תאי DLD-1: יישומים ותובנות בנוגע לתאי DLD-1 במחקר סרטן המעי הגס

DLD-1 הוא קו תאים של קרצינומה של המעי הגס האנושי הנמצא בשימוש נרחב במחקר הסרטן. זהו כלי חשוב לחקר היבטים שונים של סרטן המעי הגס, כולל התפתחות הגידול, התקדמותו, המנגנונים המולקולריים הבסיסיים ותגובתו לסוכנים טיפוליים. לפיכך, DLD-1 הוא כלי מצוין להבנת המחלה ולפיתוח אסטרטגיות טיפול פוטנציאליות.

מאפיינים כלליים ומקור תאי DLD-1

לפני שמתחילים לעבוד עם קו תאים, הדבר הראשון שחוקר צריך לבדוק הוא מקורו ותכונותיו הכלליות. חלק זה של המאמר הוא מבוא מפורט לקו התאים DLD-1. הוא יכסה את השאלות הנפוצות הבאות: מהן תאי DLD-1? מהו קו תאי סרטן DLD-1? מהן המוטציות בקו התאים DLD-1? מהו גודלו של תא DLD-1? מהו המורפולוגיה של תאי DLD-1?

• DLD-1, קו תאים של סרטן המעי הגס, מקורו במעי הגס של מטופל בן 67 הסובל מאדנוקרצינומה של המעי הגס. הוא בודד על ידי D.L. Dexter ועמיתיו בין השנים 1977-1979. קו תאים זה חולק את אותו מקור עם קווי התאים HCT-8, HCT-15 ו-HRT-18.
• כמו בסרטן המעי הגס, לתאי DLD-1 יש פנוטיפ של חוסר יציבות במיקרו-סאטליטים [1].
• המוטציות ב-DLD-1 כוללות KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ו-BRCA2. בשל מצב ה-P53 ב-DLD-1, המוטציות ב-DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 ו-DLD-1 KRAS, תאים אלה נחשבים לאידיאליים למחקרי סרטן.
• לתאים אלה מורפולוגיה דמוית אפיתל.
• גודל קו התאים DLD-1 הוא כ-15 מיקרומטר.
• קו התאים DLD-1 של סרטן המעי הגס האנושי בעל קריוטיפ פסאודו-דיפלואידי. כ-86% מהתאים בעלי מספר כרומוזומים מודאלי של 46. עם זאת, פוליפלואידיות עשויה להתקיים גם ב-17.1% מאוכלוסיית התאים.

הדמיה תלת-ממדית של קולונוגרפיה ממוחשבת או סריקת CT של המעי הגס המוצגת על המסך לצורך אבחון סרטן המעי הגס, סרטן המעי הגס וסרטן המעי הגס והרקטום.

מידע על גידול קו התאים DLD-1

לפני שתתחילו בגידול כל קו תאים, עליכם להכיר את דרישות הגידול הבסיסיות שלו. סעיף זה ידגיש את הנקודות החשובות שעליכם ללמוד לפני שתתחילו לעבוד עם קו התאים DLD-1. זה כולל: מהו זמן הכפלה של DLD-1? מהו מצע התרבית של DLD-1? מהי צפיפות הזריעה של תאי DLD-1? כיצד מגדלים תאי DLD-1?

נקודות מרכזיות לגידול תאי DLD-1

זמן הכפלה:

זמן הכפלה של DLD-1 הוא כ-15 שעות.

תאים דבקים או בתמיסה:

DLD-1 הוא קו תאים דבקים של סרטן המעי הגס האנושי. התאים גדלים לשכבה אחת.

צפיפות זריעה:

תאי DLD-1 נזרעים בצפיפות של 1 עד 2 x 10⁴ תאים/סמ"^ר. תאים דבקים נשטפים בתמיסת מלח פוספט (PBS) 1x ומוחזקים באינקובטור עם תמיסת מעבר (Accutase) בטמפרטורת החדר. לאחר דגירה של 8 עד 10 דקות, התאים המנותקים מתווספים למדיום התרבית ונצנטריפוגים. לאחר מכן, משקע התאים מושעה בזהירות, והתאים מוזגים לכלי תרבית חדשים המכילים מדיום גידול.

מדיום גידול:

לגידול תאי DLD-1 משתמשים ב-RPMI 1640 עם תוספים למדיום, כולל 10% סרום עגלי (FBS), 2.1 mM גלוטמין יציב ו-2.0 g/L NaHCO3. יש להחליף את המדיום 2-3 פעמים בשבוע. 

