Preskoči na vsebino

Mediji in reagenti

40 izdelki

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

brez davka in stroškov poštnine

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

brez davka in stroškov poštnine

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

brez davka in stroškov poštnine

DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukoze, w: 2,5 mM L-glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrijevega piruvata, w: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 je splošno priznano in široko uporabljeno osnovno gojišče v celičnih kulturah za biološke raziskave. Služi kot temeljni vir hranilnih snovi za rast različnih linij sesalskih celic, zlasti kadar je dopolnjeno s fetalnim govejim serumom (FBS). Ta edinstvena formulacija združuje Dulbeccov modificiran Eagleov medij (DMEM) in Hamov F-12 (Hamova mešanica hranil F-12) v natančnem razmerju 1:1. Dodatek L-glutamina dodatno izboljša njegovo sestavo. DMEM, ki izhaja iz minimalnega esencialnega medija po Eaglu (EMEM), v primerjavi s svojim predhodnikom ponuja višjo koncentracijo aminokislin in vitaminov. Nasprotno pa Hamov F-12 temelji na mediju Hamov F-10 in zagotavlja dopolnilni nabor esencialnih sestavin. Za podporo optimalne rasti celic je običajna praksa, da se DMEM:Ham's F12 dopolni s FBS v tipični koncentraciji 5–10 %. Ta dodatek je nujen, saj mediju primanjkuje rastnih hormonov, lipidov in beljakovin, ki so ključni za celični razvoj. DMEM:Ham's F12 vsebuje sistem za uravnavanje pH-ja in se pogosto dopolnjuje s fenol rdečim, indikatorjem pH-ja. Gojene celice v DMEM:Ham's F12 ali katerem koli gojišču, ki uporablja bikarbonatni puferski sistem, potrebujejo nadzorovano okolje s 5–10 % CO₂, da se ohranijo ustrezne vrednosti pH-ja. Kontrola kakovosti • Sterilno filtrirano Shranjevanje in rok uporabnosti • Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo. • Po odprtju shranjujte pri 4 °C in porabite v 6–8 tednih. Pogoji pošiljanja • Temperatura okolja Shranjevanje • Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka. • Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nekontroliranih virov toplote, kot so mikrovalovne pečice. • Če nameravate uporabiti le del gojišča, odvzemite potrebno količino in jo pred uporabo segrejte na sobno temperaturo. Sestava Kategorija Sestavine Koncentracija (mg/l) Aminokisline Glicin 18,75 L-alanin 4,45 L-arginin HCl 147,50 L-asparagin H₂O 7,50 L-asparaginska kislina 6,65 L-cistein HCl H₂O 17,56 L-cistin 2 HCl 31,29 L-glutaminska kislina 7,35 L-glutamin 365,00 L-histidin HCl H₂O 31,48 L-izoleucin 54,47 L-levcin 59,05 L-lizin HCl 91,25 L-metionin 17,24 L-fenilalanin 35,48 L-prolin 17,25 L-serin 26,25 L-treonin 53,45 L-triptofan 9,02 L-tirozin 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valin 52,85 Vitamini D-biotin 0,0035 Kolin klorid 8,98 D-kalcijev pantotenat 2,24 Folna kislina 2,66 mio-inozitol 12,60 Nikotinamid 2,02 Piridoksin HCl 0,031 Piridoksal HCl 2,00 Riboflavin 0,219 tiamin HCl 2,17 Vitamin B12 0,68 Anorganske soli CaCl₂·2 H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄ 7 H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Druge sestavine D-glukoza 3151,00 Hipoksantin 2,40 HEPES 3574,50 Linolna kislina 0,042 Lipoična kislina 0,105 Natrijeva sol fenol rdeče 8,63 Putrescin 2 HCl 0,081 Natrijev piruvat 55,00 Timidin 0,365

€25.00

brez davka in stroškov poštnine

DMEM, m: 4,5 g/l glukoze, m: 4 mM L-glutamina, m: 3,7 g/l NaHCO₃, m: 1,0 mM natrijevega piruvata

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) je izredno vsestransko in široko uporabljeno osnovno gojišče, zasnovano za spodbujanje rasti raznovrstnih sesalskih celic v bioloških raziskavah. Služi kot idealno gojišče za gojenje primarnih fibroblastov, nevronov, glialnih celic, HUVEC-ov, celic gladkih mišic ter priljubljenih celičnih linij, kot so HeLa, 293, Cos-7 in PC-12. DMEM se od drugih gojišč razlikuje po svoji edinstveni sestavi. V primerjavi z izvirnim minimalnim esencialnim gojiščem po Eagleu vsebuje kar štirikrat višjo koncentracijo aminokislin in vitaminov. DMEM, ki je bil prvotno razvit z nizko vsebnostjo glukoze (1 g/l) in natrijevim piruvatom, se pogosto uporablja z višjimi vsebnostmi glukoze, bodisi z natrijevim piruvatom bodisi brez njega. Pomembno je, da DMEM ne vsebuje beljakovin, lipidov ali rastnih faktorjev, zato je potrebno dodajanje dodatkov. Za doseganje optimalne rasti se DMEM običajno dopolni z 10 % fetalnega govejega seruma (FBS). Poleg tega DMEM uporablja pufrski sistem z natrijevim bikarbonatom, ki za ohranjanje fiziološkega pH zahteva okolje z 5–10 % CO₂. Dulbeccov modificirani Eagleov medij (DMEM) je med definiranimi mediji za gojenje celic in tkiv zelo cenjen, saj zadovoljuje potrebe po rasti različnih fenotipov adhezivnih celic. Prekaša izvirno gojišče Eagle, razvito v 50. letih prejšnjega stoletja za gojenje piščančjih celic, in sicer z izboljšano dodatno formulacijo, znano kot Dulbeccova modifikacija. Ta modifikacija znatno poveča vsebnost izbranih aminokislin in vitaminov, in sicer do štirikrat v primerjavi z izvirnim gojiščem. Na področju celične kulture ima DMEM ključno vlogo kot gojišče za različne vrste celic, vključno s primarnimi celicami, matičnimi celicami in transformiranimi celicami. Raziskovalci uporabljajo modificirano različico DMEM-a tudi za široko paleto raziskovalnih namembnosti, kot so odkrivanje zdravil, tkivno inženirstvo in preučevanje celičnih signalnih poti. Kontrola kakovosti • Sterilno filtriran Shranjevanje in rok uporabnosti • Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo. • Po odprtju shranjujte pri 4 °C in porabite v 6–8 tednih. Pogoji pošiljanja • Temperatura okolja Shranjevanje • Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C na temnem mestu. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka. • Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nekontroliranih virov toplote, kot so mikrovalovne pečice. • Če nameravate uporabiti le del gojišča, odvzemite potrebno količino in jo pred uporabo segrejte na sobno temperaturo. Sestava Kategorija Sestavine Koncentracija (mg/l) Aminokisline Glicin 30,00 L-arginin HCl 84,00 L-cistin 2 HCl 62,57 L-glutamin 584,00 L-histidin HCl H₂O 42,00 L-izoleucin 105,00 L-levcin 105,00 L-lizin HCl 146,00 L-metionin 30,00 L-fenilalanin 66,00 L-serin 42,00 L-treonin 95,00 L-triptofan 16,00 L-tirozin 2 Na 2H2O 103,79 L-valin 94,00 Vitamini Holin klorid 4,00 D-kalcijev pantotenat 4,00 Folna kislina 4,00 mio-inozitol 7,20 Nikotinamid 4,00 Piridoksal HCl 4,00 Riboflavin 0,40 Tiamin HCl 4,00 Anorganske soli CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄ 7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Druge sestavine D-glukoza 4500,00 Natrijeva sol fenol rdeče 15,90 Natrijev piruvat 110,00

