Línea celular Neuro-2a

Neuro-2a es una línea celular neural derivada de ratón ampliamente utilizada en la investigación neurocientífica. Estas células se emplean principalmente para estudiar el desarrollo neural, la diferenciación, la neurotoxicidad, las vías de señalización celular y el crecimiento axonal. Además, se utilizan con fines de desarrollo y cribado de fármacos.

Este artículo se centra en aspectos importantes de las células de neuroblastoma Neuro-2a que podrían resultarte útiles antes de comenzar a trabajar con ellas. Abarcará principalmente:

1. Características generales y origen de las células Neuro-2a
2. Información sobre el cultivo de la línea celular Neuro-2a
3. Ventajas y desventajas de la línea celular Neuro-2a
4. Aplicaciones de investigación de la línea celular Neuro-2a
5. Publicaciones de investigación en las que aparecen las células Neuro-2a
6. Recursos sobre las células Neuro-2a: protocolos, vídeos y más

Características generales y origen de las células Neuro-2a

En esta parte del artículo se abordarán los antecedentes y las características básicas de la línea celular Neuro-2a que es imprescindible conocer antes de trabajar con ella. Aquí descubrirás: ¿Qué es la línea celular Neuro-2a? ¿Cuál es el origen de la línea celular Neuro-2a? ¿En qué consiste la diferenciación celular de Neuro-2a? ¿Cuál es el tamaño de una célula Neuro-2a? ¿Cuál es la morfología de las células Neuro-2a?

• Las células Neuro-2a se originaron a partir de un tumor espontáneo (neuroblastoma) de un ratón albino (cepa A). La línea celular fue establecida por R.J. Klebe y F.H. Ruddle.
• Las células de neuroblastoma Neuro-2a presentan una morfología neuronal y de células madre ameboides.
• El tamaño de las células Neuro-2a es de 12 micrómetros de altura [1].
• El número de cromosomas de las células Neuro-2a puede oscilar entre 59 y 193, con un número modal de 95. El cariotipo de estas células de neuroblastoma es inestable, dentro de un rango de 94 a 98 cromosomas.

Ilustración de la señalización neuronal: representación en 3D de la liberación de neurotransmisores en el espacio sináptico por parte de la neurona presináptica, provocada por una entrada de Ca2+, lo que da lugar a la activación de canales iónicos y a una entrada de Na+ en la neurona postsináptica.

Información sobre el cultivo de la línea celular Neuro-2a

Las células Neuro-2a se utilizan ampliamente en los laboratorios de investigación en neurociencia. Antes de trabajar con estas células, debes conocer la información imprescindible sobre el cultivo celular que se menciona a continuación. Esto puede ayudarte a familiarizarte con el proceso. Sabrás: ¿Qué es un medio de cultivo para las células Neuro-2a? ¿Cómo se cultivan las células Neuro-2a? ¿Cuál es el tiempo de duplicación de las células Neuro-2a? ¿Cuál es la densidad de siembra de Neuro-2a ? ¿Cuál es el protocolo de cultivo de las células Neuro-2a? ¿Cuál es el medio de cultivo de las células Neuro-2a?

Puntos clave para el cultivo de células Neuro-2a

Tiempo de duplicación:

El tiempo de duplicación de las células Neuro-2a es de aproximadamente 70 horas.

Adherentes o en suspensión:

Neuro-2a es una línea celular adherente.

Densidad de siembra:

La densidad de siembra celular optimizada para la línea celular Neuro-2a es de 1 × 10^⁴ células/cm². Para la siembra, las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato sin magnesio ni calcio (1x). Posteriormente, se añade una solución de pasaje (Accutase) y las células se incuban durante 8 a 10 minutos a temperatura ambiente. Tras la disociación celular, se añade medio fresco y se centrifugan las células. El sedimento celular obtenido se resuspende cuidadosamente y las células se vierten en un recipiente de cultivo para su crecimiento.

Medio de crecimiento:

Para el cultivo de células Neuro-2a se utiliza EMEM. Contiene un 10 % de FBS, 2 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃, EBSS, 1 mM de piruvato de sodio y NEAA para un crecimiento celular óptimo. El medio debe sustituirse entre 1 y 2 veces por semana.

