Introduzione

Il Cellule 3T3-Swiss albino La linea — nota anche con i sinonimi Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino e Swiss3T3 — è una delle linee cellulari più longeve e ampiamente utilizzate nella ricerca biomedica. Istituita nel 1962 da George Todaro e Howard Green a partire da embrioni di topo albino svizzero disaggregati e descritta nel loro articolo del 1963, la linea è nata da un protocollo di trasferimento seriale in base al quale quasi tutte le colture embrionali hanno infine dato origine a linee stabili e spontaneamente immortalizzate [1]. Nei sei decenni successivi, le cellule 3T3-Swiss albino sono diventate un modello indispensabile per lo studio della regolazione del ciclo cellulare, della segnalazione dei fattori di crescita, delle dinamiche del citoscheletro e della biologia della guarigione delle ferite. Il loro comportamento ben definito in termini di inibizione da contatto, la reattività a mitogeni quali il fattore di crescita derivato dalle piastrine e la bradichinina, nonché la loro manipolabilità genetica, le hanno rese un modello di riferimento fondamentale in innumerevoli studi sulle vie di segnalazione e nei test di screening farmacologico.

Punti chiave

• La linea 3T3-Swiss albino è una linea di fibroblasti embrionali murini immortalizzati spontaneamente, istituita nel 1962 da Todaro e Green (codice di accesso Cellosaurus CVCL_0120, donatore maschio, embrione intero) [25].
• La linea presenta un'inibizione della crescita indotta dal contatto, il che la rende un modello efficace per lo studio della transizione tra quiescenza e proliferazione — sebbene l'intensità di questo fenotipo dipenda dal regime di coltura piuttosto che da una proprietà fissa della linea stessa [22] [23].
• È altamente sensibile a diversi mitogeni, tra cui il fattore di crescita derivato dalle piastrine, la bombesina, la bradichinina e il fattore di crescita insulino-simile di tipo I.
• Le cellule albine svizzere 3T3 hanno svolto un ruolo fondamentale nell'analisi dell'organizzazione del citoscheletro, della segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e delle dinamiche delle adesioni focali.
• Questa linea ha dato origine a un’ampia famiglia di sottolinee derivate — tra cui 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 e la sottolinia 3T3-J2, utilizzata come strato di supporto — impiegate in applicazioni relative all’adipogenesi, all’oncologia e alla cocultura [25].
• Un test STR multiplex convalidato a livello interlaboratorio (19 marcatori murini più due marcatori umani per lo screening interspecifico; 18 dei 19 marcatori murini si sono dimostrati idonei alla discriminazione intraspecifica) consente ora un’autenticazione affidabile delle linee cellulari murine, tra cui la 3T3-Swiss albino [2].

Che cos’è il 3T3-Swiss albino?

La linea 3T3-Swiss albino è stata ottenuta dal tessuto dell'intero embrione di un topo maschio Swiss albino allo stadio embrionale, senza alcuna malattia associata al donatore [25]. Il nome “3T3” rimanda al protocollo di trasferimento originario: le cellule venivano ripassate ogni tre giorni con un inoculo di 3 × 10⁵ cellule ogni 20 cm² piatto. Todaro e Green dimostrarono che le colture di embrioni di topo subivano un calo del tasso di crescita in seguito a trasferimenti successivi — il tasso di declino dipendeva in parte dalla densità di inoculazione — prima che quasi tutte le colture si sviluppassero in linee stabili entro tre mesi, e che le condizioni di coltura utilizzate determinavano quali proprietà acquisisse la linea risultante; il regime 3T3 produsse una linea estremamente sensibile all’inibizione da contatto [1]. La linea così ottenuta presenta una morfologia fibroblastica, cresce come monostrato aderente e subisce un’inibizione della proliferazione da contatto al raggiungimento della confluenza — una proprietà che la distingue dalle linee trasformate e la rende un modello ideale per lo studio delle transizioni dalla quiescenza alla proliferazione.

