Pāriet uz saturu
HROC173
Audums
Colon ascendens, UICC IV
Slimība
Primārā adenokarcinoma, TNM stadija T4N2M1R2L0V gradings G3, Lk(n) +11, ∑ Lk(n) 29

Dokumenti

HROC173

Cell line · Preces numurs 300807

This is one cell line of a series of tumor cell lines which have been established by PD Dr. Michael Linnebacher from Primary CRC resection specimens since 2006.

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts
Šī ir viena no šūnu līnijām, kas ir viena no virknes audzēja šūnu līnijām, kuras kopš 2006. gada ir izveidojis Dr. Michael Linnebacher no primāro CRC rezekciju paraugiem.
Audums
Colon ascendens, UICC IV
Slimība
Primārā adenokarcinoma, TNM stadija T4N2M1R2L0V gradings G3, Lk(n) +11, ∑ Lk(n) 29

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, imunitāti nomācošām kailām pelēm
Ploidijas statuss
Aneuploīds
MSI statuss
MSS
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
29 stundas

04Identifikatori

Atsauce
HROC173 (Cytion kataloga numurs 300807)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1D15

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
PTEN
Mutāciju profils
K-Raswt, B-RAFwt, N-Raswt, H-Raswt, PIK3CAmut
Vīrusi
Nesatur cilvēka patogēnos vīrusus SV40, JC/BK, HBV, HCV, HIV.

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
2 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 3 līdz 5 dienām
Atgūšanās pēc atkusņa
Fast
Atkausēšana un kultivēšana

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
45 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis