Úvod

Toto 3T3-švajčiarske albínske bunky Táto bunka — známa aj pod synonymami Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino a Swiss3T3 — patrí medzi najdlhšie používané a najrozšírenejšie bunkové línie v biomedicínskom výskume. Túto líniu v roku 1962 založili George Todaro a Howard Green z rozložených embryí myší Swiss albino a opísali ju vo svojej štúdii z roku 1963. Vznikla na základe protokolu sériových transferov, v rámci ktorého takmer všetky kultúry embryí nakoniec viedli k vzniku etablovaných, spontánne imortalizovaných línií. [1]. V priebehu nasledujúcich šiestich desaťročí sa bunky 3T3-Swiss albino stali nenahraditeľným modelom pre štúdium regulácie bunkového cyklu, signalizácie rastových faktorov, dynamiky cytoskeletu a biológie hojenia rán. Vďaka ich jasne definovanému správaniu pri kontaktnej inhibícii, citlivosti na mitogény, ako sú rastový faktor derivovaný z krvných doštičiek a bradykinín, a genetickej manipulovateľnosti sa stali základným referenčným modelom v nespočetných štúdiách signálnych dráh a testoch na skríning liekov.

Hlavné závery

• 3T3-Swiss albino je spontánne imortalizovaná línia embryonálnych fibroblastov myši, ktorú v roku 1962 založili Todaro a Green (registračné číslo v databáze Cellosaurus CVCL_0120, samec, celé embryo) [25].
• Táto línia vykazuje kontaktnú inhibíciu rastu, čo z nej robí výkonný model na štúdium prechodu medzi kľudovým stavom a proliferáciou — hoci intenzita tohto fenotypu závisí skôr od podmienok kultivácie než od pevne danej vlastnosti tejto línie [22] [23].
• Vyznačuje sa vysokou citlivosťou na rôzne mitogény, vrátane rastového faktora odvodeného z krvných doštičiek, bombesínu, bradykinínu a inzulínu podobného rastového faktora I.
• Bunky 3T3-Swiss albino zohrali kľúčovú úlohu pri skúmaní organizácie cytoskeletu, signalizácie GTPáz z rodiny Rho a dynamiky fokálnych adhézií.
• Táto línia dala vzniknúť rozsiahlej rodine odvodených podlínií — vrátane 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 a podlínie 3T3-J2 slúžiacej ako živná vrstva — ktoré sa využívajú v adipogenéze, onkológii a pri aplikáciách s ko-kultúrou [25].
• Multiplexný STR test, ktorého spoľahlivosť bola overená v medzilaboratórnych testoch (19 myších markerov plus dva ľudské markery na medzidruhové skríningové testy; 18 z 19 myších markerov sa ukázalo ako vhodných na vnútrodruhové rozlišovanie), teraz umožňuje spoľahlivé overovanie pravosti myších bunkových línií, vrátane 3T3-Swiss albino [2].

Čo je 3T3-Swiss albino?

3T3-Swiss albino bol odvodení z tkaniva celého embrya samčeka myši odrody Swiss albino v embryonálnom štádiu, pričom darca nevykazoval žiadne ochorenie [25]. Názov „3T3“ odkazuje na pôvodný protokol prenosu: bunky sa pasážovali každé tri dni pri inokule 3 × 10⁵ buniek na 20 cm² miska. Todaro a Green preukázali, že rýchlosť rastu kultúr myších embryí sa pri opakovaných prenosoch znižovala – pričom miera poklesu závisela čiastočne od hustoty inokulácie –, než sa takmer všetky kultúry do troch mesiacov vyvinuli na etablované línie, a že použité kultivačné podmienky určovali, aké vlastnosti výsledná línia nadobudla; režim 3T3 viedol k vzniku línie, ktorá je mimoriadne citlivá na kontaktnú inhibíciu [1]. Výsledná bunka vykazuje fibroblastickú morfológiu, rastie ako adhezívna monovrstva a pri dosiahnutí konfluencie dochádza k inhibícii proliferácie v dôsledku kontaktu — táto vlastnosť ju odlišuje od transformovaných buniek a robí z nej ideálny model na štúdium prechodov z kľudového stavu do proliferácie.

