Neuro-2a 細胞株

Neuro-2aは、神経科学の研究で広く利用されているマウスを由来とする神経細胞株です。主に、神経発生、分化、神経毒性、細胞シグナル伝達経路、および軸索の伸長に関する研究に用いられています。また、創薬やスクリーニングの目的でも利用されています。

本記事では、Neuro-2a神経芽細胞腫細胞を取り扱う前に知っておくと役立つ重要な点に焦点を当てます。主に以下の内容を取り上げます：

1. Neuro-2a細胞の一般的な特性と由来
2. Neuro-2a細胞株の培養情報
3. Neuro-2a細胞株の長所と短所
4. Neuro-2a細胞株の研究用途
5. Neuro-2a細胞を取り上げた研究論文
6. Neuro-2a細胞に関するリソース：プロトコル、動画など

Neuro-2a細胞の一般的な特性と由来

本記事のこのセクションでは、Neuro-2a細胞株を取り扱う前に知っておくべき背景情報と基本的な特性について解説します。ここでは、Neuro-2a細胞株とは何か、 Neuro-2a 細胞株の由来は何かについて学びます。 Neuro-2a細胞の分化とは何か？Neuro-2a細胞の大きさはどれくらいか？Neuro-2a細胞の形態はどのようなものか？

• Neuro-2a細胞は、アルビノマウス（系統A）の自然発生腫瘍（神経芽細胞腫）に由来します。この細胞株は、R.J. KlebeとF.H. Ruddleによって樹立されました。
• Neuro-2a神経芽細胞腫細胞は、神経細胞様およびアメーバ様幹細胞の形態を示します。
• Neuro-2a細胞の大きさは、高さ12マイクロメートルである[1]。
• Neuro-2a細胞の染色体数は59～193の範囲にあり、最頻数は95である。これらの神経芽細胞腫細胞の核型は、94～98染色体の範囲内で不安定である。

神経シグナル伝達の図解：Ca2+の流入によって引き起こされ、シナプス前ニューロンからシナプス間隙への神経伝達物質の放出を示す3D表現。これにより、シナプス後ニューロンにおいてイオンチャネルが活性化され、Na+の流入が生じる。

Neuro-2a細胞株の培養に関する情報

Neuro-2a細胞は、神経科学の研究機関で広く使用されています。これらの細胞を扱う前に、以下に挙げる必須の細胞培養情報を必ず確認してください。これにより、作業がスムーズに進むでしょう。ここでは、 Neuro-2a 細胞の培養培地とは何か、Neuro-2a細胞の培養方法について解説します。 Neuro-2a細胞の倍加時間はどれくらいか？ Neuro-2a の播種密度はどれくらいか？ Neuro-2a細胞の培養プロトコルとは？ Neuro-2a細胞用培地とは？

Neuro-2a細胞の培養における重要なポイント

倍加時間：

Neuro-2a細胞の倍加時間は約70時間です。

付着培養か浮遊培養か：

Neuro-2aは付着性細胞株です。

播種密度：

Neuro-2a細胞株の最適播種密度は1 × 10⁴細胞/cm²です。播種にあたっては、細胞をマグネシウムおよびカルシウムを含まないリン酸緩衝生理食塩水（1x）で洗浄します。 その後、継代用溶液（Accutase）を添加し、室温で8～10分間インキュベートします。細胞の解離後、新鮮な培地を添加し、細胞を遠心分離します。回収した細胞ペレットを慎重に再懸濁し、増殖用の培養容器に移します。

増殖培地：

Neuro-2a細胞の培養にはEMEMを使用する。これには、理想的な細胞増殖のために、10% FBS、2 mM L-グルタミン、1.5 g/L NaHCO3、EBSS、1 mM ピルビン酸ナトリウム、およびNEAAが含まれている。 培地は週に1～2回交換する必要があります。

培養条件：

Neuro-2a細胞の培養は、5% CO₂が供給される加湿インキュベーター内で、37°Cの条件下で行われます。

保存：

細胞は、長期保存のために、超低温電気冷凍庫または液体窒素の気相中で、-150 °C以下の温度で保存する必要があります。

凍結手順および培地：

Neuro-2a細胞の凍結には、CM-1またはCM-ACF培地を使用する。細胞は、1分あたり1°Cの温度低下のみを許容する緩慢凍結法により凍結される。これにより、細胞を凍結ショックから保護し、生存率を維持する。

