Células DLD-1: Aplicações e insights sobre as células DLD-1 na pesquisa do câncer colorretal

A DLD-1 é uma linhagem celular de carcinoma colorretal humano comumente utilizada na pesquisa sobre o câncer. É uma ferramenta valiosa para investigar diversos aspectos do câncer de cólon, incluindo o desenvolvimento e a progressão do tumor, os mecanismos moleculares subjacentes e a resposta a agentes terapêuticos. Assim, a DLD-1 é fundamental para a compreensão da doença e o desenvolvimento de possíveis estratégias de tratamento.

Características gerais e origem das células DLD-1

Antes de trabalhar com uma linha celular, a primeira consideração de um pesquisador é sua origem e suas características gerais. Esta seção do artigo é uma introdução detalhada à linha celular DLD-1. Ela abordará as seguintes perguntas frequentes: O que são as células DLD-1? O que é uma linha celular cancerosa DLD-1? Quais são as mutações da linha celular DLD-1? Qual é o tamanho de uma célula DLD-1? Qual é a morfologia das células DLD-1?

• A DLD-1, uma linha celular de câncer de cólon, teve origem no intestino grosso de um paciente do sexo masculino de 67 anos com adenocarcinoma colorretal. Ela foi isolada por D.L. Dexter e colegas entre 1977 e 1979. Essa linhagem celular compartilha a mesma origem das linhagens celulares HCT-8, HCT-15 e HRT-18.
• Assim como os cânceres colorretais, as células DLD-1 apresentam um fenótipo de instabilidade de microssatélites [1].
• As mutações da DLD-1 incluem KRAS, P53, BRAF, BRCA1 e BRCA2. Devido ao status de P53 da DLD-1, bem como às mutações BRCA, BRCA2 e KRAS da DLD-1, essas células são consideradas ideais para estudos sobre câncer.
• Essas células apresentam uma morfologia de tipo epitelial.
• O tamanho da linhagem celular DLD-1 é de aproximadamente 15 µm.
• A linhagem celular de câncer colorretal humano DLD-1 possui um cariótipo pseudodiplóide. Cerca de 86% das células apresentam um número modal de cromossomos igual a 46. No entanto, também pode haver poliploidia em 17,1% da população celular.

Renderização 3D de uma colonografia por tomografia computadorizada (TC) ou tomografia computadorizada do intestino grosso exibida na tela para o diagnóstico de câncer do intestino grosso, câncer de cólon e câncer colorretal.

Informações sobre o cultivo da linha celular DLD-1

Antes de cultivar qualquer linha celular, é necessário conhecer seus requisitos básicos de cultura celular. Esta seção destacará os pontos importantes que você deve aprender antes de iniciar o trabalho com a linha celular DLD-1. Isso inclui: Qual é o tempo de duplicação da DLD-1? Qual é o meio de cultura da DLD-1? Qual é a densidade de semeadura das células DLD-1? Como se cultiva células DLD-1?

Pontos-chave para a cultura de células DLD-1

Tempo de duplicação:

O tempo de duplicação da DLD-1 é de aproximadamente 15 horas.

Adesiva ou em suspensão:

A DLD-1 é uma linhagem celular aderente de câncer de cólon humano. As células crescem formando monocamadas.

Densidade de semeadura:

As células DLD-1 são semeadas a uma densidade de 1 a 2 x 10^⁴ células/cm². As células aderentes são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) 1x e incubadas com solução de passagem (Accutase) à temperatura ambiente. Após incubação de 8 a 10 minutos, as células desprendidas são adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas. O sedimento celular é então cuidadosamente ressuspenso, e as células são transferidas para novos recipientes de cultura contendo meio de crescimento.

Meio de crescimento:

Utiliza-se RPMI 1640 com suplementos de meio, incluindo 10% de soro fetal bovino (FBS), 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ para a cultura de células DLD-1. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana. 

Condições de crescimento:

As culturas de DLD-1 são mantidas em uma incubadora umidificada a 37 °C com um suprimento de 5% de CO₂.

Armazenamento: 

As células DLD-1 são armazenadas na fase de vapor de nitrogênio líquido ou em um freezer elétrico de temperatura ultrabaixa (a temperatura inferior a -150 °C).

Processo de congelamento e meio:

Os meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF podem ser utilizados para congelar as células DLD-1. Recomenda-se sempre um processo de congelamento lento, permitindo uma redução gradual da temperatura de 1 °C, evitando assim o choque térmico nas células e protegendo sua viabilidade.

Processo de descongelamento:

As células congeladas são descongeladas em banho-maria pré-ajustado a 37 °C por 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. Em seguida, as células são adicionadas a um meio fresco e centrifugadas. Essa etapa é necessária para remover os componentes do meio de congelamento das células. As células coletadas são ressuspensas em um meio de crescimento e transferidas para o frasco para cultivo.

Nível de biossegurança:

A linhagem celular DLD-1 é mantida em laboratórios de nível de biossegurança 1.

Células DLD-1 observadas com ampliação de 10x e 20x, revelando sua morfologia epitelial característica.

Linha celular DLD-1: Vantagens e limitações

Nesta seção do artigo, analisaremos as vantagens e limitações da linha celular DLD-1 de câncer de cólon.

Vantagens

As principais vantagens da linha celular DLD-1 são:

Modelo de câncer colorretal

As células DLD-1 apresentam mutações comumente encontradas em pacientes com câncer colorretal, como a mutação KRAS na DLD-1, a mutação BRCA na DLD-1 e a mutação BRCA2 na DLD-1. Essa relevância as torna um modelo celular clinicamente adequado para o estudo dessa doença.