Myšia línia 3T3-Swiss albino patrila medzi myšie línie zahrnuté do rozsiahleho prieskumu pomocou SNP-array, ktorého cieľom bolo overiť uvádzané genetické pozadie kmeňov a zistiť zmeny v počte kópií chromozómov, ktoré nie je možné odhaliť pomocou STR profilovania; zo 99 skúmaných línií sa 98 zhodovalo s genetickým pozadím, ktoré bolo pre ne uvedené [3] [25]. S cieľom vyriešiť problémy s overovaním pravosti v bežnej praxi validovalo medzilaboratórne konzorcium pozostávajúce z dvanástich laboratórií multiplexný test na profilovanie STR pre vnútrodruhovú identifikáciu myších bunkových línií, založený na 50 najčastejšie používaných myších líniách, pričom výsledné profily budú uverejnené v databáze NCBI BioSample; profil STR, ktorý je teraz uvedený pre 3T3-Swiss albino v Cellosaurus, pochádza z tejto štúdie [2] [25]. Tieto pokroky výrazne zlepšili reprodukovateľnosť výskumu uskutočňovaného s touto široko rozšírenou líniou.

Informácie o bunkových kultúrach

Výhody buniek 3T3-Swiss albino

Jednou z najvýraznejších predností albínskych buniek 3T3-Swiss je ich dobre charakterizovaná reakcia na stimuláciu rastovými faktormi po odobratí séra. Uvedenie buniek do kľudového stavu prostredníctvom odobratia séra a ich následná opätovná stimulácia definovanými mitogénmi umožňuje výskumníkom študovať jednotlivé signálne udalosti s vysokým časovým rozlíšením. Tento experimentálny model bol využitý na skúmanie reakcií na rastový faktor derivovaný z krvných doštičiek, bombesín, bradykinín, inzulínový rastový faktor typu I a bazický fibroblastový rastový faktor – čím sa pokrylo neobvykle široké spektrum tried receptorov a následných signálnych dráh v rámci jedného konzistentného bunkového prostredia. [4] [5] [6].

Druhou významnou výhodou je fenotyp tejto buneckej línie v oblasti inhibície kontaktu. Na rozdiel od mnohých transformovaných rakovinových línií sa albínske bunky 3T3-Swiss pri dosiahnutí konfluencie zastavia, namiesto toho, aby pokračovali v nadmernom raste. Vďaka tomu sú vynikajúcim referenčným modelom pre testy hojenia rán (scratch assay), kde je možné za definovaných podmienok kvantifikovať migráciu do odhaleného priestoru. Kľúčové však je, že tento fenotyp závisí od spôsobu kultivácie buniek a nie je pevnou charakteristikou tejto buneckej línie. Aaronson a Todaro preukázali, že línie myších embryí udržiavané v podmienkach, ktoré minimalizujú kontakt medzi bunkami, zostali netumorigénne po viac ako 200 generácií, zatiaľ čo línie kultivované v podmienkach intenzívneho bunkového kontaktu sa stali tumorogénnymi už po 30 generáciách — a že kultivačná vlastnosť, ktorá najviac korelovala s tumorigenicitou, bola práve strata kontaktnej inhibície delenia buniek [22]. Následné štúdie identifikovali konkrétne faktory, ktoré tu zohrávajú úlohu: spontánne transformované ložiská vznikajú v kultúrach typu 3T3, ktoré sú udržiavané v stave konfluencie dlhšie ako desať dní, a ich frekvencia závisí od typu a koncentrácie použitého séra, ako aj od počtu pasáží kultúry [23]. Účinok môže byť pozoruhodne rýchly — klon, ktorý počas 21 týždňov nevytvoril žiadne ložiská v päťdesiatich po sebe idúcich testoch, začal tieto ložiská vytvárať už po dvoch dňoch v médiu s nízkym obsahom séra [24]. Tieto experimenty boli vykonané na líniách 3T3 odvodených od kmeňov BALB/c a NIH, a nie priamo na albínskej línii 3T3-Swiss, avšak opisujú závislosť od režimu, ktorá je spoločná pre fibroblastové línie typu 3T3, a majú konkrétny praktický dôsledok: laboratóriá, ktoré sa spoliehajú konkrétne na kontaktnú inhibíciu, by mali pracovať s nízkym a zdokumentovaným počtom pasáží za definovaných sérových podmienok, vyhýbať sa udržiavaniu kultúr v stave konfluencie dlhšie, ako to vyžaduje test, a overovať fenotyp vlastnými silami.

