Úvod

Bunky Ba/F3, známa aj pod synonymami BA/F3, BaF3, BAF3 a Baf3 (číslo prístupu v databáze Cellosaurus: CVCL_0161), je myšia pro-B-bunka závislá od interleukínu-3 (IL-3), odvodená z kostnej drene. Túto líniu po prvýkrát opísali Palacios a Steinmetz v roku 1985 ako súčasť skupiny nepretržite proliferujúcich klonov kostnej drene závislých na IL-3, ktoré niesli marker línie B-buniek B-220 a zachovali si svoje gény imunoglobulínov v konfigurácii zárodočnej línie. ^[19] Pôvodne sa uvádzalo, že táto línia pochádza z myši BALB/c, avšak následné profilovanie pomocou SNP-array potvrdilo, že táto línia v skutočnosti pochádza z myši C3H. ^[1] Od svojho vzniku sa bunky Ba/F3 stali jedným z najčastejšie používaných modelových systémov vo výskume hematopoetických signálnych dráh a pri vývoji onkologických liekov. Ich prísna závislosť na IL-3 pre prežitie a proliferáciu z nich robí výnimočne čistú platformu: zavedenie onkogénnej kinázy alebo fúzného proteínu spôsobuje, že bunky sa stanú nezávislé od tohto faktora, čo poskytuje silný a kvantifikovateľný výsledok. Výskumníci túto vlastnosť bežne využívajú na charakterizovanie fúznych proteínov BCR-ABL, mutácií FLT3, fúzií JAK2 a mnohých ďalších klinicky relevantných kinázových onkogénov, ako aj na profilovanie malomolekulových inhibítorov kináz vo formátoch s vysokou priepustnosťou.

Hlavné závery

• Ba/F3 je myšia IL-3-dependentná pro-B-bunka odvodená z kostnej drene myši C3H, zaradená v databáze Cellosaurus pod číslom CVCL_0161.
• Odstránenie IL-3 predstavuje prísny selekčný test: rodičovské bunky odumierajú, zatiaľ čo bunky exprimujúce aktívnu onkogénnu kinázu – alebo akýkoľvek iný konštrukt, ktorý poskytuje konštitutívny rastový signál – prežívajú a proliferujú.
• Táto bunka sa vo veľkej miere využíva na štúdium fúznych proteínov BCR-ABL, mutácií génu FLT3, signálnej dráhy JAK–STAT a biológie receptorov cytokínov.
• Bunky Ba/F3 sa čoraz viac využívajú pri vysokokapacitnom skríningu inhibítorov kináz, čím sa stávajú základným kameňom vývoja cielených liekov proti rakovine. ^[2]
• Z buniek Ba/F3 boli vytvorené stovky derivátnych bunkových línií nesúcich definované onkogénne mutácie, ktoré pokrývajú EGFR, ALK, ROS1, RET, NTRK, FLT3 a mnoho ďalších klinicky relevantných cieľov.

Čo je Ba/F₃?

Ba/F3 je faktorovo závislá myšia pro-B-bunka, izolovaná z kostnej drene myši C3H; pohlavie a vek darcu nie sú v údajoch Cellosaurus pre túto líniu zaznamenané. Rodičovská línia nenesie žiadne známe mutácie aktivujúcich kináz a na prežitie vyžaduje exogénny IL-3. Jej čas zdvojnásobenia je približne 20 hodín za štandardných kultivačných podmienok. Hlavnou charakteristikou tejto línie je jej prísna závislosť od IL-3, čo znamená, že akúkoľvek genetickú manipuláciu, ktorá spôsobuje rast nezávislý od faktora, je možné rýchlo a jednoznačne zistiť. Táto vlastnosť v kombinácii s absenciou rušivých endogénnych mutácií kináz urobila z buniek Ba/F3 nenahraditeľný nástroj na analýzu onkogénneho potenciálu fúzií kináz, bodových mutácií a konštitutívne aktívnych signálnych molekúl v biológii hematopoetických aj solídnych nádorov. Je potrebné poznamenať, že absencia anotácie mutácií nie je totožná s geneticky nedotknutým pozadím: Cellosaurus zaznamenáva aj údaje o variáciách odvodené z SNP-array pre túto líniu.

Profilovanie pomocou SNP-arrayu opravilo dlhodobo nesprávne pripisovanie pôvodu tejto línie. V skoršej literatúre sa uvádzalo, že Ba/F3 pochádza z myši BALB/c, avšak genómová analýza potvrdila jej pôvod z línie C3H. ^[1] Zo 99 myších bunkových línií skúmaných v tejto štúdii bola Ba/F3 jedinou líniou, ktorej genetické pozadie nezodpovedalo uvádzanému pôvodnému kmeňu; túto nezrovnalosť nezávisle potvrdila organizácia RIKEN, distribútor tejto línie, a morfologické porovnanie s inými líniami odvodenými od C3H naznačilo, že Ba/F3 je samostatná bunková línia a nie je výsledkom krížovej kontaminácie. Tento zistenie podčiarkuje dôležitosť rutinného overovania pravosti bunkových línií, najmä v prípade myších línií, kde samotné profilovanie STR nemusí stačiť na rozlíšenie inbredných kmeňov. Výskumníci používajúci líniu Ba/F3 by mali v publikáciách uvádzať referenčné číslo Cellosaurus CVCL_0161, aby zabezpečili jednoznačnú identifikáciu.

Informácie o bunkových kultúrach

Výhody článkov Ba/F₃

Najvýznamnejšou výhodou buniek Ba/F3 je ich binárny spúšťač prežitia závislý od IL-3. Pri absencii IL-3 dochádza u rodičovských buniek Ba/F3 k rýchlej apoptóze. Zavedenie onkogénnej kinázy alebo fúzného proteínu zachráni bunky pred smrťou, čo umožňuje priamu selekciu stabilne transformovaných klonov bez zložitých reportérových konštruktov. Táto vlastnosť bola využitá v mnohých formátoch testov, od klasických testov prežitia kolónií až po moderné vysokokapacitné skríningy proliferácie na profilovanie zlúčenín. ^[2] Vďaka jednoduchosti a spoľahlivosti vyhodnocovania výsledkov sú testy založené na Ba/F₃ široko používaným systémom prvého stupňa na stanovenie poradia účinnosti inhibítorov kináz, hoci absolútne hodnoty účinnosti závisia od konkrétneho testu a laboratória a pri porovnávaní medzi jednotlivými štúdiami je potrebná opatrnosť. ^[21]

Bunky Ba/F3 sú tiež geneticky prispôsobivé a ich transfekcia alebo transdukcia je jednoduchá. Retrovirálne, lentivirálne a elektroporáciou založené zavádzanie expresných konštruktov všetky efektívne vedú k stabilne exprimujúcim sublíniám. To umožnilo vytvorenie stoviek derivátnych línií nesúcich klinicky relevantné mutácie v cieľových génoch, ako sú EGFR, FLT3, BCR-ABL, EML4-ALK a RET, a v mnohých ďalších. Absencia rušivých endogénnych mutácií kináz v rodičovskej línii zaručuje, že fenotypové reakcie možno pripísať výlučne zavedenému transgénu. Okrem toho približne 20-hodinový čas zdvojnásobenia podporuje rýchlu experimentálnu priepustnosť, čím sa výrazne skracuje čas potrebný na vykonanie testov v porovnaní s pomalšie rastúcimi primárnymi bunkovými kultúrami.

Platforma Ba/F3 sa ukázala ako mimoriadne vhodná pre aplikácie zamerané na objavovanie signálnych sekvencií. Kojima a Kitamura využili konštrukt konštitutívne aktívneho receptora cytokínov na presmerovanie závislosti rastu buniek Ba/F3 smerom k lokalizácii proteínov nesúcich signálny peptid na povrchu buniek, čo umožnilo rozsiahle skríningovanie cDNA na identifikáciu sekrétovaných a membránovo orientovaných génových produktov. ^[3] Táto kreatívna aplikácia ilustruje, ako je možné využiť závislosť buniek Ba/F3 na IL-3 aj mimo rámca bežného výskumu kinázových onkogénov, čím sa táto bunka stáva univerzálnou platformou pre genetický skríning.

Obmedzenia Ba/F₃ článkov

Napriek mnohým výhodám majú bunky Ba/F3 vrodené biologické obmedzenia, ktoré je potrebné zohľadniť pri interpretácii experimentálnych údajov. Ako myšia pro-B bunková línia nemajú mnohé signálne adaptéry a koreceptory, ktoré sa vyskytujú v ľudských nádorových bunkách. Hodnoty účinnosti inhibítorov a následné signálne reakcie pozorované v bunkách Ba/F3 nemusia presne odrážať aktivitu v primárnych ľudských nádorových bunkách alebo v materiáli získanom od pacientov. Vedci, ktorí sa zaoberajú výskumom rezistencie voči cieleným terapiám pri adenokarcinóme pľúc, musia napríklad overiť zistenia založené na bunkách Ba/F3 na fyziologicky relevantnejších modeloch ľudských buniek, skôr než vyvodia klinické závery.

Aj genómové pozadie tejto línie bolo predmetom nesprávneho charakterizovania. Po desaťročia sa Ba/F3 pripisoval pôvodu BALB/c, avšak profilovanie pomocou SNP-array preukázalo, že pochádza z myši C3H. ^[1] V tej istej štúdii boli zistené dôkazy aneuploidie u približne 42 % skúmaných myších bunkových línií, vrátane značnej časti línií odvodených skôr z normálneho tkaniva ako z nádorového; samotná línia Ba/F3 bola označená skôr kvôli nesprávnej identifikácii ako kvôli zmene počtu kópií, avšak tento všeobecný zistenie ilustruje, ako ľahko dochádza k hromadeniu karyotypových zmien v kultúre. Takáto nestabilita pri vysokom počte pasáží by mohla ovplyvniť výsledky signálnych dráh, merania citlivosti na lieky a reprodukovateľnosť transformovaných fenotypov. Výskumníci by preto mali pracovať s nízkym počtom pasáží a pravidelne overovať autentickosť svojich kmeňov.

Nakoniec, bunky Ba/F3 neodzrkadľujú celé mikroprostredie nádoru ani stromálne interakcie prítomné pri hematologických malignitách. Chýba im tiež endogénna expresia mnohých ľudských signálnych komponentov, čo znamená, že interakcie koreceptorov dôležité pre funkciu onkogénov môžu chýbať alebo sa môžu líšiť. Štúdie komplexných cytokinových receptorov s viacerými podjednotkami alebo receptorov vyžadujúcich glykozyláciou závislú signalizáciu môžu vyžadovať doplnkové systémy ľudských buniek, aby bolo možné dospieť k biologicky platným záverom. Napriek týmto výhradám zostávajú bunky Ba/F3 výkonným a široko akceptovaným nástrojom prvej línie v biológii kináz.

Zobraziť kompletné technické údaje a objednať

Aplikácie

Objavovanie liekov zameraných na kinázy a skríning onkogénov

Bunky Ba/F3 sa stali dominantnou bunkovou platformou pre objavovanie liekov zameraných na kinázy. Warmuth a jeho kolegovia poskytli komplexné hodnotenie systému Ba/F3 na tento účel a opísali, ako možno test nezávislosti na IL-3 prispôsobiť formátom s vysokou priepustnosťou na hodnotenie onkogénneho potenciálu mutácií kináz, ako aj schopnosti malomolekulových inhibítorov kináz zvrátiť rast nezávislý na faktore. ^[2]V prehľade sa zdôraznilo, že bunky Ba/F3 pokrývajú pozoruhodnú škálu onkogénnych kináz, čo z nich robí univerzálnu platformu pre počiatočné profilovanie variantov kinómu spojených s rakovinou pred prechodom k zložitejším modelom ľudských buniek.

