Въведение

The 3T3-швейцарски албиносни клетки Клетъчната линия — известна също под синонимите Swiss 3T3, Swiss-3T3, 3T3 Swiss Albino и Swiss3T3 — е една от най-дълготрайните и широко използвани клетъчни линии в биомедицинските изследвания. Създадена през 1962 г. от Джордж Тодаро и Хауърд Грийн от раздробени ембриони на швейцарски албиноски мишки и описана в тяхната статия от 1963 г., линията е резултат от протокол за последователен трансфер, при който почти всички ембрионални култури в крайна сметка са дали начало на установени, спонтанно безсмъртни линии [1]. През следващите шест десетилетия албиноските клетки 3T3-Swiss се превърнаха в незаменим модел за изследване на регулацията на клетъчния цикъл, сигнализацията на растежните фактори, динамиката на цитоскелета и биологията на заздравяването на раните. Тяхното ясно дефинирано поведение при контактна инхибиция, отзивчивостта им към митогени като тромбоцитен растежен фактор и брадикинин, както и генетичната им манипулируемост, ги превърнаха в основен референтен модел в безброй изследвания на сигналните пътища и тестове за скрининг на лекарства.

Основни изводи

• 3T3-Swiss albino е спонтанно имунологично имунизирана линия от ембрионални фибробласти на мишка, създадена през 1962 г. от Тодаро и Грийн (регистрационен номер в Cellosaurus CVCL_0120, мъжки донор, цял ембрион) [25].
• Клетката проявява инхибиране на растежа при контакт, което я превръща в мощен модел за изследване на прехода между състояние на покой и пролиферация — въпреки че степента на изразеност на този фенотип зависи от условията на култивиране, а не е фиксирано свойство на клетката [22] [23].
• Той проявява силна реакция към различни митогени, включително тромбоцитен растежен фактор, бомбезин, брадикинин и инсулиноподобен растежен фактор-I.
• Клетките 3T3-Swiss albino са изиграли ключова роля в изследването на организацията на цитоскелета, сигнализацията чрез GTPази от семейството Rho и динамиката на фокалните адхезии.
• Тази линия е дала начало на голямо семейство производни подлинии — включително 3T3-L1, 3T3-L2, 3T3-C2 и подлинията 3T3-J2, служеща като подхранващ слой — които се използват в адипогенезата, онкологията и приложенията за съвместна култура [25].
• Мултиплексен STR-тест, валидиран междулабораторно (19 миши маркера плюс два човешки маркера за междувидов скрининг; 18 от 19-те миши маркера се оказаха подходящи за вътревидово разграничаване), вече позволява надеждно удостоверяване на миши клетъчни линии, включително 3T3-Swiss albino [2].

Какво представлява 3T3-Swiss albino?

3T3-Swiss albino е получен от тъкан от цял ембрион на мъжка мишка от породата „Swiss albino“ в ембрионален стадий, като донорът не е страдал от никакви заболявания [25]. Наименованието „3T3“ отразява първоначалния протокол за прехвърляне: клетките се пресаждаха на всеки три дни при инокулум от 3 × 10⁵ клетки на 20 см² съд. Тодаро и Грийн показаха, че темпът на растеж на културите от ембриони на мишки намалява при последователни прехвърляния — като степента на намаляване зависи отчасти от гъстотата на инокулацията — преди почти всички култури да се превърнат в установени линии в рамките на три месеца, и че използваните условия на култивиране определят кои свойства придобива получената линия; режимът 3T3 доведе до линия, която е изключително чувствителна към контактна инхибиция [1]. Получената клетъчна линия притежава фибробластна морфология, расте като адхезивен монослой и при достигане на конфлуентност проявява контактна инхибиция на пролиферацията — свойство, което я отличава от трансформираните линии и я превръща в идеален модел за изучаване на преходите от състояние на покой към пролиферация.