Fibroblastický pôvod tejto buneckej línie má tiež priamy význam pre štúdie remodelácie extracelulárnej matice, integrínovej signalizácie a regenerácie kože – poskytuje fyziologický kontext, ktorý čisto epiteliálne alebo onkologické buneckej línie nemôžu ponúknuť. Okrem toho rozsiahly katalóg derivovaných podlínií vytvorených z 3T3-Swiss albino rozširuje experimentálny nástrojový arzenál dostupný výskumníkom v oblasti adipogenézy, onkológie a aplikácií spoločnej kultivácie kmeňových buniek. [25].

Obmedzenia buniek 3T3-Swiss albino

Napriek svojej užitočnosti majú bunky 3T3-Swiss albino vrodené obmedzenia vyplývajúce z ich myšieho pôvodu a spontánnej imortalizácie. Karyotypová drift bola zdokumentovaná už v pôvodnej štúdii, v ktorej sa populácie posunuli z diploidného do tetraploidného rozsahu – často veľmi rýchlo – ešte predtým, ako sa objavili markerové chromozómy [1]. Táto nestabilita nie je špecifická pre túto líniu: profilovanie pomocou SNP-array u 99 bežne používaných myších bunkových línií odhalilo dôkazy o zmene počtu kópií u 42 % z nich, vrátane 24 % línií odvodených z normálneho tkaniva, a nie z nádorového, čím sa potvrdilo, že aneuploidia je skôr bežným znakom myších bunkových kultúr ako znakom špecifickým pre rakovinu [3]. Takáto genomová nestabilita znamená, že výsledky získané pri vysokom počte pasáží nemusia verne odrážať vlastnosti buniek v raných pasážach a medzilaboratórne porovnania môžu byť skreslené nezisteným posunom. Výskumníci by preto mali overovať svoje zásoby pomocou validovaných STR metód a viesť konzistentnú evidenciu pasáží [2].

S tým súvisiacim obmedzením je historická rozšírenosť nesprávne identifikovaných alebo krížovo kontaminovaných bunkových zásob vo výskumnej komunite, čo je problém, ktorý bol vo veľkej miere zdokumentovaný v prípade myších bunkových línií [3]. Špecifický a často prehliadaný problém sa týka nomenklatúry: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, publikované v roku 1963) a NIH 3T3 (CVCL_0594, odvodená od myši NIH Swiss a publikovaná v roku 1969) sa v odbornej literatúre často skracujú na „3T3“ alebo „Swiss 3T3“. Ak článok neuvádza katalógové číslo zbierky, z ktorej bunky pochádzajú, tieto dve línie sa často nedajú vôbec rozlíšiť bez priameho kontaktovania autorov [26]. Táto nejednoznačnosť sa vzťahuje na veľkú časť klasickej literatúry o signálnych dráhach, ktorú nižšie zhrnieme: v správach opisujúcich prácu s „Swiss 3T3“ sa zriedka uvádza, o ktorú líniu ide, a zistenia by sa preto mali chápať ako platné pre myšie fibroblasty typu 3T3, pokiaľ zdroj líniu výslovne nešpecifikuje. Keďže 3T3-Swiss albino navyše nie je klonálny izolát, ale polyklonálna populácia, funkčná heterogenita medzi zásobami z rôznych zdrojov môže dodatočne ovplyvniť výsledky experimentov. Nakoniec, ako myšia fibroblastová línia, 3T3-Swiss albino nemusí bez dôkladnej validácie verne odzrkadľovať nuansy signalizácie relevantné pre ľudskú biológiu a výsledky z tohto modelu by mali byť potvrdené v primárnych bunkách vhodných pre daný druh alebo v in vivo systémoch, skôr než sa vyvodia translačné závery.