€25.00

brez davka in stroškov poštnine

EMEM (MEM Eagle), vsebnost: 2 mM L-glutamina, vsebnost: 2,2 g/l NaHCO₃, vsebnost: EBSS

Eagleovo minimalno esencialno gojišče (EMEM) je eno izmed najpogosteje uporabljanih bazalnih gojišč za gojenje širokega spektra sesalskih celic, zlasti adhezivnih celičnih linij. To klasično formulacijo, ki jo je prvotno razvil Harry Eagle, sestavljajo esencialne aminokisline, vitamini in anorganske soli, potrebne za podporo rasti tako primarnih celic kot tudi uveljavljenih celičnih linij v standardnih kultivacijskih pogojih. Ta tekoča formulacija, pripravljena za takojšnjo uporabo in sterilno filtrirana, je dopolnjena z Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS), 2 mM L-glutamina, D-glukoze (1,0 g/l) in 2,2 g/l natrijevega bikarbonata (NaHCO₃), zaradi česar je primerna za uporabo v inkubatorju z nadzorovano vsebnostjo CO₂ (običajno 5 % CO₂). Vključeni fenol rdeči deluje kot indikator pH, kar omogoča priročno vizualno spremljanje stanja gojišča med gojenjem celic. Ključne lastnosti • Klasična formulacija Eagle’s MEM z Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS) • Vključena 2 mM L-glutamina – pripravljeno za takojšnjo uporabo • 2,2 g/l natrijevega bikarbonata – pufrirano za inkubacijo pri 5 % CO₂ • Z D-glukozo (1,0 g/l) kot primarnim virom ogljika • Z fenol rdečim kot indikatorjem pH • Brez HEPES-a in brez natrijevega piruvata • Sterilno filtrirano tekoče gojišče, pripravljeno za uporabo • pH 7,0 – 7,6 Tipične uporabe EMEM omogoča gojenje široke palete celičnih linij sesalcev, vključno z HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 in številnimi primarnimi celicami. Pogoste uporabe vključujejo: • rutinsko vzdrževanje in razmnoževanje adhezivnih celičnih linij • Postopki razmnoževanja virusov in proizvodnje cepiv • Uporabe na področju citotoksičnosti in bioloških testov • Študije transfekcije in izražanja beljakovin • Temeljne raziskave na področju celične in molekularne biologije Za optimalno rast celic se EMEM običajno dopolni z 5–10 % fetalnega govejega seruma (FBS) ter, odvisno od celične linije, z neesencialnimi aminokislinami (NEAA) in antibiotiki, kot sta penicilin in streptomicin. Ravnanje in shranjevanje Neodprto steklenico shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo. Po odprtju uporabljajte v aseptičnih pogojih. L-glutamin v raztopini se postopoma razgrajuje – za najboljše rezultate priporočamo, da gojišče porabite v 4 tednih po odprtju ali pa ga pred uporabo dopolnite s svežim L-glutaminom, če je bilo shranjeno dlje časa. Pred dodajanjem celicam pustite, da se gojišče segreje na 37 °C. Kakovost Proizvedeno v skladu s strogimi standardi kakovosti. Vsaka serija je testirana na sterilnost, pH, osmolalnost in vsebnost endotoksinov, da se zagotovi dosledna učinkovitost pri uporabi v celičnih kulturah. Tehnične specifikacije Specifikacija Podrobnosti Vrsta izdelkaMEM Kategorija izdelkaGojilna sredstva za celične kulture OblikaTekočina SterilnoDa Velikost500 ml L-glutaminZ L-glutaminom (2 mM) GlukozaZ glukozo (1,0 g/l) Natrijev bikarbonatZ NaHCO₃ (2,2 g/L) HEPESBrez HEPES-a Natrijev piruvatBrez natrijevega piruvata Fenol rdečaS fenol rdečo Solna raztopinaEarleova uravnotežena solna raztopina (EBSS) pH7,0 – 7,6 Vsebnost endotoksinovNi navedeno Shranjevanjeod +2 °C do +8 °C Formulacija (sestava na liter)