La linea 3T3-Swiss albino figurava tra le linee di topi incluse in un’ampia indagine basata su array SNP, volta a verificare i background genetici riportati per i vari ceppi e a individuare le variazioni nel numero di copie cromosomiche che la profilazione STR non è in grado di rilevare; delle 99 linee esaminate, 98 corrispondevano al background genetico riportato per ciascuna di esse [3] [25]. Per rispondere alle preoccupazioni relative all’autenticazione a livello di pratica quotidiana, un consorzio interlaboratoriale composto da dodici laboratori ha convalidato un test di profilazione STR multiplex per l’identificazione intraspecifica delle linee cellulari di topo, basato su 50 delle linee di topo più comunemente utilizzate; i profili risultanti saranno pubblicati nella banca dati BioSample dell’NCBI; il profilo STR ora elencato per la linea 3T3-Swiss albino in Cellosaurus deriva da tale studio [2] [25]. Questi progressi hanno migliorato notevolmente la riproducibilità delle ricerche condotte su questa linea ampiamente diffusa.

Informazioni sulla coltura cellulare

Vantaggi delle cellule albine 3T3-Swiss

Uno dei punti di forza più interessanti delle cellule albine 3T3-Swiss è la loro risposta ben caratterizzata alla stimolazione dei fattori di crescita dopo la privazione del siero. Indurre le cellule allo stato quiescente mediante privazione del siero e poi stimolarle nuovamente con mitogeni definiti permette ai ricercatori di studiare eventi di segnalazione distinti con un’elevata risoluzione temporale. Questo paradigma sperimentale è stato utilizzato per indagare le risposte al fattore di crescita derivato dalle piastrine, alla bombesina, alla bradichinina, al fattore di crescita insulino-simile di tipo I e al fattore di crescita fibroblastico basico — coprendo una gamma insolitamente ampia di classi di recettori e vie a valle all’interno di un unico contesto cellulare coerente [4] [5] [6].

Un secondo importante vantaggio è il fenotipo di inibizione da contatto di questa linea cellulare. A differenza di molte linee tumorali trasformate, le cellule albine 3T3-Swiss subiscono un arresto della proliferazione al raggiungimento della confluenza, anziché continuare a proliferare in modo incontrollato. Ciò le rende un eccellente modello di riferimento per i test di cicatrizzazione delle ferite (scratch assay), in cui è possibile quantificare la migrazione verso una zona denudata in condizioni definite. È fondamentale, tuttavia, sottolineare che questo fenotipo dipende dalle modalità di coltura delle cellule piuttosto che da una caratteristica fissa della linea stessa. Aaronson e Todaro hanno dimostrato che le linee di embrioni di topo mantenute in condizioni che riducono al minimo il contatto cellula-cellula sono rimaste non tumorigeniche per oltre 200 generazioni, mentre le linee coltivate in condizioni di intenso contatto cellulare sono diventate tumorigeniche entro 30 generazioni — e che la proprietà di coltura che meglio correla con la tumorigenicità era proprio la perdita dell’inibizione da contatto della divisione cellulare [22]. Studi successivi hanno individuato le variabili specifiche coinvolte: nei colture di tipo 3T3 mantenute in condizioni di confluenza per più di dieci giorni si formano focolai trasformati spontanei, la cui frequenza dipende dal tipo e dalla concentrazione del siero utilizzato, nonché dalla storia dei passaggi della coltura [23]. L'effetto può essere sorprendentemente rapido: un clone che non aveva prodotto focolai in cinquanta test consecutivi nell'arco di 21 settimane ha iniziato a formarli già dopo soli due giorni in un terreno a basso contenuto di siero [24]. Questi esperimenti sono stati condotti su linee 3T3 derivate da BALB/c e NIH anziché sulla linea 3T3-Swiss albino stessa, ma descrivono una dipendenza dal regime comune alle linee di fibroblasti di tipo 3T3 e comportano un’implicazione pratica concreta: i laboratori che si affidano specificatamente all’inibizione da contatto dovrebbero operare con un numero di passaggi basso e documentato in condizioni sieriche definite, evitare di mantenere le colture in stato di confluenza più a lungo di quanto richiesto dal test e verificare il fenotipo con le proprie mani.

