Skip to content
HROG33 T0 M1
Tissue
מוח
Disease
גליובלסטומה

Documents

HROG33 T0 M1

Cell line · Product number 300878

HROG33 T0 M1 is a primary human glioblastoma multiforme (GBM) cell line established from freshly resected tumor tissue of an adult female patient with WHO...

US$800.00excl. tax and shipping
Low stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

HROG33 T0 M1 הוא קו תאים ראשוני של גליובלסטומה מולטיפורמה (GBM) אנושית, שהוקם מרקמת גידול שנותחה זה עתה מחולה בוגרת עם גליובלסטומה בדרגה IV של ארגון הבריאות העולמי (WHO), הממוקמת באזור הקודקוד-זמני השמאלי. הסימון "T0" מתייחס לגידול הראשוני באבחון הראשוני, ו-"M1" מציין את המודל המתאים במבחנה שנוצר מדגימה זו. קו התאים נוצר כחלק ממאמץ שיטתי להקמת תרבויות GBM בעלות מעבר נמוך במיוחד מחומר גידול טרי ומחומר גידול שהוקפא בקירור, במטרה לשמר את המאפיינים המולקולריים והתפקודיים הספציפיים למטופל.

HROG33 T0 M1 מציג צמיחה דבקה עם מורפולוגיה דמוית פיברובלסט האופיינית לתרבויות GBM ראשוניות. התאים יוצרים שכבה חד-תאית ומפגינים יכולת התרבות עקבית במבחנה. במחקר ההשוואתי, תרבויות זוגות שמקורן ברקמת גידול טרייה וברקמת גידול שהוקפאה לא הראו הבדלים משמעותיים במורפולוגיה, בקינטיקה של הצמיחה או בתגובה לתרופות. אפיון אימונופנוטיפי של קווי תאים HROG מייצגים הדגים ביטוי של סמנים הקשורים לשושלת עצבית, כולל חלבון חומצי פיברילרי גליאלי (GFAP), נסטין ווימנטין, בהתאם לפנוטיפ שמקורו בגידול גליומה. הניתוחים המולקולריים שבוצעו בסדרת HROG כללו הערכה של מתילציה של מקדם MGMT, הגברה של EGFR ומצב מוטציוני של TP53, IDH1/2, KRAS ו-BRAF, התומכים בשימור מאפיינים גנומיים ספציפיים לגידול בתרבויות שהוקמו.

מבחינה תפקודית, קווי תאים שמקורם ב-HROG נבדקו על רגישותם לטיפול הסטנדרטי ולחומרים מחקריים המשמשים בטיפול ב-GBM, כולל טמוזולומיד, BCNU (קרמוסטין), וינקריסטין ואימטיניב. פרופילי התגובה לתרופות של זוגות קווי תאים תואמים הצביעו על התנהגות פרמקולוגית יציבה וניתנת לשחזור לאחר שימור רקמות בהקפאה. כמודל GBM ראשוני בעל מעבר נמוך במיוחד, HROG33 T0 M1 מספק מערכת in vitro רלוונטית קלינית לחקר הביולוגיה של גליובלסטומה, חיזוי התגובה הטיפולית והטרוגניות של הגידול הספציפית למטופל, תוך צמצום מינימלי של תופעות לוואי הקשורות להתאמת קווי תאים רציפה לטווח ארוך.

Tissue
מוח
Disease
גליובלסטומה

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
HROG33 T0 M1 (מספר קטלוגי Cytion 300878)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_4U48

04Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L גלוקוז, w: 2.5 mM L-גלוטמין, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM נתרן פירובט, w: 1.2 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי Cytion 820400a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים ב-50% מדיום בסיסי + 40% FBS + 10% DMSO, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקירור.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

06Donor

Donor age
46 שנים
Ethnicity
קווקזי