Introduzione

Cellule AML12, nota anche come AML-12, AML 12 e Alpha Mouse Liver 12, è una linea cellulare di epatociti murini consolidata e ampiamente utilizzata nella ricerca biomedica. Wu, Merlino e Fausto hanno istituito la linea nel 1994 a partire dal fegato di un topo transgenico che sovraesprimeva il fattore di crescita trasformante alfa umano (TGF-α), un potente mitogeno degli epatociti. [1] A differenza degli epatociti primari, le cellule AML12 mantengono funzioni chiave legate alla differenziazione — tra cui l’espressione dei perossisomi e la presenza di strutture simili ai canalicoli biliari — nel corso di numerosi passaggi senza diventare tumorigeniche. Questa combinazione di stabilità e mantenimento del fenotipo epatocitario le ha rese una piattaforma in vitro privilegiata per lo studio del metabolismo dei lipidi, della steatosi epatica non alcolica, del danno epatico indotto da sostanze chimiche e farmaci, dell’insulino-resistenza e dell’apoptosi epatocitaria. La loro origine murina facilita il confronto diretto con modelli animali transgenici e knockout, ampliando la loro utilità traslazionale in diversi contesti di ricerca sulle malattie epatiche.

Punti chiave

• Le cellule AML12 sono epatociti murini differenziati e non tumorigenici derivati da topi transgenici TGF-α. [1]
• Conservano caratteristiche specifiche degli epatociti, quali i perossisomi, le strutture simili ai canalicoli biliari e livelli elevati di mRNA delle proteine sieriche specifiche del fegato, sebbene l’espressione di alcune di queste diminuisca con il protrarsi dei passaggi. [1]
• Questa linea cellulare è ampiamente utilizzata per modellare la steatosi epatica non alcolica, il danno epatico indotto da farmaci e i disturbi del metabolismo lipidico.
• Le cellule AML12 rispondono a segnali epatici chiave quali il TGF-β, il TNF, l’insulina e l’acido retinoico.
• Il fatto che non siano stati sottoposti a trasformazioni li rende particolarmente adatti allo studio della fisiologia e della tossicologia degli epatociti normali.
• Sono compatibili con la trasfezione adenovirale, gli oligonucleotidi antisenso e gli approcci di editing genico basati su CRISPR.
• La caratterizzazione molecolare ha evidenziato un cariotipo aneuploide quasi tetraploide e una dedifferenziazione parziale; pertanto, le cellule AML12 dovrebbero essere integrate con epatociti primari o modelli in vivo per gli endpoint che richiedono una funzione epatocitaria pienamente matura. [18]

Che cos’è l’AML12?

La linea AML12 è stata ottenuta da epatociti di un topo maschio di 5 mesi (ceppo CD-1, linea MT42) transgenico per il fattore di crescita trasformante alfa umano sotto il controllo del promotore della metallotioneina 1 inducibile dallo zinco. Wu, Merlino e Fausto hanno istituito la linea nel 1994 e l’hanno caratterizzata come una linea di epatociti spontaneamente immortalizzata e non trasformata. [1] Le cellule recano il numero di accessione Cellosaurus CVCL_0140 e sono autenticate rispetto a un profilo di riferimento STR murino a 18 marcatori. La pubblicazione originale riporta un tempo di raddoppio di 37 ore (36–48 ore secondo i dati del fornitore), e i dati trascrittomici derivanti dalle analisi su microarray sono disponibili al pubblico. Lo studio originale ha prodotto due linee, AML12 e AML14, entrambe mantenute per oltre 1,5 anni e per più di 80 passaggi. La linea AML12 ha mantenuto la propria identità epatocitaria ed è rimasta non tumorigenica per tutto il periodo, sebbene i livelli di mRNA di alcune proteine sieriche siano diminuiti progressivamente con i passaggi e potessero essere ripristinati mediante coltura in terreno privo di siero. L’AML14, al contrario, ha perso l’espressione sia dei marcatori di differenziazione che dell’mRNA del transgene durante i passaggi prolungati, con caratteristiche epatocitarie recuperabili solo parzialmente. [1]

