Introdução

Células HMC3, também conhecida como Clone 3 de microglia humana, CHME-3 ou CHME3, representa uma das linhas celulares de microglia humana mais utilizadas na investigação em neurociência. A linha foi estabelecida em 1995 por Janabi, Peudenier, Héron e colegas através da imortalização, dependente do antígeno T grande do SV40, de macrófagos derivados do cérebro embrionário humano. [1] As células HMC3 mantêm as características microgliais essenciais, incluindo a expressão constitutiva da molécula adaptadora Iba-1, que se liga ao cálcio ionizado, e a expressão induzível pelo interferão-gama de antigénios do MHC de classe II. [2] [3] Enquanto células imunitárias inatas residentes do sistema nervoso central, as microglia são mediadoras fundamentais das doenças neuroinflamatórias, da doença de Alzheimer e de outras doenças neurodegenerativas. As células HMC3 servem, por conseguinte, como uma plataforma in vitro humana versátil para o estudo da ativação microglial, de agentes neuroprotetores, da neuroinfecção viral e do microambiente tumoral do glioblastoma.

Pontos-chave

• As células HMC3 são microglia do cérebro fetal humano imortalizadas, obtidas por transfecção com o antígeno T grande do SV40.
• A linha celular expressa Iba-1 de forma constitutiva e aumenta a expressão do MHC de classe II após estimulação com interferão-gama; os resultados relativos à expressão de CD14, CD11b e CD68 variam entre laboratórios e devem ser verificados para cada lote específico.
• As células HMC3 constituem um modelo in vitro amplamente utilizado para o estudo de doenças neuroinflamatórias, da doença de Alzheimer e de doenças neurodegenerativas.
• Esta linhagem é suscetível à infeção por vários vírus neurotrópicos, incluindo o vírus do Zika, o vírus da doença de Borna 1, o vírus da chikungunya e o rinovírus.
• As células HMC3 expressam NOX4 de forma constitutiva e geram espécies reativas de oxigénio, o que as torna relevantes para a investigação sobre o stress oxidativo.
• Esta linha tem sido utilizada em estudos sobre o microambiente tumoral do glioblastoma, na farmacologia de fármacos e na investigação sobre arcabouços de biomateriais.
• A interleucina-1 beta — isoladamente ou em combinação com o interferão-gama — é o estímulo inflamatório mais eficaz nesta linha celular; as respostas ao LPS são comparativamente modestas, e o TNF-alfa e o óxido nítrico estão praticamente ausentes.

O que é o HMC3?

A HMC3 (n.º de acesso no Cellosaurus: CVCL_II76) é uma linha celular microglial humana transformada, derivada do cérebro fetal de um embrião com 8 a 10 semanas de idade gestacional. O sexo do dador não foi especificado. Não foi associada qualquer doença ao dador. A linha foi estabelecida por Janabi e colegas em 1995, através da transfecção de culturas primárias de macrófagos do cérebro embrionário com um plasmídeo que codifica o antígeno T grande do SV40, resultando em quatro linhas celulares microgliais contínuas, das quais o clone 3 se tornou o mais amplamente utilizado. [1] As células transformadas mantiveram características macrofágicas, tais como a aderência e a atividade esterásica não específica, e foram capazes de fagocitar partículas de zimosano, embora a atividade fagocítica se tenha mantido baixa. A interleucina-6 foi produzida espontaneamente pelas células, tendo a produção aumentado ainda mais após estimulação com interleucina-1 alfa. [1] Uma revisão sistemática exaustiva da literatura, realizada em 2018 por Dello Russo e colegas, compilou os dados de caracterização disponíveis relativos a este clone e esclareceu um importante ponto de confusão: a mesma linha celular tem circulado sob os nomes CHME3, C13-NJ e CHME-5. [3] A análise concluiu que, independentemente da designação utilizada, as células partilham um perfil antigénico e funcional comparável e devem ser consideradas como um único modelo experimental — embora se tenha alertado para o facto de se ter constatado que várias alíquotas de CHME-5 em circulação estavam contaminadas com células de glioma de rato. O stock de HMC3 (ATCC CRL-3304) autenticado pela ATCC está isento desta ambiguidade.