Линията 3T3-Swiss albino беше сред мишините линии, включени в мащабно проучване с SNP-матрица, предназначено да потвърди отчетените генетични произходи на щамовете и да открие промени в броя на хромозомните копия, които не могат да бъдат установени чрез STR-профилиране; от общо 99-те изследвани линии 98 съвпадаха с отчетения за тях генетичен произход [3] [25]. С цел да се отговори на проблемите, свързани с автентичността в ежедневната практика, междулабораторен консорциум, състоящ се от дванадесет лаборатории, валидира мултиплексен тест за STR-профилиране за вътревидова идентификация на миши клетъчни линии, въз основа на 50 от най-често използваните миши линии, като получените профили ще бъдат публикувани в базата данни BioSample на NCBI; STR профилът, който сега е включен за 3T3-Swiss albino в Cellosaurus, произхожда от това проучване [2] [25]. Тези постижения значително подобриха възпроизводимостта на изследванията, провеждани с тази широко разпространена линия.

Информация за клетъчните култури

Предимства на албиноските клетки 3T3-Swiss

Едно от най-забележителните предимства на албиноските клетки 3T3-Swiss е тяхната добре охарактеризирана реакция към стимулация с растежни фактори след отнемане на серума. Превръщането на клетките в състояние на покой чрез лишаване от серум и последващата им рестимулация с определени митогени позволява на изследователите да изучават отделни сигнални събития с висока времева разделителна способност. Тази експериментална парадигма е използвана за изследване на реакциите към тромбоцитен растежен фактор, бомбезин, брадикинин, инсулиноподобен растежен фактор-I и основен фибропластен растежен фактор — обхващайки необичайно широк спектър от класове рецептори и последващи сигнални пътища в рамките на единен, последователен клетъчен фон [4] [5] [6].

Второ важно предимство е фенотипът на инхибиция на контакта при тази клетъчна линия. За разлика от много трансформирани ракови линии, албиноските клетки 3T3-Swiss спират растежа си при достигане на конфлуентност, вместо да продължават да се разрастват прекомерно. Това ги превръща в отличен референтен модел за тестове за заздравяване на рани чрез надраскване, при които миграцията в оголената зона може да бъде количествено определена при определени условия. От решаващо значение обаче е, че този фенотип зависи от начина, по който се отглеждат клетките, а не е фиксирана характеристика на линията. Ааронсън и Тодаро показаха, че линии от миши ембриони, поддържани при условия, които свеждат до минимум контакта между клетките, остават нетуморогенни за повече от 200 поколения, докато линиите, отглеждани при интензивен клетъчен контакт, започват да образуват тумори в рамките на 30 поколения — и че културалното свойство, което най-добре корелира с туморогенността, е именно загубата на контактното инхибиране на клетъчното делене [22]. По-късни изследвания установиха конкретните фактори, които оказват влияние: спонтанни трансформирани огнища възникват в култури от тип 3T3, поддържани в състояние на конфуенция в продължение на повече от десет дни, като честотата им зависи от вида и концентрацията на използваното серум, както и от историята на пасажите на културата [23]. Ефектът може да бъде удивително бърз — клон, който не е образувал фокуси в петдесет последователни теста в рамките на 21 седмици, започна да ги образува едва след два дни в среда с ниско съдържание на серум [24]. Тези експерименти бяха проведени върху линии 3T3, произхождащи от BALB/c и NIH, а не върху самата линия 3T3-Swiss albino, но те описват зависимост от режима, характерна за фибробластните линии от тип 3T3, и имат конкретно практическо значение: лабораториите, които разчитат специално на контактната инхибиция, трябва да работят при нисък и документиран брой пасажи при определени серумни условия, да избягват поддържането на културите в състояние на конфлуентност по-дълго, отколкото изисква тестът, и да verificate фенотипа със собствени ръце.