Informazioni sulla coltura cellulare AML12

Vantaggi delle cellule AML12

Uno dei principali vantaggi delle cellule AML12 è la loro capacità di mantenere un fenotipo epatocitario differenziato durante la coltura a lungo termine. A differenza di molte linee di epatoma, le cellule AML12 contengono perossisomi e strutture simili ai canalicoli biliari, esprimono elevati livelli di mRNA di proteine sieriche specifiche del fegato, tra cui l’albumina, l’alfa-1-antitripsina e la transferrina, e secernono albumina. [1] Non crescono su agar morbido e rimangono non tumorigenici nei topi nudi, a conferma del fatto che l’immortalizzazione è avvenuta senza una trasformazione maligna funzionale. Questo stato non trasformato è fondamentale per gli studi che richiedono un comportamento di base fisiologicamente rilevante, come le indagini sulla segnalazione dell’insulina, sul metabolismo dei lipidi o sull’epatotossicità. A livello genomico, tuttavia, è stato successivamente dimostrato che la linea presenta significative aberrazioni cromosomiche, discusse nella sezione «Limiti». [18]

Le cellule AML12 sono estremamente versatili in termini di manipolazione genetica. Consentono la sovraespressione genica mediante vettori adenovirali, come dimostrato negli studi sulle subunità dell'activina. [2] [3] Consentono inoltre un'espressione stabile del transgene regolata dalla tetraciclina, rendendo possibili modelli inducibili dell'attività della proteina X del virus dell'epatite B. [4] Inoltre, è stato possibile somministrare in modo efficiente oligonucleotidi antisenso, rendendo le cellule AML12 adatte a studi mirati sull’RNA, [5] e sono stati generati con successo derivati knockout basati su CRISPR/Cas9. [21] La loro origine murina consente di verificare i risultati sperimentali confrontandoli direttamente con i dati relativi a topi transgenici e knockout, rafforzando così il ponte traslazionale tra in vitro e in vivo.

Da un punto di vista pratico, le cellule AML12 rispondono in modo marcato a un’ampia gamma di stimoli fisiologici. Tra le risposte documentate figurano l’attivazione trascrizionale indotta dall’acido retinoico, dai ligandi del PPARα, dal TGF-β, dal TNF e dai modulatori della via dell’insulina. [6] [7] Questa ampia capacità di risposta ai segnali rende la linea utile contemporaneamente in diversi ambiti di ricerca, riducendo la necessità di cambiare piattaforma a seconda del contesto sperimentale.

Limiti delle cellule AML12

Nonostante il loro fenotipo differenziato, le cellule AML12 non sono equivalenti agli epatociti primari sotto ogni aspetto funzionale. Uno studio di riferimento che ha messo a confronto le cellule AML12, HepG2 e THLE-2 per quanto riguarda la segnalazione dell’insulina e l’espressione genica delle epatocine ha rilevato che la risposta all’insulina delle cellule AML12 risultava compromessa quando le cellule venivano coltivate nel terreno di coltura raccomandato, ma diventava paragonabile a quella delle cellule HepG2 quando veniva utilizzato un terreno privo di insulina. [8] I livelli della proteina recettore dell’insulina nelle cellule AML12 erano simili a quelli delle cellule HepG2, mentre le cellule AML12 mostravano livelli di trascrizione solo bassi o non rilevabili di diversi enzimi gluconeogenici ed epatocine. Gli autori hanno concluso che, per quanto riguarda la gluconeogenesi e l’espressione delle epatocine, le cellule HepG2 apparivano più vicine alla situazione in vivo nonostante la loro origine tumorigenica. La composizione del terreno di coltura e l’abbondanza delle principali proteine di segnalazione dovrebbero quindi essere valutate con attenzione quando si utilizzano le cellule AML12 per modellare l’insulino-resistenza.