Informações sobre a cultura celular HMC3

As células HMC3 são resistentes no que diz respeito à escolha do meio basal: têm sido cultivadas com sucesso em EMEM, MEM e DMEM:Ham's F12, cada um deles suplementado com 10% de soro. [3] No entanto, esta escolha não é fenotipicamente neutra. Dello Russo e colegas relataram que a produção basal de espécies reativas de oxigénio era significativamente inferior nas células cultivadas em MEM ou DMEM:F12 do que em EMEM, indicando um fenótipo de repouso menos ativado. [3] Os investigadores que compararem dados entre laboratórios devem, por conseguinte, registar o meio utilizado juntamente com o número de passagem.

Vantagens das células HMC3

As células HMC3 constituem um modelo microglial humano excepcionalmente acessível, numa altura em que é difícil obter microglia humana primária em quantidades suficientes para investigação em grande escala. Esta linha cresce por adesão e é fácil de manter. Fundamentalmente, as células expressam Iba-1 de forma constitutiva, regulam positivamente o MHC de classe II em resposta ao interferão-gama e — no stock autenticado pela ATCC — transcrevem os genes característicos da microglia definidos mais recentemente: CX3CR1, CSF1R, P2RY12 e TMEM119, fornecendo um substituto biologicamente validado para a microglia humana primária. [2] [3] Estas características tornam as células HMC3 uma plataforma amplamente utilizada para estudos mecanísticos de doenças neuroinflamatórias que requerem material celular reprodutível, escalável e totalmente humano.

Outro ponto forte das células HMC3 é a sua capacidade de resposta a um conjunto definido de estímulos inflamatórios. O indutor mais eficaz da interleucina-6 é a interleucina-1 beta, que aumenta a libertação basal até cinquenta vezes e atua de forma sinérgica com o interferão-gama; o LPS e os péptidos beta-amilóides provocam aumentos mais modestos e dependentes da concentração. [3] Este perfil de resposta graduado e reproduzível permite a realização de experiências dependentes da concentração e com evolução temporal, que são difíceis de concretizar em preparações de células primárias. A sua capacidade de resposta a estímulos tanto pró-inflamatórios como anti-inflamatórios — incluindo agentes farmacológicos como a rapamicina e a dexmedetomidina — alarga ainda mais a sua utilidade na farmacologia de medicamentos e na triagem de agentes neuroprotetores. [4] [5] As células também são suscetíveis a vários vírus neurotrópicos, o que alarga a sua utilização à investigação em neuroinfetologia.

Limitações das células HMC3

Enquanto linha celular transformada, as células HMC3 portam o antígeno T grande do SV40, o que lhes confere imortalidade, mas também altera aspetos da biologia celular em relação à microglia primária. Li e colegas relataram padrões inesperados de expressão das isoformas de NOX — NOX4 abundante, mas quase ausência de ARNm de NOX2 —, o que contrasta com a microglia primária e limita a utilidade desta linha como modelo para a explosão respiratória mediada por NOX2. [2] [3] Os investigadores devem, por isso, verificar se a via específica em estudo é fielmente reproduzida nesta linha celular antes de tirarem conclusões mecanísticas de carácter geral.