€25.00

brez davka in stroškov poštnine

Sredstvo za zamrzovanje CM-1 – 100 ml

Freeze Medium CM-1 podjetja Cytion je najsodobnejše sredstvo za kriokonzervacijo, zasnovano za zagotavljanje najvišje ravni življenskosti in funkcionalnosti celic po odmrznitvi. To vsestransko sredstvo je primerno za širok spekter celic, vključno s človeškimi in živalskimi celicami, kar ga naredi nepogrešljivo orodje za raznolike raziskovalne namene. Sestavljen je iz skrbno uravnotežene kombinacije krioprotektantov in bistvenih hranilnih snovi, s čimer Freeze Medium CM-1 zmanjšuje nastajanje ledenih kristalov in celični stres med zamrzovanjem ter tako ohranja celično integriteto. Ključne lastnosti Freeze Medium CM-1 vključujejo: • Široka združljivost: Učinkovit za širok spekter tipov celic, vključno s primarnimi celicami, matičnimi celicami in uveljavljenimi celičnimi linijami. • Visoka vitalnost: Optimiziran za maksimalno obnovo in vitalnost celic po odmrzovanju, kar zagotavlja zanesljive eksperimentalne rezultate. • Pripravljeno za uporabo: priročno pripravljeno in sterilizirano za takojšnjo uporabo, kar skrajša čas priprave in zmanjša tveganje za kontaminacijo. • Izboljšana stabilnost: Ohranja dosledno delovanje v standardnih pogojih krioprezervacije, kar zagotavlja ponovljive rezultate. • Dolga rok uporabnosti: CM-1 je krioprezervacijski medij, ki vsebuje serum in je pripravljen za takojšnjo uporabo; v hladilniku ga je mogoče hraniti do enega leta. Uporaba CM-1 za zamrzovanje celic Za uporabo CM-1 pri zamrzovanju adhezivnih in suspenzijskih celic sledite tem korakom: • Adhezivne celice operite in jih ločite od kultivnega substrata. Pri celicah v suspenziji nadaljujte neposredno z naslednjim korakom. • Preštejte celice, da se prepričate, da so v ustrezni koncentraciji. • Celice centrifugirajte, da se usedejo na dno, nato jih ponovno suspendirajte v sredstvu za zamrzovanje CM-1. • Prenesite ponovno suspendirane celice v krioviale. • Pred prenosom celic v dolgoročno shranjevanje uporabite metodo počasnega zamrzovanja. Metoda Opis Koraki ❄️ Ročno zamrzovanje Postopek, ki poteka korak za korakom in vključuje postopno zniževanje temperature, da se zagotovi življenskost celic. 1️⃣ Celice v zamrzovalnem mediju postavite v zamrzovalnik pri 4 °C za 40 minut. 2️⃣ Nato jih prestavite v zamrzovalnik pri -80 °C za 24 ur. 3️⃣ Celice shranite v tekočem dušiku za dolgoročno ohranjanje. ❄️ Uporaba naprave Mr. Frosty Priročna naprava, ki omogoča nadzorovano hitrost zamrzovanja brez električne energije. 1️⃣ Pripravite celice v kriovialah z zamrzovalnim medijem. 2️⃣ Krioviale postavite v posodo Mr. Frosty. 3️⃣ Shranite pri -80 °C za 24 ur, preden jih prenesete v tekoči dušik. ❄️ Zamrzovalnik z nadzorovano hitrostjo zamrzovanja Visoko natančen zamrzovalnik proizvajalca Thermo Fisher ali drugih proizvajalcev, zasnovan za nadzorovano zniževanje temperature. 1️⃣ Napravo nastavite tako, da se temperatura postopoma znižuje. 2️⃣ Pripravljene celice vstavite v zamrzovalnik. 3️⃣ Po končanem ciklu zamrzovanja celice prenesite v tekoči dušik. • Krioviale shranjujte pri temperaturah pod -130 °C ali v tekočem dušiku za dolgoročno shranjevanje. Sestavine • Vsebuje FBS, DMSO, glukozo, soli • Pufrska zmogljivost: pH = 7,2 do 7,6 Cytionov zamrzovalni medij CM-1 ponuja zanesljivo rešitev za krioprezervacijo, ki zagotavlja visoko življenskost in funkcionalnost celic po odmrznitvi za širok spekter raziskovalnih aplikacij.

€99.00

brez davka in stroškov poštnine

Sredstvo za zamrzovanje CM-1 – 50 ml

Freeze Medium CM-1 podjetja Cytion je najsodobnejše sredstvo za kriokonzervacijo, zasnovano za zagotavljanje najvišje ravni življenskosti in funkcionalnosti celic po odmrznitvi. To vsestransko sredstvo je primerno za širok spekter celic, vključno s človeškimi in živalskimi celicami, zaradi česar je nepogrešljivo orodje za raznolike raziskovalne namene. Sestavljen je iz skrbno uravnotežene kombinacije krioprotektantov in bistvenih hranilnih snovi, s čimer Freeze Medium CM-1 zmanjšuje nastajanje ledenih kristalov in celični stres med zamrzovanjem ter tako ohranja celično integriteto. Ključne lastnosti Freeze Medium CM-1 vključujejo: • Široka združljivost: Učinkovit za širok spekter tipov celic, vključno s primarnimi celicami, matičnimi celicami in uveljavljenimi celičnimi linijami. • Visoka vitalnost: Optimizirano za maksimalno obnovo in vitalnost celic po odmrzovanju, kar zagotavlja zanesljive eksperimentalne rezultate. • Pripravljeno za uporabo: priročno pripravljeno in sterilizirano za takojšnjo uporabo, kar skrajša čas priprave in zmanjša tveganje za kontaminacijo. • Izboljšana stabilnost: Ohranja dosledno delovanje v standardnih pogojih krioprezervacije, kar zagotavlja ponovljive rezultate. • Dolga rok uporabnosti: CM-1 je krioprezervacijski medij, ki vsebuje serum in je pripravljen za uporabo ter se lahko shranjuje v hladilniku do enega leta. Uporaba CM-1 za zamrzovanje celic Za uporabo CM-1 pri zamrzovanju tako adhezivnih kot suspenzijskih celic sledite tem korakom: • Adhezivne celice operite in jih ločite od kultivnega substrata. Pri celicah v suspenziji nadaljujte neposredno z naslednjim korakom. • Preštejte celice, da se prepričate, da so v ustrezni koncentraciji. • Celice centrifugirajte, da se usedejo na dno, nato jih ponovno suspendirajte v sredstvu za zamrzovanje CM-1. • Prenesite ponovno suspendirane celice v krioviale. • Pred prenosom celic v dolgoročno shranjevanje uporabite metodo počasnega zamrzovanja. Metoda Opis Koraki ❄️ Ročno zamrzovanje Postopek, ki poteka korak za korakom in vključuje postopno zniževanje temperature, da se zagotovi življenskost celic. 1️⃣ Celice v zamrzovalnem mediju postavite v zamrzovalnik pri 4 °C za 40 minut. 2️⃣ Nato jih prestavite v zamrzovalnik pri -80 °C za 24 ur. 3️⃣ Celice shranite v tekočem dušiku za dolgoročno ohranjanje. ❄️ Uporaba naprave Mr. Frosty Priročna naprava, ki omogoča nadzorovano hitrost zamrzovanja brez električne energije. 1️⃣ Pripravite celice v kriovialah z zamrzovalnim medijem. 2️⃣ Krioviale postavite v posodo Mr. Frosty. 3️⃣ Shranite pri -80 °C za 24 ur, preden jih prenesete v tekoči dušik. ❄️ Zamrzovalnik z nadzorovano hitrostjo zamrzovanja Visoko natančen zamrzovalnik proizvajalca Thermo Fisher ali drugih proizvajalcev, zasnovan za nadzorovano zniževanje temperature. 1️⃣ Napravo nastavite tako, da se temperatura postopoma znižuje. 2️⃣ Pripravljene celice vstavite v zamrzovalnik. 3️⃣ Po končanem ciklu zamrzovanja celice prenesite v tekoči dušik. • Krioviale shranjujte pri temperaturah pod -130 °C ali v tekočem dušiku za dolgoročno shranjevanje. Sestavine • Vsebuje FBS, DMSO, glukozo, soli • Pufrska zmogljivost: pH = 7,2 do 7,6 Cytionov zamrzovalni medij CM-1 ponuja zanesljivo rešitev za krioprezervacijo, ki zagotavlja visoko življenskost in funkcionalnost celic po odmrznitvi za širok spekter raziskovalnih aplikacij.