L’origine murina delle cellule AML12 comporta inoltre differenze intrinseche legate alla specie rispetto agli epatociti umani. Le vie di metabolismo dei farmaci, la gestione dei lipidi e alcune risposte infiammatorie differiscono tra le cellule epatiche murine e quelle umane. I risultati ottenuti sulle cellule AML12 richiedono quindi un'attenta valutazione prima di poter essere estrapolati alla fisiologia umana, in particolare nel contesto dello sviluppo di farmaci, dove l'attività del citocromo P450, specifica per ciascuna specie, potrebbe confondere i risultati.

Il background transgenico dell’animale di origine — la sovraespressione di TGF-α — potrebbe inoltre influenzare i modelli di espressione genica di base e la segnalazione dei fattori di crescita. Gli studi incentrati sulla biologia dei membri della famiglia TGF dovrebbero tenere conto di questo contesto nell’interpretazione dei dati.

Una caratterizzazione integrata citogenetica e trascrittomica pubblicata nel 2026 definisce ulteriormente i confini del modello. La FISH multicolore e la banda multicolore hanno rivelato un cariotipo complesso, quasi tetraploide e altamente aneuploide (81<4n>) con riarrangiamenti strutturali ricorrenti, tra cui del(X)(A3)×2, un dicentrico dic(X;17), del(17)(D1)×2 e un cromosoma derivato der(3)t(2;3), insieme a molteplici guadagni e perdite di interi cromosomi; entrambi i cromosomi Y sono andati persi nonostante l’origine maschile della linea. [18] Quando gli squilibri nel numero di copie così individuati sono stati mappati sulle bande citogenetiche ortologhe umane, il 57,5–68 % si è sovrapposto alle alterazioni riportate ricorrentemente nel carcinoma epatocellulare umano. Il sequenziamento dell’RNA nello stesso studio ha confermato un chiaro programma di differenziazione del lignaggio epatocitario, ma ha anche documentato una parziale dedifferenziazione: l’espressione dell’albumina era modesta, gli enzimi del ciclo dell’urea e della gluconeogenesi, quali Cps1, Otc, Pck1 e G6pc erano da bassi ad assenti, mentre i citocromi chiave coinvolti nel metabolismo degli acidi biliari e dei farmaci, tra cui Cyp7a1 e la famiglia Cyp3a, erano appena rilevabili, a fronte dell’induzione di marcatori ductulari e progenitoriali. Essere non tumorigenici in senso funzionale non significa quindi essere genomicamente stabili. Per gli endpoint che richiedono un metabolismo maturo degli xenobiotici, la gestione dell’azoto o la sintesi degli acidi biliari, gli autori raccomandano di integrare l’AML12 con epatociti primari, organoidi o modelli in vivo. Lo studio ha inoltre identificato due cloni correlati le cui proporzioni relative possono variare in base al numero di passaggi e alle condizioni di coltura, rafforzando l’importanza di utilizzare ceppi master a basso numero di passaggi, finestre di passaggio limitate e un’autenticazione regolare rispetto al profilo di riferimento STR stabilito. [18]

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Applicazioni

Apoptosi e segnalazione della morte cellulare

Le cellule AML12 sono state ampiamente utilizzate per studiare l’apoptosi degli epatociti innescata da citochine e fattori di crescita. Pierce e colleghi hanno dimostrato che le cellule AML12, come gli epatociti in vivo, non sono sensibili al TNF da solo, ma subiscono l’apoptosi quando il TNF è combinato con una bassa dose di actinomicina D. [9] Il loro lavoro ha rivelato che l’apoptosi indotta dal TNF nelle cellule AML12 comporta una rottura dell’omeostasi redox, con la perdita di NAD(P)H e glutatione che precede il danno mitocondriale, il rilascio di citocromo C e l’attivazione delle caspasi. Il danno era in gran parte determinato dal contenuto cellulare di glutatione e l’acido alfa-lipoico, in quanto antiossidante, ha prevenuto completamente il danno mitocondriale e l’apoptosi. Questi risultati hanno confermato che le cellule AML12 costituiscono un modello utilizzabile per lo studio dei meccanismi ossidativi alla base del danno epatocitario mediato dal TNF.

Il TGF-β1 è un altro induttore chiave dell’apoptosi degli epatociti studiato in questo modello. Liao e colleghi hanno dimostrato che le cellule AML12 mostrano le classiche caratteristiche apoptotiche — condensazione della cromatina, disintegrazione nucleare e frammentazione del DNA — in seguito al trattamento con TGF-β1, e che questo processo è stato completamente bloccato dalla cicloesimide, il che implica una sintesi proteica attiva nella via della morte cellulare. [10] Dooley e colleghi hanno inoltre utilizzato colture di epatociti primari e cellule AML-12 insieme per caratterizzare la transizione epiteliale-mesenchimale indotta dal TGF-β, dimostrando che la sovraespressione di Smad7 negli epatociti attenuava la fibrogenesi mediata dal TGF-β e proteggeva dal danno epatico. [11]

Anche la biologia delle subunità dell’activina è stata caratterizzata nelle cellule AML12. Wada e colleghi hanno scoperto che la sovraespressione della subunità βC dell’activina promuoveva la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule AML12, mentre la sovraespressione della subunità βE riduceva la proliferazione e innescava l’apoptosi in condizioni di basso livello sierico. [2] [3] Nel loro insieme, questi studi sottolineano l’importanza delle cellule AML12 per l’analisi dei segnali contrastanti pro-sopravvivenza e pro-apoptotici che determinano il destino degli epatociti nelle malattie epatiche infiammatorie e fibrotiche.

Metabolismo lipidico e segnalazione PPAR

La via del PPARα è un regolatore centrale del metabolismo lipidico epatico, e le cellule AML12 si sono dimostrate particolarmente utili per lo studio della sua modulazione da parte di agenti farmacologici. Clemenz e colleghi hanno utilizzato le cellule AML12 per dimostrare che il telmisartan, un antagonista del recettore dell’angiotensina di tipo 1, agisce come agonista parziale del PPARα: ha indotto l’espressione del gene bersaglio del PPARα, l’acil-CoA sintetasi della famiglia a catena lunga 1 (ACSL1) nelle cellule AML12 murine e la carnitina palmitoiltransferasi 1A (CPT1A) nelle cellule HepG2 umane, fornendo una base molecolare per i suoi effetti di riduzione dei trigliceridi osservati clinicamente. [7] Nei topi con obesità indotta dalla dieta, il telmisartan ha aumentato l’espressione epatica di ACSL1 e CPT1A e ha ridotto marcatamente i trigliceridi epatici e sierici. Analogamente, Huang e colleghi hanno dimostrato che il fenofibrato, un ligando del PPARα, ha aumentato l’espressione epatica del recettore delle lipoproteine a bassa densità nelle cellule AML12 e ha ripristinato la capacità di legame delle LDL, con risultati confermati in vivo. [12]

L’aldose reduttasi (AR) si è rivelata un regolatore inaspettato dell’attività del PPARα negli epatociti. Qiu e colleghi hanno dimostrato nelle cellule AML12 che la sovraespressione dell’AR sopprimeva fortemente l’attività del PPARα e sottoregolava i geni dell’ossidazione degli acidi grassi, effetti attenuati dall’inibitore selettivo dell’AR zopolrestat. [13] La sovraespressione dell’AR ha inoltre determinato un aumento dei livelli di PPARα e ERK1/2 fosforilati, e la soppressione dell’attività del PPARα è stata invertita dall’inibizione di ERK1/2 — collegando la via dei polioli all’omeostasi lipidica attraverso meccanismi dipendenti dalle chinasi. Questi risultati illustrano come le cellule AML12 possano rivelare interazioni inaspettate tra vie metaboliche e di segnalazione rilevanti per la steatosi epatica non alcolica e le complicanze epatiche del diabete.

