Introdução

Células AML12, também conhecida como AML-12, AML 12 e Alpha Mouse Liver 12, é uma linhagem celular de hepatócitos murinos bem estabelecida e amplamente utilizada na pesquisa biomédica. Wu, Merlino e Fausto estabeleceram a linhagem em 1994 a partir do fígado de um camundongo transgênico que superexpressava o fator de crescimento transformador alfa humano (TGF-α), um potente mitógeno de hepatócitos. [1] Ao contrário dos hepatócitos primários, as células AML12 mantêm funções-chave da diferenciação — incluindo a expressão de peroxissomos e estruturas semelhantes aos canalículos biliares — ao longo de muitas passagens, sem se tornarem tumorigênicas. Essa combinação de estabilidade e manutenção do fenótipo hepatocitário tornou essas células uma plataforma in vitro preferencial para a investigação do metabolismo lipídico, da doença hepática gordurosa não alcoólica, da lesão hepática induzida por substâncias químicas e medicamentos, da resistência à insulina e da apoptose hepatocitária. Sua origem em camundongos facilita a comparação direta com modelos animais transgênicos e knockout, ampliando sua utilidade translacional em diversos contextos de pesquisa sobre doenças hepáticas.

Principais conclusões

• As células AML12 são hepatócitos murinos diferenciados e não tumorigênicos, derivados de camundongos transgênicos para TGF-α. [1]
• Elas mantêm características específicas dos hepatócitos, como peroxissomos, estruturas semelhantes aos canalículos biliares e altos níveis de mRNA de proteínas séricas específicas do fígado, embora a expressão de algumas delas diminua com o aumento do número de passagens. [1]
• Essa linhagem é amplamente utilizada para modelar a doença hepática gordurosa não alcoólica, a lesão hepática induzida por medicamentos e os distúrbios do metabolismo lipídico.
• As células AML12 respondem a sinais hepáticos importantes, incluindo TGF-β, TNF, insulina e ácido retinóico.
• O fato de não serem transformados os torna particularmente adequados para o estudo da fisiologia e da toxicologia dos hepatócitos normais.
• Elas são compatíveis com a transfecção adenoviral, oligonucleotídeos antisense e abordagens de edição gênica baseadas em CRISPR.
• A caracterização molecular revelou um cariótipo aneuploide quase tetraplóide e desdiferenciação parcial; portanto, as células AML12 devem ser complementadas com hepatócitos primários ou modelos in vivo para parâmetros que exijam a função de hepatócitos totalmente maduros. [18]

O que é o AML12?

A linha AML12 foi derivada de hepatócitos de um camundongo macho de 5 meses de idade (linha MT42 da cepa CD-1), transgênico para o fator de crescimento transformador alfa humano sob o controle do promotor da metalotioneína 1 induzível por zinco. Wu, Merlino e Fausto estabeleceram a linhagem em 1994 e a caracterizaram como uma linhagem de hepatócitos espontaneamente imortalizada e não transformada. [1] As células possuem o número de acesso CVCL_0140 do Cellosaurus e são autenticadas com base em um perfil de referência STR murino de 18 marcadores. A publicação original relata um tempo de duplicação de 37 horas (36–48 horas, de acordo com os dados do fornecedor), e os dados transcriptômicos das análises de microarray estão disponíveis publicamente. O estudo original produziu duas linhagens, AML12 e AML14, ambas mantidas por mais de 1,5 ano e por mais de 80 passagens. A AML12 manteve sua identidade hepatocitária e permaneceu não tumorigênica durante todo o período, embora os níveis de mRNA de algumas proteínas séricas tenham diminuído progressivamente com as passagens e pudessem ser restaurados por meio de cultura em meio sem soro. A AML14, por outro lado, perdeu a expressão tanto dos marcadores de diferenciação quanto do mRNA do transgene durante passagens prolongadas, com as características hepatocíticas sendo recuperáveis apenas parcialmente. [1]

Informações sobre a cultura celular de AML12

Vantagens das células AML12

Uma vantagem fundamental das células AML12 é a retenção de um fenótipo de hepatócito diferenciado durante a cultura de longo prazo. Ao contrário de muitas linhagens de hepatoma, as células AML12 contêm peroxissomos e estruturas semelhantes aos canalículos biliares, expressam altos níveis de mRNA de proteínas séricas específicas do fígado, incluindo albumina, alfa-1-antitripsina e transferrina, e secretam albumina. [1] Elas não crescem em ágar mole e permanecem não tumorigênicas em camundongos nude, confirmando que a imortalização ocorreu sem transformação maligna funcional. Esse estado não transformado é fundamental para estudos que exigem um comportamento basal fisiologicamente relevante, como investigações sobre a sinalização da insulina, o metabolismo lipídico ou a hepatotoxicidade. No nível genômico, no entanto, demonstrou-se posteriormente que a linhagem apresenta aberrações cromossômicas substanciais, as quais são discutidas na seção “Limitações”. [18]

As células AML12 são altamente versáteis em termos de manipulação genética. Elas permitem a superexpressão gênica por meio de vetores adenovirais, conforme demonstrado em estudos com subunidades da ativina. [2] [3] Elas também permitem a expressão estável do transgene regulada pela tetraciclina, possibilitando modelos induzíveis da atividade da proteína X do vírus da hepatite B. [4] Além disso, a administração de oligonucleotídeos antisense foi realizada com eficácia, tornando as células AML12 adequadas para estudos que têm como alvo o RNA, [5] e foram geradas com sucesso variantes com gene inativado por meio da técnica CRISPR/Cas9. [21] Sua origem murina permite que os resultados experimentais sejam validados de forma cruzada diretamente com dados de camundongos transgênicos e knockout, fortalecendo a ponte translacional entre in vitro e in vivo.

Do ponto de vista prático, as células AML12 apresentam uma resposta robusta a uma ampla gama de estímulos fisiológicos. As respostas documentadas incluem a ativação transcricional pelo ácido retinóico, ligantes do PPARα, TGF-β, TNF e moduladores da via da insulina. [6] [7] Essa ampla capacidade de resposta ao sinal torna a linha útil em vários domínios de pesquisa simultaneamente, reduzindo a necessidade de alternar entre plataformas em diferentes contextos experimentais.

Limitações das células AML12

Apesar de seu fenótipo diferenciado, as células AML12 não são equivalentes aos hepatócitos primários em todos os aspectos funcionais. Um estudo comparativo entre as células AML12, HepG2 e THLE-2, com foco na sinalização da insulina e na expressão gênica de hepatocinas, constatou que a responsividade à insulina das células AML12 estava comprometida quando as células eram cultivadas no meio de crescimento recomendado, mas tornava-se comparável à das células HepG2 quando se utilizava meio sem insulina. [8] Os níveis da proteína do receptor de insulina no AML12 foram semelhantes aos observados no HepG2, enquanto o AML12 apresentou apenas níveis de transcrição baixos ou indetectáveis de várias enzimas gliconeogênicas e hepatocinas. Os autores concluíram que, no que diz respeito à gliconeogênese e à expressão de hepatocinas, as células HepG2 pareciam mais próximas da situação in vivo, apesar de sua origem tumoral. A composição do meio de cultura e a abundância de proteínas-chave de sinalização devem, portanto, ser consideradas cuidadosamente quando as células AML12 forem utilizadas para modelar a resistência à insulina.

A origem murina das células AML12 também introduz diferenças inerentes à espécie em relação aos hepatócitos humanos. As vias de metabolismo de medicamentos, o processamento de lipídios e certas respostas inflamatórias diferem entre as células hepáticas de camundongos e as de humanos. Os resultados obtidos em células AML12, portanto, requerem uma avaliação cuidadosa antes de serem extrapolados para a fisiologia humana, particularmente em contextos de desenvolvimento de medicamentos, nos quais a atividade específica da espécie do citocromo P450 pode confundir os resultados.

O fundo transgênico do animal de origem — a superexpressão de TGF-α — pode, além disso, influenciar os padrões basais de expressão gênica e a sinalização dos fatores de crescimento. Estudos voltados para a biologia dos membros da família TGF devem levar esse contexto em consideração ao interpretar os dados.

Uma caracterização integrada citogenética e transcriptômica publicada em 2026 define ainda mais os limites do modelo. A técnica FISH multicolorida e a bandagem multicolorida revelaram um cariótipo complexo, quase tetraplóide e altamente aneuploide (81<4n>), com rearranjos estruturais recorrentes, incluindo del(X)(A3)×2, um dicêntrico dic(X;17), del(17)(D1)×2 e um cromossomo derivado der(3)t(2;3), juntamente com múltiplos ganhos e perdas de cromossomos inteiros; ambos os cromossomos Y foram perdidos, apesar da origem masculina da linhagem. [18] Quando os desequilíbrios no número de cópias resultantes foram mapeados em citobandas ortólogas humanas, 57,5–68 % se sobrepunham a alterações recorrentemente relatadas no carcinoma hepatocelular humano. O sequenciamento de RNA no mesmo estudo confirmou um programa claro de linhagem hepatocitária, mas também documentou uma desdiferenciação parcial: a expressão de albumina foi modesta; as enzimas do ciclo da ureia e da gliconeogênese, como Cps1, Otc, Pck1 e G6pc eram baixos ou ausentes, e os citocromos essenciais para o metabolismo de ácidos biliares e de medicamentos, incluindo Cyp7a1 e a família Cyp3a, eram quase indetectáveis, juntamente com a indução de marcadores ductulares e de células progenitoras. Ser não tumorigênico no sentido funcional, portanto, não significa ser genômicamente estável. Para parâmetros que exigem metabolismo maduro de xenobióticos, manejo de nitrogênio ou síntese de ácidos biliares, os autores recomendam complementar a AML12 com hepatócitos primários, organoides ou modelos in vivo. O estudo também identificou dois clones relacionados, cujas proporções relativas podem variar com o número de passagens e as condições de cultura, reforçando a importância do uso de estoques-mestre de baixa passagem, janelas de passagem limitadas e autenticação regular em relação ao perfil de referência STR estabelecido. [18]

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Aplicações

Apoptose e sinalização da morte celular

As células AML12 têm sido amplamente utilizadas para investigar a apoptose dos hepatócitos desencadeada por citocinas e fatores de crescimento. Pierce e colegas demonstraram que as células AML12, assim como os hepatócitos in vivo, não são sensíveis ao TNF isoladamente, mas sofrem apoptose quando o TNF é combinado com uma baixa dose de actinomicina D. [9] Seu trabalho revelou que a apoptose induzida pelo TNF nas células AML12 envolve a perturbação da homeostase redox, com perda de NAD(P)H e glutationa precedendo o dano mitocondrial, a liberação de citocromo C e a ativação das caspasas. A lesão foi amplamente determinada pelo conteúdo celular de glutationa, e o antioxidante ácido alfa-lipóico impediu totalmente o dano mitocondrial e a apoptose. Essas descobertas estabeleceram as células AML12 como um modelo viável para os mecanismos oxidativos subjacentes à lesão dos hepatócitos mediada pelo TNF.