Фибробластният произход на линията също така има пряко значение за изследванията на ремоделирането на екстрацелуларния матрикс, интегриновия сигнализиращ път и възстановяването на кожата — като осигурява физиологичен контекст, който чисто епителните или раковите линии не могат да предложат. Освен това, обширният каталог от производни подлинии, генерирани от 3T3-Swiss albino, разширява набора от експериментални инструменти, с които разполагат изследователите в областите на адипогенезата, онкологията и приложенията за съвместна култура на стволови клетки [25].

Ограничения на 3T3-Swiss albino клетките

Въпреки своята полезност, 3T3-Swiss albino клетките имат присъщи ограничения, произтичащи от мишия им произход и спонтанно безсмъртния им характер. Кариотипната дрейфа вече беше документирана в първоначалното проучване, в което популациите преминаваха от диплоиден към тетраплоиден диапазон — често много бързо — преди да се появят маркерните хромозоми [1]. Тази нестабилност не е характерна само за тази линия: при профилирането чрез SNP-матрица на 99 често използвани миши клетъчни линии бяха открити данни за промяна в броя на копията при 42 % от тях, включително при 24 % от линиите, получени от нормална, а не от туморна тъкан, което установява, че анеуплоидията е широко разпространена характеристика на мишите клетъчни култури, а не специфична за рака [3]. Тази геномна нестабилност означава, че резултатите, получени при голям брой пасажи, може да не отразяват точно свойствата на клетките от ранните пасажи, а сравненията между лабораториите могат да бъдат изкривени от незабелязана дрейфа. Затова изследователите трябва да удостоверяват автентичността на своите култури чрез валидирани STR-методи и да водят последователна документация за пасажите [2].

Свързано с това ограничение е историческата разпространеност на неправилно идентифицирани или подложени на кръстосано замърсяване клетъчни запаси в научната общност – проблем, широко документиран при клетъчните линии на мишки [3]. Една конкретна и често пренебрегвана уловка е свързана с номенклатурата: 3T3-Swiss albino (CVCL_0120, публикуван през 1963 г.) и NIH 3T3 (CVCL_0594, получена от мишка NIH Swiss и публикувана през 1969 г.) често се съкращават до „3T3“ или „Swiss 3T3“ в литературата. Когато в дадена статия не е посочен каталожен номерът на колекцията, от която произхождат клетките, често двете линии изобщо не могат да бъдат разграничени, без да се свърже директно с авторите [26]. Тази двусмисленост се отнася и за голяма част от класическата литература по сигнализацията, обобщена по-долу: в публикациите, описващи изследвания върху „Swiss 3T3“, рядко се уточнява коя линия се има предвид, поради което резултатите трябва да се тълкуват като валидни за миши фибробласти от типа 3T3, освен ако източникът не посочи изрично конкретната линия. Тъй като 3T3-Swiss albino освен това не е клонален изолат, а поликлонална популация, функционалната хетерогенност между запасите от различни източници може допълнително да повлияе на експерименталните резултати. Накрая, като линия миши фибробласти, 3T3-Swiss albino може да не възпроизведе нюансите на сигнализацията, които са от значение за човешката биология, без внимателна валидация, а резултатите от този модел трябва да бъдат потвърдени в подходящи за вида системи от първични клетки или in vivo, преди да се направят транслационни заключения.

Вижте пълните технически характеристики и поръчайте

Приложения

Сигнализиране на растежни фактори и клетъчна пролиферация

Албиноските клетки 3T3-Swiss са служили като изключителен модел за анализ на митогенните сигнални каскади, задействани от различни растежни фактори и невропептиди. В ранните изследвания на Дейвис и Рос клетките Swiss 3T3 са използвани заедно с гладкомускулни клетки от аортата на маймуни и ендотелиални клетки от аортата на говеда, за да се покаже, че замяната на серума, получен от плазма, със серум от цяла кръв или с частично пречистен растежен фактор, произхождащ от тромбоцити, значително стимулира пиноцитозата, както и пролиферацията в култури в състояние на покой — ранна връзка между индуцирания от растежни фактори мембранен транспорт и влизането в клетъчния цикъл, установена главно в системата на гладкомускулните клетки [7]. Последващите изследвания използваха парадигмата „отнемане на серум/повторна стимулация“, за да позиционират отделните сигнални молекули в подредени пътища надолу по веригата след активирането на рецепторите.