Há ainda três outras limitações que merecem atenção. Em primeiro lugar, o repertório de mediadores inflamatórios está incompleto: as células HMC3 secretam apenas quantidades marginais da citocina anti-inflamatória IL-10 (na ordem de alguns pg/ml), produzem pouca ou nenhuma TNF-alfa, quer espontaneamente quer após ativação pró-inflamatória, e apresentam níveis constitutivamente elevados de IL-6 induzidos por espécies reativas de oxigénio dependentes de NOX4. [2] [3] Em segundo lugar, e em nítido contraste com a microglia dos roedores, as células HMC3 em repouso não expressam iNOS, não tendo-se observado nem a indução da iNOS nem uma acumulação mensurável de nitrito após estimulação com LPS, LPS associado a interferão-gama, IL-1 beta ou TNF-alfa. [3] Os estudos centrados no eixo do óxido nítrico não são, portanto, bem representados por este modelo.

Em terceiro lugar, a linha foi criada a partir de tecido cerebral fetal, o que significa que o seu perfil transcricional e funcional pode diferir dos estados microgliais que surgem na idade adulta e que estão associados a doenças neurodegenerativas da terceira idade. Os investigadores que modelam a doença de Alzheimer ou a doença de Parkinson em adultos devem interpretar os dados derivados da HMC3 em conjunto com sistemas microgliais complementares, primários de adultos ou derivados de iPSC, sempre que possível. Por fim, os relatos sobre o perfil dos marcadores de superfície não são totalmente concordantes: enquanto Li e colegas descreveram Iba-1 e CD14 constitutivos, juntamente com CD11b, CD68 e MHC de classe II induzíveis por interferão-gama, [2] tanto a caracterização original de Janabi e colegas [1] e os dados de citometria de fluxo apresentados por Dello Russo e colegas relativamente à linha celular ATCC CRL-3304 revelaram que as células em repouso eram negativas para CD14 e CD11b, não tendo nenhum desses marcadores sido induzido pelo interferão-gama. [3] O clone de anticorpos, o meio de cultura e o número de passagens influenciam todos estes resultados, e a deriva genética resultante de passagens em série está, de um modo geral, documentada para as linhas contínuas; a expressão do marcador deve ser confirmada internamente, em vez de ser dada como certa.

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Aplicações das células HMC3

Neuroinflamação e ativação microglial

O estudo das doenças neuroinflamatórias representa a aplicação mais amplamente desenvolvida das células HMC3. Li e colegas demonstraram que as células HMC3 expressam constitutivamente a proteína NOX4, o que impulsiona a produção contínua de espécies reativas de oxigénio e a expressão sustentada de IL-6 — uma descoberta que posicionou estas células como um modelo para a neuroinflamação crónica de baixo grau. [2] Este tom inflamatório constitutivo reflete aspetos da preparação microglial observados em condições neurodegenerativas, proporcionando uma base de referência relevante para estudos de intervenção.

Um estudo influente de Baek e colegas analisou a inibição do domínio bromodomínio BET nas células HMC3 através do sequenciamento de ARN. [6] Os autores demonstraram que o inibidor BET JQ1 atenuou a resposta inflamatória e migratória das células HMC3 ativadas por LPS e identificaram o mecanismo: O LPS induz o fator de transcrição IRF1, que regula diretamente genes relacionados com quimiocinas, citocinas, genes estimulados por interferão e genes relacionados com a migração, e o JQ1 reduz significativamente o IRF1 juntamente com os seus genes-alvo. A supressão do IRF1 reproduziu o efeito e inibiu a migração microglial. [6] Este trabalho estabeleceu o eixo BET–IRF1 como um alvo farmacológico na neuroinflamação microglial humana e demonstrou a adequação das células HMC3 para estudos de intervenção farmacológica a nível mecanístico.