תנאי גידול:

תרבויות DLD-1 נשמרות באינקובטור לח בטמפרטורה של 37°C עם אספקת CO2 של 5%.

אחסון: 

תאי DLD-1 מאוחסנים בשלב האדי של חנקן נוזלי או במקפיא חשמלי בטמפרטורה נמוכה במיוחד (בטמפרטורה הנמוכה מ-150°C).

תהליך הקפאה ומצע:

ניתן להשתמש במדיום הקפאה CM-1 או CM-ACF להקפאת תאי DLD-1. מומלץ תמיד לבצע תהליך הקפאה איטי, המאפשר ירידה הדרגתית של 1°C בטמפרטורה, ובכך למנוע הלם לתאים ולהגן על חיוניותם.

תהליך ההפשרה:

תאים קפואים מופשרים באמבט מים המכוון מראש לטמפרטורה של 37 °C למשך 40 עד 60 שניות, עד שנותר גוש קרח קטן. לאחר מכן, התאים מועברים למדיום טרי ונצנטריפוגים. שלב זה נחוץ כדי להסיר את מרכיבי מדיום ההקפאה מהתאים. התאים שנאספו מושעים מחדש במדיום גידול ומועברים לצלחת גידול.

רמת בטיחות ביולוגית:

קו התאים DLD-1 נשמר במעבדות ברמת בטיחות ביולוגית 1.

תאי DLD-1 שנצפו בהגדלה של פי 10 ופי 20, המראים את המורפולוגיה האפיתלית האופיינית להם.

קו התאים DLD-1: יתרונות ומגבלות

בחלק זה של המאמר נסקור את היתרונות והמגבלות של קו התאים DLD-1 לסרטן המעי הגס.

יתרונות

היתרונות העיקריים של קו התאים DLD-1 הם:

מודל לסרטן המעי הגס

תאי DLD-1 נושאים מוטציות הנפוצות בקרב חולי סרטן המעי הגס, כגון מוטציית DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA ו-DLD-1 BRCA2. רלוונטיות זו הופכת אותם למודל תאי מתאים קלינית לחקר מחלה זו.

קו תאים ממאיר

תאי DLD-1 הם תאים ממאירים. הם עלולים לגרום לגידולים כאשר מוזרקים לעכברי ניוד. לכן, חוקרים משתמשים בתאים אלה לפיתוח מודלים של גידולים בהשתלה בין-מינית, המסייעים לחקור את היווצרות הגידולים, התפתחותם והתקדמותם in vivo.

 

מגבלות

המגבלות הקשורות לתאי DLD-1 הן:

הטרוגניות

אוכלוסיות תאי סרטן המעי הגס DLD-1 מפגינות הטרוגניות גנטית ופנוטיפית. הדבר עשוי להשפיע על יכולת ההכללה של תוצאות המחקר.

 

יישומים מחקריים של קו תאי DLD-1

קו התאים DLD-1 מציע מגוון יישומים במחקר הסרטן. בסעיף זה נדון בכמה יישומים בולטים.

• מחקר סרטן: תאי DLD-1 משמשים כמודל in vitro חשוב להבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הצמיחה, ההתפתחות וההתקדמות של סרטן המעי הגס. בנוסף, הם משמשים לחקר ביטוי גנים, מסלולי איתות והשפעת מוטציות גנטיות ספציפיות על התנהגות תאי הסרטן. מחקר שנערך בשנת 2022 מצא כי מסלול האיתות PI3K/Akt/YAP מווסת את הנדידה והפלישה של קו התאים DLD-1 של סרטן המעי הגס [2].
• פיתוח תרופות: חוקרים משתמשים בקו התאים DLD-1 כדי לבדוק את יעילותן של תרופות נגד סרטן ולהעריך את הפוטנציאל שלהן לטיפול בסרטן המעי הגס. הדבר מסייע בפיתוח תרופות ובמאבק יעיל במחלה. מחקר שנערך בשנת 2022 השתמש בקו התאים הסרטניים DLD-1 ובחן את הפעילות האנטי-סרטנית של פתלוציאנינים מסיליקון, תרכובות שנוצרו בסינתזה כימית. תוצאות המחקר הצביעו על תרכובות אלו כעל חומרים אנטי-סרטניים חזקים [3]. מעניין לציין שמחקר אחר מצא פוטנציאל אנטי-סרטני בחלבון P8 שמקורו בפרוביוטיקה, תוך שימוש בתאי DLD-1 [4].