Фосфатидилинозитол-3-киназата (PI3K) се очерта като централен възел в реакциите, стимулирани от растежни фактори. Йохансон и колеги показаха, че пул от p110α PI3K, независим от p85-субединицата, се локализира заедно с p70 S6 киназа върху актиновите стрес-влакна и че активността на PI3K е необходима за образуването на стрес-влакна, индуцирано от тромбин, в Swiss 3T3 клетки [8]. Сходна роля на PI3K в усвояването на хранителни вещества е описана от Хигаки и Шимокадо, които показаха, че инхибиторите на PI3K прекъсват стимулираното от тромбоцитен растежен фактор усвояване на аминокиселини в гладкомускулните клетки на съдовете и съобщиха за подобен инхибиторен ефект в Swiss 3T3 клетки [9].

Протеинкиназа D (PKD) се активира в интактни Swiss 3T3 клетки от форбол естери, проникващи в клетките диацилглицероли, бриостатин, невропептиди и растежни фактори чрез механизъм, зависещ от фосфорилиране и изискващ протеинкиназа C. Както е обобщено от Уолдрън, Иглесиас и Розенгурт, мутагенезата на остатъците от активационната верига – серин 744 и серин 748 – в PKD-конструкции, експресирани в COS-7 клетки, директно е доказала, че PKC-медиираната фосфорилация на тези два остатъка е в основата на активацията на PKD [10]. Успоредно с това Лим и колегите му доказаха, че атипичните изоформи на PKC – PKCλ и PKCζ – се свързват с докерния протеин FRS2 в Swiss 3T3 клетки, стимулирани с основен фибробластен растежен фактор, което поставя атипичните PKC в рамките на сигналния комплекс на рецептора на фибробластния растежен фактор [6].

Динамика на цитоскелета и сигнализиране на GTPазите от семейството на Rho

Реакцията на цитоскелета на албиносните клетки 3T3-Swiss към определени стимули ги е превърнала в основен модел за изследвания на GTPазите от семейството на Rho. Охта и колегите му демонстрираха, че малкият GTPаза RalA, свързан с Ras, се свързва с филамин по GTP-специфичен начин и индуцира образуването на филоподии, богати на актин, върху повърхността на Swiss 3T3 клетките, като привлича филамин в цитоскелета на филоподиите [11]. От решаващо значение е, че доминантно-негативният RalA или домейнът на филамина, свързващ се с RalA, блокираха индуцираното от Cdc42 образуване на филоподии, което поставя RalA като междинен елемент надолу по веригата в медиираната от Cdc42 реорганизация на цитоскелета. По подобен начин Granés и колегите му показаха в трансфекционни изследвания върху COS-1 и Swiss 3T3 клетки, че свръхекспресията на трансмембранния хепарансулфатния протеогликан синдекан-2 индуцира дълги структури, подобни на филоподии, чрез механизъм, зависещ от активния Cdc42 [12].