Os padrões moleculares associados a danos mitocondriais também foram analisados nesta linha. Nasi e colegas descobriram que a estimulação com ADN mitocondrial e cardiolipina aumentava o stress oxidativo celular nas células HMC3, sem, no entanto, desencadear uma resposta pró-inflamatória clássica: a expressão de HLA-DR não foi regulada positivamente e nem a secreção de TNF-alfa nem a de IL-6 aumentaram. [7] Os autores interpretaram isto como um possível mecanismo regulador endógeno que limita a ativação microglial. Por outro lado, Cappoli e colegas demonstraram que o inibidor de mTOR, a rapamicina, aumentava paradoxalmente a expressão e a libertação de IL-6 nas células HMC3 ativadas com uma mistura de interferão-gama e IL-1 beta, ao mesmo tempo que reduzia a produção de espécies reativas de oxigénio — o que desafia as suposições sobre as ações anti-inflamatórias da rapamicina nas células imunitárias residentes no cérebro humano. [4] Estes estudos demonstram, em conjunto, que as células HMC3 constituem um sistema sensível e relevante para o ser humano, permitindo a análise das vias moleculares subjacentes às doenças neuroinflamatórias.

Modelação da Doença de Alzheimer e de Doenças Neurodegenerativas

As células HMC3 tornaram-se uma ferramenta importante para modelar a contribuição da microglia para a doença de Alzheimer. Um estudo de caracterização inicial realizado por Lindberg e colegas, efetuado neste clone sob o nome CHME3, estabeleceu que a beta-amilóide (1–40) recém-dissolvida produzia um aumento dependente da dose na libertação de IL-6, a par de uma perda de viabilidade dependente da dose. [8] A hormona alfa-estimuladora dos melanócitos não alterou a resposta de IL-6 induzida pela beta-amilóide, mas aumentou a libertação basal de IL-6 de forma dependente da dose, um efeito atribuído aos subtipos de recetores de melanocortina MCR3 ou MCR5. [8] Este trabalho validou as células HMC3 como uma plataforma viável para estudar a relação entre os peptídeos beta-amilóides e as respostas inflamatórias microgliais, que são fundamentais para a patogénese da doença de Alzheimer.

González-Prieto e colegas investigaram o CX3CR1 — o único recetor da quimiocina neuronal CX3CL1 — na doença de Alzheimer. [9] A produção de CX3CR1 estava aumentada no córtex de ratos 5xFAD e em amostras de cérebro humano com doença de Alzheimer, e a administração do inibidor da recaptação de noradrenalina reboxetina aumentou-a ainda mais in vivo. Em contrapartida, a aplicação direta de noradrenalina em células HMC3 e na microglia primária de ratos inibiu a produção de CX3CR1. [9] Os autores concluíram que as respostas microgliais à noradrenalina podem ser alteradas na ausência de neurónios produtores de CX3CL1 ou de outros fatores não microgliais — um exemplo instrutivo de como as células HMC3 podem isolar uma resposta celular autónoma e, assim, revelar a contribuição do contexto tecidular mais amplo.

O estudo sobre a dexmedetomidina, realizado por Li e colegas, utilizou células HMC3 estimuladas com LPS e ATP como modelo de neuroinflamação induzida pelo inflamassoma NLRP3, relevante para a doença de Alzheimer. [5] A dexmedetomidina inibiu a libertação de IL-1β e IL-18 através de uma cascata c-Fos/NLRP3/caspase-1, identificando um eixo anti-inflamatório mecanicamente inovador na microglia humana. As células HMC3 também serviram de modelo para investigar a polarização microglial em resposta a extratos vegetais contendo fitoestrogénios, alargando ainda mais a sua utilidade na descoberta de fármacos para doenças neurodegenerativas. [10] [11]

Virologia e infeções do SNC

As células HMC3 revelaram-se altamente versáteis para o estudo da neuroinfecção viral, dada a sua origem humana e o seu papel como modelo da primeira linha de defesa microglial no sistema nervoso central. Martinez Viedma e Pickett compararam a resposta do hospedeiro das células microgliais HMC3 e das células placentárias JEG-3 à infeção pelo vírus Zika, utilizando um painel de 84 genes imunitários inatos e adaptativos, cujos perfis foram analisados 24 e 72 horas após a infeção. [12] Os dois tipos de células apresentaram conjuntos distintos de genes expressos de forma diferencial, e a análise das vias biológicas indicou que a sinalização TLR7/8 estava suprimida nas células microgliais, enquanto era ativada nas células placentárias — uma divergência posteriormente investigada através de experiências com siRNA. O estudo estabeleceu as células HMC3 como uma plataforma adequada para a transcriptómica hospedeiro-patógeno na virologia do SNC.