O TGF-β1 é outro indutor-chave da apoptose dos hepatócitos estudado nesse modelo. Liao e colegas demonstraram que as células AML12 exibem características apoptóticas clássicas — condensação da cromatina, desintegração nuclear e fragmentação do DNA — após o tratamento com TGF-β1, e que esse processo foi completamente bloqueado pela cicloheximida, o que sugere a participação da síntese ativa de proteínas na via da morte celular. [10] Dooley e colegas utilizaram ainda culturações de hepatócitos primários e células AML12 em conjunto para caracterizar a transição epitelial-mesenquimal induzida pelo TGF-β, demonstrando que a superexpressão de Smad7 nos hepatócitos atenuou a fibrogênese mediada pelo TGF-β e protegeu contra danos hepáticos. [11]

A biologia das subunidades da activina também foi caracterizada em células AML12. Wada e colegas descobriram que a superexpressão da subunidade βC da activina promovia a proliferação e a sobrevivência das células AML12, enquanto a superexpressão da subunidade βE reduzia a proliferação e desencadeava a apoptose em condições de baixo teor de soro. [2] [3] Em conjunto, esses estudos ressaltam o valor das células AML12 para a análise dos sinais concorrentes pró-sobrevivência e pró-apoptóticos que determinam o destino dos hepatócitos em doenças hepáticas inflamatórias e fibróticas.

Metabolismo lipídico e sinalização do PPAR

A via do PPARα é um regulador central do metabolismo lipídico hepático, e as células AML12 se mostraram especialmente úteis para estudar sua modulação por agentes farmacológicos. Clemenz e colegas utilizaram células AML12 para demonstrar que o telmisartan, um bloqueador do receptor da angiotensina tipo 1, atua como um agonista parcial do PPARα: ele induziu a expressão do gene-alvo do PPARα, a acil-CoA sintetase de cadeia longa, membro 1 (ACSL1) em células AML12 murinas e a carnitina palmitoiltransferase 1A (CPT1A) em células HepG2 humanas, fornecendo uma base molecular para seus efeitos redutores de triglicerídeos observados clinicamente. [7] Em camundongos com obesidade induzida por dieta, o telmisartan aumentou a expressão hepática de ACSL1 e CPT1A e reduziu significativamente os triglicerídeos hepáticos e séricos. Da mesma forma, Huang e colegas demonstraram que o fenofibrato, um ligante do PPARα, aumentou a expressão do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL) no fígado em células AML12 e restaurou a capacidade de ligação do LDL, com resultados confirmados in vivo. [12]

A aldose redutase (AR) surgiu como um regulador inesperado da atividade do PPARα nos hepatócitos. Qiu e colegas demonstraram, em células AML12, que a superexpressão da AR suprimiu fortemente a atividade do PPARα e regulou negativamente os genes da oxidação de ácidos graxos, efeitos atenuados pelo inibidor seletivo da AR, o zopolrestat. [13] A superexpressão da AR também elevou os níveis de PPARα fosforilado e de ERK1/2, e a supressão da atividade do PPARα foi revertida pela inibição da ERK1/2 — vinculando a via dos polióis à homeostase lipídica por meio de mecanismos dependentes de quinases. Essas descobertas ilustram como as células AML12 podem revelar interações inesperadas entre vias metabólicas e de sinalização relevantes para a doença hepática gordurosa não alcoólica e complicações hepáticas do diabetes.

A nicotinamida-N-metiltransferase (NNMT) é outra enzima estudada nas células AML12 no contexto da regulação lipídica hepática. A supressão de Nnmt mediada por RNAi nas células AML12 causou acúmulo de S-adenosil-metionina (SAM) e S-adenosil-homocisteína, além de uma redução na 1-metilnicotinamida (MNAM), acompanhada pela regulação negativa de genes lipogênicos, como o Srebf1, e por uma diminuição mensurável nos lipídios neutros totais — estabelecendo uma ligação entre o metabolismo de um carbono e a lipogênese hepática. [19] Separadamente, a proteína do retículo endoplasmático TXNDC5 foi identificada como um parceiro de interação de PRDX6 e HSPA9 nas células AML12; a deficiência de TXNDC5 reduziu os níveis das proteínas PRDX6 e HSPA9 e diminuiu significativamente a peroxidação lipídica, a glutationa reduzida e a atividade da iPLA2. [20] Com base no mesmo modelo, o esqualeno incorporado em nanopartículas de PLGA protegeu as células AML12 contra o estresse oxidativo e do retículo endoplasmático de maneira dependente da TXNDC5, com captação celular rápida e eficiente observada a 30 µM — achados relevantes para futuras estratégias terapêuticas para a esteatose hepática. [21]