Zobraziť kompletné technické údaje a objednať

Aplikácie

Signalizácia rastových faktorov a bunková proliferácia

Albinistické bunky 3T3-Swiss slúžili ako vynikajúci model na skúmanie mitogénnych signálnych kaskád vyvolaných rôznymi rastovými faktormi a neuropeptidmi. V raných prácach Daviesa a Rossa boli bunky Swiss 3T3 použité spolu s bunkami hladkého svalstva opičej aorty a endoteliálnymi bunkami hovädzej aorty na preukázanie, že nahradenie séra získaného z plazmy celým krvným sérom alebo čiastočne purifikovaným rastovým faktorom z derivátov krvných doštičiek výrazne stimulovalo pinocytózu, ako aj proliferáciu v kľudových kultúrach — čo predstavovalo skoré prepojenie medzi membránovým transportom indukovaným rastovými faktormi a vstupom do bunkového cyklu, stanovené hlavne v systéme buniek hladkého svalstva [7]. Následné štúdie využili paradigma odňatia séra a následnej restimulácie na zaradenie jednotlivých signálnych molekúl do usporiadaných dráh nadväzujúcich na aktiváciu receptora.

Fosfatidylinozitol-3-kináza (PI3K) sa ukázala ako centrálny uzol v reakciách stimulovaných rastovými faktormi. Johanson a spolupracovníci ukázali, že zásoba p110α PI3K nezávislá od p85-podjednotky sa kolokalizuje s p70 S6 kinázou na aktínových stresových vláknach a že aktivita PI3K je nevyhnutná pre tvorbu stresových vlákien indukovanú trombínom v bunkách Swiss 3T3 [8]. Porovnateľnú úlohu PI3K pri príjme živín opísali Higaki a Shimokado, ktorí preukázali, že inhibítory PI3K zrušili príjem aminokyselín stimulovaný rastovým faktorom derivovaným z krvných doštičiek v bunkách hladkého svalstva ciev a uviedli podobný inhibičný účinok v bunkách Swiss 3T3 [9].

Proteínkináza D (PKD) sa v intaktných bunkách Swiss 3T3 aktivuje forbolovými estermi, diacylglycerolmi prenikajúcimi do buniek, bryostatínom, neuropeptidmi a rastovými faktormi prostredníctvom mechanizmu závislého od fosforylácie, ktorý vyžaduje proteínkinázu C. Ako uvádzajú Waldron, Iglesias a Rozengurt, mutagénna analýza aminokyselinových zvyškov serínu 744 a serínu 748 v aktivačnej slučke konštruktov PKD exprimovaných v bunkách COS-7 priamo preukázala, že fosforylácia týchto dvoch zvyškov sprostredkovaná PKC je základom aktivácie PKD [10]. Súbežne s tým Lim a spolupracovníci preukázali, že atypické izoformy PKC, PKCλ a PKCζ, sa viažu na dokovací proteín FRS2 v bunkách Swiss 3T3 stimulovaných bazickým fibroblastovým rastovým faktorom, čím sa atypické PKC zaradili do signálneho komplexu receptora fibroblastového rastového faktora [6].

Dynamika cytoskeletu a signalizácia GTPáz z rodiny Rho

Reakčná schopnosť cytoskeletu albínskych buniek 3T3-Swiss na definované podnety z nich urobila kľúčový model pre výskum GTPáz z rodiny Rho. Ohta a spolupracovníci preukázali, že malá GTPáza RalA, príbuzná Ras, sa viaže na filamín spôsobom špecifickým pre GTP a indukuje tvorbu filopódií bohatých na aktín na povrchu buniek Swiss 3T3 tým, že rekrutuje filamín do cytoskeletu filopódií [11]. Kľúčové je, že dominantne negatívny RalA alebo doména filamínu viažuca RalA blokovali tvorbu filopódií indukovanú Cdc42, čím sa RalA zaradil medzi následné medzistupne v reorganizácii cytoskeletu sprostredkovanej Cdc42. Podobne Granés a spolupracovníci v transfekčných štúdiách na bunkách COS-1 a Swiss 3T3 ukázali, že nadmerná expresia transmembránového heparánsulfátového proteoglykánu syndekánu-2 indukovala dlhé štruktúry podobné filopódiám prostredníctvom mechanizmu závislého od aktívneho Cdc42 [12].