Беше показано, че както бомбезинът, така и тромбоцитният растежен фактор индуцират асоциация между фокалната адхезивна киназа (FAK) и членове на семейството Src в Swiss 3T3 клетки, но по различни пътища. Реакцията към бомбезин беше доловима в рамките на една минута след стимулацията, достигна пик след десет минути и протичаше независимо от ^Ca2+ и фосфатидилинозитол 3'-киназа, докато реакцията към ниски концентрации на тромбоцитен растежен фактор изискваше PI3K; и двете зависеха от целостта на мрежата от актинови филаменти [4]. Хотчин и колегите му използваха Swiss 3T3 клетки заедно с BHK фибробласти, за да анализират отделните приноси на деветия и десетия домейн на фибронектина тип III (FIII) към фосфорилирането на FAK и активирането на Rho/Rac, като демонстрираха, че FIII10 поддържа клетъчното прикрепване, без да предизвиква фосфорилиране на FAK [13]. Ли и колегите му картираха биохимично регионите на Cdc42, специфични за PAK1, WASP и IQGAP1, след което микроинжектираха конститутивно активни Cdc42/RhoA в Swiss 3T3 клетки, лишавани от серум, като разкриха, че домейнът „switch I“ осигурява съществени детерминанти за свързване на ефекторите, докато всеки ефектор се разпознава чрез отделен механизъм [14].

Установено е, че степента на фосфорилиране на WAVE – протеин от семейството на WASP, посредничещ в набръчкването на мембраната надолу по веригата от Rac – се увеличава в Swiss 3T3 клетки, стимулирани с тромбоцитен растежен фактор, като тази хиперфосфорилиране се инхибира от MEK-инхибитора PD98059 [15]. Мартели и колегите му демонстрираха, че зависимата от инсулиноподобния растежен фактор-I (IGF-I) стимулация на активността на ядрената фосфолипаза С-β1 изисква интактен микротубулен цитоскелет, тъй като нарушаването му с колхицин премахва увеличението на диацилглицерола в ядрото, без да засяга фосфорилирането на IGF-I рецептора или активността на PI3K [5]. Кричли и колегите му направиха преглед на връзката между интегрин и актин, включваща талин, α-актинин, филамин и винкулин, и съобщиха, че експерименти в Swiss 3T3 клетки, пермеабилизирани със стрептолизин-O, сочат, че GTP-свързващият протеин ARF-1 участва в насочването на паксилина към фокалните адхезии [16].

Регулиране на клетъчния цикъл

Поведението на растежа на албиноските клетки 3T3-Swiss, инхибирано при контакт, ги е превърнало в класически модел за изследвания на клетъчния цикъл. Уан и колегите му направиха изненадващото наблюдение, че при експерименти със субклетъчно фракциониране инхибиторът на циклин-зависимите кинази p27^Kip1 се открива изключително в цитозола на Swiss/3T3 клетките през цялата G1 фаза и в началото на S фазата, а не в ядрото, както се е предполагало [17]. След серумна стимулация на клетките в състояние на покой нивото на цитозолния ^p27Kip1 намалява значително към края на фаза G1, което съвпада по време с повишаване на нивата в ядрото както на Cdk2, така и на циклин E.

Системата от клетки Swiss 3T3 в състояние на покой позволи на авторите да демонстрират, че неактивният Cdk2 копреципита с p27Kip1 в клетките в състояние на покой, докато стимулацията със серум активира както ядрения, така и цитозолния Cdk2, докато нивото на p^27Kip1 намалява; свръхекспресираният p27Kip1 се натрупва в ядрото и блокира навлизането на Cdk2 [17]. Въз основа на това авторите предложиха, че цитозолният p27^Kip1 има функционална роля в протичането на клетъчния цикъл, вероятно чрез ограничаване на ядрения внос на комплексите циклин Е-Cdk2 — модел на компартаментализация, който действа успоредно с транслационния и протеазомно-медиирания контрол върху изобилието на p27^Kip1. Възможността за възпроизводима синхронизация на 3T3-Swiss албиносни клетки чрез лишаване от серум остава от централно значение за експерименталната значимост на тези открития.