L’origine fibroblastica di questa linea è inoltre direttamente rilevante per gli studi sul rimodellamento della matrice extracellulare, sulla segnalazione delle integrine e sulla riparazione cutanea, fornendo un contesto fisiologico che le linee puramente epiteliali o tumorali non sono in grado di offrire. Inoltre, l’ampio catalogo di sottolinee derivate generate dalla linea 3T3-Swiss albino amplia la gamma di strumenti sperimentali a disposizione dei ricercatori nei campi dell’adipogenesi, dell’oncologia e delle applicazioni di cocultura con cellule staminali [25].

Limiti delle cellule 3T3-Swiss albino

Nonostante la loro utilità, le cellule albine 3T3-Swiss presentano alcuni limiti intrinseci derivanti dalla loro natura murina e dall’immortalizzazione spontanea. La deriva cariotipica era già stata documentata nello studio iniziale, in cui le popolazioni passavano dalla gamma diploide a quella tetraploide — spesso molto rapidamente — prima che comparissero i cromosomi marcatori [1]. Tale instabilità non è propria solo di questa linea: l’analisi mediante array SNP di 99 linee cellulari di topo comunemente utilizzate ha evidenziato variazioni nel numero di copie nel 42% di esse, compreso il 24% delle linee derivate da tessuto normale anziché tumorale, dimostrando che l’aneuploidia è una caratteristica diffusa delle colture cellulari di topo piuttosto che una caratteristica specifica del cancro [3]. Tale instabilità genomica implica che i risultati ottenuti a un numero elevato di passaggi potrebbero non riflettere fedelmente le proprietà delle cellule nei primi passaggi, e che i confronti tra laboratori potrebbero essere distorti da derive non rilevate. I ricercatori dovrebbero pertanto autenticare le proprie colture utilizzando metodi STR convalidati e mantenere registrazioni coerenti dei passaggi [2].

Un limite correlato è la prevalenza storica di ceppi cellulari identificati erroneamente o soggetti a contaminazione incrociata nella comunità scientifica, un problema ampiamente documentato per le linee cellulari di topo [3]. Una difficoltà specifica e spesso trascurata riguarda la nomenclatura: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, pubblicato nel 1963) e NIH 3T3 (CVCL_0594, derivata da un topo svizzero del NIH e pubblicata nel 1969) sono entrambe frequentemente abbreviate in “3T3” o “Swiss 3T3” nella letteratura. Laddove un articolo non riporti il numero di catalogo della collezione da cui provengono le cellule, spesso non è possibile distinguere le due linee senza contattare direttamente gli autori [26]. Questa ambiguità si estende a gran parte della letteratura classica sulla segnalazione riassunta di seguito: gli articoli che descrivono studi condotti su "Swiss 3T3" raramente specificano a quale linea si riferiscano, e i risultati dovrebbero quindi essere interpretati come applicabili ai fibroblasti murini di tipo 3T3, a meno che la fonte non identifichi esplicitamente la linea. Poiché la linea 3T3-Swiss albino non è inoltre un isolato clonale ma una popolazione policlonale, l’eterogeneità funzionale tra le colture provenienti da fonti diverse può influenzare ulteriormente i risultati sperimentali. Infine, in quanto linea di fibroblasti murini, la 3T3-Swiss albino potrebbe non riprodurre le sfumature di segnalazione rilevanti per la biologia umana senza un’attenta validazione, e i risultati ottenuti da questo modello dovrebbero essere corroborati in sistemi cellulari primari o in vivo appropriati alla specie prima di trarre conclusioni traslazionali.