Ukázalo sa, že bombesín aj rastový faktor derivovaný z krvných doštičiek indukujú asociáciu medzi kinázou fokálnej adhézie (FAK) a členmi rodiny Src v bunkách Swiss 3T3, avšak odlišnými cestami. Reakcia na bombesín bola zistiteľná do jednej minúty od stimulácie, dosiahla vrchol po desiatich minútach a prebiehala nezávisle od ^Ca²⁺ a fosfatidylinozitolu 3'-kinázy, zatiaľ čo reakcia na nízke koncentrácie rastového faktoru derivovaného z krvných doštičiek vyžadovala PI3K; obe záviseli od integrity siete aktínových filamentov [4]. Hotchin a spolupracovníci použili bunky Swiss 3T3 spolu s fibroblastami BHK na analýzu odlišných príspevkov deviatej a desiatej domény fibronektínu typu III (FIII) k fosforylácii FAK a aktivácii Rho/Rac, čím preukázali, že FIII10 podporuje priľnavosť buniek bez vyvolania fosforylácie FAK [13]. Li a spolupracovníci biochemicky zmapovali regióny Cdc42 špecifické pre PAK1, WASP a IQGAP1 a následne mikroinjektovali konštitutívne aktívne chiméry Cdc42/RhoA do buniek Swiss 3T3, ktoré boli zbavené séra, čím odhalili, že doména „switch I“ poskytuje základné determinanty pre väzbu efektorov, pričom každý efektor je rozpoznávaný prostredníctvom odlišného mechanizmu [14].

Zistilo sa, že stav fosforylácie WAVE, proteínu z rodiny WASP sprostredkovávajúceho zvlnenie membrány v nadväznosti na Rac, sa zvyšuje v bunkách Swiss 3T3 stimulovaných rastovým faktorom derivovaným z krvných doštičiek a táto hyperfosforylácia bola inhibovaná inhibítorom MEK PD98059 [15]. Martelli a spolupracovníci preukázali, že stimulácia aktivity jadrovej fosfolipázy C-β1 závislej od inzulínu podobného rastového faktora I vyžaduje intaktný mikrotubulárny cytoskelet, keďže jej narušenie kolchicínom zrušilo nárast diacylglycerolu v jadre bez ovplyvnenia fosforylácie receptora IGF-I alebo aktivity PI3K [5]. Critchley a spolupracovníci zhodnotili prepojenie integrínu s aktínom, na ktorom sa podieľajú talín, α-aktinín, filamín a vinculín, a uviedli, že experimenty na bunkách Swiss 3T3 permeabilizovaných streptolyzínom-O naznačujú, že proteín viažuci GTP ARF-1 sa podieľa na smerovaní paxilínu do fokálnych adhézií [16].

Regulácia bunkového cyklu

Správanie buniek 3T3-Swiss albínov, ktorých rast je inhibovaný kontaktom, z nich urobilo klasický model pre štúdium bunkového cyklu. Wang a kolegovia urobili prekvapivé zistenie, že v experimentoch so subcelulárnou frakcionáciou sa inhibítor cyklín-dependentnej kinázy ^p27Kip1 nachádzal výlučne v cytosole buniek Swiss/3T3 počas celej fázy G1 a až do rannej fázy S, a nie v jadre, ako sa predpokladalo [17]. Po stimulácii kľudových buniek sérom hladina ^p27Kip1 v cytosole výrazne poklesla v neskorej fáze G1, čo časovo zodpovedalo nárastu hladín Cdk2 aj cyklínu E v jadre.

Systém kľudových buniek Swiss 3T3 umožnil autorom preukázať, že neaktívny Cdk2 sa v kľudových bunkách spoluprecypituje s p27Kip¹, zatiaľ čo stimulácia sérom aktivuje Cdk2 v jadre aj v cytosole, pričom hladina p27Kip1 klesá; nadmerne exprimovaný ^p2^7Kip1 sa hromadil v jadre a blokoval vstup Cdk2 [17]. Na tomto základe autori navrhli, že cytosolický p27^Kip1 má funkčnú úlohu v priebehu bunkového cyklu, pravdepodobne obmedzovaním importu komplexov cyklínu E-Cdk2 do jadra — ide o model kompartmentalizácie, ktorý funguje popri translacionálnej a proteazómom sprostredkovanej regulácii množstva p27Kip1. Schopnosť reprodukovateľne synchronizovať albínske bunky 3T3-Swiss prostredníctvom deprivácie séra zostáva kľúčová pre experimentálnu výpovednú hodnotu týchto zistení.