Заздравяване на рани и тестване на биоматериали

Фибропластичната идентичност и инхибираният от контакт растеж на 3T3-Swiss albino клетки ги превръщат в стандартен референтен модел в изследванията за заздравяване на рани и оценката на биосъвместимостта на биоматериалите. Едно особено поучително проучване изследва ефикасността на ресвератрол (RES) в процеса на заздравяване на рани, като използва фибробласти 3T3 Swiss Albino като първичен клетъчен модел [19]. Оксидативният стрес беше предизвикан с водороден пероксид, а дози RES в диапазона от 1 до 100 µM бяха прилагани в продължение на до 48 часа, за да се оценят ефектите върху клетъчната пролиферация, миграцията и нивата на оксидативен стрес — ключови фактори за ефективността на затварянето на раната.

В това проучване водородният пероксид намали индекса на пролиферация, докато прилагането на ресвератрол го увеличи, понижи нивата на оксидативния стрес и подобри скоростта на миграция и запазването на ултраструктурата; забележително е, че не беше установена разлика в експресията на мРНК на колаген I (COL1A2), което показва, че наблюдаваната полза не е била посредничена чрез повишена транскрипция на колаген [19]. Използването на 3T3-Swiss албиносни клетки в този контекст отразява тяхното признаване като представителна нормална линия фибробласти, спрямо която могат да се сравняват интервенциите за заздравяване на рани. Сравнителният скрининг за цитосъвместимост е в основата на разработването на превръзки за рани: например, алгинатният хидрогел, съдържащ гликоличен екстракт от календула, например, първо беше оценен за клетъчна жизнеспособност в фибробласти 3T3 чрез MTT и SRB тестове, преди да бъде тестван в модел на инцизионна рана при плъхове, където подобри затварянето на раната и отлагането на колаген [21].

Линията се използва също така като референтен субстрат при тестове за генотоксичност. В едно сравнително проучване с кометен тест, проведено изрично с линията 3T3-Swiss albino, беше оценена времезависимата кинетика на репарацията на ДНК след експозиция на шест често използвани генотоксични агенти — водороден пероксид, калиев бромат, етилметанесулфонат, метилметанесулфонат, N-етил-N-нитрозоуреа и етопозид — и установи специфични за всеки агент профили на репарация, като уврежданията, предизвикани от водороден пероксид и ЕМС, се репарираха бързо, докато лезиите, предизвикани от ЕНУ и етопозид, се запазиха повече от 24 часа [20]. Проучвания от този вид предоставят референтните данни, необходими за стандартизиране и валидиране на in vitro кометен тест за регулаторни изпитвания за генотоксичност.

Извънклетъчни везикули и нововъзникващи технологии

Клетките 3T3-Swiss albino са поели важна роля като референция за нормални клетки в проучванията на биологията на екстрацелуларните везикули (EV). Фукута и колегите му използваха миши меланомни клетки B16F1 заедно с 3T3 Swiss Albino клетки като представителни ракови и нормални клетъчни линии, съответно, за да изследват дали нискочестотна електрическа стимулация (0,34 mA/cm) може да засили секрецията на EV от култивирани клетки [18]. Този експериментален дизайн с две групи беше от съществено значение за разграничаване на общите клетъчни реакции към електрическата стимулация от специфичните за раковите клетки ефекти върху освобождаването на EV. Електрическото въздействие увеличи броя на EV-частиците и в двете линии — 1,7 пъти в 3T3 Swiss Albino и 1,26 пъти в B16F1 — без видима цитотоксичност [18].

Двойният експериментален дизайн разкри и механистична разлика между двата типа клетки: фармакологичното инхибиране на Rho GTPase потискаше електрически индуцираното увеличение на секрецията на EV в линията на меланома по дозозависим начин, но имаше слаб ефект върху клетките 3T3 Swiss Albino, което показва, че основните изисквания за сигнализиране не са идентични в раковите и нормалните клетки [18]. Представителните маркери на екзозомите CD9, HSP70 и CD81 бяха открити в EV от двете линии и останаха практически непроменени след третирането (като HSP70 беше постоянно ниско в EV, произхождащи от 3T3), което — заедно с непромененото съотношение частици към протеин — сочи, че третирането е увеличило количеството на EV, без да променя качеството им. С разширяването на изследванията върху ЕВ в областта на терапевтичното приложение, откриването на биомаркери и клетъчната комуникация, наличието на добре валидирана линия от фибробласти, които не произхождат от тумор, като 3T3-Swiss Albino, става все по-ценно за контекстуализиране на резултатите от ракови или генетично модифицирани клетъчни модели.

