תאי Hep3B: מחקר וגילוי בתחום קרצינומה של תאי הכבד

HEP3B הוא קו תאים של קרצינומה הפטוצלולרית שמקורו בבני אדם. הוא נמצא בשימוש נרחב במחקר על רעילות כבדית ומטבוליזם של תרופות. יעילות הטרנספקציה של HEP3B היא משמעותית; לכן, תאים אלה משמשים בדרך כלל לחקר התפתחות סרטן הכבד, התקדמותו והתערבויות טיפוליות. מאמר זה מכסה את כל המידע הדרוש אודות קו התאים HEP3B כדי לסייע לכם בעבודה עמו. בעיקר, הוא יכלול:

1. מאפיינים כלליים ומקור תאי HEP3B
2. מידע על גידול קו תאי HEP3B
3. קו תאים HEP3B: יתרונות ומגבלות
4. יישומים של תאי HEP3B במחקר
5. פרסומים על קו תאי HEP3B
6. משאבים עבור קו תאי HEP3B: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

מאפיינים כלליים ומקור תאי HEP3B

המידע העיקרי הדרוש לכם על קו תאים הוא מקורו ומאפייניו הכלליים. מידע זה יכול לעזור לכם להחליט על השימוש בו במחקר שלכם ולסייע לכם בעבודה עמו. חלק זה של המאמר מכסה את כל המידע החיוני על מקורם ומאפייניהם של תאי HEP3B. כאן תלמדו: מהו קו תאים Hep 3B? מהו מקורם של תאי Hep3B? מהו המורפולוגיה של תאי HEP3B?

• HEP3B, קו תאים רציף של הפטומה אנושית, מקורו ברקמת הכבד של ילד אפריקאי בן 8 הסובל מסרטן הכבד (HCC). הוא הוקם על ידי אדן ועמיתיו בשנת 1979 במעבדתה של ברברה ב. נואלס, במכון וויסטאר, פילדלפיה, ארה"ב [1]. 
• בתאי HEP3B יש שילוב של הגנום של נגיף הפטיטיס B (HBV) בכרומוזום שלהם.
• תאי קרצינומה של הפטוציטים הללו מציגים מורפולוגיה אפיתלית.
• לתאי HEP3B מספר כרומוזומים מודאלי של 60. בניגוד ל-HepG2, אין להם כרומוזום 1 מסודר מחדש.

מה ההבדל בין HepG2 ל-Hep3B?

HepG2 ו-HEP3B נבדלים במספר הכרומוזומים לכל תא. HEP3B מכיל 60 כרומוזומים, בעוד שתאי HepG2 מכילים בממוצע 55 כרומוזומים. יתר על כן, HepG2 אינו ממאיר ושלילי להפטיטיס B, בעוד ש-HEP3B הוא ממאיר וחיובי ל-HBV.

קרצינומה של הכבד בהגדלה גבוהה תחת המיקרוסקופ.

מידע על גידול קו התאים HEP3B

ידע על תנאי התרבית של קו תאים יכול להקל עליכם את העבודה. סעיף זה מכסה את כל הנקודות המרכזיות בתרבית קו התאים HEP3B HBV, כולל: מהו זמן הכפלה של תאי Hep3B? מה הם תנאי התרבית של HEP3B? כיצד מתרבים תאי HEP3B HCC?

נקודות מרכזיות לגידול תאי HEP3B

זמן הכפלה:

זמן הכפלה של תאי HEP3B הוא כ-36 שעות.

דבקים או בתמיסה:

קו תאים זה של הפטומה הוא צמוד.

יחס חלוקה:

תאי HEP3B עוברים תרבית משנה ביחס של 1:2 עד 1:4. תאי HEP3B דבקים נשטפים ב-1 x PBS ולאחר מכן עוברים אינקובציה עם תמיסת פירוק Accutase. לאחר 8 עד 10 דקות, מוסיפים מדיום טרי, והתאים עוברים צנטריפוגה. לאחר מכן, התאים שנאספו מושעים בזהירות ומוזגים לבקבוקים המכילים מדיום תרבית ביחס חלוקה מומלץ.

מדיום גידול:

לגידול תאי HEP3B משתמשים במדיום EMEM המכיל 10% FBS, 2.2 g/L NaHCO3, 2 mM L-Glutamine ו-Earle's Balanced Salt Solution (EBSS).

תנאי גידול: 

תאי HEP3B מתורבתים באינקובטור לח ב-37°C עם אספקה רציפה של 5% CO2.

אחסון: 

תאי HEP3B קפואים מאוחסנים בטמפרטורה הנמוכה מ-150°C במקפיא חשמלי או בשלב האדי של חנקן נוזלי.

תהליך הקפאה ומדיום:

המדיום המומלץ להקפאת תאי HEP3B הוא CM-1 או CM-ACF. התאים מוקפאים בתהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה של 1°C בלבד בטמפרטורה לדקה, כדי לשמור על חיוניות התאים.