Pasca na signálnu sekvenciu, ktorú vyvinuli Kojima a Kitamura, preukázala, že bunky Ba/F3 možno použiť nielen na prácu s kinázovými onkogénmi, ale aj na funkčné skríningovanie cDNA knižníc. ^[3]Spojením konštitutívne aktívneho receptora cytokínu s funkciou signálneho peptidu priniesol jediný pilotný experiment 150 už známych klonov – všetky kódujúce sekrétne alebo povrchové proteíny – spolu s 48 novými cDNA klonmi, vrátane membránových proteínov typu II, ktoré unikli predchádzajúcim stratégiám pasce na signálnu sekvenciu. Tento prístup ilustruje škálovateľnosť platformy Ba/F3 nad rámec klasickej validácie cieľov liečiv.

Extrémna rozmanitosť derivátnych línií Ba/F3, ktoré sú teraz katalogizované v Cellosaurus – zahŕňajúca stovky variantov EGFR, fúzií ALK, prestavieb RET, fúzií NTRK a rezistenčných mutácií – podčiarkuje, ako sa rodičovská línia Ba/F3 stala základným rámcom pre presný onkologický výskum. Každá odvodená línia si zachováva čisté pozadie závislé od IL-3 a zároveň pridáva jednu definovanú genetickú premennú, čo umožňuje systematické štúdie vzťahu medzi štruktúrou a aktivitou na bunkovej úrovni.

Mutácie FLT3 a akútna myeloidná leukémia

Jednou z najvýznamnejších aplikácií buniek Ba/F3 bola charakterizácia mutácií FLT3 (fms-podobná tyrozínkináza 3) pri akútnej myeloidnej leukémii (AML). Interná tandemová duplikácia génu FLT3 patrí medzi najčastejšie onkogénne lézie pri AML, pričom sa vyskytuje približne v 20 % až 30 % prípadov v závislosti od kohorty a detekčnej metódy. ^[4][20]Hayakawa a spolupracovníci preukázali, že tandemovo duplikovaný gén FLT3, zavedený do dvoch línií závislých na IL-3 (32D a Ba/F3), konštitutívne aktivuje STAT5 aj MAP kinázu a zabezpečuje autonómny, rast nezávislý od IL-3, zatiaľ čo FLT3 divokého typu podporoval len minimálnu proliferáciu aj pri nepretržitej stimulácii ligandom.^[4] Táto prelomová štúdia etablovala bunky Ba/F3 ako primárny funkčný testovací systém na validáciu mutácií FLT3 a naďalej zostáva metodologickým štandardom v tejto oblasti.

Následné práce vo veľkej miere nadväzovali na tento základ. Štúdie fukosylácie jadra ukázali, že CRISPR/Cas9-knockout génu Fut8 v bunkách Ba/F3 exprimujúcich FLT3 divokého typu stačil na vyvolanie proliferácie nezávislej od IL-3 — efekt, ktorý sa u rodičovských buniek nepozoroval — sprevádzaný zvýšenou tyrozínovou fosforyláciou a aktiváciou STAT5, AKT a ERK, ako aj dimerizáciou FLT3 nezávislou od ligandov.^[20] Tým sa odhalila úroveň regulácie prostredníctvom glykozilácie, ktorá nebola v súvislosti s týmto receptorom doteraz docenená. Rezistencia voči inhibítoru FLT3 gilteritinibu bola tiež skúmaná na modeloch Ba/F3 FLT3-ITD, kde rezistencia pri klinicky dosiahnuteľných koncentráciách lieku zvyčajne vyžadovala viacero sekundárnych mutácií, z ktorých niektoré neboli doteraz popísané. ^[21]V tej istej práci sa systematicky zhodnotili silné stránky a obmedzenia modelov Ba/F3 FLT3-ITD, pričom sa konštatovalo, že hoci je táto platforma vhodná na identifikáciu a klasifikáciu mutácií rezistencie, nedokáže replikovať komplexné prostredie kostnej drene, ktoré formuje rezistenciu u pacientov.

Biológia BCR-ABL a chronická myeloidná leukémia

Bunky Ba/F3 transfekované fúznymi proteínmi BCR-ABL zohrali kľúčovú úlohu v pochopení molekulárnej biológie chronickej myeloidnej leukémie (CML). Canitrot a kolegovia použili bunky Ba/F3 exprimujúce izoformy p190 a p210 BCR-ABL na preukázanie, že BCR-ABL spôsobuje mutátorový fenotyp, čím sa frekvencia spontánnych mutácií v porovnaní s rodičovskými bunkami zvyšuje troj- až päťnásobne, a že táto genomická nestabilita súvisela so zvýšenou expresiou DNA polymerázy beta. ^[6]Tento objav poskytol mechanizmus, ktorým by BCR-ABL mohol riadiť progresiu ochorenia z chronickej fázy CML do akútnej myeloidnej leukémie.

