תאי B16-F10 – חקר קו התאים B16-F10 של מלנומה במחקר על גרורות

תאי B16-F10 מהווים קו תאים של מלנומה שמקורו בעכבר C57BL/6J. הם נמצאים בשימוש נרחב במחקר סרטן העור. חוקרים משתמשים בתאים אלה כדי לחקור התפתחות והתקדמות של גידולים והתערבויות טיפוליות. מאמר זה יסקור את ההיבטים הבסיסיים של תאי מלנומה B16-F10. בין היתר, הוא יכלול:

1. מקור ומאפיינים כלליים של קו התאים B16-F10
2. מידע על גידול תאי B16-F10
3. תאי B16-F10: יתרונות וחסרונות
4. יישומים מחקריים של תאי B16-F10
5. פרסומים המציגים את קו התאים B16-F10
6. משאבים עבור קו התאים B16-F10: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

מקור ומאפיינים כלליים של קו התאים B16-F10

סעיף זה ייתן לכם תובנות לגבי המקור והתכונות הייחודיות של תאי הגידול של מלנומה B16F10. הוא יסייע לכם להשתמש בקו התאים ביעילות בעבודת המחקר שלכם. בעיקר, תלמדו: מהן תאי B16-F10? ממה נגזר B16F10? מהי המורפולוגיה של קו התאים B16F12? מהו גודל התא B16F10?

• B16-F10 הוא תת-שיבוט של קו תאי הגידול B16 שמקורו ברקמת עור של עכברי C57BL/6J. כאן, תאי מלנומה B16F10 פותחו לאחר הזרקה תוך-ורידית של קו B16 לעכברים בעלי מערכת חיסונית מוחלשת או לעכברים סינגניים. תאים אלה נבחרו בשל הפוטנציאל שלהם ליצור מושבות גרורתיות בריאות in vivo, ולאחר מכן הוקמו לאחר עשרה מחזורים של יצירת מושבות בריאות in vitro [1]. הם פותחו על ידי Fidler ועמיתיו בשנת 1976.
• לקווי התאים B16-F10 מראה דמוי אפיתל וצורתם כציר.
• הגודל המשוער של תאי B16-F10 הוא 15.4 ± 1.4 מיקרומטר [2].

תאי B16-F1 ו-B16-F10

תאי B16-F1 ו-B16-F10 נגזרו מקו התאים האב B16. שניהם מקורם באותו מקור ובעלי מאפיינים דומים כמעט. עם זאת, ההבדל העיקרי ביניהם הוא יכולת הגרורתית שלהם. לתאי B16-F10 פוטנציאל גרורתי גבוה, בעוד שלתאי B16-F1 פוטנציאל גרורתי נמוך [3].

חתך רוחב מוגדל מאוד של גידול מלנומה ממאירה תחת המיקרוסקופ.

מידע על גידול תאי B16-F10

לפני טיפול וגידול של קו תאים, עליך לדעת על זמן הכפלתם, מצעי הגידול, התנאים ופרוטוקולי תרבית התאים. בסעיף זה נדון: מהו זמן הכפלת תאי B16-F10? כיצד מגדלים תאי B16-F10? מהו מצע התאים של B16-F10? אילו תנאי תרבית מומלצים לתאי B16-F10?

נקודות מרכזיות לגידול תאי B16-F10

זמן הכפלה:

זמן הכפלה של תאי B16-F10 הוא כ-20.1 שעות. הוא עשוי לנוע בין 17 ל-21 שעות, בהתאם לתנאי התרבית.

תאים דבקים או בתמיסה:

B16-F10 הוא קו תאים דבקים. התאים גדלים במהירות ויוצרים שכבה חד-תאית.

יחס חלוקה:

תאי B16-F10 עוברים תרבית משנה ביחס חלוקה של 1:2 עד 1:4. התאים נשטפים בתמיסת מלח פוספט (1x) ולאחר מכן עוברים אינקובציה עם תמיסת מעבר Accutase למשך 8 עד 10 דקות בטמפרטורת החדר. לתאים מוסיפים מצע טרי ומרכזים אותם. משקע התאים שנאסף מושעה שוב, והתאים מועברים לצלחת חדשה המכילה מצע גידול טרי בהתאם ליחס החלוקה.

מדיום גידול:

תאי B16-F10 מתורבתים במדיום DMEM. למדיום מתווספים 10% FBS, 4 mM L-Glutamine, 1.5 g/L NaHCO3, 4.5 g/L Glucose, ו-1.0 mM Sodium pyruvate לצורך גידול תאים אידיאלי. יש להחליף את התרבית 2-3 פעמים בשבוע.

