Gå direkt till innehållet
Hep-74.3A
Vävnad
Lever
Sjukdom
Hepatocellulärt karcinom
Synonymer
Hep-74.3, HEP-74.3a, 74.3A, 74.3a

Hep-74.3A

Cell line · Produktnummer 400208

The Hep-74.3 hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C3H/He mouse strain. This cell line is characterized by its hep...

€800.00exkl. moms och frakt
Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

Hepatomcellinjen Hep-74.3 härrör från en levertumör från mus, specifikt från C3H/He-musstammen. Denna cellinje kännetecknas av sitt hepatocytiska ursprung, vilket bekräftas genom analys av intermediära filamentproteiner. Hep-74.3 uttrycker enkla keratiner K8 och K18, som är typiska för normala leverceller, samt vimentin och keratin K19 i varierande grad. Dessa proteinmönster bekräftar cellinjens hepatocytiska natur och dess klassificering som en hepatomlinje.

Hep-74.3-cellinjen uppvisar en övervägande epitelial morfologi, vilket återspeglar dess ursprung från hepatocyter. Denna morfologiska fenotyp överensstämmer med dess proteinuttrycksprofil. DNA-fingeravtrycksanalys av Hep-74.3 avslöjade inga större strukturella avvikelser, vilket tyder på en viss genomisk stabilitet. Vissa förändringar i de relativa intensiteterna för specifika band observerades dock med ökande passagenummer, vilket tyder på mindre genomisk variabilitet under längre odlingsperioder.

Trots att det inte fanns några påvisbara p53-mutationer i de primära levertumörerna hos möss, upptäcktes avvikelser i vissa hepatomlinjer under in vitro -förökning. Cellinjen Hep-74.3 analyserades med avseende på mutationer i generna p53 och c-Ha-ras. Avsaknaden av påvisbara mutationer i p53-genen i denna linje under tidiga passager tyder på en stabil genetisk bakgrund. Denna cellinje fungerar som en värdefull modell för att studera hepatocellulärt karcinom och ger insikter i de cellulära och molekylära mekanismer som ligger bakom tumöruppkomst i levern.

Vävnad
Lever
Sjukdom
Hepatocellulärt karcinom
Synonymer
  • Hep-74.3
  • HEP-74.3a
  • 74.3A
  • 74.3a

02Klassificering

Organism
Mus
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitelliknande
Tumörframkallande
Ja, i C3H/HE-möss

04Identifierare

Källa
Hep-74.3A (Cytion katalognummer 400208)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5773

05Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
Keratin 8, Keratin 18, Vimentin
Mutationsprofil
P53 wt

06Hantering och odling

Odlingsmedium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabilt glutamin, w: 1,0 mM natriumpyruvat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820600a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
1 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
Var 3:e till 5:e dag
Återhämtning efter upptining
Efter upptining, plattlägg cellerna med 5 x 104 celler/cm2 och låt cellerna återhämta sig från frysprocessen och fästa i minst 24 timmar.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Ras / underart
C57BL/6J
Donatorns ålder
Vuxen