Uemura a jeho kolegovia skúmali v bunkách Ba/F3 adaptérny proteín CRKL, jeden z hlavných tyrozínových fosfoproteínov v leukemických neutrofiloch pacientov s CML. ^[7]Bunky s nadmernou expresiou CRKL v plnej dĺžke vykazovali zvýšenú adhéziu k fibronektínu a zmenenú morfológiu na povrchoch pokrytých fibronektínom, zatiaľ čo deléčné mutanty bez domény SH2 alebo N-terminálnej domény SH3 tieto vlastnosti nevykazovali — čo naznačuje, že na tento účinok sú potrebné obe domény. Adhézia bola blokovaná protilátkou proti integrínu beta1, hoci nadmerná expresia CRKL nezmenila povrchovú expresiu integrínu beta1 ani spontánne neindukovala jeho aktivačný epitop. Tieto experimenty naznačujú účasť CRKL v signálnych dráhach, ktoré regulujú adhéziu sprostredkovanú integrínom v nadväznosti na BCR-ABL.

Spolu tieto štúdie BCR-ABL ilustrujú, ako bunky Ba/F3 umožňujú jasnú analýzu signálnych dráh riadených onkogénom tým, že odstraňujú zložitosť endogénnej kinázovej aktivity. Táto platforma naďalej podporuje charakterizáciu mutácií rezistencie voči inhibítorom BCR-ABL, pričom sú teraz k dispozícii špecializované línie Ba/F3 BCR-ABL a deriváty BCR-ABL-T315I na priame profilovanie inhibítorov v kontexte klinicky relevantných genotypov rezistencie.

Signálne dráhy JAK–STAT

Bunky Ba/F3 slúžili ako primárny model na analýzu toho, ktoré signálne udalosti za cytokínovými receptormi sú skutočne nevyhnutné pre rast. Liu a spolupracovníci skonštruovali chimérickú molekulu (beta/JAK2) pozostávajúcu z extracelulárnej a transmembránovej oblasti betac fúzovanej s JAK2 a exprimovali ju v bunkách Ba/F3. ^[8]Táto chiméra bola konštitutívne fosforylovaná a stačila na riadenie prežitia a proliferácie nezávislej od IL-3. Je pozoruhodné, že STAT5, Shc a SHP-2 neboli v týchto bunkách fosforylované a aktivita promotérov beta-kazeínu a c-fos nebola zvýšená, zatiaľ čo transkripcia c-myc bola konštitutívne aktivovaná. Autori dospeli k záveru, že na prežitie a proliferáciu stačí samotná aktivácia JAK2 a že aktivácia STAT5 a MAP kinázy nie je pre tieto konkrétne výstupy potrebná — čo je užitočná pripomienka, že rast nezávislý od faktorov v bunkách Ba/F3 sám o sebe neznamená aktiváciu STAT.

Úlohu STAT5 v signalizácii IFN-alfa skúmali v bunkách Ba/F3 Jaster a spolupracovníci, ktorí ukázali, že IFN-alfa aktivuje väzbu STAT5A a STAT5B na DNA, avšak IL-3 je oveľa silnejším induktorom oboch izoforiem. ^[9]Dominantne negatívna mutácia JAK2 potláčala aktiváciu STAT5 vyvolanú IL-3, nie však aktiváciu vyvolanú IFN-alfa, čo odhalilo, že tieto dva cytokíny využívajú nezávislé mechanizmy vyššieho rádu, ktoré konvergujú na ten istý transkripčný faktor; autori napriek tomu dospeli k záveru, že STAT5 nie je v tomto systéme kľúčový pre signalizáciu IFN-alfa.

