קו תאים Neuro-2a

Neuro-2a הוא קו תאים עצביים שמקורו בעכברים, הנמצא בשימוש נרחב במחקר בתחום מדעי המוח. תאים אלה משמשים בעיקר לחקר התפתחות עצבית, התמיינות, נוירוטוקסיות, מסלולי איתות תאיים וצמיחת אקסונים. בנוסף, הם משמשים לפיתוח תרופות ולמטרות סינון.

מאמר זה מתמקד בהיבטים חשובים של תאי הנוירובלסטומה מסוג Neuro-2a, שיכולים לסייע לכם לפני שתתחילו לעבוד איתם. המאמר יכסה בעיקר:

1. מאפיינים כלליים ומקור תאי Neuro-2a
2. מידע על גידול קו התאים Neuro-2a
3. יתרונות וחסרונות של קו התאים Neuro-2a
4. יישומים מחקריים של קו התאים Neuro-2a
5. פרסומים מחקריים העוסקים בתאי Neuro-2a
6. משאבים לתאי Neuro-2a: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

מאפיינים כלליים ומקור תאי Neuro-2a

חלק זה של המאמר יסקור את הרקע ואת המאפיינים הבסיסיים של קו התאים Neuro-2a, שחשוב להכיר לפני שמתחילים לעבוד איתו. כאן תלמדו: מהו קו התאים Neuro-2a? מהו מקורו של קו התאים Neuro-2a? מהי התמיינות תאי Neuro-2a? מהו גודלו של תא Neuro-2a? מהי המורפולוגיה של תאי Neuro-2a?

• תאי Neuro-2a מקורם בגידול ספונטני (נוירובלסטומה) של עכבר לבקן (זן A). קו התאים הוקם על ידי R.J. Klebe ו-F.H. Ruddle.
• תאי הנוירובלסטומה מסוג Neuro-2a מציגים מורפולוגיה של תאי גזע עצביים ואמובואידים.
• גודל תא Neuro-2a הוא 12 מיקרומטר בגובה [1].
• מספר הכרומוזומים בתאי Neuro-2a עשוי לנוע בין 59 ל-193, כאשר המספר האופייני הוא 95. הקריוטיפ של תאי הנוירובלסטומה הללו אינו יציב, והוא נע בטווח שבין 94 ל-98 כרומוזומים.

הדגמת איתות עצבי: ייצוג תלת-ממדי של שחרור נוירוטרנסמיטור למרווח הסינפטי על ידי הנוירון הפרה-סינפטי, המושרה על ידי זרימת Ca2+ פנימה, מה שמוביל להפעלת תעלות יוניות ולזרימת Na+ פנימה לנוירון הפוסט-סינפטי.

מידע על גידול קו התאים Neuro-2a

תאי Neuro-2a נמצאים בשימוש נרחב במעבדות מחקר בתחום מדעי המוח. לפני שתתחילו לעבוד עם תאים אלה, עליכם ללמוד את המידע החיוני בנושא תרבית תאים המפורט להלן. מידע זה עשוי להקל עליכם את העבודה. תוכלו ללמוד: מהו Neuro-2a , מצע תרבית תאים? כיצד מגדלים תאי Neuro-2a? מהו זמן הכפלה של תאי Neuro-2a? מהי צפיפות הזריעה של Neuro-2a ? מהו פרוטוקול תרבית תאי Neuro-2a? מהו מצע התרבית של תאי Neuro-2a?

נקודות מרכזיות לגידול תאי Neuro-2a

זמן הכפלה:

זמן הכפלה של תאי Neuro-2a הוא כ-70 שעות.

תאים דבקים או בתמיסה:

Neuro-2a הוא קו תאים דבק.

צפיפות זריעה:

צפיפות הזריעה האופטימלית עבור קו התאים Neuro-2a היא 1 x 10^⁴ תאים/סמ^"ר. לצורך הזריעה, שוטפים את התאים בתמיסת מלח פוספטית נטולת מגנזיום וסידן (1x). לאחר מכן, מוסיפים תמיסת העברה (Accutase), והתאים עוברים אינקובציה למשך 8 עד 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר פירוק התאים, מוסיפים מצע טרי, והתאים עוברים צנטריפוגה. משקע התאים שנאסף מושעה מחדש בזהירות, והתאים מוזגים לכלי תרבית לצורך גידול.

מדיום גידול:

לגידול תאי Neuro-2a משתמשים ב-EMEM. הוא מכיל 10% FBS, 2 mM L-גלוטמין, 1.5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM פירובט נתרן ו-NEAA לצורך גידול תאים אידיאלי. יש להחליף את התרבית 1–2 פעמים בשבוע.

תנאי גידול:

תרבויות Neuro-2a נשמרות באינקובטור לח בטמפרטורה של 37°C, המחובר לאספקת CO₂ בריכוז של 5%.

