Μετάβαση στο περιεχόμενο
Hep-74.3A
Ιστός
Ήπαρ
Ασθένεια
Ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα
Συνώνυμα
Hep-74.3, HEP-74.3a, 74.3A, 74.3a

Έγγραφα

Hep-74.3A

Cell line · Αριθμός προϊόντος 400208

The Hep-74.3 hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C3H/He mouse strain. This cell line is characterized by its hep...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής
Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά ηπατώματος Hep-74.3 προέρχεται από όγκο του ήπατος ποντικού, συγκεκριμένα από το στέλεχος ποντικού C3H/He. Αυτή η κυτταρική σειρά χαρακτηρίζεται από την ηπατοκυτταρική της προέλευση, η οποία επιβεβαιώνεται μέσω της ανάλυσης πρωτεϊνών ενδιάμεσων νηματίων. Η Hep-74.3 εκφράζει τις απλές κερατίνες Κ8 και Κ18, οι οποίες είναι χαρακτηριστικές των φυσιολογικών ηπατικών κυττάρων, καθώς και τη βιμεντίνη και την κερατίνη Κ19 σε διαφορετικό βαθμό. Αυτά τα πρωτεϊνικά μοτίβα επιβεβαιώνουν την ηπατοκυτταρική φύση της κυτταρικής σειράς και την ταξινόμησή της ως ηπατώματος.

Η κυτταρική σειρά Hep-74.3 εμφανίζει κυρίως επιθηλιακή μορφολογία, γεγονός που αντανακλά την προέλευσή της από ηπατοκύτταρα. Αυτός ο μορφολογικός φαινότυπος συνάδει με το προφίλ έκφρασης των πρωτεϊνών της. Η ανάλυση δακτυλικού αποτυπώματος DNA της Hep-74.3 δεν αποκάλυψε σημαντικές δομικές ανωμαλίες, υποδεικνύοντας έναν βαθμό γονιδιωματικής σταθερότητας. Ωστόσο, παρατηρήθηκαν ορισμένες αλλαγές στις σχετικές εντάσεις συγκεκριμένων ζωνών με την αύξηση των αριθμών διέλευσης, γεγονός που υποδηλώνει μικρή γονιδιωματική μεταβλητότητα κατά τη διάρκεια παρατεταμένων περιόδων καλλιέργειας.

Παρά την απουσία ανιχνεύσιμων μεταλλάξεων p53 στους πρωτογενείς όγκους του ήπατος ποντικών, διαπιστώθηκαν εκτροπές σε ορισμένες σειρές ηπατωμάτων κατά τον in vitro πολλαπλασιασμό. Η κυτταρική σειρά Hep-74.3 αναλύθηκε για μεταλλάξεις στα γονίδια p53 και c-Ha-ras. Η απουσία ανιχνεύσιμων μεταλλάξεων στο γονίδιο p53 σε αυτή τη γραμμή κατά τη διάρκεια των πρώτων διαβάσεων υποδηλώνει ένα σταθερό γενετικό υπόβαθρο. Αυτή η κυτταρική σειρά χρησιμεύει ως πολύτιμο μοντέλο για τη μελέτη του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος, παρέχοντας πληροφορίες για τους κυτταρικούς και μοριακούς μηχανισμούς που διέπουν την καρκινογένεση του ήπατος.

Ιστός
Ήπαρ
Ασθένεια
Ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα
Συνώνυμα
  • Hep-74.3
  • HEP-74.3a
  • 74.3A
  • 74.3a

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Ποντίκι
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιοειδής
Ογκογόνος
Ναι, σε ποντίκια C3H/HE

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
Hep-74.3A (αριθμός καταλόγου Cytion 400208)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
10090
Κελλοσαύρος
CVCL_5773

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
Κερατίνη 8, Κερατίνη 18, Βιμεντίνη
Προφίλ μεταλλάξεων
P53 wt

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
Ham's F12, w: 1,0 mM σταθερή γλουταμίνη, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο, w: 1,1 g/L NaHCO3 (αριθμός άρθρου Cytion 820600a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
Κάθε 3 έως 5 ημέρες
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, τοποθετήστε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 x 104 κύτταρα/cm2 και αφήστε τα κύτταρα να αναρρώσουν από τη διαδικασία κατάψυξης και να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Φυλή / υποείδος
C57BL/6J
Ηλικία δωρητή
Ενηλίκων