€59.00

brez davka in stroškov poštnine

Hamov F12K Medium, vsebnost: 2,0 mM L-glutamina, vsebnost: 2,0 mM natrijevega piruvata, vsebnost: 2,5 g/L NaHCO₃

Predstavljamo Hamovo gojišče F-12K (Kaighnovo), specializirano različico Hamovega gojišča F-12, zasnovano za izpolnjevanje posebnih zahtev bioloških raziskav. To napredno gojišče ponuja izrazite prednosti, saj izboljšuje gojenje primarnih človeških hepatocitov ter jetrnih celic podgan in piščancev, zlasti v pogojih z zmanjšano vsebnostjo seruma. Hamovo gojišče F-12K (Kaighnovo) je skrbno sestavljeno za optimizacijo pogojev gojenja celic. Odlikuje ga obogatena sestava, ki zagotavlja višje ravni bistvenih sestavin, kot so aminokisline in natrijev piruvat, ter dodatnih elementov, vključno s putrescinom, timidinom, hipoksantinom in cinkom. Ti dodatki raziskovalcem omogočajo, da gojišče dopolnijo z minimalno količino seruma ali z določenimi sestavinami za specifične vrste celic, kar olajša vzpostavitev natančnih eksperimentalnih pogojev. Pomembno je, da Hamovo gojišče F-12K (Kaighnovo) ne vsebuje beljakovin ali rastnih faktorjev. Zato je pogosto potrebno dopolnjevanje z rastnimi faktorji in fetalnim govejim serumom (FBS), kar raziskovalcem omogoča prilagajanje gojišča zahtevam njihovih specifičnih celičnih linij. Za optimalno delovanje je treba koncentracijo FBS skrbno optimirati za vsako celično linijo, s čimer se zagotovi optimalna rast in funkcionalnost. Za ohranjanje fiziološkega pH-ja Hamovo gojišče F-12K (Kaighnovo) uporablja puferski sistem natrijevega bikarbonata (2,5 g/l), kar med gojenjem zahteva nadzorovano okolje z 5–10 % CO₂. To zagotavlja, da pH gojišča ostane v idealnem območju za rast in vitalnost celic. Nadzor kakovosti • pH = 7,2 ± 0,02 pri 20–25 °C. • Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij. Shranjevanje • Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C na temnem mestu. Zamrzovanje in segrevanje na temperaturo do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka. • Gojilnega sredstva ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte virov toplote, ki jih ni mogoče nadzorovati (npr. mikrovalovne pečice). • Če nameravate uporabiti le del gojišča, vzemite to količino iz steklenice in jo segrejte na sobno temperaturo. • Rok uporabnosti za vsa gojišča, razen osnovnega, je 8 tednov od datuma proizvodnje. Sestava Sestavine mg/L Anorganske soli Kalcijev klorid x 2H₂O 135,24 Bakrov(II) sulfat x 5H₂O 0,00 Železov(II) sulfat x 7H₂O 0,83 Magnezijev klorid x 6H₂O 105,72 Magnezijev sulfat x 7H₂O 394,49 Kalijev klorid 283,29 Kalijev dihidrogenfosfat 58,52 Natrijev klorid 7597,20 brezvodni dinatrijev hidrogenfosfat 115,02 Cinkov sulfat x 7H₂O 0,14 Druge sestavine D(+)-glukoza, brezvodna 1260,00 Hipoksantin 4,08 DL-α-lipoična kislina 0,21 Fenol rdeča 3,00 Putrescin x 2HCl 0,32 Natrijev piruvat 220,00 NaHCO₃ 2500,00 Timidin 0,73 Aminokisline L-alanin 17,82 L-arginin x HCl 421,40 L-asparagin x H₂O 30,02 L-asparaginska kislina 26,62 L-cistein x HCl x H₂O 70,24 L-glutamin 292,20 L-glutaminska kislina 29,42 Glicin 15,01 L-histidin x HCl x H₂O 41,92 L-izoleucin 7,87 L-levcin 26,24 L-lizin x HCl 73,04 L-metionin 8,95 L-fenilalanin 9,91 L-prolin 69,06 L-serin 21,02 L-treonin 23,82 L-triptofan 4,08 L-tirozin 10,87 L-valin 23,42 Vitamini D(+)-biotin 0,07 D-kalcijev pantotenat 0,48 Holin klorid 13,96 Folna kislina 1,32 mio-inozitol 18,02 Nikotinamid 0,04 Piridoksin x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 tiamin x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€108.00

brez davka in stroškov poštnine

Ham's F12 Medium, vsebnost: 1,0 mM stabilnega glutamina, vsebnost: 1,0 mM natrijevega piruvata, vsebnost: 1,176 g/L NaHCO₃