Заключение

Клетките 3T3-Swiss albino се открояват като една от най-универсалните и исторически значими линии миши фибропласти, достъпни за научната общност. От фундаменталната работа върху пиноцитозата и пролиферацията, медиирани от тромбоцитен растежен фактор, до настоящите изследвания на секрецията на екстрацелуларни везикули, усилвана от слаб електрически ток [18], тази спонтанно имортализирана линия непрекъснато доказва своята значимост в различни дисциплини. Добре дефинираният ѝ преход от състояние на покой към пролиферация, широката ѝ реактивност към митогени, пластичността на цитоскелета и признаването ѝ като еталон за нормални клетки при тестове за заздравяване на рани и биоматериали гарантират, че 3T3-Swiss albino клетките ще останат в центъра на клетъчната биология и в бъдеще — при условие че запасите са удостоверени чрез STR профилиране, че историята на пасажите е документирана и че режимът на култивиране е избран съзнателно, когато фенотипът на контактната инхибиция е от значение за експеримента. Изследователите, които търсят надежден и удостоверен източник на 3T3-Swiss албиносни клетки за следващото си проучване в областта на сигнализацията, цитоскелета или заздравяването на рани, се насърчават да се запознаят със спецификациите на продукта и да направят поръчка на cytion.com.

Ключови публикации

1. TODARO GJ, GREEN H (1963) Количествени изследвания на растежа на клетки от миши ембриони в култура и тяхното развитие в установени линии. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Almeida JL, Dakic A, Kindig K (2019) Междулабораторно проучване за валидиране на метод за STR-профилиране за вътревидова идентификация на миши клетъчни линии. PloS one. PMID: 31220119
3. Дидион Дж.П., Буус Р.Дж., Нагашфар З. (2014) Профилирането чрез SNP матрица на миши клетъчни линии идентифицира техните изходни щамове и разкрива кръстосано замърсяване и широко разпространена анеуплоидия. BMC Genomics. PMID: 25277546
4. Salazar EP, Rozengurt E (1999) Бомбезинът и тромбоцитният растежен фактор индуцират асоциация на ендогенната фокална адхезивна киназа със Src в интактни Swiss 3T3 клетки. The Journal of biological chemistry. PMID: 10497197
5. Мартели А.М., Коко Л., Бареги Р. (1999) Зависимата от инсулиноподобния растежен фактор-I стимулация на активността на ядрената фосфолипаза С-бета1 в клетки Swiss 3T3 изисква интактен цитоскелет и е съпътствана от повишена фосфорилиране на фосфолипазата. Journal of cellular biochemistry. PMID: 10022515
6. Лим Й.П., Лоу Б.С., Лим Дж. (1999) Връзка между атипичните изотипи на протеинкиназа С и докерния протеин FRS2 в сигнализацията на фибропластния растежен фактор. Списание по биологична химия. PMID: 10383403
7. Davies PF, Ross R (1978) Посредничество на пиноцитозата в култивирани гладкомускулни и ендотелни клетки от артериите чрез тромбоцитен растежен фактор. Списание по клетъчна биология. PMID: 103882
8. Йохансон С.О., Накаче П.А., Крауч М.Ф. (1999) Независима от p85 субединица p110α PI 3-киназа се локализира заедно с p70 S6 киназа върху актиновите стресови влакна и регулира стимулираното от тромбин образуване на стресови влакна в Swiss 3T3 клетки. Experimental Cell Research. PMID: 10094829