Konštitutívna aktivácia JAK–STAT bola modelovaná v bunkách Ba/F3 pomocou fúzného proteínu TEL–JAK2, čo je onkogénna fúzia spojená s akútnou lymfoblastickou leukémiou T-buniek. Ho a spolupracovníci ukázali, že fúzia špičkovej domény TEL s funkčnou kinázovou doménou JAK2 (JH1) premenila bunky Ba/F3 na bunky nezávislé od faktorov, zatiaľ čo fúzia s pseudokinázovou doménou (JH2) alebo s kinázovo neaktívnou doménou JH1 tak neurobila; aktívne konštrukty vyvolávali konštitutívnu tyrozínovú fosforyláciu STAT1, STAT3 a STAT5.^[5] Nedávno sa zistilo, že metotrexát potláča fosforyláciu TEL–JAK2, STAT3 a STAT5 v bunkách Ba/F3 prostredníctvom mechanizmu závislého od metabolizmu folátov: tento účinok bol zvrátený kyselinou folínovou, reprodukovaný knockoutom dihydrofolátreduktázy pomocou CRISPR/Cas9 a nebol napodobený 5-fluóruracilom. ^[22]

Signalizáciu IL-4 prostredníctvom STAT6 skúmali Gingras a spolupracovníci, ktorí preukázali, že koaktivátory p300/CBP sú nevyhnutné pre transkripčnú indukciu sprostredkovanú STAT6 a že nadmerná expresia p300/CBP potencuje aktivitu reportérového génu riadenú IL-4. ^[10]Väčšina týchto prác bola vykonaná na bunkách COS7 a HeLa; bunky Ba/F3 prispeli kľúčovým endogénnym dôkazom, a to konkrétne koimunoprecipitáciou natívneho STAT6 spolu s CBP.

Signalizácia prostredníctvom receptorov cytokínov a biológia hematopoetických buniek

Systém receptorov GM-CSF/IL-3/IL-5 bol podrobne zmapovaný s využitím buniek Ba/F3. Itoh a spolupracovníci vykonali systematickú mutačnú analýzu ôsmich cytoplazmatických tyrozínových zvyškov spoločnej beta-podjednotky (betac), pričom v bunkách Ba/F3 exprimovali sériu mutantov s nahradením tyrozínu fenylalanínom spolu s ľudskou alfa-podjednotkou divokého typu, aby určili, ktoré zvyšky sprostredkúvajú špecifické signálne výstupy. ^[12]Pri prehľade paralelnej série mutagénnych experimentov Okuda a spolupracovníci uviedli, že mutácia všetkých ôsmich cytoplazmatických tyrozínov v GMR-beta znížila fosforyláciu samotného receptora, SHP2 a SHC, avšak nezabránila krátkodobému proliferačnému signálu ani fosforylácii JAK2 a STAT5, čo ilustruje hierarchiu funkcií domén receptora. ^[13]Ukázalo sa, že tyrozínkináza receptora RON aktivuje signálnu dráhu receptora IL-3 beta v bunkách Ba/F3, čím indukuje morfologické zmeny zahŕňajúce redistribúciu F-aktínu a jedinečné zmeny tvaru jadra, čo odhaľuje vzájomnú interakciu medzi systémami tyrozínkinázových receptorov a receptorov cytokínov. ^[14]

Požiadavky na subdomény receptora boli analyzované aj v prípade receptora IL-2. Pomocou transfekovaných línií Ba/F3 Hunt a spolupracovníci identifikovali kyslé domény a oblasť bohatú na serín v blízkosti membrány v beta reťazci receptora IL-2 ako nevyhnutné pre aktiváciu MAP kináz p38 a p54, pričom Tyr338 – miesto väzby na Shc – slúži ako kľúčový sprostredkovateľ. ^[11]Keďže kyslá doména nie je nevyhnutná pre proliferáciu indukovanú IL-2, autori dospeli k záveru, že na rast buniek Ba/F3 indukovaný IL-2 nie je v skutočnosti potrebná aktivácia ani MAP kinázy p38, ani p54, čo platí aj pre primárne T-bunky.