Sinalização da insulina e doenças metabólicas

As células AML12 têm sido utilizadas como ferramenta in vitro para investigar a sinalização da insulina e sua perturbação patológica. Butler e colegas utilizaram células AML12 para validar uma estratégia de oligonucleotídeos antisense direcionada ao PTEN, uma fosfatase lipídica que regula negativamente a via PI3K. A transfecção de oligonucleotídeos antissenso contra o PTEN nas células AML12 reduziu os níveis de mRNA e proteína do PTEN e aumentou a fosforilação da Akt estimulada pela insulina, fornecendo uma prova de conceito mecanicista antes que a administração sistêmica em camundongos db/db e ob/ob normalizasse as concentrações de glicose no sangue. [14] Esse estudo ilustrou o valor das células AML12 como plataforma de triagem de primeira linha para intervenções metabólicas direcionadas à resistência à insulina.

O estudo comparativo realizado por Sefried e colegas avaliou diretamente a adequação das células AML12 para pesquisas sobre sinalização da insulina e expressão gênica de hepatocinas. [8] Ao comparar as células AML12 com as células HepG2 e THLE-2, os autores constataram que a responsividade aguda à insulina nas células AML12 dependia fortemente da composição do meio de cultura e que as células AML12 expressavam apenas níveis baixos ou indetectáveis de várias transcrições de genes gliconeogênicos e de hepatocinas. A regulação gênica dependente do PPARδ foi comparável entre as células AML12 e HepG2, mas apenas as células HepG2 reproduziram a regulação da gliconeogênese hepática mediada pelo AMPc. Os autores concluíram que, para esses parâmetros específicos, as células HepG2 se assemelhavam mais à situação in vivo, apesar de sua origem tumorigênica — uma consideração fundamental na seleção de um modelo para pesquisas sobre resistência à insulina ou diabetes tipo 2.

A tomatina foi avaliada quanto à sua capacidade de melhorar o metabolismo da glicose e a respiração mitocondrial em células AML12 e HepG2 resistentes à insulina induzidas por alta concentração de glicose. [22] A tomatina aumentou o consumo de glicose de forma dependente da dose, restaurou a expressão do transportador de glicose Glut2 e de genes relacionados à gliconeogênese, ativou a fosforilação da AMPK e regulou positivamente a PGC1α, além de melhorar a taxa de consumo de oxigênio, a produção de ATP e as proteínas do complexo de fosforilação oxidativa mitocondrial. Tanto a inibição genética quanto a farmacológica da AMPK anularam esses benefícios, confirmando o papel central dessa via e posicionando as células AML12 como uma plataforma útil para a triagem de compostos naturais com potencial antidiabético. Esses achados reforçam a relevância dessa linha de células para o estudo do metabolismo lipídico, da resistência à insulina e dos mecanismos da esteatose hepática.

Pesquisa sobre carcinoma hepatocelular e hepatite viral

O estado não transformado das células AML12 as torna uma linha de controle ou parental ideal na pesquisa do carcinoma hepatocelular (CHC). Lee e colegas desenvolveram derivados das células AML12 que expressam a proteína X (pX) do vírus da hepatite B, regulada por tetraciclina, para criar modelos de transformação mediada pela pX. [4] Ao comparar a sublinha diferenciada e transformadora (3pX-1) com a sublinha desdiferenciada e não transformadora (4pX-1), os autores identificaram alterações distintas no ciclo celular associadas à ativação sustentada das vias Ras-Raf-MAPK e JNK, demonstrando como as células parentais AML12 podem servir como um contexto controlado para a análise de sinais oncogênicos.