La nicotinamide-N-metiltransferasi (NNMT) è un altro enzima studiato nelle cellule AML12 nel contesto della regolazione dei lipidi epatici. Il knockdown di Nnmt mediato da RNAi nelle cellule AML12 ha causato l’accumulo di S-adenosil-metionina (SAM) e S-adenosil-omocisteina, nonché una riduzione della 1-metilnicotinamide (MNAM), accompagnata da una sottoregolazione di geni lipogenici quali Srebf1 e da una diminuzione misurabile dei lipidi neutri totali — collegando così il metabolismo del carbonio a un carbonio alla lipogenesi epatica. [19] Separatamente, la proteina del reticolo endoplasmatico TXNDC5 è stata identificata come partner di interazione di PRDX6 e HSPA9 nelle cellule AML12; la carenza di TXNDC5 ha ridotto i livelli proteici di PRDX6 e HSPA9 e ha diminuito significativamente la perossidazione lipidica, il glutatione ridotto e l’attività dell’iPLA2. [20] Partendo dallo stesso modello, lo squalene caricato in nanoparticelle di PLGA ha protetto le cellule AML12 dallo stress ossidativo e da quello del reticolo endoplasmatico in modo dipendente da TXNDC5, con un assorbimento cellulare rapido ed efficiente osservato a 30 µM — risultati rilevanti per future strategie terapeutiche per la steatosi epatica. [21]

Segnalazione dell’insulina e malattie metaboliche

Le cellule AML12 sono state impiegate come strumento in vitro per lo studio della segnalazione dell’insulina e della sua alterazione patologica. Butler e colleghi hanno utilizzato le cellule AML12 per convalidare una strategia basata su oligonucleotidi antisenso mirata al PTEN, una fosfatasi lipidica che regola negativamente la via PI3K. La trasfezione di oligonucleotidi antisenso anti-PTEN nelle cellule AML12 ha ridotto i livelli di mRNA e di proteina PTEN e ha aumentato la fosforilazione di Akt stimolata dall’insulina, fornendo una prova meccanicistica di concetto prima che la somministrazione sistemica nei topi db/db e ob/ob normalizzasse le concentrazioni di glucosio nel sangue. [14] Questo studio ha illustrato il valore delle cellule AML12 come piattaforma di screening di primo livello per interventi metabolici mirati all’insulino-resistenza.

Lo studio comparativo condotto da Sefried e colleghi ha valutato direttamente l’idoneità delle cellule AML12 per la ricerca sulla segnalazione dell’insulina e sull’espressione genica delle epatocine. [8] Confrontando le cellule AML12 con quelle HepG2 e THLE-2, gli autori hanno riscontrato che la risposta acuta all’insulina nelle AML12 dipendeva fortemente dalla composizione del terreno di coltura e che le cellule AML12 esprimevano solo livelli bassi o non rilevabili di diversi trascritti gluconeogenici ed epatocine. La regolazione genica dipendente dal PPARδ era comparabile tra le cellule AML12 e HepG2, ma solo le cellule HepG2 riproducevano la regolazione della gluconeogenesi epatica mediata dal cAMP. Gli autori hanno concluso che, per questi particolari endpoint, le cellule HepG2 assomigliavano più da vicino alla situazione in vivo nonostante la loro origine tumorigenica — una considerazione fondamentale nella scelta di un modello per la ricerca sull’insulinoresistenza o sul diabete di tipo 2.

La tomatina è stata valutata per la sua capacità di migliorare il metabolismo del glucosio e la respirazione mitocondriale nelle cellule AML12 e HepG2 insulinoresistenti indotte da alti livelli di glucosio. [22] La tomatina ha aumentato in modo dose-dipendente il consumo di glucosio, ha ripristinato l’espressione del trasportatore del glucosio Glut2 e dei geni correlati alla gluconeogenesi, ha attivato la fosforilazione dell’AMPK e sovraregolato la PGC1α, e ha migliorato il tasso di consumo di ossigeno, la produzione di ATP e le proteine del complesso della fosforilazione ossidativa mitocondriale. Sia l’inibizione genetica che quella farmacologica dell’AMPK hanno annullato questi benefici, confermando il ruolo centrale di questa via e indicando le cellule AML12 come una piattaforma utile per lo screening di composti naturali con potenziale antidiabetico. Questi risultati rafforzano la rilevanza di questa linea di ricerca per lo studio del metabolismo dei lipidi, dell’insulino-resistenza e dei meccanismi della steatosi epatica.