Regulácia bunkového cyklu v hematopoetických progenitorových bunkách bola tiež skúmaná s využitím buniek Ba/F3. Mahmud a spolupracovníci preukázali, že TGF-beta1 spomaľuje prechod z fázy G1 do fázy S v bunkách Ba/F3, pričom toto spomalenie rastu spojili so zvýšenou expresiou proteínu Bcl-2 a inhibítora CDK p27. ^[15]Synergický účinok IL-4 s aktivovaným Raf-1 pri riadení dlhodobej proliferácie buniek Ba/F3 skúmali Levings a spolupracovníci, ktorí zistili, že IL-4 sám o sebe nedokáže podporiť rast, ale môže spolupracovať s aktivovaným Ras alebo Raf-1 na udržaní nepretržitej proliferácie porovnateľnej s IL-3. ^[16]

Vytvorené systémy prepínania receptorov využili závislosť buniek Ba/F3 na IL-3 pre aplikácie v génovej terapii. Kume a jeho kolegovia vyvinuli receptor G-CSF fúzovaný s bakteriálnou gyrazou B (GcrGyr), v ktorom dimerizujúce antibiotikum kumermycín spúšťalo proliferáciu buniek Ba/F3 nezávislú od IL-3 ako selektívny zosilňovací génový systém na rozšírenie geneticky modifikovaných hematopoetických buniek, čo slúžilo ako dôkaz koncepcie. ^[17]Podobne sa ukázalo, že fúzny proteín IL-11 a rozpustného receptora IL-11 pôsobí ako superagonista na bunky Ba/F3 transfekované gp130, ktorým chýba membránovo viazaný receptor IL-11 alfa, čo dokazuje, že zložky rozpustného receptora môžu funkčne nahradiť transmembránové podjednotky. ^[18]

Záver

Bunky Ba/F3 (CVCL_0161) predstavujú jednu z najuniverzálnejších a najrozsiahlejšie validovaných platforiem myších bunkových línií v modernom biomedicínskom výskume. Ich prísna závislosť od IL-3 poskytuje elegantný a reprodukovateľný funkčný test pre onkogénne kinázy — vrátane fúznych proteínov BCR-ABL, mutácií FLT3, a fúzií JAK2 – ako aj pre nízkomolekulárne inhibítory kináz s klinickým významom pre chronickú myeloidnú leukémiu, akútnu myeloidnú leukémiu, lymfoblastickú leukémiu-lymfóm z prekurzorových buniek a adenokarcinóm pľúc. Desaťročia výskumu potvrdili, že signálna dráha JAK–STAT, biológia receptorov cytokínov a regulácia hematopoetických buniek sú kľúčovými oblasťami uplatnenia buniek Ba/F3. Prispôsobivosť tejto buneckej línie umožnila vytvorenie stoviek odvodených modelov s definovanými mutáciami rezistencie, vďaka čomu je táto línia nenahraditeľná pri vývoji cielených terapií. Ak máte záujem o založenie alebo rozšírenie svojho programu v oblasti biológie kináz alebo vývoja liekov, bunky Ba/F3 sú k dispozícii na stránke cytion.com — navštívte stránku produktu a ešte dnes si vyžiadajte informácie alebo zadajte objednávku.