Agentes anticâncer de origem vegetal também foram avaliados em contextos hepatocitários utilizando células AML12. Choedon e colegas testaram frações de látex seco de Calotropis procera contra a linhagem de hepatoma Huh-7, a linhagem não hepatomática COS-1 e hepatócitos AML12 não transformados. O extrato metanólico e sua fração 8 induziram morte celular generalizada e fragmentação do DNA nas células Huh-7 e COS-1, enquanto as células AML12 não foram afetadas; paralelamente, a administração oral do látex seco protegeu totalmente camundongos transgênicos X15-myc contra a hepatocarcinogênese. [15] Tais ensaios de seletividade, utilizando células AML12 como referência de hepatócitos não malignos, são uma estratégia comum para identificar compostos candidatos com toxicidade preferencial para células tumorais em relação ao parênquima hepático normal.

A sinalização do ácido retinóico (AR), que está implicada na supressão do HCC, foi mapeada de forma abrangente nas células AML12 por meio da análise de microarray de cDNA de 39.000 genes murinos. Mamoon e colegas identificaram 15 genes com regulação positiva e 3 com regulação negativa em pelo menos duas vezes após 3 horas de tratamento com RA todo-trans, com 26 com regulação positiva e 48 com regulação negativa após 24 horas. [6] Um estudo de acompanhamento realizado por Ventura-Holman e colegas utilizou análise de microarray de células AML12 transfectadas de forma estável com v-erbA — uma oncoproteína conhecida por exercer um efeito dominante-negativo sobre os receptores de ácido retinóico — para identificar quais genes responsivos ao RA são afetados pelo v-erbA, bem como genes regulados pelo v-erbA no nível da transcrição basal, vários dos quais estão implicados na carcinogênese. [16]

Estresse oxidativo e lesão por isquemia-reperfusão

A lesão por isquemia-reperfusão (I/R) representa um grande desafio clínico na cirurgia e no transplante de fígado, e as células AML12 têm sido utilizadas para modelar os mecanismos oxidativos subjacentes. Haga e colegas demonstraram que as células AML12 submetidas a condições de hipóxia/reoxigenação desenvolveram rapidamente estresse oxidativo, com muitas células sofrendo apoptose. [17] A supressão da isoforma p66 da ShcA (p66shc) por meio de RNAi reduziu significativamente o estresse oxidativo celular e a apoptose induzida por H/R, além de conferir resistência ao peróxido de hidrogênio. A proteção foi atribuída ao aumento da eliminação de ROS, e não à inibição da geração de ROS: as proteínas antioxidantes MnSOD e Ref-1 e a proteína antiapoptótica Bcl-xL apresentaram regulação positiva, enquanto a proteína pró-apoptótica FLICE apresentou regulação negativa; por outro lado, a expressão da catalase permaneceu inalterada. Esses achados identificaram a p66shc como um alvo terapêutico potencial na lesão hepática por isquemia-reperfusão.

A tecnologia de oligonucleotídeos antissenso foi caracterizada em células AML12 no contexto da morte celular mediada por Fas. Thonberg e colegas compararam seis oligonucleotídeos fosforotioatos direcionados ao mRNA de Fas em células AML12, revelando que quatro reduziram significativamente os níveis de mRNA e que um produziu um fragmento estável de clivagem do mRNA 3′ mapeado para a sequência complementar ao antissenso. [5] Esse estudo destacou as células AML12 como um modelo adequado para avaliar a eficiência do antisense e para investigar os mecanismos da degradação de RNA mediada pela RNase H em células hepáticas.

