Siirry sisältöön
WiDr
Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
WiDR, WIDR, WiDr/S, WiDr-TC, WiDrTC, LED-WiDr, Led-WiDr

Asiakirjat

WiDr

Cell line · Tuotenumero 300377

According to Chen TR, 1987, the WiDr cell line is a derivative of the HT-29 cell line. The cells are negative for Colon Antigen 3 expression, but positive fo...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja

Räätälöinti / Suositukset

Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
Chen TR:n (1987) mukaan WiDr-solulinja on HT-29-solulinjan johdannainen. Solut ovat negatiivisia Colon Antigen 3:n ilmentymisen suhteen, mutta positiivisia keratiinin suhteen immunoperoksidaasivärjäyksessä. Solut ekspressoivat p53-antigeenia (tuotetussa p53:ssa on G -> A -mutaatio, jonka seurauksena asemassa 273 on Arg -> His). WiDr-solujen kasvua estää tuumorinekroositekijä alfa (TNF-dihydrofolaattireduktaasin estäjät ovat erittäin sytotoksisia WiDr-soluille).
Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
  • WiDR
  • WIDR
  • WiDr/S
  • WiDr-TC
  • WiDrTC
  • LED-WiDr
  • Led-WiDr

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä

04Tunnisteet

Lähdeviite
WiDr (Cytionin luettelonumero 300377)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_2760

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
Epiderminen kasvutekijä (EGF)
Proteiinin ilmentyminen
CEA positiivinen
Antigeenin ilmentyminen
HLA A24, A32, B15, B18
Isoentsyymit
PGM1, 1-2, PGM3, 1-2, G6PD, B, ES-D, 1, PEP-D, 1, 6PGD, A
Tuotteet
Karsinoembryoninen antigeeni (CEA) 118 ng/106 solua/10 vrk, paksusuolen spesifinen antigeeni (CSAp), transformoiva kasvutekijä beeta, keratiini

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoosia, w: 2,5 mM L-glutamiinia, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaattia, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820400a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
1-2 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
44 vuotta