Zhang e colegas utilizaram células HMC3 infetadas com o BoDV-1 para demonstrar que o miR-146a facilita a replicação viral ao suprimir o eixo de sinalização imunitária inata IRAK1/TRAF6/NF-κB. [13] Esta descoberta proporcionou uma compreensão mecanista de como um vírus de ARN altamente neurotrópico escapa às respostas antivirais da microglia. Num modelo de infeção distinto, Angel-Ambrocio e colegas demonstraram, pela primeira vez, que o rinovírus humano completa todo o seu ciclo viral nas células HMC3, estabelecendo a microglia como um potencial reservatório celular para complicações do SNC associadas ao rinovírus. [14] Esta linha também suporta a replicação do vírus chikungunya sem perda significativa de viabilidade até 72 horas após a infeção. [19]

Sharma e colegas identificaram a prohibitina 1/2 como um recetor de entrada putativo para o vírus da dengue do serótipo 3 em células microgliais CHME-3 — um sinónimo de HMC3 — utilizando ensaios de ligação de proteínas por sobreposição viral, proteómica por LC-MS/MS, silenciamento por siRNA e coimunoprecipitação. [15] Notavelmente, a mesma dependência foi observada nas células neuronais SH-SY5Y, mas não nas células astrogliais U-87 MG, indicando que a via de entrada é específica do tipo celular. Em conjunto, estes estudos virológicos destacam as células HMC3 como um modelo microglial humano amplamente aplicável para investigar a patogénese e as estratégias de evasão imunitária dos vírus neurotrópicos.

Microambiente tumoral do glioblastoma

As células HMC3 têm sido utilizadas como modelo de microglia associada ao glioma para estudar como as células tumorais do glioblastoma cooptam o fenótipo inflamatório da microglia. Li e colegas demonstraram que a cocultura de células de glioblastoma resistentes à temozolomida com células HMC3 promoveu a polarização M2 das células HMC3 e aumentou a secreção das citocinas pró-tumorígenas TGF-β e IL-6. [16] Esta polarização estava associada ao circuito lncRNA SNHG15/miR-627-5p/CDK6, e o inibidor de CDK4/6 palbociclib reduziu os marcadores M2, ao mesmo tempo que superou a resistência à temozolomida em modelos de xenoenxertos derivados de doentes.

Estes resultados posicionam as células HMC3 como um modelo humano relevante para o estudo das contribuições da microglia para o microambiente tumoral imunossupressor do glioblastoma. A capacidade de modelar a interação microglia–glioblastoma in vitro utilizando células HMC3 proporciona um sistema maleável para identificar alvos terapêuticos que abordem simultaneamente a resistência das células tumorais e a evasão imunitária. [16]

Agentes neuroprotetores e farmacologia dos fármacos

As células HMC3 têm sido amplamente utilizadas para a triagem de agentes neuroprotetores e para a caracterização dos seus mecanismos de ação na microglia humana. Martínez Leo e Segura Campos avaliaram frações peptídicas de sementes de Salvia hispanica quanto à atividade neuroprotetora em células HMC3, constatando que a fração de 1–3 kDa reduziu a produção de espécies reativas de oxigénio em 51,3% e diminuiu a libertação de óxido nítrico, TNF-alfa e IL-6, com um efeito protetor global de 79,0%. [17] Este tipo de estudo ilustra como as células HMC3 permitem uma triagem rápida e relevante para o ser humano de compostos bioativos derivados de alimentos.

