HROG33 T0 M1

HROG33 T0 M1 es una línea celular de glioblastoma multiforme (GBM) humano primario establecida a partir de tejido tumoral recién extirpado de una paciente adulta con glioblastoma de grado IV según la clasificación de la OMS, localizado en la región occipitotemporal izquierda. La designación «T0» se refiere al tumor primario en el momento del diagnóstico inicial, y «M1» denota el modelo in vitro correspondiente derivado de esta muestra. La línea celular se generó como parte de un esfuerzo sistemático por establecer cultivos de GBM de pases ultrabajos a partir de material tumoral tanto fresco como criopreservado de manera vital, con el objetivo de preservar las características moleculares y funcionales específicas de cada paciente.

HROG33 T0 M1 presenta un crecimiento adherente con una morfología similar a la de los fibroblastos, típica de los cultivos primarios de GBM. Las células forman una monocapa y muestran una capacidad proliferativa constante in vitro. En el estudio comparativo de establecimiento, los cultivos emparejados derivados de tejido tumoral fresco y criopreservado no mostraron diferencias significativas en cuanto a morfología, cinética de crecimiento o respuesta a los fármacos. La caracterización inmunofenotípica de líneas celulares HROG representativas demostró la expresión de marcadores asociados al linaje neural, incluyendo la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), la nestina y la vimentina, lo cual concuerda con un fenotipo derivado del glioma. Los análisis moleculares realizados en toda la serie de HROG incluyeron la evaluación de la metilación del promotor de MGMT, la amplificación de EGFR y el estado mutacional de TP53, IDH1/2, KRAS y BRAF, lo que respalda la retención de características genómicas específicas del tumor en los cultivos establecidos.

Desde el punto de vista funcional, se ha evaluado la sensibilidad de las líneas celulares derivadas de HROG a los tratamientos de referencia y a los agentes en fase de investigación utilizados en la terapia del GBM, incluyendo temozolomida, BCNU (carmustina), vincristina e imatinib. Los perfiles de respuesta a los fármacos de los pares de líneas celulares emparejadas indicaron un comportamiento farmacológico estable y reproducible tras la criopreservación del tejido. Como modelo de GBM primario de muy bajo número de pases, HROG33 T0 M1 ofrece un sistema in vitro clínicamente relevante para investigar la biología del glioblastoma, predecir la respuesta terapéutica y estudiar la heterogeneidad tumoral específica de cada paciente, al tiempo que minimiza los artefactos asociados con la adaptación continua a largo plazo de las líneas celulares.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.