Ricerca sul carcinoma epatocellulare e sull’epatite virale

Lo stato non trasformato delle cellule AML12 le rende una linea di controllo o parentale ideale nella ricerca sul carcinoma epatocellulare (HCC). Lee e colleghi hanno ingegnerizzato derivati delle cellule AML12 che esprimono la proteina X del virus dell’epatite B (pX), regolati dalla tetraciclina, per creare modelli di trasformazione mediata dalla pX. [4] Confrontando la sottolinia differenziata e trasformante (3pX-1) con quella dedifferenziata e non trasformante (4pX-1), gli autori hanno individuato alterazioni distinte del ciclo cellulare legate all’attivazione prolungata della via Ras-Raf-MAPK rispetto a quella della via JNK, dimostrando come le cellule parentali AML12 possano fungere da sfondo controllato per l’analisi dei segnali oncogenici.

Anche gli agenti antitumorali di origine vegetale sono stati valutati in contesti epatocitari utilizzando le cellule AML12. Choedon e colleghi hanno testato frazioni di lattice essiccato di Calotropis procera sulla linea di epatoma Huh-7, sulla linea non epatomatosa COS-1 e sugli epatociti AML12 non trasformati. L’estratto metanolico e la sua frazione 8 hanno indotto una morte cellulare estesa e la frammentazione del DNA nelle cellule Huh-7 e COS-1, mentre le cellule AML12 sono state risparmiate; parallelamente, la somministrazione orale del lattice essiccato ha protetto completamente i topi transgenici X15-myc dall’epatocarcinogenesi. [15] Tali test di selettività, che utilizzano le cellule AML12 come riferimento per gli epatociti non maligni, rappresentano una strategia comune per identificare composti candidati con tossicità preferenziale nei confronti delle cellule tumorali rispetto al parenchima epatico normale.

La segnalazione dell’acido retinoico (RA), implicata nella soppressione dell’HCC, è stata mappata in modo esaustivo nelle cellule AML12 mediante analisi con microarray di cDNA di 39.000 geni murini. Mamoon e colleghi hanno identificato 15 geni sovraregolati e 3 sottoregolati di almeno due volte dopo 3 ore di trattamento con RA all-trans, con 26 sovraregolati e 48 sottoregolati dopo 24 ore. [6] Uno studio di approfondimento condotto da Ventura-Holman e colleghi ha utilizzato l’analisi con microarray su cellule AML12 trasfettate in modo stabile con v-erbA — un’oncoproteina nota per esercitare un effetto dominante-negativo sui recettori dell’acido retinoico — per identificare quali geni sensibili all’acido retinoico siano influenzati da v-erbA, nonché i geni regolati da v-erbA a livello di trascrizione basale, molti dei quali sono implicati nella carcinogenesi. [16]

Stress ossidativo e danno da ischemia-riperfusione

Il danno da ischemia-riperfusione (I/R) rappresenta una delle principali sfide cliniche nella chirurgia e nel trapianto epatico, e le cellule AML12 sono state utilizzate per modellare i meccanismi ossidativi sottostanti. Haga e colleghi hanno dimostrato che le cellule AML12 sottoposte a condizioni di ipossia/riossigenazione sviluppavano rapidamente stress ossidativo, con molte cellule che andavano incontro ad apoptosi. [17] Il knockdown dell’isoforma p66 di ShcA (p66shc) tramite RNAi ha ridotto notevolmente lo stress ossidativo cellulare e l’apoptosi indotta da H/R, conferendo resistenza al perossido di idrogeno. La protezione era attribuibile a una maggiore eliminazione dei ROS piuttosto che all’inibizione della loro generazione: le proteine antiossidanti MnSOD e Ref-1 e la proteina antiapoptotica Bcl-xL erano sovraregolate, mentre la proteina proapoptotica FLICE era sottoregolata; l’espressione della catalasi, invece, rimaneva invariata. Questi risultati hanno identificato la p66shc come potenziale bersaglio terapeutico nel danno da I/R epatico.