Hojenie rán a testovanie biomateriálov

Fibroblastická identita a rast 3T3-Swiss albínových buniek inhibovaný kontaktom z nich robia štandardný referenčný model vo výskume hojenia rán a pri hodnotení biokompatibility biomateriálov. Obzvlášť poučná štúdia skúmala účinnosť resveratrolu (RES) v procese hojenia rán s využitím fibroblastov 3T3 Swiss Albino ako primárneho bunkového modelu [19]. Oxidačný stres bol indukovaný peroxidom vodíka a dávky RES v rozmedzí od 1 do 100 µM sa aplikovali po dobu až 48 hodín s cieľom posúdiť vplyv na proliferáciu buniek, migráciu a hladiny oxidačného stresu – kľúčové determinanty efektívnosti uzatvárania rán.

V tejto štúdii peroxid vodíka znížil index proliferácie, zatiaľ čo aplikácia resveratrolu ho zvýšila, znížila hladiny oxidačného stresu a zlepšila rýchlosť migrácie a zachovanie ultrastruktúry; je potrebné poznamenať, že nebol zistený žiadny rozdiel v expresii mRNA kolagénu I (COL1A2), čo naznačuje, že pozorovaný prínos nebol sprostredkovaný zvýšenou transkripciou kolagénu [19]. Použitie albínskych buniek 3T3-Swiss v tomto kontexte odzrkadľuje ich uznanie ako reprezentatívnej línie normálnych fibroblastov, voči ktorej je možné porovnávať intervencie zamerané na hojenie rán. Podobné skríningy cytokompatibility tvoria základ vývoja ránových obväzov: napríklad alginátový hydrogél obsahujúci glykolový extrakt z nechtíka lekárskeho bol napríklad najskôr posúdený z hľadiska životaschopnosti buniek vo fibroblastoch 3T3 pomocou testov MTT a SRB, a až potom bol testovaný na modeli reznej rany u potkanov, kde zlepšil uzatváranie rany a ukladanie kolagénu [21].

Táto línia sa rovnako používa ako referenčný substrát pri testovaní genotoxicity. V porovnávacej štúdii s kométovým testom, ktorá pracovala výlučne s líniou 3T3-Swiss albino, sa hodnotila časovo závislá kinetika opravy DNA po expozícii šiestim bežne používaným genotoxickým látkam – peroxidu vodíka, bromátu draselnému, etylmetánsulfonátu, metylmetánsulfonátu, N-etyl-N-nitrozo-močovinu a etopozid — a zistila profily opravy špecifické pre jednotlivé látky, pričom poškodenia vyvolané peroxidom vodíka a EMS sa opravili rýchlo, zatiaľ čo lézie vyvolané ENU a etopozidom pretrvávali dlhšie ako 24 hodín [20]. Štúdie tohto druhu poskytujú referenčné údaje potrebné na štandardizáciu a validáciu in vitro kometového testu pre regulačné testovanie genotoxicity.

Extracelulárne vezikuly a nové technológie

Bunky 3T3-Swiss albino zohrávajú dôležitú úlohu ako referenčné normálne bunky v štúdiách biológie extracelulárnych vezikúl (EV). Fukuta a kolegovia použili myšie melanómové bunky B16F1 spolu s bunkami 3T3 Swiss Albino ako reprezentatívne rakovinové, resp. normálne bunkové línie, aby zistili, či nízka úroveň elektrickej stimulácie (0,34 mA/cm) môže zvýšiť sekréciu EV z kultivovaných buniek [18]. Tento párový experimentálny dizajn bol nevyhnutný na odlíšenie všeobecných bunkových reakcií na elektrickú stimuláciu od účinkov špecifických pre rakovinové bunky na uvoľňovanie EV. Elektrická stimulácia zvýšila počet častíc EV v oboch líniách – 1,7-násobne v línii 3T3 Swiss Albino a 1,26-násobne v línii B16F1 – bez zjavnej cytotoxicity [18].