Ma'arif e colegas realizaram dois estudos relacionados utilizando células HMC3 para avaliar fitoestrogénios de origem vegetal provenientes de folhas de Marsilea crenata. A fração de n-butanol reduziu a expressão de MHC de classe II em células ativadas por interferão-gama, o que é consistente com a inibição da ativação clássica de M1, embora a relação dose-resposta relatada não fosse monotónica. [10] Um extrato de etanol a 96% aumentou a expressão do marcador M2 arginase-1; o mesmo estudo relatou uma diminuição na expressão do recetor de estrogénio beta ativado às concentrações de 125 e 250 ppm, um resultado que entra em contradição com o próprio título do artigo e deve ser considerado como não resolvido. [11] Ambos os estudos utilizaram o protocolo de polarização com interferão-gama, bem caracterizado em células HMC3, para investigar a potencial neuroproteção fitoestrogénica na neuroinflamação pós-menopáusica.

No campo dos biomateriais e da engenharia de tecidos, Venkateswarlu e colegas utilizaram células HMC3 vivas cultivadas em matrizes de arcabouços eletrofiados para desenvolver um fluxo de trabalho de imagiologia volumétrica em tempo real para oscilações de cálcio citosólico, utilizando microscopia confocal de varredura a laser. [18] Este trabalho alargou a aplicação das células HMC3 para além da farmacologia clássica, estendendo-a aos ensaios de biomateriais de última geração, ilustrando a versatilidade desta linha celular em diversos contextos tecnológicos na investigação em neurociências.

Conclusão

As células HMC3 — o clone 3 de microglia humana — consolidaram-se como um modelo in vitro fundamental para doenças neuroinflamatórias, doença de Alzheimer, doenças neurodegenerativas, virologia do SNC, investigação do microambiente tumoral do glioblastoma e descoberta de agentes neuroprotetores. Derivada de tecido cerebral fetal humano e imortalizada por transfecção com SV40, a linha expressa marcadores microgliais essenciais e responde a um leque definido de estímulos inflamatórios, farmacológicos e infecciosos. Estudos como o trabalho sobre inibidores BET, realizado por Baek e colegas, demonstraram o potencial desta linha para identificar alvos farmacológicos na neuroinflamação microglial humana. Desde estudos mecanísticos fundamentais sobre espécies reativas de oxigénio e a sinalização do inflamassoma NLRP3 até triagens aplicadas de agentes neuroprotetores de origem vegetal e testes de biomateriais baseados em arcabouços, as células HMC3 oferecem uma versatilidade excecional — desde que as suas limitações documentadas relativamente ao TNF-alfa, ao óxido nítrico e à biologia da NOX2 sejam tidas em conta na conceção das experiências. Os investigadores que procurem um modelo microglial validado, escalável e totalmente humano encontrarão nas células HMC3 um recurso valioso para aprofundar a compreensão da imunidade e das doenças cerebrais. Para encomendar células HMC3 ou solicitar mais informações sobre as especificações do produto, visite cytion.com.

