rosso fenolo

L’indicatore di pH rosso fenolo è spesso incluso nei terreni di coltura disponibili in commercio, consentendo il monitoraggio continuo del pH. Man mano che le cellule si moltiplicano, i metaboliti da esse prodotti causano una variazione del pH e, di conseguenza, un cambiamento di colore del terreno di coltura. Il rosso fenolo ha un duplice effetto sul colore del terreno di coltura, che diventa giallo a pH acido e viola a pH alcalino. Un pH di 7,4, il valore ottimale per la coltura cellulare, fa apparire il terreno di coltura di colore rosso fluorescente.

Tuttavia, il rosso fenolo presenta alcuni svantaggi: in primo luogo, è in grado di simulare l’azione di numerosi ormoni steroidei, in particolare degli estrogeni [14]. Pertanto, quando si studiano cellule sensibili agli estrogeni, come il tessuto mammario, si raccomanda l’uso di un terreno privo di rosso fenolo. L’equilibrio sodio-potassio viene alterato dalla presenza del rosso fenolo in diverse formulazioni prive di siero. L’aggiunta di siero o di ormone ipofisario bovino ai terreni di coltura può contrastare questo effetto [15]. In terzo luogo, la presenza del rosso fenolo ostacola il rilevamento negli esperimenti di citometria a flusso.

Sali inorganici

I terreni di coltura contenenti sali inorganici, quali ioni sodio, potassio e calcio, contribuiscono a mantenere l’equilibrio osmotico e a regolare il potenziale di membrana.

Aminoacidi

Poiché gli aminoacidi sono i componenti fondamentali delle proteine, costituiscono una componente essenziale di ogni singolo terreno di coltura cellulare mai concepito. Poiché le cellule non sono in grado di produrre autonomamente determinati aminoacidi, è importante che il terreno di coltura includa aminoacidi essenziali. Essi sono necessari per la proliferazione cellulare e la loro concentrazione determina la densità cellulare massima raggiungibile. In particolare, la L-glutammina, un amminoacido essenziale, riveste un’importanza cruciale.

La L-glutammina funge da fonte secondaria di energia per il metabolismo e apporta azoto alla produzione di NAD, NADPH e nucleotidi. Poiché la L-glutammina è un amminoacido instabile che, con il tempo, si trasforma in una forma che le cellule non sono in grado di utilizzare, deve essere aggiunta al terreno di coltura.

Inoltre, è possibile aggiungere al terreno di coltura aminoacidi non essenziali per reintegrare quelli consumati durante il processo di crescita. L’integrazione del terreno di coltura con aminoacidi non essenziali stimola la crescita delle cellule e ne aumenta la vitalità.

Carboidrati

I carboidrati sotto forma di zuccheri costituiscono la principale fonte di energia. Molti terreni di coltura contengono, oltre agli zuccheri più comuni quali il glucosio e il galattosio, anche maltosio e fruttosio.

Proteine e peptidi

L'albumina, la transferrina e la fibronectina sono le proteine e i peptidi più comunemente utilizzati. Sono particolarmente importanti nei terreni di coltura che non contengono siero. L'albumina, la transferrina, l'aprotinina, la fetuina e la fibronectina sono alcune delle proteine che si possono trovare nel siero, che costituisce una ricca fonte proteica.

L’albumina è la principale proteina presente nel sangue e la sua funzione è quella di legare e trasportare varie sostanze, tra cui acqua, sali, acidi grassi liberi, ormoni e vitamine, tra i diversi organi e le cellule. La capacità dell’albumina di legarsi alle sostanze chimiche la rende un candidato efficace per la rimozione dei composti nocivi dal terreno in cui vengono coltivate le cellule.

L’aprotinina è un agente protettivo nei sistemi di coltura cellulare, poiché è stabile a pH neutro e acido, oltre che resistente alle alte temperature e alla distruzione che può essere causata dagli enzimi proteolitici. È in grado di inibire numerose proteasi seriniche, tra cui la tripsina, per citarne alcune.

La fetuina è una glicoproteina che può essere rilevata in quantità maggiori nel siero di animali fetali e neonati rispetto al siero degli adulti. Inoltre, agisce come inibitore delle proteasi seriniche. La proteina fibronectina è un componente essenziale nel processo di adesione cellulare. La transferrina è una proteina che trasporta il ferro ed è responsabile del suo apporto alle membrane cellulari.

Acidi grassi e lipidi

Svolgono un ruolo cruciale nel terreno di coltura privo di siero, in assenza di siero.

Vitamine

Numerose vitamine sono necessarie per lo sviluppo e la proliferazione cellulare. Le cellule non sono in grado di produrre vitamine in quantità adeguate; pertanto, nella coltura tissutale sono indispensabili come integratori alimentari.

Nella coltura cellulare, il siero è la fonte primaria di vitamine; tuttavia, i terreni di coltura vengono anche arricchiti con varie vitamine per renderli adatti a un tipo specifico di cellula. In genere, le vitamine del gruppo B vengono utilizzate per stimolare la crescita.