תנאי גידול:

תאי B16-F10 מגודלים באינקובטור לח ב-37 °C עם אספקת CO2 של 5%.

אחסון:

תאים קפואים מאוחסנים בטמפרטורה הנמוכה מ-150 °C במקפיא חשמלי בטמפרטורה נמוכה במיוחד או בשלב האדי של חנקן נוזלי כדי לשמור על חיוניות התאים.

תהליך הקפאה ומדיום:

תאי B16-F10 מוקפאים במדיום CM-1 או CM-ACF לאחסון. לשם כך, מומלץ להשתמש בתהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה של 1°C בלבד בטמפרטורה לדקה, כדי למנוע הלם לתאים.

תהליך ההפשרה:

תאי B16-F10 קפואים מופשרים באמבט מים בטמפרטורה קבועה מראש של 37°C למשך 40 עד 60 שניות. לאחר מכן, התאים מועברים למדיום טרי ומצנטריפוגים כדי להסיר את מרכיבי המדיום הקפוא. התאים שנאספו מושעים מחדש במדיום גידול ומועברים לצלחות תרבית.

רמת בטיחות ביולוגית:

נדרש מעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 1 לטיפול בקו התאים B16-F10 ולתחזוקתו.

תאי B16-F10 במצב של צמיחה חלקית בהגדלה של פי 20 ופי 10.

תאי B16-F10: יתרונות וחסרונות

כמו קווי תאים אחרים, גם ל-B16-F10 יש יתרונות וחסרונות. בסעיף זה נדון בכמה יתרונות וחסרונות משמעותיים של קו תאים זה של מלנומה בעור.

יתרונות

קו התאים B16-F10 נמצא בשימוש נרחב במחקר הסרטן. היתרונות של תאי B16-F10 הם:

פוטנציאל גרורתי

תאי B16F10 של מלנומה בעור מציגים פוטנציאל גרורתי גבוה, מה שהופך אותם בעלי ערך רב לחקר גרורות סרטן והמנגנונים העומדים בבסיסן.

מודל גידול במבחנה

תאי B16-F10 משמשים כמודל במבחנה לחקר התקדמות הסרטן וצמיחתו, ומסייעים לחוקרים להבין את המנגנונים התאיים והמולקולריים המניעים את הסרטן.

 

חסרונות

החסרונות הקשורים לקו התאים B16-F10 הם:

קו תאים שמקורו בעכברים

B16-F10 הוא קו תאים שמקורו בעכברים, מה שמגביל את ישימותו למחקרים ספציפיים לבני אדם. ממצאי המחקר מתאים אלה לא תמיד ניתנים לתרגום מדויק לביולוגיה האנושית.

 

יישומים מחקריים של תאי B16-F10

קו התאים B16-F10 נמצא בשימוש נרחב במחקר הסרטן. להלן מספר יישומים מבטיחים של קו תאים זה.

• מחקר הסרטן: קו התאים B16-F10 מהווה מודל חשוב לחקר תהליכים בתאי סרטן, כולל התרבות, פלישה, נדידה ומוות תאי או אפופטוזיס. בנוסף, הוא מסייע לחוקרים להשיג תובנות לגבי המנגנונים והמסלולים המולקולריים המניעים תהליכים תאיים אלה. מחקר שנערך בשנת 2018 בחן את תפקידו של CCR5 (קולטן כימוקין C-C מסוג 5) במעבר של תאי מלנומה מתאי אפיתל לתאי מזנכימה ובגרורות. הממצאים חשפו כי מחסור ב-CCR5 מגביל את צמיחת הגידול והגרורות, בעוד שביטוי גבוה מוביל לצמיחה מוגברת ולגרורות של תאי B16-F10. מחקרים נוספים דיווחו כי CCR5 מווסת את הביטוי של TGFβ1, אשר מווסת את מסלול האיתות PI3K/AKT/GSK3β כדי לקדם את המעבר מאפיתל למזנכימה ואת נדידת התאים [4].
• בדיקת ופיתוח תרופות: תאי הגידול של מלנומה מסוג B16F10 הם אגרסיביים ביותר ולכן מתאימים לבדיקת תרופות וטיפולים פוטנציאליים נגד הגידול. חוקרים משתמשים בתאים אלה ומעריכים את ההשפעה של תרכובות שונות על צמיחת התאים, התרבותם והגרורות, דבר המסייע בפיתוח תרופות. מחקר שנערך בשנת 2018 על ידי ולנטינה נאני ועמיתיה בחן את ההשפעות הטיפוליות של תמצית הידרו-אלכוהולית של פרחי Spartium junceum. המחקר הציע שתמצית הפרחים הייתה יעילה בהשראת הזדקנות בתאי B16-F10, מה שמוביל לדיכוי צמיחת התאים והמלנוגנזה, ובכך היא יכולה להפעיל פעילות אנטי-סרטנית פוטנציאלית [5].