Visualizza le specifiche complete ed effettua l'ordine

Applicazioni

Segnalazione dei fattori di crescita e proliferazione cellulare

Le cellule albine 3T3-Swiss hanno rappresentato un modello di eccellenza per l’analisi delle cascate di segnalazione mitogeniche innescate da diversi fattori di crescita e neuropeptidi. Nei primi lavori di Davies e Ross, le cellule 3T3 Swiss sono state utilizzate insieme a cellule muscolari lisce aortiche di scimmia e a cellule endoteliali aortiche bovine per dimostrare che la sostituzione del siero derivato dal plasma con siero da sangue intero o con il fattore di crescita derivato dalle piastrine parzialmente purificato stimolava notevolmente sia la pinocitosi che la proliferazione in colture quiescenti — un primo collegamento tra il traffico di membrana indotto dai fattori di crescita e l’ingresso nel ciclo cellulare, stabilito principalmente nel sistema delle cellule muscolari lisce [7]. Studi successivi hanno sfruttato il paradigma della sospensione del siero e della ristimolazione per collocare le singole molecole di segnalazione all’interno di vie ordinate a valle dell’attivazione del recettore.

La fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) è emersa come nodo centrale nelle risposte stimolate dai fattori di crescita. Johanson e colleghi hanno dimostrato che un pool di PI3K p110α, indipendente dalla subunità p85, si localizza insieme alla chinasi p70 S6 sulle fibre di stress dell’actina e che l’attività della PI3K è necessaria per la formazione delle fibre di stress indotta dalla trombina nelle cellule Swiss 3T3 [8]. Un ruolo analogo della PI3K nell’assorbimento dei nutrienti è stato descritto da Higaki e Shimokado, i quali hanno dimostrato che gli inibitori della PI3K inibivano l’assorbimento di aminoacidi stimolato dal fattore di crescita derivato dalle piastrine nelle cellule muscolari lisce vascolari e hanno riportato un effetto inibitorio simile nelle cellule Swiss 3T3 [9].

La proteina chinasi D (PKD) viene attivata nelle cellule Swiss 3T3 intatte dagli esteri di forbol, dai diacilgliceroli permeabili alle cellule, dalla briostatina, dai neuropeptidi e dai fattori di crescita attraverso un meccanismo dipendente dalla fosforilazione che richiede la proteina chinasi C. Come riportato nella revisione di Waldron, Iglesias e Rozengurt, la mutagenesi dei residui della spira di attivazione (serina 744 e serina 748) in costrutti di PKD espressi in cellule COS-7 ha dimostrato direttamente che la fosforilazione mediata dalla PKC di questi due residui è alla base dell’attivazione della PKD [10]. Parallelamente, Lim e colleghi hanno dimostrato che le isoforme atipiche della PKC, PKCλ e PKCζ, si associano alla proteina docker FRS2 nelle cellule Swiss 3T3 stimolate con il fattore di crescita fibroblastico basico, collocando la PKC atipica all’interno del complesso di segnalazione del recettore del fattore di crescita fibroblastico [6].

Dinamica del citoscheletro e segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho

La reattività del citoscheletro delle cellule albine 3T3-Swiss a stimoli definiti le ha rese un modello fondamentale per la ricerca sulle GTPasi della famiglia Rho. Ohta e colleghi hanno dimostrato che la piccola GTPasi RalA, correlata a Ras, si lega alla filamina in modo specifico per il GTP e induce la formazione di filopodi ricchi di actina sulla superficie delle cellule Swiss 3T3 reclutando la filamina nel citoscheletro dei filopodi [11]. Fondamentalmente, la RalA dominante-negativa o il dominio di legame alla RalA della filamina hanno bloccato la formazione di filopodi indotta da Cdc42, collocando la RalA come intermedio a valle nella riorganizzazione del citoscheletro mediata da Cdc42. Analogamente, Granés e colleghi hanno dimostrato, in studi di trasfezione su cellule COS-1 e Swiss 3T3, che la sovraespressione del proteoglicano transmembranario a base di eparan solfato syndecan-2 induceva lunghe strutture simili a filopodi attraverso un meccanismo dipendente dalla Cdc42 attiva [12].