La tecnologia degli oligonucleotidi antisenso è stata caratterizzata nelle cellule AML12 nel contesto della morte cellulare mediata da Fas. Thonberg e colleghi hanno confrontato sei oligonucleotidi fosforotioati mirati all’mRNA di Fas nelle cellule AML12, rivelando che quattro di essi riducevano significativamente i livelli di mRNA e che uno produceva un frammento stabile di scissione dell’mRNA 3′ mappato sulla sequenza complementare antisenso. [5] Questo studio ha evidenziato che le cellule AML12 rappresentano un modello adeguato per valutare l’efficienza antisenso e per studiare i meccanismi della degradazione dell’RNA mediata dalla RNasi H nelle cellule epatiche.

Un profilo citogenetico e trascrittomico completo ha confermato che le cellule AML12 mantengono un chiaro programma di lignaggio epatocitario, con una forte espressione di Hnf4a, Foxa2 e Prox1, della proteina HNF4α nucleare e dell’assenza dei marcatori che definiscono il lignaggio delle cellule stellate epatiche, dei colangiociti e delle cellule di Kupffer. [18] Lo stesso set di dati, tuttavia, ha rivelato una marcata firma trascrizionale associata allo stress e alle cellule progenitrici, che include un’espressione molto elevata di Spp1/osteopontina, Ccl2 e Plscr1 insieme a marcatori duttali quali Krt19, Sox9, Hnf1b e Jag1. Questo stato di base, simile a quello dei progenitori e adattato alla lesione, rende AML12 un modello pratico per lo stress intrinseco degli epatociti, la segnalazione infiammatoria e la plasticità epiteliale, a condizione che lo stato di base venga preso in considerazione nell’interpretazione dei risultati negli studi sullo stress ossidativo e tossicologici.

Conclusione

Le cellule AML12 rimangono uno dei modelli di epatociti murini più ampiamente utilizzati nella ricerca sul fegato, offrendo un equilibrio unico tra la funzione degli epatociti differenziati e la stabilità in vitro a lungo termine. Istituita da Wu, Merlino e Fausto nel 1994 [1], da allora questa linea ha supportato la ricerca in ambiti quali la steatosi epatica non alcolica, il danno epatico indotto da farmaci, il metabolismo dei lipidi, l’insulino-resistenza, l’apoptosi, il carcinoma epatocellulare e il danno da ischemia-riperfusione. Lo studio di riferimento di Sefried e colleghi ha delineato i limiti della loro capacità di segnalazione dell’insulina e ha dimostrato che, per gli endpoint gluconeogenici e delle epatocine, le cellule HepG2 potrebbero in realtà rappresentare il modello più adeguato. [8] Profili citogenetici e trascrittomici più recenti hanno documentato un cariotipo aneuploide quasi tetraploide e una parziale dedifferenziazione, a sostegno della necessità di una validazione complementare in epatociti primari, organoidi o modelli in vivo ogni volta che sia richiesta la piena funzionalità degli epatociti maturi. [18] Se utilizzate tenendo presenti queste avvertenze — sia per la farmacologia del PPARα, sia per la modellizzazione dell’epatite virale, sia per lo studio dello stress ossidativo — le cellule AML12 forniscono una piattaforma affidabile e ben caratterizzata per la biologia epatica basata su ipotesi. Per ordinare le cellule AML12 o richiedere informazioni sulle specifiche, visitare il sito cytion.com.