Tento párový dizajn tiež odhalil mechanistický rozdiel medzi týmito dvoma typmi buniek: farmakologická inhibícia Rho GTPázy potlačila elektricky indukovaný nárast sekrécie EV v línii melanómu spôsobom závislým od dávky, avšak mala len malý vplyv na bunky 3T3 Swiss Albino, čo naznačuje, že základné signálne požiadavky nie sú v rakovinových a normálnych bunkách identické [18]. Reprezentatívne markery exozómov CD9, HSP70 a CD81 boli detekované v EV z oboch línií a liečba ich v podstate nezmenila (HSP70 bol v EV pochádzajúcich z 3T3 konzistentne nízky), čo — spolu s nezmeneným pomerom častíc k bielkovinám — naznačuje, že liečba zvýšila množstvo EV bez zmeny ich kvality. Vzhľadom na to, že sa výskum EV rozširuje do oblasti terapeutického podávania, objavovania biomarkerov a bunkovej komunikácie, dostupnosť dobre validovanej línie fibroblastov nepochádzajúcich z nádorov, ako je 3T3-Swiss albino, sa stáva čoraz cennejšou pre kontextualizáciu výsledkov z modelov rakovinových alebo geneticky modifikovaných buniek.

Záver

Bunky 3T3-Swiss albino predstavujú jednu z najuniverzálnejších a historicky najvýznamnejších línií myších fibroblastov, ktoré má výskumná komunita k dispozícii. Od základných prác o pinocytóze a proliferácii sprostredkovanej rastovým faktorom derivovaným z krvných doštičiek až po súčasné skúmanie sekrécie extracelulárnych vezikúl podporenej slabým elektrickým prúdom [18] táto spontánne imortalizovaná línia neustále potvrdzuje svoj význam naprieč disciplínami. Jej jasne definovaný prechod medzi kľudovým stavom a proliferáciou, široká citlivosť na mitogény, plasticita cytoskeletu a uznanie ako referenčného štandardu normálnych buniek pre testy hojenia rán a biomateriálov zaručujú, že bunky 3T3-Swiss albino zostanú aj v budúcich rokoch kľúčové pre bunkovú biológiu — za predpokladu, že zásoby sú overené profilovaním STR, že história pasáží je zdokumentovaná a že kultivačný režim je zvolený zámerne v prípadoch, kde je fenotyp kontaktnej inhibície dôležitý pre experiment. Výskumníkom, ktorí hľadajú spoľahlivý a overený zdroj albínskych buniek 3T3-Swiss pre svoje ďalšie štúdie v oblasti signalizácie, cytoskeletu alebo hojenia rán, odporúčame oboznámiť sa so špecifikáciami produktu a zadať objednávku na stránke cytion.com.