Hamovo gojišče F-12, znano tudi kot Hamova mešanica hranil F-12, je široko uporabljeno osnovno gojišče, zasnovano posebej za celične kulture. Obsežno se uporablja za brezserumsko gojenje posameznih celic jajčnikov kitajskega hrčka (CHO), pljučnih celic in mišjih L-celic. Poleg tega je Ham's F-12 gojišče izbire za test klonske toksičnosti (CTA). Ena od njegovih pomembnih prednosti je sposobnost podpiranja rasti celic brez potrebe po dodajanju seruma. To odpravlja morebitne motnje, ki jih povzročajo sestavine seruma, ter zagotavlja dosledne in zanesljive rezultate poskusov. S tem, da zagotavlja gojišče brez seruma, Ham's F-12 Medium raziskovalcem omogoča večji nadzor nad njihovimi raziskavami. Druga ključna lastnost gojišča Ham's F-12 je njegova primernost za sejanje posameznih celic. Zaradi tega je odlična izbira za različne celične linije, vključno s celicami CHO, pljučnimi celicami in mišjimi L-celicami. Optimizirana sestava hranil v gojišču omogoča učinkovito pritrditev in rast posameznih celic, kar omogoča vzpostavitev homogenih celičnih kultur z izboljšano ponovljivostjo. Poleg tega se je Hamovo gojišče F-12 uveljavilo kot prednostno gojišče za test klonske toksičnosti (CTA). Ta test ima ključno vlogo pri ocenjevanju citotoksičnih učinkov snovi na celice. Z uporabo Hamovega gojišča F-12 v testu CTA lahko raziskovalci natančno ocenijo vpliv različnih spojin ali obdelav na posamezne celice, kar zagotavlja dragocene vpoglede v toksikološke profile. Kontrola kakovosti • pH = 7,2 ± 0,02 pri 20–25 °C. • Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij. Shranjevanje • Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C na temnem mestu. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšata kakovost izdelka. • Gojilnega sredstva ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte virov toplote, ki jih ni mogoče nadzorovati (npr. mikrovalovne pečice). • Če nameravate uporabiti le del gojišča, vzemite to količino iz steklenice in jo segrejte na sobno temperaturo. • Rok uporabnosti vseh gojišč, razen osnovnega gojišča, je 8 tednov od datuma proizvodnje. Sestava Sestavine mg/l Anorganske soli Kalcijev klorid x 2H₂O 44,00 Bakrov(II) sulfat x 5H₂O 0,00 Železov(II) sulfat x 7H₂O 0,83 Magnezijev klorid x 6H₂O 122,00 Kalijev klorid 223,65 Natrijev klorid 7599,00 brezvodni dinatrijev hidrogenfosfat 142,04 Cinkov sulfat x 7H₂O 0,86 Druge sestavine D(+)-glukoza, brezvodna 1801,60 Hipoksantin 4,08 Linolna kislina 0,08 DL-α-lipoična kislina 0,21 Fenol rdeča 1,20 Putrescin x 2HCl 0,16 Natrijev piruvat 110,00 Timidin 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Aminokisline L-alanin 8,91 L-arginin x HCl 210,70 L-asparagin x H₂O 15,01 L-asparaginska kislina 13,31 L-cistein x HCl x H₂O 35,12 L-alanil-L-glutamin 217,30 L-glutaminska kislina 14,71 Glicin 7,51 L-histidin x HCl x H₂O 20,96 L-izoleucin 3,94 L-levcin 13,12 L-lizin x HCl 36,54 L-metionin 4,48 L-fenilalanin 4,96 L-prolin 34,53 L-serin 10,51 L-treonin 11,91 L-triptofan 2,04 L-tirozin 5,44 L-valin 11,71 Vitamini D(+)-biotin 0,01 D-kalcijev pantotenat 0,24 Holin klorid 13,96 Folna kislina 1,32 mio-inozitol 18,02 Nikotinamid 0,04 Piridoksin x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 tiamin x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€25.00

brez davka in stroškov poštnine

HEPES Buffer Solution (1M)

Volume: 100 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered HEPES Buffer Solution (1 M), also known as N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, is a zwitterionic organic buffering agent widely used in cell culture media. It is designed to maintain stable pH conditions in the physiological range of 6.7 to 8.6, supporting optimal cellular function during in vitro applications. Application and Benefits HEPES provides reliable buffering capacity in cell culture systems, particularly when cells are handled outside a CO₂ incubator. The addition of 10–25 mM HEPES to culture media offers enhanced pH stability during extended manipulation periods, helping to maintain consistent experimental conditions. This buffer is membrane-impermeable, has minimal interference with biochemical reactions, and demonstrates strong chemical and enzymatic stability. These properties make it suitable for a wide range of cell culture and biochemical applications. Formulation and Usage The solution is supplied as a 1 M concentrate prepared in cell culture–grade water and is sterile-filtered for use in contamination-sensitive environments. It can be diluted to the desired working concentration depending on application requirements. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to preserve product integrity. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

brez davka in stroškov poštnine

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

brez davka in stroškov poštnine

Gojilna sredstva za celice: pregled

Na področju življenjskih znanosti je ena najpomembnejših metodologij celična kultura. Izraz »celična kultura« pomeni odvzem celic, tkiv ali organov iz živali ali rastline in njihovo naknadno vsaditev v umetno okolje, ki je ugodno za njihovo preživetje in/ali rast. Osnovne okoljske potrebe za optimalni razvoj celic so nadzorovana temperatura, substrat za pritrditev celic, ustrezen gojišče in inkubator, ki vzdržuje optimalno vrednost pH in osmolalnost. Celice morajo imeti te pogoje, da lahko zrastejo do svojega polnega potenciala.