Condiciones de cultivo:

Los cultivos de Neuro-2a se mantienen en una incubadora humidificada a 37 °C conectada a un suministro de CO₂ al 5 %.

Almacenamiento:

Las células deben almacenarse a una temperatura inferior a -150 °C en un congelador eléctrico de temperatura ultrabaja o en la fase de vapor de nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo.

Proceso de congelación y medio:

Para congelar las células Neuro-2a se utilizan los medios CM-1 o CM-ACF. Las células se congelan mediante un proceso de congelación lenta que permite un descenso de tan solo 1 °C por minuto. Esto protege a las células del choque térmico y mantiene su viabilidad.

Proceso de descongelación:

Para descongelar los cultivos congelados, se coloca el vial en un baño de agua a 37 °C durante 40 a 60 segundos, hasta que solo quede un pequeño trozo de hielo. A continuación, se añade medio de cultivo y se someten las células a centrifugación. Este paso ayuda a eliminar los componentes del medio de congelación. A continuación, se resuspende el sedimento celular y se transfieren las células a un nuevo frasco lleno de medio de cultivo. Posteriormente, las células se colocan en una incubadora a 37 °C durante un mínimo de 24 horas.

Nivel de bioseguridad:

Para manipular y mantener cultivos de Neuro-2a es obligatorio disponer de un laboratorio con nivel de bioseguridad 1.

Imagen microscópica de un pasaje temprano de células de neuroblastoma Neuro 2a adherentes, en la que se aprecia su morfología con un aumento de 10x y 20x.

Ventajas e inconvenientes de la línea celular Neuro-2a

Las células Neuro-2a presentan una serie de ventajas e inconvenientes que las distinguen de otras líneas celulares neuronales. A continuación se enumeran algunos de los pros y contras más destacados de estas células.

Ventajas

Las ventajas de la línea celular de neuroblastoma murino Neuro-2a son:

• Fácil de mantener:

  La línea celular Neuro-2a no requiere procedimientos de cultivo celular complejos ni laboriosos. Son fáciles de cultivar y mantener en laboratorios de investigación.

• Modelo de célula neuronal in vitro:

  Neuro-2a es un modelo celular neuronal muy práctico, ampliamente utilizado por los investigadores en estudios sobre el desarrollo y la diferenciación de las neuronas.

 

Desventajas

Las desventajas de las células Neuro-2a son:

• Origen murino:

  Neuro-2a es de origen murino, por lo que los investigadores deben actuar con cautela a la hora de extrapolar los resultados de estudios basados en ratones a la salud y las enfermedades humanas, ya que la biología de los ratones y la de los seres humanos puede diferir significativamente.

 

Aplicaciones de investigación de la línea celular Neuro-2a

Las células Neuro-2a ofrecen numerosas aplicaciones en el campo de la investigación neurocientífica. A continuación se analizan algunos usos prometedores de esta línea celular:

• Desarrollo neuronal: Neuro-2a es un modelo de célula neuronal in vitro que se utiliza ampliamente para estudiar el desarrollo neuronal y procesos relacionados, como la diferenciación, el crecimiento axonal y la formación de sinapsis. Un estudio realizado en 2020 utilizó células Neuro-2a para explorar el papel del microARN-124 en la diferenciación de las células neuronales inducida por el ácido retinoico [2]. Otro estudio investigó la expresión del receptor gamma del ácido retinoico (RARG) y del miARN-124 en la línea celular de neuroblastoma (N2A). Este estudio propuso que el miR-124 actúa sobre el RARG y suprime el crecimiento de las neuritas [3].
• Neurotoxicidad: Las células Neuro-2a también se utilizan para evaluar los efectos tóxicos de fármacos, sustancias químicas o factores ambientales sobre las células neuronales. Por ejemplo, un estudio realizado por Zhihong Yin y sus colaboradores investigó la neurotoxicidad del bisfenol A (BPA), una sustancia química ambiental, utilizando células Neuro-2a. Observaron que el BPA inhibe la diferenciación y la proliferación de las células neuronales al alterar su integridad celular y sináptica [4].
• Cribado de fármacos: Las células Neuro-2a también se emplean para evaluar la actividad terapéutica de diversos fármacos, compuestos y productos naturales. Por ejemplo, en un estudio se utilizaron células Neuro-2a para analizar el potencial antioxidante del extracto de la planta Ginkgo biloba. Además, la investigación sugirió que este extracto provoca una disminución de la agregación de Aβ y podría constituir un posible tratamiento para la enfermedad de Alzheimer [5].