תהליך ההפשרה:

תאים קפואים מופשרים באמבט מים המכוון מראש לטמפרטורה של 37°C למשך 40 עד 60 שניות. לאחר מכן, תאים אלה מועברים למדיום גידול טרי ומצנטריפוגים כדי להסיר את מרכיבי מדיום ההקפאה. התאים שנאספו מושעים מחדש ומועברים לצלחות חדשות לצורך גידול.

רמת בטיחות ביולוגית:

לצורך גידול תאי HEP3B נדרש מעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 1.

 

שכבה צפופה למחצה של תאי Hep3B בהגדלה של פי 10 ופי 20.

קו תאים HEP3B: יתרונות ומגבלות

HEP3B הוא קו תאים של קרצינומה הפטוצלולרית הנמצא בשימוש נרחב. סעיף זה יתמקד בכמה יתרונות ומגבלות מרכזיים של תאי הכבד הללו.

יתרונות

היתרונות העיקריים של תאי HEP3B הם:

קלים לגידול

לתאי HEP3B אין דרישות גידול קפדניות, מה שהופך אותם לקלים לטיפול ולתחזוקה במעבדת מחקר. דבר זה מפשט את הליכי הניסוי.

יעילות טרנספקציה גבוהה

תאי HEP3B מפגינים יעילות טרנספקציה מרשימה, מה שהופך אותם לנפוצים במניפולציות גנטיות ובמחקרים הקשורים לביטוי גנים.

יכולת גידול

HEP3B הוא קו תאים של קרצינומה הפטוצלולרית בעל פוטנציאל גידולי, המסוגל ליצור גידולים כאשר הוא מוזרק לעכבר עם מערכת חיסונית מוחלשת. דבר זה מסייע בחקר התקדמות והתפתחות הסרטן באמצעות מודלים של שתל זר HEP3B.

סטטוס P53 של HEP3B

לתאי HEP3B מוטציה בגן P53 הדומה לזו הקיימת בקרצינומה הפטוצלולרית (HCC) ובסוגים אחרים של סרטן, מה שהופך אותם לרלוונטיים לחקר ההשפעות של מוטציית P53 על צמיחת הסרטן, התפתחותו והתקדמותו.

 

מגבלות

המגבלה הקשורה לקו התאים HEP3B היא:

מודל תאים במבחנה

קו התאים HEP3B משמש כמודל במבחנה לתאי קרצינומה הפטוצלולרית (HCC). עם זאת, ייתכן שהוא אינו מייצג באופן מלא את המורכבות של HCC כפי שהיא באה לידי ביטוי באורגניזמים חיים. כתוצאה מכך, תוצאות הניסויים במבחנה עשויות להיות שונות מאלה שנצפו in vivo.

 

יישומים של תאי HEP3B במחקר

קו התאים HEP3B מציע מספר יישומים מחקריים במחקר ביו-רפואי. חלק מהיישומים המחקריים העיקריים של תאי HEP3B כוללים:

• ביולוגיה של הסרטן: HEP3B הוא קו תאים של קרצינומה הפטוצלולרית אנושית. זהו מודל תאי בעל ערך רב לחקר המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס התפתחות והתקדמות ה-HCC. חוקרים משתמשים בתאים אלה כדי לחקור מוטציות גנטיות, תהליכים תאיים ומסלולי איתות תאיים הקשורים לסרטן הכבד. לדוגמה, במחקר שנעשה שימוש בתאי HEP3B נמצא כי microRNA-223-3p מווסת את רכיבי ה-inflammasome של NLRP3, מעכב את השגשוג ומגביר את האפופטוזיס של תאי קרצינומה הכבד HEP3B [2].
• סינון ופיתוח תרופות: קו התאים HEP3B משמש גם לבדיקה, סינון ופיתוח טיפולים חדשניים נגד קרצינומה של הכבד. יתר על כן, הוא משמש להערכת הרעילות והיעילות של תרופות וטיפולים שונים נגד סרטן. חוקרים השתמשו בתאי הכבד הללו גם כדי לחקור את חילוף החומרים של תרופות. החוקרים השתמשו בתאי HEP3B והעריכו את הפוטנציאל הציטוטוקסי של תמצית צמח Cotinus coggygria על תאי קרצינומה של הכבד HEP3B [3].
• זיהומים נגיפיים: HEP3B הוא קו תאים חיובי לנגיף הפטיטיס B; לכן, הוא משמש לחקר זיהומים נגיפיים העלולים להוביל להתפתחות סרטן הכבד, כלומר HBV ו-HCV. הדבר עשוי לסייע בהבנה טובה יותר של זיהומים נגיפיים ובפיתוח טיפולים אנטי-ויראליים פוטנציאליים. לדוגמה, במחקר אחד נעשה שימוש בתאי סרטן הכבד HEP3B ונבדקה חשיבותה של אוביקוויטינציה להתפשטות נגיף הפטיטיס C. הממצאים הצביעו על כך שהפרוטאז הספציפי לאוביקוויטין 15 (USP15) מעורב בהפצת HCV באמצעות ויסות תפקודים ספציפיים להפטוציטים, כולל היווצרות טיפות שומן ותרגום ה-RNA של HCV [4].