Publicações principais

1. Janabi N, Peudenier S, Héron B (1995) Estabelecimento de linhas celulares de microglia humana após a transfecção de culturas primárias de células microgliais embrionárias com o antígeno T grande do SV40. Neuroscience letters. PMID: 7478261
2. Li B, Bedard K, Sorce S (2009) A expressão de NOX4 na microglia humana conduz à geração constitutiva de espécies reativas de oxigénio e à expressão constitutiva de IL-6. Journal of innate immunity. PMID: 20375612
3. Dello Russo C, Cappoli N, Coletta I (2018) A linha celular microglial humana HMC3: em que ponto estamos? Uma revisão sistemática da literatura. Journal of Neuroinflammation. PMID: 30200996
4. Cappoli N, Mezzogori D, Tabolacci E (2019) A rapamicina, inibidor da quinase mTOR, aumenta a expressão e a libertação da citocina pró-inflamatória interleucina 6, modulando a ativação das células microgliais humanas. EXCLI Journal. PMID: 31645839
5. Li H, Zhang X, Chen M (2018) A dexmedetomidina inibe a inflamação nas células da microglia sob estimulação de LPS e ATP através das cascatas c-Fos/NLRP3/caspase-1. Revista EXCLI. PMID: 29743866
6. Baek M, Yoo E, Choi HI (2021) O inibidor BET atenua a resposta inflamatória e a migração celular na linha celular microglial humana HMC3. Scientific Reports. PMID: 33893325
7. Nasi M, De Gaetano A, Bianchini E (2020) Os padrões moleculares associados a danos mitocondriais estimulam a produção de espécies reativas de oxigénio na microglia humana. Molecular and Cellular Neurosciences. PMID: 32828963
8. Lindberg C, Hjorth E, Post C (2005) Produção de citocinas por uma linha celular de microglia humana: efeitos da beta-amilóide e da hormona estimulante dos melanócitos alfa. Neurotoxicity Research. PMID: 16371321
9. González-Prieto M, Gutiérrez IL, García-Bueno B (2021) A produção de CX3CR1 pela microglia aumenta na doença de Alzheimer e é regulada pela noradrenalina. Glia. PMID: 32662924
10. Ma'arif B, Mirza DM, Hasanah M (2020) Atividade antineuroinflamatória da fração de n-butanol de Marsilea crenata Presl. na linha celular de microglia HMC3. Jornal de fisiologia e farmacologia básica e clínica. PMID: 31967965
11. Ma'arif B, Agil M, Laswati H (2020) O aumento da expressão de Arg1 e do ERβ ativado na microglia HMC3 por indução do extrato de etanol a 96% das folhas de Marsilea crenata Presl. Revista de fisiologia e farmacologia básica e clínica. PMID: 31981453
12. Martinez Viedma MDP, Pickett BE (2018) Caracterização dos diferentes efeitos da infeção pelo vírus Zika na placenta e nas células da microglia. Viruses. PMID: 30453684
13. Zhang X, Guo Y, Xu X (2019) O miR-146a promove a replicação do vírus da doença de Borna 1 através da via de sinalização IRAK1/TRAF6/NF-κB. Virus Research. PMID: 31330207
14. Angel-Ambrocio AH, Bautista-Carbajal P, García-León ML (2020) As células HMC3 da microglia são altamente suscetíveis à infeção por rinovírus. Virus Research. PMID: 32768491
15. Sharma A, Vasanthapuram R, M Venkataswamy M (2020) A prohibitina 1/2 medeia a entrada do Dengue-3 em células de neuroblastoma humano (SH-SY5Y) e de microglia (CHME-3). Journal of biomedical science. PMID: 32306962
16. Li Z, Zhang J, Zheng H (2019) A modulação do circuito lncRNA SNHG15/CDK6/miR-627 pelo palbociclib supera a resistência à temozolomida e reduz a polarização M2 da microglia associada ao glioma no glioblastoma multiforme. Revista de Investigação Oncológica Experimental e Clínica: CR. PMID: 31462285
17. Martínez Leo EE, Segura Campos MR (2020) Efeito neuroprotetor das frações peptídicas de Salvia hispanica na modulação pró-inflamatória das células microgliais HMC3. Journal of Food Biochemistry. PMID: 32207175
18. Venkateswarlu K, Suman G, Dhyani V (2020) Imagiologia tridimensional e quantificação em tempo real das oscilações do cálcio citosólico em células microgliais cultivadas em matrizes eletrofiadas, utilizando microscopia confocal de varredura a laser. Biotecnologia e Bioengenharia. PMID: 32557561
19. Qadri SW, Kumar N, Santhoshkumar R (2022) Infecção da linha celular microglial humana CHME-3 para estudar a neuropatogénese do vírus Chikungunya. Journal of Neurovirology. PMID: 35352315