Oligoelementi

Elementi chimici quali rame, zinco, selenio e intermedi dell’acido tricarbossilico sono noti come oligoelementi. Gli oligoelementi vengono spesso aggiunti ai terreni di coltura privi di siero al fine di sostituire quelli tipicamente presenti nel siero. Questi elementi sono importanti componenti chimici necessari per uno sviluppo cellulare sano. Molte reazioni biochimiche dipendono da determinati micronutrienti, come l’attività enzimatica.

Integratori per terreni di coltura

Il terreno di coltura completo raccomandato per determinate linee cellulari necessita di componenti aggiuntivi che non sono presenti nei terreni di base e nel siero. Questi integratori favoriscono la crescita cellulare e il corretto funzionamento metabolico.

Sebbene gli ormoni, i fattori di crescita e le molecole di segnalazione siano essenziali per la corretta proliferazione di particolari linee cellulari, è necessario adottare sempre le seguenti precauzioni: poiché l’aggiunta di integratori potrebbe alterare l’osmolalità del terreno di coltura completo, inibendo lo sviluppo cellulare, è sempre consigliabile verificare l’osmolalità dopo l’aggiunta degli integratori. Per la maggior parte delle linee cellulari, l’osmolalità ottimale varia tra 260 e 320 mOSM/kg.

Antibiotici

Gli antibiotici vengono spesso impiegati per inibire lo sviluppo di contaminanti batterici e fungini [16], sebbene non siano essenziali per la crescita cellulare. Poiché gli antibiotici potrebbero mascherare la contaminazione da micoplasmi e batteri resistenti, il loro uso di routine non è raccomandato per la coltura cellulare [17, 18].

Inoltre, gli antibiotici possono alterare il metabolismo delle cellule ipersensibili. Vengono spesso utilizzate le combinazioni di penicillina e streptomicina prodotte da MilliporeSigma e Life Technologies. Il Plasmocin è stato utilizzato nella coltura delle linee cellulari di glioma TS603, TS516 e BT260 [19] e si è dimostrato efficace nell’eliminare la contaminazione da micoplasmi (20).

Siero

Nel siero sono presenti albumine, fattori di crescita e inibitori della crescita. Il siero è uno dei componenti più significativi del terreno di coltura cellulare poiché fornisce aminoacidi, proteine, vitamine (in particolare quelle liposolubili come A, D, E e K), carboidrati, lipidi, ormoni, fattori di crescita, minerali e oligoelementi.

Il siero di origine fetale e da vitello viene spesso utilizzato per favorire lo sviluppo delle cellule in coltura. Il siero fetale è una fonte abbondante di fattori di crescita ed è adatto alla clonazione cellulare e allo sviluppo di cellule sensibili. A causa delle sue ridotte capacità di stimolare la crescita, il siero di vitello viene impiegato negli esperimenti di inibizione da contatto. I terreni di coltura standard contengono spesso dal 2% al 10% di siero. L’aggiunta di siero al terreno di coltura ha i seguenti scopi [21]:

  • Il siero fornisce i nutrienti essenziali per le cellule (sia in soluzione che legati alle proteine).

  • Il siero contiene diversi fattori di crescita e ormoni coinvolti nella promozione della crescita e nell’attività cellulare specializzata.

  • Fornisce numerose proteine leganti, come l’albumina e la transferrina, che trasportano altre sostanze chimiche all’interno della cellula. Ad esempio, l’albumina trasporta grassi, vitamine, ormoni, ecc. nelle cellule.

  • Fornisce inoltre proteine, come la fibronectina, che aumentano l’adesione cellulare al substrato. Inoltre, produce elementi di espansione che favoriscono l’espansione cellulare prima della divisione.

  • Fornisce inibitori delle proteasi che impediscono la proteolisi nelle cellule.

  • Contiene inoltre minerali quali Na+, K+, Zn2+ e Fe2+.

  • Aumenta la viscosità del mezzo, proteggendo così le cellule da lesioni meccaniche durante l’agitazione della coltura in sospensione.

  • Funge anche da tampone.

Riferimenti

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrizione delle cellule animali nella coltura tissutale; studi iniziali su un terreno di coltura sintetico. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapido assorbimento di un componente del siero fetale bovino da parte delle cellule di mammiferi in coltura. Una potenziale fonte di artefatti negli studi sugli antisieri contro antigeni specifici delle cellule. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. L’aggiunta di siero al terreno utilizzato per la preparazione di sospensioni cellulari come possibile fonte di artefatti nelle reazioni cellulo-mediate studiate mediante il test del linfonodo popliteo. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Terreni commerciali privi di siero: crescita degli ibridomi e produzione di anticorpi monoclonali. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Metodi per la crescita di cellule in coltura in terreno privo di siero. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. Le chaperone HSP70 trasportano la TDP-43 priva di RNA in gusci sferici liquidi intranucleari anisotropi. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. La senescenza indotta dalla sindrome di Down altera l’architettura nucleare dei progenitori neurali. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7

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