אחסון:

יש לאחסן את התאים בטמפרטורה הנמוכה מ-150 °C- במקפיא חשמלי בטמפרטורה נמוכה במיוחד או בשלב האדים של חנקן נוזלי לאחסון לטווח ארוך.

תהליך ההקפאה והמדיום:

מדיום CM-1 או CM-ACF משמשים להקפאת תאי Neuro-2a. התאים מוקפאים בתהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה של 1 °C בלבד בדקה. תהליך זה מגן על התאים מפני הלם ושומר על חיוניותם.

תהליך ההפשרה:

כדי להפשיר תרבויות קפואות, יש להניח את הבקבוקון באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C למשך 40 עד 60 שניות, עד שנותר רק גוש קרח קטן. לאחר מכן, מוסיפים מצע גידול, והתאים עוברים צנטריפוגה. שלב זה מסייע בהסרת מרכיבי מצע ההקפאה. לאחר מכן, משחררים את משקע התאים, ומעבירים את התאים לבקבוק חדש המלא במצע גידול. לאחר מכן, התאים מונחים באינקובטור בטמפרטורה של 37 °C למשך 24 שעות לפחות.

רמת בטיחות ביולוגית:

יש לעבוד עם תרבויות Neuro-2a אך ורק במעבדות ברמת בטיחות ביולוגית 1.

תמונה מיקרוסקופית של תרבית מוקדמת של תאי נוירובלסטומה מסוג Neuro 2a הנצמדים למצע, המציגה את המורפולוגיה שלהם בהגדלה של 10x ו-20x.

יתרונות וחסרונות של קו התאים Neuro-2a

לתאי Neuro-2a יש מספר יתרונות וחסרונות המבדילים אותם מקווי תאים עצביים אחרים. להלן רשימה של כמה מהיתרונות והחסרונות הבולטים של תאים אלה.

יתרונות

היתרונות של קו התאים Neuro-2a של נוירובלסטומה עכברית הם:

• קלות בתחזוקה:

  קו התאים Neuro-2a אינו כרוך בהליכי תרבית תאים מורכבים או מסובכים. קל לתרבת אותם ולתחזק אותם במעבדות מחקר.

• מודל תאי עצב במבחנה:

  Neuro-2a הוא מודל תאי עצבי נוח הנמצא בשימוש נרחב בקרב חוקרים במחקרים העוסקים בהתפתחות ובדיפרנציאציה של נוירונים.

 

חסרונות

החסרונות של תאי Neuro-2a הם:

• מקור עכברי:

  Neuro-2a מקורו בעכברים, ועל החוקרים לנהוג בזהירות בעת השלכת תוצאות ממחקרים המבוססים על עכברים על בריאות ומחלות בבני אדם, שכן הביולוגיה של עכברים ושל בני אדם עשויה להיות שונה באופן משמעותי.

 

יישומים מחקריים של קו התאים Neuro-2a

לתאי Neuro-2a יש יישומים רבים בתחום המחקר הנוירולוגי. להלן מספר שימושים מבטיחים של קו תאים זה:

• התפתחות עצבית: Neuro-2a הוא מודל תאי עצבי במבחנה הנמצא בשימוש נרחב לחקר ההתפתחות העצבית ותהליכים נלווים כגון התמיינות, צמיחת אקסונים ויצירת סינפסות. מחקר שנערך בשנת 2020 השתמש בתאי Neuro-2a כדי לבחון את תפקידו של microRNA-124 בהתמיינות תאי עצב המושרה על ידי חומצה רטינואית [2]. מחקר נוסף בחן את הביטוי של קולטן חומצה רטינואית גמא (RARG) ו-miRNA-124 בקו התאים של נוירובלסטומה (N2A). מחקר זה הציע כי RARG מהווה יעד ל-miR-124 ומדכא את צמיחת הנויריטים [3].
• נוירוטוקסיות: תאי Neuro-2a משמשים גם להערכת ההשפעות הרעילות של תרופות, חומרים כימיים או גורמים סביבתיים על תאי עצב. לדוגמה, מחקר שנערך על ידי Zhihong Yin ועמיתיו בחן את הנוירוטוקסיות של ביספנול A (BPA), חומר כימי סביבתי, באמצעות תאי Neuro-2a. החוקרים הבחינו כי BPA מדכא את התמיינותם והתפשטותם של תאי עצב על ידי פגיעה בשלמותם התאית והסינפטית [4].
• סינון תרופות: תאי Neuro-2a משמשים גם להערכת הפעילות הטיפולית של מספר תרופות, תרכובות ומוצרים טבעיים. לדוגמה, במחקר שנעשה תוך שימוש בתאי Neuro-2a נבדק הפוטנציאל האנטי-חמצוני של תמצית צמח הגינקו בילובה. יתר על כן, המחקר הצביע על כך שהתמצית גורמת לירידה באגרגציה של Aβ ועשויה להוות טיפול פוטנציאלי למחלת אלצהיימר [5].