5. פרסומים העוסקים בקו התאים B16-F10

להלן מספר פרסומים מחקריים משמעותיים המציגים את קו התאים B16-F10 של מלנומה:

השפעה אנטי-מלנוגנית של תמצית אתנולית של Sorghum bicolor על מלנוגנזה המושרה על ידי IBMX בתאי מלנומה B16/F10

מחקר זה פורסם בכתב העת Nutrients (2020). המחקר הציע כי לתמצית אתנולית של Sorghum bicolor יש השפעה אנטי-מלנוגנית בתאי מלנומה B16F10 בעור.

קלציטריול מעכב התרבות ועשוי לגרום לאפופטוזיס בתאי B16–F10

המחקר שפורסם ב-Medical Science Monitor Basic Research (2022) הציע כי התרופה קלציטריול מפעילה השפעות אנטי-סרטניות בתאי מלנומה B16-F10 על ידי עיכוב התרבות וגירוי אפופטוזיס.

ההשפעה הפרו-חמצונית של קרדולים מעורבת בפעילות הציטוטוקסית שלהם כנגד תאי מלנומה B16–F10 של עכברים

מאמר זה פורסם ב-Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). הממצאים חשפו כי קרדולים, שומנים רזורצינוליים, מפעילים ציטוטוקסיות עזה על קו התאים B16-F10.

תמצית קליפת ג'ינקו בילובה מעכבת את הגרורות של מלנומה מסוג B16-F10 באמצעות מסלול האיתות PI3K/akt/NF-κB/MMP-9

המחקר שפורסם ב-Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) בחן את הפוטנציאל האנטי-גרורתי של תמצית הקליפה החיצונית של גינקו בילובה באמצעות תאי B16-F10.

תימוקינון גורם לאפופטוזיס בתאי מלנומה מסוג B16-F10 באמצעות עיכוב של p-STAT3 ומעכב את צמיחת הגידול במלנומה תוך-מוחית בעכברים...

מחקר זה, שפורסם ב-World Neurosurgery (2018), הציע כי תימוקינון יכול להוות טיפול יעיל נגד נגעים גרורתיים תוך-מוחיים, שכן הוא מדכא את צמיחת תאי B16-F10 ומעורר אפופטוזיס. 

משאבים עבור קו תאים B16-F10: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

תאי אנדותל B16F10 נמצאים בשימוש נרחב במחקר סרטן העור. להלן כמה משאבים מקוונים המסבירים את פרוטוקולי התרבית והטרנספקציה שלהם:

• טרנספקציה של תאי מלנומה B16F10: מדריך וידאו זה יכול לעזור לכם ללמוד את פרוטוקול הטרנספקציה לתאי B16-F10.
• טרנספקציה של B16-F10: מסמך זה מסביר את פרוטוקול הטרנספקציה של DNA במבחנה לתאי מלנומה בעור B16F10.

הקישור הבא מכיל את פרוטוקול תרבית התאים עבור תאי B16-F10:

• תת-תרבית B16-F10: אתר זה מכיל מידע מועיל על תאי הגידול של מלנומה B16F10. הוא כולל מצעי גידול, זמן הכפלה, תנאי תרבית ופרוטוקול לתת-תרבית תאים, וכן טיפול בתרבויות מוקפאות ופרוליפרטיביות.

מקורות

1. Poste, G., et al., Comparison of the metastatic properties of B16 melanoma clones isolated from cultured cell lines, subcutaneous tumors, and individual lung metastases. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
2. Nakamura, M., D. Ono, and S. Sugita, Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate Treatment Using a Tapered Microfluidic Device. Micromachines, 2019. 10(3): עמ' 207.
3. Danciu, C., et al., התנהגות ארבעה תתי-קווים שונים של תאי מלנומה עכבריים מסוג B16: עור C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): עמ' 73-80.
4. Liu, J., et al., ביטוי גבוה של CCR5 במלנומה משפר את המעבר האפיתליאלי-מזנכימלי ואת הגרורות באמצעות TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): עמ' 481-493.
5. Nanni, V., et al., תמצית הידרו-אלכוהולית של פרחי Spartium junceum L. מעכבת את הצמיחה ואת המלנוגנזה בתאי B16-F10 על ידי גרימת הזדקנות. Phytomedicine, 2018. 46: עמ' 1-10.