È stato dimostrato che sia la bombesina che il fattore di crescita derivato dalle piastrine inducono l’associazione tra la chinasi di adesione focale (FAK) e i membri della famiglia Src nelle cellule Swiss 3T3, ma attraverso vie distinte. La risposta alla bombesina era rilevabile entro un minuto dalla stimolazione, raggiungeva il picco dopo dieci minuti e procedeva indipendentemente dal ^Ca²⁺ e dalla fosfatidilinositolo 3'-chinasi (PI3K), mentre la risposta a basse concentrazioni del fattore di crescita derivato dalle piastrine richiedeva la PI3K; entrambe dipendevano dall’integrità della rete dei filamenti di actina [4]. Hotchin e colleghi hanno utilizzato cellule Swiss 3T3 insieme a fibroblasti BHK per analizzare i contributi distinti del nono e del decimo dominio della fibronectina di tipo III (FIII) alla fosforilazione della FAK e all’attivazione di Rho/Rac, dimostrando che il dominio FIII10 favorisce l’adesione cellulare senza indurre la fosforilazione della FAK [13]. Li e colleghi hanno mappato biochimicamente le regioni di Cdc42 specifiche per PAK1, WASP e IQGAP1 e hanno poi microiniettato Cdc42/RhoA in cellule Swiss 3T3 private di siero, rivelando che il dominio switch I fornisce determinanti essenziali per il legame con gli effettori, mentre ciascun effettore viene riconosciuto attraverso un meccanismo distinto [14].

È stato riscontrato che lo stato di fosforilazione di WAVE, una proteina della famiglia WASP che media l’arricciamento della membrana a valle di Rac, aumentava nelle cellule Swiss 3T3 stimolate con il fattore di crescita derivato dalle piastrine, e tale iperfosforilazione veniva inibita dall’inibitore della MEK PD98059 [15]. Martelli e colleghi hanno dimostrato che la stimolazione dell’attività della fosfolipasi C-β1 nucleare, dipendente dal fattore di crescita insulino-simile di tipo I (IGF-I), richiedeva un citoscheletro di microtubuli intatto, poiché la sua distruzione con la colchicina aboliva l’aumento del diacilglicerolo nucleare senza influenzare la fosforilazione del recettore dell’IGF-I o l’attività della PI3K [5]. Critchley e colleghi hanno esaminato il collegamento integrina-actina che coinvolge talina, α-actinina, filamina e vinculina, e hanno riportato che esperimenti su cellule Swiss 3T3 permeabilizzate con streptolisina-O implicano la proteina legante il GTP ARF-1 nel convogliare la paxillina verso le adesioni focali [16].

Regolazione del ciclo cellulare

Il comportamento di crescita inibita dal contatto delle cellule albine 3T3-Swiss le ha rese un modello classico per gli studi sul ciclo cellulare. Wang e colleghi hanno fatto la sorprendente osservazione che, in esperimenti di frazionamento subcellulare, l’inibitore della chinasi ciclina-dipendente ^p27^Kip1 è stato trovato esclusivamente nel citosol delle cellule Swiss/3T3 durante tutta la fase G1 e fino alla fase S precoce, anziché nel nucleo come si era ipotizzato [17]. A seguito della stimolazione sierica delle cellule quiescenti, la ^p27Kip1 citosolica è diminuita marcatamente verso la fine della fase G1, in corrispondenza temporale con un aumento dei livelli nucleari sia di Cdk2 che di ciclina E.