Kľúčové publikácie

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Kvantitatívne štúdie rastu buniek myších embryí v kultúre a ich vývoja do etablovaných línií. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Medzilaboratórna štúdia na validáciu metódy profilovania STR na vnútrodruhovú identifikáciu myších bunkových línií. PloS one. PMID: 31220119
3. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Profilovanie myších bunkových línií pomocou SNP-array identifikuje ich pôvodné kmene a odhaľuje krížovú kontamináciu a rozšírenú aneuploidiu. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Bombesín a rastový faktor derivovaný z krvných doštičiek indukujú asociáciu endogénnej kinázy fokálnej adhézie so Src v intaktných bunkách Swiss 3T3. The Journal of biological chemistry. PMID: 10497197
5. Martelli AM, Cocco L, Bareggi R (1999) Stimulácia aktivity jadrovej fosfolipázy C-beta1 v bunkách Swiss 3T3, závislá od inzulínu podobného rastového faktora I, vyžaduje intaktný cytoskelet a sprevádza ju zvýšená fosforylácia fosfolipázy. Journal of cellular biochemistry. PMID: 10022515
6. Lim YP, Low BC, Lim J (1999) Vzťah atypických izotypov proteínkinázy C s dokovacím proteínom FRS2 v signalizácii fibroblastového rastového faktora. The Journal of biological chemistry. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Sprostredkovanie pinocytózy v kultivovaných bunkách hladkého svalstva artérií a endotelových bunkách prostredníctvom rastového faktora derivovaného z krvných doštičiek. The Journal of cell biology. PMID: 103882
8. Johanson SO, Naccache PA, Crouch MF (1999) PI 3-kináza p110alfa, nezávislá od podjednotky p85, sa kolokalizuje s kinázou p70 S6 na aktínových stresových vláknach a reguluje trombínom stimulovanú tvorbu stresových vlákien v bunkách Swiss 3T3. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Higaki M, Shimokado K (1999) Fosfatidylinozitol-3-kináza je nevyhnutná pre príjem aminokyselín indukovaný rastovými faktormi v bunkách hladkého svalstva ciev. Arterioskleróza, trombóza a vaskulárna biológia. PMID: 10479654
10. Waldron RT, Iglesias T, Rozengurt E (1999) Aktivácia proteínkinázy D závislej od fosforylácie [Prehľad]. Electrophoresis. PMID: 10197446
11. Ohta Y, Suzuki N, Nakamura S (1999) Malá GTPáza RalA sa viaže na filamín a indukuje filopódie. Zborník Národnej akadémie vied Spojených štátov amerických. PMID: 10051605
12. Granés F, García R, Casaroli-Marano RP (1999) Syndekán-2 indukuje filopódie prostredníctvom aktívneho cdc42Hs. Experimental cell research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Diferenciálna aktivácia kinázy fokálnej adhézie, Rho a Rac deviatou a desiatou doménou FIII fibronektínu. Journal of Cell Science. PMID: 10444388
14. Li R, Debreceni B, Jia B (1999) Lokalizácia regiónov Cdc42 špecifických pre PAK1, WASP a IQGAP1. Časopis biologickej chémie. PMID: 10514434
15. Miki H, Fukuda M, Nishida E (1999) Fosforylácia WAVE v nadväznosti na signálnu dráhu mitogénom aktivovanej proteínkinázy. The Journal of biological chemistry. PMID: 10488099
16. Critchley DR, Holt MR, Barry ST (1999) Integrínom sprostredkovaná bunková adhézia: prepojenie s cytoskeletom [Prehľad]. Biochemical Society symposium. PMID: 10320934
17. Wang G, Miskimins R, Miskimins WK (1999) Inhibítor cyklín-dependentnej kinázy p27Kip1 je lokalizovaný v cytosole buniek Swiss/3T3. Oncogene. PMID: 10498870
18. Fukuta T, Nishikawa A, Kogure K (2019) Nízkonapäťový elektrický prúd zvyšuje sekréciu extracelulárnych vezikúl z kultivovaných buniek. Biochemistry and biophysics reports. PMID: 31828227
19. Kaleci B, Koyuturk M (2020) Účinnosť resveratrolu v procese hojenia rán prostredníctvom znižovania oxidačného stresu a podpory proliferácie a migrácie fibroblastov. Dermatologická terapia. PMID: 32996685
20. İpek Tekneci S, Üstündağ A, Duydu Y (2025) Kinetika opravy DNA špecifická pre jednotlivé látky v bunkách 3T3: komparatívna štúdia s využitím in vitro kometového testu. Toxicology research. PMID: 41399455
21. Possa GOK, Chopek S, Pereira AV (2024) Glykolový extrakt z nechtíka lekárskeho podporuje hojenie rán s použitím alginátového hydrogélu. Acta cirurgica brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Základ pre získanie malígneho potenciálu myšími bunkami kultivovanými in vitro. Science. PMID: 4301647
23. Rubin H, Xu K (1989) Dôkazy o progresívnej a adaptívnej povahe spontánnej transformácie v bunkovej línii NIH 3T3. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Grundel R, Rubin H (1992) Adaptácia a selekcia ako faktory spontánnej transformácie buniek NIH-3T3. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Záznam v databáze Cellosaurus 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Švajčiarsky inštitút bioinformatiky. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Cellosaurus FAQ, otázka č. 21: Prečo existujú v databáze Cellosaurus rôzne záznamy o bunkovej línii 3T3? cellosaurus.org/faq