Izbira ustreznega gojišča za gojenje in vitro je tista faza v celični kulturi, ki je hkrati najbolj kritična in najbolj pomembna. Rastno gojišče, znano tudi kot gojišče, je tekočina ali gel, zasnovan za spodbujanje razvoja organizmov na mikroskopski, celični ali rastlinski ravni. Gojišče, ki se uporablja za gojenje celic, pogosto vsebuje zadostno količino energije in snovi, ki uravnavajo celični cikel. Glavne sestavine gojišča so aminokisline, vitamini, anorganske soli, glukoza in serum. Serum se doda gojišču, ker deluje kot vir rastnih faktorjev, hormonov in faktorjev za pritrditev. Poleg zagotavljanja hranilnih snovi gojišče prispeva tudi k ohranjanju ravni pH in osmolalnosti.

Vrste gojišč, ki se uporabljajo v celični kulturi

Tako človeške kot živalske celice je mogoče gojiti v umetnem ali sintetičnem gojišču ali v povsem naravnem gojišču, ki je dopolnjeno z naravnimi elementi. V nadaljevanju vam bomo podali pregled različnih vrst gojišč, ki so trenutno na voljo.

Naravna gojišča

V naravnih gojiščih se nahajajo le biološke tekočine, ki obstajajo v naravnem stanju. Naravna gojišča so zelo koristna in enostavna za gojenje široke palete živalskih celic. Pomanjkanje razumevanja natančnih sestavin, iz katerih so sestavljena naravna gojišča, je glavni dejavnik, ki prispeva k nizki ponovljivosti rezultatov, pridobljenih z uporabo naravnih gojišč.

Umetna gojišča

Priprava umetnih ali sintetičnih gojišč vključuje dodajanje hranil (tako organskih kot anorganskih), serumskih beljakovin, ogljikovih hidratov, kofaktorjev, vitaminov in soli ter plinskih faz O₂ in CO₂ [1].

Razvite so bile različne vrste umetnih gojišč, da bi izpolnile eno ali več naslednjih funkcij: 1) Takojšnje preživetje (uravnotežena solna raztopina z natančno vrednostjo pH in osmotskim tlakom). 2) Podaljšano preživetje (uravnotežena solna raztopina, dopolnjena z različnimi formulacijami organskih kemikalij in/ali seruma). 3) Neomejen razvoj. 4) Specializirane funkcije.

Obstajajo štiri različne klasifikacije umetnih gojišč:

Gojilna sredstva, ki vsebujejo serum

Najpogostejša vrsta dodatka v gojiščih za gojenje živalskih celic je goveji fetalni serum. V gojišče se dodaja kot cenovno ugoden dodatek, da se dosežejo najboljši možni pogoji za rast. Poleg tega, da deluje kot prenašalec ali kelator za hranilne snovi, ki so nestabilne ali netopne v vodi, hormone in rastne faktorje, zaviralce proteaz ter druge snovi, serum tudi veže in nevtralizira škodljive molekule.

Gojilna podlaga brez seruma

Prisotnost seruma v gojiščih ima številne slabosti in lahko povzroči resne napake pri interpretaciji rezultatov v imunoloških raziskavah [2, 3]. Razviti so bili različni gojišča brez seruma [4, 5]. Ta gojišča so na splošno posebej zasnovana za podporo gojenja enega samega tipa celic, kot sta na primer Knockout Serum Replacement in Knockout DMEM podjetja Thermo Fisher Scientific ter gojišče mTESR podjetja Stem Cell Technologies [6] za izvorne celice [7].

Poleg tega ta gojišča vsebujejo določene količine prečiščenih rastnih faktorjev, lipoproteinov in drugih beljakovin, ki jih sicer običajno zagotavlja serum [8]. Ta gojišča se pogosto imenujejo »definirana gojišča«, saj so sestavine, iz katerih so sestavljena, dobro razumljive.

Kemično opredeljena gojišča

Ta gojišča vsebujejo ultračiste anorganske in organske sestavine, ki niso bile onesnažene z nobeno vrsto kontaminacije. Lahko vsebujejo tudi dodatke čistih beljakovin, kot so rastni faktorji.

 Genska modifikacija bakterij ali kvasovk skupaj z dodajanjem določenih maščobnih kislin, vitaminov, holesterola in aminokislin omogoča proizvodnjo njihovih sestavnih delov [9].

Gojilna podlaga brez beljakovin

Gojilna sredstva brez beljakovin so tista, ki sploh ne vsebujejo beljakovin, temveč le nebeljakovinske sestavine. V primerjavi z gojilnimi sredstvi z dodanim serumom uporaba gojilnih sredstev brez dodanih beljakovin spodbuja večjo celično proliferacijo in izražanje beljakovin ter olajša čiščenje katerega koli proizvoda, nastalega v nadaljnjem procesu [10–12]. Beljakovine niso vključene v formulacije, kot sta MEM in RPMI-1640. Vendar se lahko po potrebi doda beljakovinski dodatek.

Kulturni mediji in njihove osnovne sestavine

Komercialna gojišča so na voljo v obliki prahu ali tekočine in pogosto vsebujejo različne hranilne snovi, kot so aminokisline, glukoza, soli, vitamini in druga prehranska dopolnila. 

Potrebe po teh sestavinah se razlikujejo za vsako celično linijo, te razlike pa so razlog za veliko število različnih formulacij gojišč. Vsaka sestavina ima določeno funkcijo, ki bo opisana v naslednjih odstavkih:

Puferski sistemi

Za ohranjanje optimalnih pogojev rasti je treba nadzorovati pH, kar se pogosto izvaja z enim od dveh pufrskih sistemov:

Naravni pufrski sistem

Razmerje CO₂/H₂CO₃ v atmosferi je enako razmerju v gojišču, kar ustvarja naravni pufrski mehanizem. Da bi ohranili svoj naravni pufrski mehanizem, je treba kulture gojiti v zračnem okolju z 5–10 % CO₂, kar se pogosto doseže z uporabo inkubatorja s CO₂. Ena od največjih prednosti uporabe naravnega pufra je njegova cenovna dostopnost in varnost.