Pubblicazioni principali

1. Wu JC, Merlino G, Fausto N (1994) Creazione e caratterizzazione di linee cellulari di epatociti differenziati e non trasformati derivati da topi transgenici per il fattore di crescita trasformante alfa. Atti dell’Accademia Nazionale delle Scienze degli Stati Uniti d’America. PMID: 7904757
2. Wada W, Maeshima A, Zhang YQ (2004) Valutazione della funzione della subunità betaC dell’attivina negli epatociti in coltura. American Journal of Physiology. Endocrinologia e metabolismo. PMID: 15039147
3. Wada W, Medina JJ, Kuwano H (2005) Confronto tra la funzione delle subunità beta(C) e beta(E) dell’activina negli epatociti AML12. Endocrine Journal. PMID: 15863943
4. Lee S, Tarn C, Wang WH (2002) La proteina X del virus dell’epatite B regola in modo differenziale la progressione del ciclo cellulare nelle linee cellulari di epatociti X-trasformanti rispetto a quelle non trasformanti (AML12). The Journal of Biological Chemistry. PMID: 11756437
5. Thonberg H, Dahlgren C, Wahlestedt C (2004) La degradazione dell’mRNA di Fas indotta da antisenso produce un frammento stabile e sito-specifico di 3'-mRNA mediante scissione da parte dell’esonucleasi in corrispondenza della sequenza complementare. *Oligonucleotides*. PMID: 15625917
6. Mamoon A, Ventura-Holman T, Maher JF (2008) Geni sensibili all’acido retinoico nella linea cellulare di epatociti murini AML 12. *Gene*. PMID: 18006250
7. Clemenz M, Frost N, Schupp M (2008) Regolazione dei geni bersaglio del recettore alfa attivato dal proliferatore dei perossisomi (PPAR-α) specifico del fegato da parte del telmisartan, un antagonista del recettore dell’angiotensina di tipo 1. Diabetes. PMID: 18184928
8. Sefried S, Häring HU, Weigert C (2018) Idoneità delle linee cellulari di epatociti HepG2, AML12 e THLE-2 per lo studio della segnalazione dell’insulina e dell’espressione genica delle epatocine. Open biology. PMID: 30355754
9. Pierce RH, Campbell JS, Stephenson AB (2000) Alterazione dell’omeostasi redox nell’apoptosi indotta dal fattore di necrosi tumorale in una linea cellulare di epatociti murini. The American journal of pathology. PMID: 10880392
10. Liao JH, Zhou BH, Chai MQ (2001) La cicloesimide blocca l’apoptosi indotta dal TGF-beta1 negli epatociti murini. *Acta pharmacologica Sinica*. PMID: 11741524
11. Dooley S, Hamzavi J, Ciuclan L (2008) L’espressione di Smad7 specifica per gli epatociti attenua la fibrogenesi mediata dal TGF-beta e protegge dal danno epatico. *Gastroenterology*. PMID: 18602923
12. Huang Z, Zhou X, Nicholson AC (2008) L’attivazione del recettore alfa attivato dai proliferatori dei perossisomi nei topi induce l’espressione del recettore epatico delle lipoproteine a bassa densità. British journal of pharmacology. PMID: 18852694
13. Qiu L, Wu X, Chau JF (2008) L’aldose reduttasi regola la fosforilazione e l’attività del recettore alfa attivato dai proliferatori dei perossisomi epatico, influenzando l’omeostasi lipidica. The Journal of biological chemistry. PMID: 18445591
14. Butler M, McKay RA, Popoff IJ (2002) L’inibizione specifica dell’espressione di PTEN inverte l’iperglicemia nei topi diabetici. Diabetes. PMID: 11916922
15. Choedon T, Mathan G, Arya S (2006) Proprietà antitumorali e citotossiche del lattice di Calotropis procera in un modello murino transgenico di carcinoma epatocellulare. World Journal of Gastroenterology. PMID: 16688796
16. Ventura-Holman T, Mamoon A, Subauste JS (2008) Modulazione dell’espressione dei geni regolati dal RA da parte dell’oncoproteina v-erbA. Gene. PMID: 18775481
17. Haga S, Terui K, Fukai M (2008) Prevenzione del danno da ipossia/riossigenazione agli epatociti mediante ablazione di p66(shc): sovraregolazione delle proteine antiossidanti e antiapoptotiche. Journal of hepatology. PMID: 18191273
18. Asar DY, Kankel S, Keller DT (2026) Profilo citogenetico e genomico completo della linea cellulare epatocitaria murina AML12 (Alpha Mouse Liver 12). Cells. PMID: 41827824
19. Yoda M, Mizuno R, Izumi Y (2023) La nicotinamide-N-metiltransferasi regola il metabolismo dei lipidi tramite SAM e 1-metilnicotinamide nella linea cellulare di epatociti AML12. Journal of biochemistry. PMID: 37014628
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