5. פרסומים בנושא קו התאים HEP3B

חלק זה של המאמר יסקור מספר פרסומים מחקריים מעניינים בנושא תאי HEP3B.

ויסות אפופטוזיס ואוטופגיה על ידי לוטאולין בתאי Hep3B של סרטן הכבד האנושי

פרסום זה ב-Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) הציע כי לחץ ברשתית האנדופלזמית המושרה על ידי תרכובת לוטאולין עשוי להפעיל השפעות אנטי-גידוליות בתאי HEP3B נטולי P53 באופן שאינו תלוי ב-P53.

מיקוד פוטנציאלי של תאי סרטן הכבד Hep3B באמצעות לופאול המבודד מ-Avicennia marina

מחקר זה, שפורסם ב-Archiv der Pharmazie (2021), הציע טריטרפנואיד פנטציקלי, לופאול, כסוכן אנטי-סרטני פוטנציאלי נגד תאי HEP3B.

תמצית אתנול מ-Cnidium monnieri (L.) Cusson גורמת לעצירת מחזור התא ואפופטוזיס באמצעות ויסות המסלול הבלתי תלוי ב-p53 בתאי קרצינומה הפטוצלולרית HepG2 ו-Hep3B

מאמר זה פורסם ב-Molecular Medicine Reports (2017). ממצאי המחקר קובעים שתמצית אתנול מ-Cnidium monnieri (L.) Cusson גורמת למוות תאי (אפופטוזיס) ולעצירת מחזור התא בתאי קרצינומה בכבד HepG2 ו-HEP3B באמצעות ויסות מסלול האיתות p53 ו-Akt/GSK-3β.

אורנופין משפר את האפופטוזיס המתווך על ידי סולפורפן בתאי קרצינומה הפטוצלולרית Hep3B באמצעות השבתת מסלול האיתות PI3K/Akt

מחקר זה, שפורסם ב-Biomolecules and Therapeutics (2020), הציע כי אורנופין מפגין פעילות סינרגטית ומקדם את האפופטוזיס בתיווך סולפורפן בתאי HEP3B באמצעות הפעלת מסלול PI3K/AKT.

ל-RNA מעגלי-0072309 יש השפעות אנטי-סרטניות בקו תאים Hep3B באמצעות מיקוד ב-microRNA-665

מאמר מחקר זה, שפורסם ב-BioFactors (2023), הציע כי RNA מעגלי-0072309 מפעיל השפעות אנטי-סרטניות בתאי קרצינומה הפטוצלולרית HEP3B באמצעות מיקוד ב-miRNA-665.

משאבים עבור קו תאי HEP3B: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן מספר משאבים הזמינים בנוגע לתאי HEP3B:

• טרנספקציה של HEP3B: סרטון זה מסביר את פרוטוקול הטרנספקציה לתאי HEP3B.
• יעילות טרנספקציה של HEP3B: קישור זה יסייע לכם ללמוד על הרכב מדיום DMEM של HEP3B, העברת תאים ופרוטוקול הטרנספקציה לתאי HEP3B. בנוסף, הוא מספק מידע על אופטימיזציה של ריאגנט ליפופקטמין 3000 של HEP3B בפרוטוקול הטרנספקציה שלכם.

הקישור הבא מכיל את פרוטוקול תרבית תאי HEP3B:

• תנאי תרבית HEP3B: קישור זה יסייע לכם ללמוד את הפרוטוקול לטיפול ולתחזוקה של תרבויות Huh7 ו-HEP3B.
• תאי HEP3B: אתר זה מכיל מידע רב על תאי HEP3B, כולל מצעי HEP3B, הפרוטוקול לפיצול תאים, הפשרה וטיפול בתרבויות מתרבות ומוקפאות.

מקורות

1. Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origin and properties of hepatocellular carcinoma cell lines. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
2. Wan, L., et al., miRNA-223-3p regulates NLRP3 to promote apoptosis and inhibit proliferation of hep3B cells. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
3. Danjolli-Hashani, D. ו-S. Selen-Isbilir, השפעה ציטוטוקסית של תמצית Cotinus coggygria על קו תאי הסרטן Hep3B. Natural Product Research, 2022: עמ' 1-4.
4. Kusakabe, S., et al., USP15 משתתף בהפצת נגיף הפטיטיס C באמצעות ויסות תרגום ה-RNA הנגיפי והיווצרות טיפות שומניות. Journal of Virology, 2019. 93(6): עמ' 10.1128/jvi. 01708-18.