5. Publicaciones de investigación en las que se utilizan células Neuro-2a

A continuación se presentan algunos artículos de investigación interesantes sobre la línea celular Neuro-2a.

Las alkamidas similares a la piperina procedentes de Piper nigrum activan el promotor del BDNF y favorecen el crecimiento de las neuritas en las células Neuro-2a

Este estudio, publicado en la revista *Journal of Natural Medicines* en 2018, investigó los efectos terapéuticos de las alcamidas aisladas de la pimienta blanca (P. nigrum) en las células neuronales Neuro-2a.

La regulación a la baja de Nkx2.1 está implicada en la anomalía cerebral inducida por un exceso de ácido retinoico

Esta investigación, publicada en *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* en 2020, propuso que el gen Nkx2.1 desempeña un papel importante en el desarrollo del cerebro de ratón al regular la cascada de señalización Shh.

La exposición al bisfenol A induce neurotoxicidad asociada a una disfunción sináptica y del citoesqueleto en las células Neuro-2a

Este artículo, publicado en Toxicology and Industrial Health (2023), propone que el bisfenol A, una sustancia química presente en el medio ambiente, desencadena neurotoxicidad en las células Neuro-2a y altera su funcionamiento sináptico y citoesquelético.

La modulación de las vías MAPK y PI3K/Akt por la hexarelina en células Neuro-2A inhibe la toxicidad apoptótica inducida por el peróxido de hidrógeno

Este artículo, publicado en la revista *Pharmaceuticals* (2021), propone que un fármaco, la hexarelina, modula las cascadas PI3K/AKT y MAPK en las células de neuroblastoma (Neuro-2a) e inhibe la apoptosis de estas células inducida por el peróxido de hidrógeno.

El extracto etanólico del fruto de Emblica officinalis suprime la neuroinflamación en la microglía y favorece el crecimiento de las neuritas en las células Neuro-2A

Este artículo de investigación publicado en Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) propone que el extracto etanólico del fruto de Emblica officinalis suprime la neuroinflamación en las células Neuro-2a y, por lo tanto, puede resultar beneficioso para las enfermedades neuroinflamatorias.

Recursos sobre las células Neuro-2a: protocolos, vídeos y más

A continuación se enumeran los recursos en línea disponibles sobre las células Neuro-2a. Entre ellos se incluyen el protocolo de cultivo celular y de transfección de Neuro-2a. 

• Protocolo de transfección de Neuro-2a: Neuro-2a es un huésped adecuado para la transfección. Este enlace le guiará sobre el protocolo de transfección de esta línea celular. La eficiencia de la transfección de Neuro-2a varía según el reactivo utilizado.

El siguiente enlace contiene el protocolo de cultivo de células Neuro-2a.

• Protocolo de cultivo de células Neuro-2a: Este enlace le ayudará a conocer el protocolo de subcultivo de las células Neuro-2a.
• Células Neuro-2a: La página web contiene información exhaustiva sobre los medios de cultivo de las células Neuro-2a, la densidad de siembra y los protocolos para el subcultivo y la manipulación de cultivos criopreservados y proliferativos.

Referencias

1. Lulevich, V., et al., La mecánica de célula única proporciona un método sensible y cuantitativo para estudiar las interacciones entre el péptido beta-amiloide y las células neuronales. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
2. You, Q., et al., «Papel del miR-124 en la regulación de la diferenciación de las células Neuro-2A inducida por el ácido retinoico». Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
3. Su, X., et al., El receptor gamma del ácido retinoico es diana del microARN-124 e inhibe el crecimiento de las neuritas. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
4. Yin, Z., et al., La exposición al bisfenol A indujo neurotoxicidad y se asoció con las sinapsis y el citoesqueleto en las células Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
5. Chen, L., et al., El extracto de Ginkgo biloba (EGb) inhibe el estrés oxidativo en células Neuro-2A que sobreexpresan APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.