9. Хигаки М., Шимокадо К. (1999) Фосфатидилинозитол 3-киназата е необходима за индуцирания от растежни фактори прием на аминокиселини от гладкомускулните клетки на съдовете. Атеросклероза, тромбоза и съдова биология. PMID: 10479654
10. Уолдрон Р.Т., Иглесиас Т., Розенгурт Е. (1999) Активация на протеинкиназа D, зависима от фосфорилиране [Преглед]. Електрофореза. PMID: 10197446
11. Охта Й., Сузуки Н., Накамура С. (1999) Малката GTPаза RalA се свързва с филамин, за да индуцира филоподии. Сборник на Националната академия на науките на Съединените американски щати. PMID: 10051605
12. Гранес Ф., Гарсия Р., Касароли-Марано Р.П. (1999) Синдекан-2 индуцира филоподии чрез активен cdc42Hs. Experimental Cell Research. PMID: 10222136
13. Hotchin NA, Kidd AG, Altroff H (1999) Диференциална активация на фокалната адхезивна киназа, Rho и Rac от деветия и десетия FIII домейни на фибронектина. Списание за клетъчна наука. PMID: 10444388
14. Ли Р., Дебречени Б., Дзя Б. (1999) Локализация на регионите на Cdc42, специфични за PAK1, WASP и IQGAP1. Списание по биологична химия. PMID: 10514434
15. Мики Х., Фукуда М., Нишида Е. (1999) Фосфорилиране на WAVE надолу по веригата от сигнализацията на митоген-активираната протеинкиназа. „The Journal of Biological Chemistry“. PMID: 10488099
16. Кричли Д.Р., Холт М.Р., Бари С.Т. (1999) Интегрин-медиирана клетъчна адхезия: връзката с цитоскелета [Преглед]. Симпозиум на Биохимичното дружество. PMID: 10320934
17. Уанг Г., Мискиминс Р., Мискиминс У.К. (1999) Инхибиторът на циклин-зависимата киназа p27Kip1 се локализира в цитозола на Swiss/3T3 клетки. Oncogene. PMID: 10498870
18. Фукута Т., Нишикава А., Когуре К. (2019) Нискочестотното електрическо поле увеличава секрецията на екстрацелуларни везикули от култивирани клетки. Доклади по биохимия и биофизика. PMID: 31828227
19. Калечи Б., Коютурк М. (2020) Ефикасност на ресвератрола в процеса на заздравяване на рани чрез намаляване на оксидативния стрес и стимулиране на пролиферацията и миграцията на фибробластите. Dermatologic therapy. PMID: 32996685
20. Ипек Текнечи С., Устундаг А., Дуйду Й. (2025) Кинетика на репарацията на ДНК, специфична за даден агент, в 3T3 клетки: сравнително проучване с използване на in vitro кометен тест. Изследвания по токсикология. PMID: 41399455
21. Поса Г.О.К., Чопек С., Перейра А.В. (2024) Гликоличният екстракт от календула подобрява заздравяването на рани при алгинатния хидрогел. Acta cirurgica brasileira. PMID: 39630705
22. Aaronson SA, Todaro GJ (1968) Основа за придобиването на злокачествен потенциал от миши клетки, култивирани in vitro. Science. PMID: 4301647
23. Рубин Х., Сю К. (1989) Доказателства за прогресивния и адаптивен характер на спонтанната трансформация в клетъчната линия NIH 3T3. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2928308
24. Грундел Р., Рубин Х. (1992) Адаптация и селекция като фактори в спонтанната трансформация на NIH-3T3 клетки. Carcinogenesis. PMID: 1423847
25. Запис в Cellosaurus за 3T3-Swiss albino (RRID:CVCL_0120). SIB Швейцарски институт по биоинформатика. cellosaurus.org/CVCL_0120
26. Често задавани въпроси за Cellosaurus, В21: Защо в Cellosaurus има различни записи за клетъчната линия 3T3? cellosaurus.org/faq