Kľúčové publikácie

1. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z (2014) Profilovanie myších bunkových línií pomocou SNP array identifikuje ich pôvodné kmene a odhaľuje krížovú kontamináciu a rozšírenú aneuploidiu. BMC Genomics. PMID: 25277546
2. Warmuth M, Kim S, Gu XJ (2007) Bunky Ba/F3 a ich využitie pri vývoji liekov zameraných na kinázy. Current Opinion in Oncology. PMID: 17133113
3. Kojima T, Kitamura T (1999) Pasca na signálnu sekvenciu založená na konštitutívne aktívnom receptore cytokínu. Nature Biotechnology. PMID: 10331810
4. Hayakawa F, Towatari M, Kiyoi H (2000) Tandemovo duplikovaný Flt3 konštitutívne aktivuje STAT5 a MAP kinázu a indukuje autonómny rast buniek v bunkových líniách závislých od IL-3. Oncogene. PMID: 10698507
5. Ho JM, Beattie BK, Squire JA (1999) Fúzia transkripčného faktora ets TEL s Jak2 vedie k konštitutívnej Jak-Stat signalizácii. Blood. PMID: 10361134
6. Canitrot Y, Lautier D, Laurent G (1999) Mutátorový fenotyp bunkových línií Ba/F3 transfekovaných BCR–ABL a jeho súvislosť so zvýšenou expresiou DNA polymerázy beta. Oncogene. PMID: 10348341
7. Uemura N, Salgia R, Ewaniuk DS (1999) Účasť adaptérneho proteínu CRKL na adhézii sprostredkovanej integrínmi. Oncogene. PMID: 10362355
8. Liu CB, Itoh T, Arai K (1999) Konštitutívna aktivácia JAK2 zabezpečuje prežívanie a proliferáciu buniek BA/F3 nezávislé od myšieho interleukínu-3. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10037724
9. Jaster R, Tschirch E, Bittorf T (1999) Úloha STAT5 v signálnej transdukcii interferónu-alfa v bunkách Ba/F3. Cellular Signalling. PMID: 10376805
10. Gingras S, Simard J, Groner B (1999) p300/CBP je nevyhnutný pre transkripčnú indukciu interleukínom-4 a interaguje so Stat6. Nucleic Acids Research. PMID: 10373589
11. Hunt AE, Lali FV, Lord JD (1999) Úloha subdomén beta-reťazca receptora interleukínu (IL)-2 a Shc pri aktivácii p38 mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAP) a p54 MAP kinázy. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10066828
12. Itoh T, Liu R, Arai K (1999) Diferenciálny vplyv tyrozínových zvyškov spoločnej beta-podjednotky receptora na viaceré signály indukované ľudským GM-CSF. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. PMID: 10329850
13. Okuda K, Foster R, Griffin JD (1999) Signálne domény beta-c reťazca receptora GM-CSF/IL-3/IL-5. Annals of the New York Academy of Sciences. [Prehľad] PMID: 10372132
14. Mera A, Suga M, Ando M (1999) Indukcia zmien tvaru buniek prostredníctvom aktivácie receptora s spoločným beta reťazcom pre interleukín-3 tyrozínkinázou typu RON. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 10336478
15. Mahmud N, Katayama N, Nishii K (1999) Možná úloha bcl-2 v regulácii priebehu bunkového cyklu hematopoetických buniek prostredníctvom transformujúceho rastového faktora beta1. British Journal of Haematology. PMID: 10233423
16. Levings MK, Bessette DC, Schrader JW (1999) Interleukín-4 pôsobí synergicky s Raf-1 a podporuje dlhodobú proliferáciu a aktiváciu N-terminálnej kinázy c-jun. Blood. PMID: 10339476
17. Kume A, Ito K, Ueda Y (1999) Fúzny gén receptora G-CSF a gyrázy B: nový typ molekulárneho spínača pre expanziu geneticky modifikovaných hematopoetických buniek. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 10381335
18. Pflanz S, Tacken I, Grötzinger J (1999) Fúzny proteín interleukínu-11 a rozpustného receptora interleukínu-11 pôsobí ako superagonista na bunky exprimujúce gp130. FEBS Letters. PMID: 10350068
19. Palacios R, Steinmetz M (1985) Klony myší závislé od IL-3, ktoré exprimujú povrchový antigén B-220, obsahujú gény Ig v konfigurácii zárodočnej línie a in vivo generujú B-lymfocyty. Cell. PMID: 3924409
20. Duan C, Fukuda T, Isaji T (2020) Deficit fukosylácie jadra aktivuje bunkovú signalizáciu závislú od expresie FLT3 v bunkovom systéme Ba/F3. The FASEB Journal. PMID: 31908039
21. Yang J, Friedman R (2025) Prednosti a obmedzenia buniek Ba/F3 pri modelovaní rezistencie AML riadenej FLT3. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. PMID: 41183623
22. Saito M, Takeda K, Yoshino M (2026) Metotrexát inhibuje signálnu dráhu TEL-JAK2-STAT prostredníctvom mechanizmu závislého od metabolizmu folátov v bunkách Ba/F3. International Immunopharmacology. PMID: 42287956