Il sistema cellulare Swiss 3T3 in stato di quiescenza ha permesso agli autori di dimostrare che la Cdk2 inattiva si co-precipita con p27Kip1 nelle cellule in stato di quiescenza, mentre la stimolazione sierica attiva sia la Cdk2 nucleare che quella citosolica man mano che p27Kip1 diminuisce; ^{la p27Kip1} sovraespressa si accumulava nel nucleo e bloccava l’ingresso di Cdk2 [17]. Su questa base, gli autori hanno ipotizzato che ^{la p27Kip1} citosolica svolga un ruolo funzionale nella progressione del ciclo cellulare, forse limitando l’importazione nucleare dei complessi ciclina E-Cdk2 — un modello di compartimentazione che opera parallelamente al controllo dell’abbondanza di p27^Kip1 mediato dalla traduzione e dal proteasoma. La capacità di sincronizzare in modo riproducibile le cellule albine 3T3-Swiss mediante privazione di siero rimane fondamentale per la validità sperimentale di questi risultati.

Guarigione delle ferite e test sui biomateriali

L’identità fibroblastica e la crescita inibita dal contatto delle cellule 3T3-Swiss albino le rendono un modello di riferimento standard nella ricerca sulla guarigione delle ferite e nella valutazione della biocompatibilità dei biomateriali. Uno studio particolarmente istruttivo ha esaminato l’efficacia del resveratrolo (RES) nel processo di guarigione delle ferite utilizzando i fibroblasti 3T3-Swiss Albino come modello cellulare primario [19]. Lo stress ossidativo è stato indotto dal perossido di idrogeno e sono state somministrate dosi di RES comprese tra 1 e 100 µM per un massimo di 48 ore al fine di valutare gli effetti sulla proliferazione cellulare, sulla migrazione e sui livelli di stress ossidativo — fattori chiave che determinano l’efficienza della chiusura della ferita.

In quello studio, il perossido di idrogeno ha ridotto l’indice di proliferazione, mentre l’applicazione del resveratrolo lo ha aumentato, ha abbassato i livelli di stress ossidativo e ha migliorato i tassi di migrazione e la conservazione ultrastrutturale; in particolare, non è stata rilevata alcuna differenza nell’espressione dell’mRNA del collagene I (COL1A2), indicando che il beneficio osservato non era mediato da un aumento della trascrizione del collagene [19]. L’uso delle cellule albine 3T3-Swiss in questo contesto riflette il loro riconoscimento come linea rappresentativa di fibroblasti normali rispetto alla quale è possibile valutare gli interventi di guarigione delle ferite. Uno screening comparativo di citocompatibilità è alla base dello sviluppo delle medicazioni per ferite: un idrogel di alginato contenente estratto glicolico di calendula, ad esempio, è stato dapprima valutato per la viabilità cellulare nei fibroblasti 3T3 mediante saggi MTT e SRB prima di essere testato in un modello di ferita da incisione nei ratti, dove ha migliorato la chiusura della ferita e la deposizione di collagene [21].

La linea viene inoltre utilizzata come substrato di riferimento nei test di genotossicità. Uno studio comparativo con il test delle comete, condotto specificatamente sulla linea 3T3-Swiss albino, ha valutato la cinetica di riparazione del DNA in funzione del tempo dopo l’esposizione a sei agenti genotossici di uso comune — perossido di idrogeno, bromato di potassio, etilmetansolfonato, metilmetansolfonato, N-etil-N-nitrosourea ed etoposide — e ha rilevato profili di riparazione specifici per ciascun agente: i danni indotti dal perossido di idrogeno e dall’EMS sono stati riparati rapidamente, mentre le lesioni indotte dall’ENU e dall’etoposide sono persistite oltre le 24 ore [20]. Studi di questo tipo forniscono i dati di riferimento necessari per standardizzare e convalidare il test in vitro «comet assay» ai fini dei test normativi di genotossicità.