HEPES

Kemično pufriranje z uporabo zwitteriona HEPES ima večjo pufrsko sposobnost v območju pH 7,2–7,4 in ne potrebuje reguliranega plinskega okolja. Za določene vrste celic je lahko večji odmerek HEPES škodljiv. Gojilna sredstva, ki vsebujejo HEPES, so prav tako veliko bolj občutljiva na fototoksične učinke fluorescenčne svetlobe [13].

Fenol rdeča

Indikator pH fenol rdeča je pogosto vključen v komercialno dostopna gojišča, kar omogoča neprekinjeno spremljanje pH. Med razmnoževanjem celic presnovki, ki jih te celice proizvajajo, povzročijo spremembo pH in s tem tudi spremembo barve gojišča. Fenol rdeča ima dvojni učinek na barvo gojišča: pri kislem pH se obarva rumeno, pri alkalnem pH pa vijolično. Pri pH 7,4, ki je optimalna vrednost za celično kulturo, se gojišče obarva fluorescenčno rdeče.

Vendar ima fenol rdeča nekaj pomanjkljivosti: prvič, fenol rdeča lahko posnema delovanje številnih steroidnih hormonov, predvsem estrogena [14]. Zato se pri preučevanju celic, občutljivih na estrogen, kot je tkivo dojke, priporoča gojišče brez fenol rdeče. Prisotnost fenol rdeče v nekaterih formulacijah brez seruma moti ravnovesje natrija in kalija. Dodajanje seruma ali govejega hipofiznega hormona v gojišča lahko nevtralizira ta učinek [15]. Tretjič, prisotnost fenol rdeče ovira detekcijo v eksperimentih s pretočno citometrijo.

Anorganske soli

Gojilna sredstva, ki vsebujejo anorganske soli, kot so natrijevi, kalijevi in kalcijevi ioni, pomagajo ohranjati osmoško ravnovesje in uravnavajo membranski potencial.

Aminokisline

Ker so aminokisline osnovne sestavine beljakovin, so bistvena sestavina vsakega gojišča za celice, ki je bilo kdaj koli zasnovano. Ker celice same ne morejo proizvajati nekaterih aminokislin, je pomembno, da gojišče vsebuje esencialne aminokisline. So potrebne za proliferacijo celic, njihova koncentracija pa določa največjo gostoto celic, ki jo je mogoče doseči. Zlasti pomembna je esencialna aminokislina L-glutamin.

L-glutamin deluje kot sekundarni vir energije za presnovo in prispeva dušik k proizvodnji NAD, NADPH in nukleotidov. Ker je L-glutamin nestabilna aminokislina, ki se s časom spremeni v obliko, ki je za celice neuporabna, jo je treba dodati gojišču.

Poleg tega se v gojišče lahko dodajo neesencialne aminokisline, da se nadomestijo tiste, ki so bile porabljene med rastnim procesom. Rast celic se pospeši in njihova vitalnost se poveča, če se gojišče dopolni z neesencialnimi aminokislinami.

Ogljikovi hidrati

Ogljikovi hidrati v obliki sladkorjev so glavni vir energije. Mnoga gojišča poleg bolj običajnih sladkorjev, kot sta glukoza in galaktoza, vsebujejo tudi maltozo in fruktozo.

Beljakovine in peptidi

Albumin, transferin in fibronektin so najpogosteje uporabljene beljakovine in peptidi. Zlasti so pomembni v gojiščih, ki ne vsebujejo seruma. Albumin, transferin, aprotinin, fetuin in fibronektin so nekatere beljakovine, ki jih lahko najdemo v serumu, ki je bogat vir beljakovin.

Albumin je glavna beljakovina v krvi, njegova naloga pa je vezanje in prenos različnih snovi, vključno z vodo, solmi, prostimi maščobnimi kislinami, hormoni in vitamini, med različnimi organi in celicami. Zmožnost albumina, da se veže na kemikalije, ga naredi za učinkovitega kandidata za odstranjevanje škodljivih spojin iz gojišča, v katerem se gojijo celice.

Aprotinin je zaščitno sredstvo v sistemih celičnih kultur, saj je stabilen pri nevtralnem in kislim pH ter odporen na visoke temperature in razgradnjo, ki jo lahko povzročajo proteolitični encimi. Zmožen je zavirati številne serinske proteaze, med drugim tudi tripsin.

Fetuin je glikoprotein, ki ga je mogoče v večjih količinah zaznati v serumu plodov in novorojenčkov v primerjavi s serumom odraslih živali. Poleg tega deluje kot zaviralec serinskih proteaz. Beljakovina fibronektin je bistvena sestavina v procesu celične adhezije. Transferin je beljakovina, ki prenaša železo in je odgovorna za dostavo železa do celičnih membran.

Maščobne kisline in lipidi

Imajo ključno vlogo v brezserumskem gojišču, kadar seruma ni.

Vitamini

Za razvoj in proliferacijo celic so potrebni številni vitamini. Celice ne morejo proizvesti zadostnih količin vitaminov, zato so ti v tkivnih kulturah nujni kot prehranska dopolnila.

V celični kulturi je serum glavni vir vitaminov; vendar se gojišča obogatijo tudi z različnimi vitamini, da so primerna za določen tip celic. Najpogosteje se za spodbujanje rasti uporabljajo vitamini skupine B.

Sledni elementi

Kemični elementi, kot so baker, cink, selen in vmesni produkti trikarboksilne kisline, so znani kot oligoelementi. Oligoelementi se pogosto dodajajo gojiščem, ki ne vsebujejo seruma, da bi nadomestili tiste, ki so običajno prisotni v serumu. Ti elementi so pomembne kemične sestavine, potrebne za zdrav razvoj celic. Mnoge biokemične reakcije so odvisne od določenih mikrohranil, na primer encimska aktivnost.

Dodatki k gojišču

Celotno gojišče, priporočeno za določene celične linije, potrebuje dodatne sestavine, ki jih v osnovnem gojišču in serumu ni. Ti dodatki podpirajo rast celic in ustrezno presnovno delovanje.