5. פרסומים מחקריים העוסקים בתאי Neuro-2a

להלן מספר מאמרים מחקריים מעניינים העוסקים בקו התאים Neuro-2a.

אלקמידים דמויי פיפרין מ-Piper nigrum מפעילים את הפרומוטור של BDNF ומקדמים צמיחת נויריטים בתאי Neuro-2a

מחקר זה, שפורסם ב-Journal of Natural Medicines בשנת 2018, בחן את ההשפעות הטיפוליות של אלקמידים שהופקו מפלפל לבן (P. nigrum) על תאי עצב מסוג Neuro-2a.

הפחתת הביטוי של Nkx2.1 קשורה לחריגות במוח הנגרמות מעודף חומצה רטינואית

מחקר זה, שפורסם ב-Acta Biochimica et Biophysica Sinica בשנת 2020, הציע כי הגן Nkx2.1 ממלא תפקיד חשוב בהתפתחות מוח העכבר באמצעות ויסות מסלול האיתות של Shh.

חשיפה לביספנול A גורמת לנוירוטוקסיות הקשורה לתפקוד לקוי של הסינפסות ושל שלד התא בתאי Neuro-2a

מאמר זה, שפורסם בכתב העת Toxicology and Industrial Health (2023), הציע כי החומר הכימי הסביבתי ביספנול A מעורר נוירוטוקסיות בתאי neuro-2a וגורם לתפקוד לקוי של הסינפסות והשלד התאי שלהם.

ויסות מסלולי MAPK ו-PI3K/Akt על ידי הקסארלין בתאי Neuro-2A מעכב רעילות אפופטוטית הנגרמת על ידי מי חמצן

מאמר זה, שפורסם בכתב העת Pharmaceuticals (2021), הציע כי התרופה הקסארלין מווסתת את שרשרת התגובות של PI3K/AKT ו-MAPK בתאי נוירובלסטומה (Neuro-2a) ומעכבת אפופטוזיס בתאי Neuro-2a הנגרם על ידי מי חמצן.

תמצית פירות אתנולית של Emblica officinalis מדכאת דלקת עצבית במיקרוגליה ומקדמת צמיחת נויריטים בתאי Neuro-2A

מאמר מחקר זה, שפורסם בכתב העת Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021), הציע שתמצית הפירות של Emblica officinalis מדכאת דלקת עצבית בתאי Neuro-2a, ולכן עשויה להועיל במחלות נוירו-דלקתיות.

משאבים לתאי Neuro-2a: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן המשאבים המקוונים הזמינים בנושא תאי Neuro-2a. הם כוללים פרוטוקול לגידול תאי Neuro-2a ולטרנספקציה. 

• פרוטוקול טרנספקציה של תאי Neuro-2a: תאי Neuro-2a מהווים מארח מתאים לטרנספקציה. קישור זה ינחה אתכם לגבי פרוטוקול הטרנספקציה של קו התאים. יעילות הטרנספקציה של תאי Neuro-2a משתנה בין ריאגנט לריאגנט.

הקישור הבא מכיל את פרוטוקול תרבית תאי Neuro-2a.

• פרוטוקול לגידול תאי Neuro-2a: קישור זה יסייע לכם ללמוד את פרוטוקול התרבית המשנית של תאי Neuro-2a.
• תאי Neuro-2a: האתר מכיל ידע מקיף על מצעי גידול לתאי Neuro-2a, צפיפות זריעה, ופרוטוקולים לריבוי משנה ולטיפול בתרבויות שהוקפאו ובתרבויות מתרבות.

מקורות

1. Lulevich, V., et al., מכניקת התא הבודד מספקת אמצעי רגיש וכמותי לבחינת האינטראקציות בין פפטיד בטא-עמילואיד לתאי עצב. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): עמ' 13872-7.
2. You, Q., et al., תפקידו של miR-124 בוויסות התמיינות תאי Neuro-2A המושרה על ידי חומצה רטינואית. Neural Regen Res, 2020. 15(6): עמ' 1133-1139.
3. Su, X., et al., קולטן חומצה רטינואית גמא מהווה יעד של microRNA-124 ומעכב את צמיחת הנויריטים. Neuropharmacology, 2020. 163: עמ' 107657.
4. Yin, Z., et al., חשיפה לביספנול-A גרמה לנוירוטוקסיות והייתה קשורה לסינפסות ולשלד התא בתאי Neuro-2a. Toxicology in Vitro, 2020. 67: עמ' 104911.
5. Chen, L., et al., תמצית גינקו בילובה (EGb) מעכבת לחץ חמצוני בתאי Neuro 2A המבטאים יתר על המידה את APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.