5. פרסומים מחקריים בנושא תאי DLD-1

סעיף זה יציג מספר פרסומים מעניינים ומצוטטים בתדירות גבוהה העוסקים בקו התאים DLD-1 של קרצינומה במעי הגס.

הגליקוזיד הפלבנואידי דיוסמין גורם לאפופטוזיס ולעצירת מחזור התא בקו תאי סרטן המעי הגס האנושי DLD-1

פרסום זה מופיע בכתב העת Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). המחקר מצא כי דיוסמין, פלבנואיד, גרם למוות תאי בתאי DLD-1 וגם גרם לעצירת מחזור התא; לפיכך, הוא עשוי להיות חומר אנטי-סרטני פוטנציאלי.

ברומלין מדכא ביעילות סרטן המעי הגס עם מוטציה ב-Kras על ידי גירוי פרופטוזיס

מחקר זה, שפורסם ב-Animal Cells and Systems (2018), הציע כי ברומלין, אנזים, מדכא את המוטציה DLD-1 KRAS ומפעיל השפעות ציטוטוקסיות חזקות.

ברגפטן גורם לעצירת G1 ולשרשרת פרו-אפופטוטית בתאי סרטן המעי הגס הקשורים לציר p53/p21/PTEN

מאמר מחקר זה פורסם בשנת 2019 בכתב העת "Environmental Toxicology". המחקר בחן את ההשפעות האנטי-גידוליות של תרכובת טבעית, ברגפטן, באמצעות קו תאים של סרטן המעי הגס DLD-1.

ייצור ידידותי לסביבה של קומפוזיט ננו-כורכומין/ננו-תחמוצת ברזל: פעילות אנטי-סרטנית משופרת במבחנה נגד קווי תאים DLD-1

מחקר זה, שפורסם בכתב העת Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023), מצא כי קומפוזיטים ננו-מטריים של כורכומין/תחמוצת ברזל יעילים ביותר נגד תאי סרטן המעי הגס DLD-1.

אפיברסינוליד מפעיל את AKT כדי לעורר אוטופגיה עם חילוף חומרים של פוליאמין בקווי תאי סרטן המעי הגס SW480 ו-DLD-1

מאמר מחקר זה פורסם בשנת 2020 בכתב העת Turkish Journal of Biology. המחקר הציע כי מוצר טבעי, הפעלה של AKT בתיווך אפיברסינוליד בתאי DLD-1, מגרה אוטופגיה הקשורה לפוליאמינים.

משאבים עבור קו התאים DLD-1: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן מספר משאבים בנושא תאי DLD-1:

• טרנספקציה של DLD-1: מדריך וידאו זה הוא מדריך מקיף על פרוטוקול הטרנספקציה של DLD-1 במבחנה.
• תאי DLD-1: מאמר מחקר זה מתאר בקצרה את דרישות תרבית תאי DLD-1, כולל מצעים ותנאי תרבית. בנוסף, הוא עשוי לסייע לכם ללמוד את פרוטוקול הטרנספקציה המשמש לתאי DLD-1.

הקישורים הבאים מכילים את הפרוטוקול לגידול DLD-1, תאי סרטן המעי הגס שמקורם בבני אדם.

• קו תאים DLD-1: אתר זה מספק מידע בסיסי על קו התאים DLD-1. הוא יסייע לכם ללמוד פרוטוקולים שונים לגידול תאי DLD-1, כולל תרבית משנה וטיפול בתרבויות שהוקפאו ובתאים מתרבים.

מקורות

1. Gavrilas, L.I., et al., גנים פרו-אפופטוטיים כיעדים חדשים לטיפולים בודדים ומשולבים עם רזברטרול וכורכומין בסרטן המעי הגס. Food & function, 2019. 10(6): עמ' 3717-3726.
2. Takeda, T., et al., איתות PI3K/Akt/YAP מקדם נדידה וחדירה של תאי סרטן המעי הגס DLD‑1. Oncology Letters, 2022. 23(4): עמ' 1-9.
3. Farajzadeh, N., et al., פעילות אנטי-סרטנית של פתלוציאנינים סיליקון חדשים כנגד קו תאי אדנוקרצינומה של המעי הגס (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): עמ' 19863-19873.
4. An, B.C., et al., תפקידי החלבון P8 שמקורו בפרוביוטיקה במלחמה בסרטן בקו תאי סרטן המעי הגס DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): עמ' 9857.