Vescicole extracellulari e tecnologie emergenti

Le cellule 3T3-Swiss albino hanno assunto un ruolo importante come riferimento di cellule normali negli studi sulla biologia delle vescicole extracellulari (EV). Fukuta e colleghi hanno utilizzato cellule di melanoma murino B16F1 insieme a cellule 3T3 Swiss Albino come linee cellulari rappresentative rispettivamente di cellule tumorali e normali, per indagare se una stimolazione elettrica a basso livello (0,34 mA/cm) potesse potenziare la secrezione di EV da parte delle cellule in coltura [18]. Questo disegno sperimentale a coppie è stato essenziale per distinguere le risposte cellulari generali alla stimolazione elettrica dagli effetti specifici delle cellule tumorali sul rilascio delle EV. Il trattamento elettrico ha aumentato il numero di particelle EV in entrambe le linee — di 1,7 volte nelle 3T3 Swiss Albino e di 1,26 volte nelle B16F1 — senza apparente citotossicità [18].

Il disegno sperimentale accoppiato ha inoltre rivelato una differenza meccanicistica tra i due tipi di cellule: l’inibizione farmacologica della Rho GTPasi ha soppresso l’aumento indotto elettricamente della secrezione di EV nella linea di melanoma in modo dose-dipendente, ma ha avuto scarso effetto sulle cellule 3T3 Swiss Albino, indicando che i requisiti di segnalazione sottostanti non sono identici nelle cellule tumorali e in quelle normali [18]. I marcatori rappresentativi degli esosomi CD9, HSP70 e CD81 sono stati rilevati negli EV di entrambe le linee e sono rimasti sostanzialmente invariati dal trattamento (con livelli di HSP70 costantemente bassi negli EV derivati dalle cellule 3T3), il che — insieme a un rapporto particella-proteina rimasto invariato — suggerisce che il trattamento abbia aumentato la quantità di EV senza alterarne la qualità. Man mano che la ricerca sulle EV si espande nei campi della somministrazione terapeutica, della scoperta di biomarcatori e della comunicazione cellulare, la disponibilità di una linea di fibroblasti ben convalidata e non di origine tumorale, come la 3T3-Swiss albino, diventa sempre più preziosa per contestualizzare i risultati provenienti da modelli cellulari tumorali o ingegnerizzati.

Conclusione

Le cellule 3T3-Swiss albino rappresentano una delle linee di fibroblasti murini più versatili e storicamente significative a disposizione della comunità di ricerca. Dai lavori fondamentali sulla pinocitosi e la proliferazione mediate dal fattore di crescita derivato dalle piastrine alle attuali indagini sulla secrezione di vescicole extracellulari potenziata da un basso livello di elettricità [18], questa linea immortalizzata spontaneamente ha continuamente dimostrato la propria rilevanza in diverse discipline. Il suo ben definito passaggio da stato di quiescenza a proliferazione, l’ampia risposta ai mitogeni, la plasticità del citoscheletro e il suo riconoscimento come modello di riferimento per le cellule normali nei test sulla guarigione delle ferite e sui biomateriali garantiscono che le cellule 3T3-Swiss albino rimarranno fondamentali per la biologia cellulare negli anni a venire — a condizione che le scorte siano autenticate tramite profilazione STR, che le cronologie dei passaggi siano documentate e che il regime di coltura sia scelto deliberatamente nei casi in cui il fenotipo di inibizione da contatto sia rilevante per l’esperimento. I ricercatori alla ricerca di una fonte affidabile e autenticata di cellule 3T3-Swiss albine per il loro prossimo studio sulla segnalazione, sul citoscheletro o sulla guarigione delle ferite sono invitati a consultare le specifiche del prodotto ed effettuare un ordine su cytion.com.

Pubblicazioni chiave

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Studi quantitativi sulla crescita delle cellule embrionali di topo in coltura e sul loro sviluppo in linee stabili. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Studio interlaboratoriale per la convalida di un metodo di profilazione STR per l’identificazione intraspecifica di linee cellulari di topo. PloS one. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) La profilazione mediante array SNP delle linee cellulari di topo ne identifica i ceppi di origine e rivela contaminazioni incrociate e aneuploidia diffusa. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) La bombesina e il fattore di crescita derivato dalle piastrine inducono l’associazione della chinasi di adesione focale endogena con Src in cellule Swiss 3T3 intatte. The Journal of biological chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) La stimolazione, dipendente dal fattore di crescita insulino-simile di tipo I, dell’attività della fosfolipasi C-beta1 nucleare nelle cellule Swiss 3T3 richiede un citoscheletro intatto ed è accompagnata da un aumento della fosforilazione della fosfolipasi. Journal of cellular biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Associazione di isotipi atipici della proteina chinasi C con la proteina docker FRS2 nella segnalazione del fattore di crescita dei fibroblasti. The Journal of biological chemistry. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Mediazione della pinocitosi nelle cellule muscolari lisce arteriose e endoteliali in coltura da parte del fattore di crescita derivato dalle piastrine. The Journal of Cell Biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) Una PI 3-chinasi p110alfa indipendente dalla subunità p85 si colocalizza con la chinasi p70 S6 sulle fibre di stress dell’actina e regola la formazione delle fibre di stress stimolata dalla trombina nelle cellule Swiss 3T3. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) La fosfatidilinositolo 3-chinasi è necessaria per l’assorbimento degli aminoacidi indotto dai fattori di crescita da parte delle cellule muscolari lisce vascolari. Arteriosclerosi, trombosi e biologia vascolare. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) Attivazione della proteina chinasi D dipendente dalla fosforilazione [Rassegna]. Electrophoresis. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) La piccola GTPasi RalA agisce sulla filamina per indurre i filopodi. Atti dell’Accademia Nazionale delle Scienze degli Stati Uniti d’America. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) Il sindecano-2 induce i filopodi tramite la cdc42Hs attiva. Experimental cell research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Attivazione differenziale della chinasi di adesione focale, di Rho e di Rac da parte del nono e del decimo dominio FIII della fibronectina. Journal of Cell Science. PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) Localizzazione delle regioni di Cdc42 che specificano PAK1, WASP e IQGAP1. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) Fosforilazione di WAVE a valle della via di segnalazione della proteina chinasi attivata dai mitogeni. The Journal of biological chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Adesione cellulare mediata dalle integrine: il collegamento con il citoscheletro [Revisione]. Simposio della Biochemical Society. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) L’inibitore della chinasi ciclina-dipendente p27Kip1 è localizzato nel citosol nelle cellule Swiss/3T3. Oncogene. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) Una corrente elettrica a bassa intensità aumenta la secrezione di vescicole extracellulari da cellule in coltura. Biochemistry and biophysics reports. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) Efficacia del resveratrolo nel processo di guarigione delle ferite attraverso la riduzione dello stress ossidativo e la promozione della proliferazione e della migrazione dei fibroblasti. Dermatologic Therapy. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Cinetica di riparazione del DNA specifica per agente nelle cellule 3T3: uno studio comparativo mediante il test Comet in vitro. Ricerca tossicologica. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) L’estratto glicolico di calendula potenzia la guarigione delle ferite con idrogel di alginato. Acta cirurgica brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Fondamenti per l’acquisizione del potenziale maligno da parte di cellule di topo coltivate in vitro. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Prove a sostegno della natura progressiva e adattativa della trasformazione spontanea nella linea cellulare NIH 3T3. Atti dell’Accademia Nazionale delle Scienze degli Stati Uniti d’America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Adattamento e selezione come fattori nella trasformazione spontanea delle cellule NIH-3T3. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Voce Cellosaurus 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Istituto svizzero di bioinformatica. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Domande frequenti su Cellosaurus, Q21: Perché in Cellosaurus esistono diverse voci relative alla linea cellulare 3T3? cellosaurus.org/faq