Čeprav so hormoni, rastni faktorji in signalne molekule bistveni za ustrezno proliferacijo določenih celičnih linij, je treba vedno upoštevati naslednje previdnostne ukrepe: Ker lahko dodajanje dodatkov spremeni osmolalnost celotnega gojišča, kar lahko zavira razvoj celic, je vedno priporočljivo preveriti osmolalnost po dodajanju dodatkov. Za večino celičnih linij se optimalna osmolalnost giblje med 260 in 320 mOSM/kg.

Antibiotiki

Antibiotiki se pogosto uporabljajo za zaviranje razvoja bakterijskih in glivičnih onesnaževalcev [16], čeprav niso nujni za rast celic. Ker lahko antibiotiki prikrijejo okužbo z mikoplazmo in odpornimi bakterijami, se njihova rutinska uporaba v celičnih kulturah ne priporoča [17, 18].

Poleg tega lahko antibiotiki motijo presnovo preobčutljivih celic. Pogosto se uporabljajo kombinacije penicilina in streptomicina proizvajalcev MilliporeSigma in Life Technologies. Plasmocin se je uporabljal pri gojenju celičnih linij gliomov TS603, TS516 in BT260 [19], pri čemer se je izkazal za učinkovitega pri odstranjevanju okužbe z mikoplazmo (20).

Serum

V serumu so prisotni albumini, rastni faktorji in zaviralci rasti. Serum je ena najpomembnejših sestavin gojišča za celice, saj zagotavlja aminokisline, beljakovine, vitamine (zlasti maščobotopne vitamine, kot so A, D, E in K), ogljikove hidrate, lipide, hormone, rastne faktorje, minerale in oligoelemente.

Za spodbujanje razvoja gojenih celic se pogosto uporablja serum iz govejih plodov in telet. Plodni serum je bogat vir rastnih faktorjev in je primeren za kloniranje celic ter razvoj občutljivih celic. Zaradi zmanjšanih sposobnosti spodbujanja rasti se teletni serum uporablja v poskusih z zaviranjem stika. Običajna gojišča pogosto vsebujejo od 2 % do 10 % seruma. Dodajanje seruma v gojišče služi naslednjim namenom [21]:

  • Serum zagotavlja celicam nujna hranila (tako v raztopini kot vezana na beljakovine).

  • Serum vsebuje več rastnih faktorjev in hormonov, ki sodelujejo pri spodbujanju rasti in specializirani celični aktivnosti.

  • Vsebuje veliko vezavnih beljakovin, kot sta albumin in transferin, ki v celico prenašajo druge kemikalije. Albumin na primer v celice prenaša maščobe, vitamine, hormone itd.

  • Prav tako zagotavlja beljakovine, kot je fibronektin, ki povečujejo adhezijo celic na substrat. Poleg tega proizvaja elemente za širjenje, ki pomagajo pri širitvi celic pred delitvijo.

  • Prinaša zaviralce proteaz, ki preprečujejo proteolizo v celicah.

  • Vsebuje tudi minerale, kot so Na+, K+, Zn2+ in Fe2+.

  • Poveča viskoznost gojišča, s čimer ščiti celice pred mehanskimi poškodbami med mešanjem suspenzijske kulture.

  • Deluje tudi kot pufer.

Viri

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Prehrana živalskih celic v tkivni kulturi; začetne študije o sintetičnem gojišču. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1–8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Hitra adsorpcija sestavine fetalnega telečjega seruma s strani sesalskih celic v kulturi. Morebitni vir artefaktov v študijah antiserumov proti celično specifičnim antigenom. Immunology. 1976;31:881–91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Dodajanje seruma v gojišče, uporabljeno za pripravo celičnih suspenzij, kot možen vir artefaktov v celično posredovanih reakcijah, preučevanih s testom poplitealnih limfnih vozlov. J Immunogenet. 1980;7:483–9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercialna gojišča brez seruma: rast hibridomov in proizvodnja monoklonskih protiteles. J Immunol Methods. 1991;145:175–83

[5] Barnes D, Sato G. Metode za gojenje celic v gojišču brez seruma. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, in sod. HSP70 kot šaperon prevaža TDP-43 brez RNA v anizotropne intranuklearne tekoče sferične lupine. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. Staranje, povzročeno z Downovim sindromom, moti jedrsko arhitekturo nevralnih progenitornih celic. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Popolna zamenjava seruma z albuminom, transferinom in sojinimi lipidi v kulturah B-limfocitov, ki se odzivajo na lipopolisaharide. J Exp Med. 1978;147:923–33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Sistematično izboljševanje kemično opredeljenega gojišča brez beljakovin za rast hibridomov in proizvodnjo monoklonskih protiteles. J Biotechnol. 1996;45:111–23

[10] Darfler F. Gojišče brez beljakovin za rast hibridomov in drugih celic imunskega sistema. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769–78

[11] Barnes D, Sato G. Brezserumska celična kultura: poenoten pristop. Cell. 1980;22:649–55

[12] Hamilton W, Ham R. Klonska rast celičnih linij kitajskega hrčka v gojiščih brez beljakovin. In Vitro. 1977;13:537–47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analiza citotoksičnih učinkov gojišča, ki vsebuje HEPES in je bilo izpostavljeno svetlobi. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282–7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenol rdeča v gojiščih za tkivne kulture je šibek estrogen: posledice za raziskovanje celic, ki se odzivajo na estrogen, v kulturi. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496–500

[15] Karmiol S. Razvoj gojišč brez seruma. V: Master JRW, urednik. Animal Cell culture, 3. izdaja. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Uporaba antibiotikov v gojiščih za celične kulture. Methods Enzymol. 1979;58:110–6

[17] McGarrity G. Širjenje in obvladovanje mikoplazemske okužbe celičnih kultur. In Vitro. 1976;12:643–8

[18] Masters J, Stacey G. Menjava gojišča in pasiranje celičnih linij. Nat Protoc. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Histonska demetilaza KDM6A neposredno zazna kisik za nadzor kromatina in usode celic. Science. 2019;363:1217–1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Učinkovitost zdravila Plasmocin™ na različnih linijah sesalskih celic, okuženih z molikuti, v primerjavi s pogosto uporabljanimi antibiotiki v celičnih kulturah: lokalne izkušnje. Cytotechnology. 2011;63:609–20

[21] Kragh Hansen U. Molekularni vidiki vezave liganda na serumski albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17–53