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MEL-CLS-3
Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Melanoma amelanótico
Sinónimos
MRI-H-221

Documentos

MEL-CLS-3

Cell line · Número de producto 300293

Esta línea celular fue establecida en 1998 por CLS como línea celular in vitro a partir del xenoinjerto de melanoma humano MRI-H-221, procedente de un melanoma maligno primario.

€800.00sin impuestos ni gastos de envío

Personalización / Recomendaciones

En stock
Lote
Recomendado (lote más fresco)
1

01Información general

Descripción
Esta línea celular se estableció como línea celular in vitro a partir del xenoinjerto de melanoma humano MRI-H-221 de un melanoma maligno primario por CLS en 1998.
Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Melanoma amelanótico
Sinónimos
  • MRI-H-221

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Hombre
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Tumorigénico
Sí, en ratones desnudos

04Identificadores

Referencia
MEL-CLS-3 (número de catálogo 300293 de Cytion)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6002

05Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
P53(+)
Perfil mutacional
La mutación BRAF de tipo V600E se determinó mediante métodos basados en el ADN (secuenciación, RT-PCR) y métodos basados en proteínas (Western Blot)
Virus
Negativo para: Sendai, Ektromelie, Polyoma, K-Virus, Kilham, Reo 3, PVM, LCM, M.pulmonis, MVM, Theiler's GD VII, toolan's H-1, MHV, LDV, RCV/SDA, M-Adenovirus, B.piliformis

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM, w: 4,5 g/L de glucosa, w: 4 mM de L-glutamina, w: 3,7 g/L de NaHCO3, w: 1,0 mM de piruvato sódico (número de artículo de Cytion 820300a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
1 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
Cada 3 días
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 48 horas.
Descongelación y cultivo

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
Sin especificar
Origen étnico
Caucásico