Linha celular tumorigênica

As células DLD-1 são tumorigênicas. Elas podem causar tumores quando injetadas em camundongos nude. Portanto, os pesquisadores utilizam essas células para desenvolver modelos tumorais de xenoenxerto que auxiliam na investigação da formação, do desenvolvimento e da progressão do tumor in vivo.

 

Limitações

As limitações associadas às células DLD-1 são:

Heterogeneidade

As populações de células DLD-1 de câncer de cólon apresentam heterogeneidade genética e fenotípica. Isso pode influenciar a generalização dos resultados da pesquisa.

 

Aplicações de pesquisa da linhagem celular DLD-1

A linhagem celular DLD-1 oferece uma variedade de aplicações na pesquisa sobre câncer. Algumas aplicações de destaque são discutidas nesta seção.

• Estudo do câncer: as células DLD-1 servem como um valioso modelo in vitro para a compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes ao crescimento, desenvolvimento e progressão do câncer colorretal. Além disso, são utilizadas para estudar a expressão gênica, as vias de sinalização e a influência de mutações genéticas específicas no comportamento das células cancerosas. Uma pesquisa realizada em 2022 observou que a cascata de sinalização PI3K/Akt/YAP regula a migração e a invasão da linha celular DLD-1 de câncer colorretal [2].
• Desenvolvimento de medicamentos: Pesquisadores utilizam a linhagem celular DLD-1 para testar a eficácia de medicamentos anticâncer e avaliar seu potencial no tratamento do câncer de cólon. Isso auxilia no desenvolvimento de medicamentos e no combate eficiente à doença. Um estudo realizado em 2022 utilizou a linhagem de células cancerosas DLD-1 e explorou a atividade anticâncer das ftalocianinas de silício, compostos sintetizados quimicamente. Os resultados do estudo sugeriram que esses compostos são potentes agentes anticâncer [3]. Curiosamente, outra pesquisa identificou o potencial anticâncer de uma proteína P8 derivada de probióticos utilizando células DLD-1 [4].

5. Publicações científicas sobre as células DLD-1

Esta seção destacará algumas publicações interessantes e frequentemente citadas que abordam a linhagem celular DLD-1 de carcinoma de cólon.

O glicosídeo flavonóide diosmina induz a apoptose e a parada do ciclo celular na linhagem celular DLD-1 de câncer de cólon humano

Esta publicação consta do Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). O estudo constatou que a diosmina, um flavonóide, induziu a morte celular nas células DLD-1 e também causou a parada do ciclo celular; portanto, pode ser um potencial agente anticâncer.

A bromelaína suprime eficazmente o câncer colorretal com mutação no gene Kras ao estimular a ferroptose

Este estudo, publicado na revista *Animal Cells and Systems* (2018), propôs que a bromelaína, uma enzima, reprime a mutação KRAS na linha DLD-1 e exerce potentes efeitos citotóxicos.

O bergapteno induz a parada no ciclo celular na fase G1 e a cascata pró-apoptótica em células de câncer colorretal, associando-se ao eixo p53/p21/PTEN

Este artigo de pesquisa foi publicado em 2019 na revista “Environmental Toxicology”. O estudo explorou os efeitos antitumorais de um composto natural, o bergapteno, utilizando uma linhagem celular colorretal DLD-1.

Fabricação ecologicamente correta de compósito de nanocurcumina/nanoóxido de ferro: atividade anticâncer in vitro aprimorada contra linhagens celulares DLD-1

Este estudo, publicado no “Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials” (2023), constatou que os nanocompósitos de curcumina/óxido de ferro são altamente eficazes contra células de câncer colorretal DLD-1.

A epibrassinolida ativa a AKT para desencadear a autofagia com metabolismo de poliaminas nas linhagens celulares de câncer de cólon SW480 e DLD-1

Este artigo de pesquisa foi publicado em 2020 no Turkish Journal of Biology. O estudo propôs que um produto natural, a epibrassinolida, ao ativar a AKT nas células DLD-1, estimula a autofagia relacionada às poliaminas.

Recursos para a linhagem celular DLD-1: protocolos, vídeos e muito mais

A seguir, apresentamos alguns recursos sobre as células DLD-1:

• Transfecção de DLD-1: este tutorial em vídeo é um guia abrangente sobre o protocolo de transfecção in vitro de DLD-1.
• Células DLD-1: este artigo científico descreve resumidamente os requisitos para o cultivo de células DLD-1, incluindo meios de cultura e condições de cultivo. Além disso, ele pode ajudar você a aprender o protocolo de transfecção utilizado para células DLD-1.

Os links a seguir contêm o protocolo para o cultivo de DLD-1, células de câncer de cólon derivadas de humanos.

• Linha celular DLD-1: Este site fornece informações básicas sobre a linha celular DLD-1. Ele ajudará você a conhecer diferentes protocolos de cultura de células DLD-1, incluindo subcultura e manuseio de culturas criopreservadas e em proliferação.

Referências

1. Gavrilas, L.I., et al., Genes pró-apoptóticos como novos alvos para tratamentos isolados e combinados com resveratrol e curcumina no câncer colorretal. Food & Function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
2. Takeda, T., et al., A via de sinalização PI3K/Akt/YAP promove a migração e a invasão de células de câncer colorretal DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
3. Farajzadeh, N., et al., Atividade anticâncer de novas ftalocianinas de silício contra a linhagem celular de adenocarcinoma colorretal (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
4. An, B.C., et al., Papéis anticâncer da proteína P8 derivada de probióticos na linhagem celular de câncer colorretal DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.