Um perfil citogenético e transcriptômico abrangente confirmou que as células AML12 mantêm um programa de linhagem hepatocitária bem definido, com expressão robusta de Hnf4a, Foxa2 e Prox1, da proteína HNF4α nuclear e da ausência dos marcadores definidores da linhagem das células estreladas hepáticas, dos colangiócitos e das células de Kupffer. [18] O mesmo conjunto de dados, no entanto, revelou uma assinatura transcricional pronunciada associada ao estresse e às células progenitoras, incluindo expressão muito elevada de Spp1/osteopontina, Ccl2 e Plscr1, juntamente com marcadores ductulares, como Krt19, Sox9, Hnf1b e Jag1. Essa linha de base adaptada à lesão e semelhante à de progenitores torna a AML12 um modelo prático para o estresse intrínseco aos hepatócitos, a sinalização inflamatória e a plasticidade epitelial, desde que o estado basal seja levado em consideração na interpretação dos resultados em estudos de estresse oxidativo e toxicológicos.

Conclusão

As células AML12 continuam sendo um dos modelos de hepatócitos murinos mais amplamente utilizados na pesquisa hepática, oferecendo um equilíbrio único entre a função dos hepatócitos diferenciados e a estabilidade in vitro a longo prazo. Estabelecida por Wu, Merlino e Fausto em 1994 [1], a linhagem tem, desde então, apoiado pesquisas nas áreas de doença hepática gordurosa não alcoólica, lesão hepática induzida por medicamentos, metabolismo lipídico, resistência à insulina, apoptose, carcinoma hepatocelular e lesão por isquemia-reperfusão. O estudo de referência realizado por Sefried e colegas delineou os limites de sua capacidade de sinalização da insulina e mostrou que, para desfechos gliconeogênicos e de hepatocinas, as células HepG2 podem, de fato, ser o modelo mais adequado. [8] Perfis citogenéticos e transcriptômicos mais recentes documentaram um cariótipo aneuploide quase tetraplóide e desdiferenciação parcial, defendendo a validação complementar em hepatócitos primários, organoides ou modelos in vivo sempre que for necessária a função de hepatócitos totalmente maduros. [18] Quando utilizadas levando em conta essas ressalvas — seja para farmacologia do PPARα, modelagem de hepatite viral ou investigação do estresse oxidativo —, as células AML12 oferecem uma plataforma confiável e bem caracterizada para a biologia hepática orientada por hipóteses. Para encomendar células AML12 ou consultar as especificações, acesse cytion.com.

Publicações principais

1. Wu JC, Merlino G, Fausto N (1994) Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares de hepatócitos diferenciados e não transformados, derivadas de camundongos transgênicos para o fator de crescimento transformador alfa. Anais da Academia Nacional de Ciências dos Estados Unidos da América. PMID: 7904757
2. Wada W, Maeshima A, Zhang YQ (2004) Avaliação da função da subunidade betaC da ativina em hepatócitos em cultura. American Journal of Physiology. Endocrinologia e Metabolismo. PMID: 15039147
3. Wada W, Medina JJ, Kuwano H (2005) Comparação da função das subunidades beta(C) e beta(E) da ativina em hepatócitos AML12. Endocrine Journal. PMID: 15863943
4. Lee S, Tarn C, Wang WH (2002) A proteína X do vírus da hepatite B regula de maneira diferenciada a progressão do ciclo celular em linhagens celulares de hepatócitos transformados pela proteína X em comparação com as não transformadas (AML12). The Journal of Biological Chemistry. PMID: 11756437
5. Thonberg H, Dahlgren C, Wahlestedt C (2004) A degradação do mRNA de Fas induzida por antisense produz um fragmento estável de 3'-mRNA específico do local por clivagem da exonuclease na sequência complementar. Oligonucleotides. PMID: 15625917
6. Mamoon A, Ventura-Holman T, Maher JF (2008) Genes responsivos ao ácido retinóico na linhagem celular de hepatócitos murinos AML 12. *Gene*. PMID: 18006250
7. Clemenz M, Frost N, Schupp M (2008) Regulação de genes-alvo do receptor alfa ativado por proliferadores de peroxissomas (PERA) específicos do fígado pelo bloqueador do receptor da angiotensina tipo 1, telmisartan. Diabetes. PMID: 18184928
8. Sefried S, Häring HU, Weigert C (2018) Adequação das linhagens celulares de hepatócitos HepG2, AML12 e THLE-2 para o estudo da sinalização da insulina e da expressão gênica de hepatocinas. Open biology. PMID: 30355754
9. Pierce RH, Campbell JS, Stephenson AB (2000) Perturbação da homeostase redox na apoptose induzida pelo fator de necrose tumoral em uma linhagem celular de hepatócitos murinos. The American Journal of Pathology. PMID: 10880392
10. Liao JH, Zhou BH, Chai MQ (2001) A cicloheximida bloqueia a apoptose induzida pelo TGF-beta1 em hepatócitos murinos. Acta pharmacologica Sinica. PMID: 11741524
11. Dooley S, Hamzavi J, Ciuclan L (2008) A expressão de Smad7 específica dos hepatócitos atenua a fibrogênese mediada pelo TGF-beta e protege contra danos hepáticos. Gastroenterology. PMID: 18602923
12. Huang Z, Zhou X, Nicholson AC (2008) A ativação do receptor alfa ativado por proliferadores de peroxissomos em camundongos induz a expressão do receptor hepático de lipoproteína de baixa densidade. British Journal of Pharmacology. PMID: 18852694
13. Qiu L, Wu X, Chau JF (2008) A aldose redutase regula a fosforilação e a atividade do receptor alfa ativado por proliferadores de peroxissomos no fígado, influenciando a homeostase lipídica. The Journal of Biological Chemistry. PMID: 18445591
14. Butler M, McKay RA, Popoff IJ (2002) A inibição específica da expressão de PTEN reverte a hiperglicemia em camundongos diabéticos. Diabetes. PMID: 11916922
15. Choedon T, Mathan G, Arya S (2006) Propriedades anticâncer e citotóxicas do látex de Calotropis procera em um modelo de camundongo transgênico de carcinoma hepatocelular. World Journal of Gastroenterology. PMID: 16688796
16. Ventura-Holman T, Mamoon A, Subauste JS (2008) Modulação da expressão de genes regulados pelo RA pela oncoproteína v-erbA. Gene. PMID: 18775481
17. Haga S, Terui K, Fukai M (2008) Prevenção de danos por hipóxia/reoxigenação aos hepatócitos por meio da ablação de p66(shc): regulação positiva de proteínas antioxidantes e antiapoptóticas. Journal of Hepatology. PMID: 18191273
18. Asar DY, Kankel S, Keller DT (2026) Perfil citogenético e genômico abrangente da linhagem celular de hepatócitos murinos AML12 (Alpha Mouse Liver 12). Cells. PMID: 41827824
19. Yoda M, Mizuno R, Izumi Y (2023) A nicotinamida-N-metiltransferase regula o metabolismo lipídico por meio da SAM e da 1-metilnicotinamida na linhagem celular de hepatócitos AML12. Journal of Biochemistry. PMID: 37014628
20. Bidooki SH, Sánchez-Marco J, Martínez-Beamonte R (2023) A proteína TXNDC5 do retículo endoplasmático interage com PRDX6 e HSPA9 para regular o metabolismo da glutationa e a peroxidação lipídica na linhagem celular hepática AML12. Revista Internacional de Ciências Moleculares. PMID: 38138960
21. Bidooki SH, Alejo T, Sánchez-Marco J (2022) Nanopartículas carregadas com esqualeno protegem efetivamente as linhagens celulares hepáticas AML12 contra o estresse oxidativo e do retículo endoplasmático de maneira dependente da TXNDC5. Antioxidants. PMID: 35326231
22. Lee YG, Kim D (2025) A tomatina melhora o metabolismo da glicose e a respiração mitocondrial nas linhagens celulares de hepatócitos resistentes à insulina AML12 e HepG2 por meio de uma via dependente da proteína quinase ativada por AMP. Cells. PMID: 40072058