解凍手順：

凍結した培養物を解凍するには、バイアルを37 °Cの水浴に40～60秒間入れ、氷の塊がわずかに残る程度になるまで待ちます。 その後、培養液を加え、細胞を遠心分離します。この工程により、凍結培地の成分を除去します。続いて、細胞ペレットを再懸濁し、培養液を充填した新しいフラスコに移します。その後、細胞を37 °Cのインキュベーターに最低24時間置きます。

バイオセーフティレベル：

Neuro-2a培養の取り扱いおよび維持には、バイオセーフティレベル1の実験室環境が必須です。

付着性のNeuro 2a神経芽細胞腫細胞の初期継代における顕微鏡画像。10倍および20倍の倍率での形態が示されている。

Neuro-2a細胞株の長所と短所

Neuro-2a細胞には、他の神経細胞株とは異なるいくつかの長所と短所があります。ここでは、この細胞の主な長所と短所を挙げます。

長所

Neuro-2aマウス神経芽細胞腫細胞株の長所は以下の通りです：

• 維持が容易：

  Neuro-2a細胞株は、複雑で手間のかかる細胞培養手順を必要としません。研究施設での培養および維持が容易です。

• in vitro神経細胞モデル：

  Neuro-2aは、神経細胞の発達および分化に関する研究において、研究者によって広く利用されている便利な神経細胞モデルです。

 

デメリット

Neuro-2a細胞の欠点は以下の通りです：

• マウス由来：

  Neuro-2aはマウス由来であり、マウスとヒトの生物学には大きな違いがあるため、研究者はマウスを用いた研究結果をヒトの健康や疾患に外挿する際には注意を払う必要があります。

 

Neuro-2a細胞株の研究用途

Neuro-2a細胞は、神経科学の研究分野において多くの応用が可能です。ここでは、この細胞株の有望な用途をいくつか紹介します：

• 神経発生：Neuro-2aは、神経発生や、分化、軸索伸長、シナプス形成などの関連プロセスを研究するために広く利用されているin vitro神経細胞モデルである。 2020年に実施された研究では、Neuro-2a細胞を用いて、レチノイン酸誘導性神経細胞分化におけるマイクロRNA-124の役割を解明した[2]。 別の研究では、神経芽細胞腫細胞株（N2A）におけるNeuro-2aのレチノイン酸受容体γ（RARG）およびmiR-124の発現が調査されました。この研究では、RARGがmiR-124の標的となり、神経突起の伸長を抑制することが示唆されました[3]。
• 神経毒性：Neuro-2aは、薬剤、化学物質、または環境要因が神経細胞に及ぼす毒性作用を評価するためにも使用される。 例えば、Zhihong Yinらによる研究では、Neuro-2a細胞を用いて、環境化学物質であるビスフェノールA（BPA）の神経毒性を調査した。彼らは、BPAが細胞およびシナプスの完全性を損なうことで、神経細胞の分化と増殖を抑制することを観察した[4]。
• 薬剤スクリーニング：Neuro-2a細胞は、いくつかの薬剤、化合物、および天然物の治療効果を評価するためにも用いられる。 例えば、ある研究ではNeuro-2a細胞を用いて、イチョウ葉（Ginkgo biloba）抽出物の抗酸化能を調査した。さらに、この研究では、同抽出物がAβの凝集を減少させ、アルツハイマー病の潜在的な治療法となり得ると提唱されている[5]。

5. Neuro-2a細胞を用いた研究論文

Neuro-2a細胞株を取り上げた興味深い研究論文をいくつか紹介します。

Piper nigrum由来のピペリン様アルカミドは、Neuro-2a細胞においてBDNFプロモーターを誘導し、神経突起の伸長を促進する

2018年に『Journal of Natural Medicines』誌に掲載された本研究では、白コショウ（P. nigrum）から単離されたアルカミドがNeuro-2a神経細胞に及ぼす治療効果について調査した。

Nkx2.1の発現低下は、過剰なレチノイン酸によって誘発される脳の異常に関与している

2020年に『Acta Biochimica et Biophysica Sinica』誌に掲載された本研究は、Nkx2.1遺伝子がShhシグナル伝達カスケードを調節することにより、マウスの脳発達において重要な役割を果たしていることを示唆した。

ビスフェノールAへの曝露は、Neuro-2a細胞においてシナプスおよび細胞骨格の機能障害に関連する神経毒性を誘発する

『Toxicology and Industrial Health』（2023年）に掲載された本論文は、環境化学物質であるビスフェノールAが、Neuro-2a細胞において神経毒性を引き起こし、そのシナプスおよび細胞骨格の機能障害を招くと提唱した。

Neuro-2A細胞におけるヘキサレリンによるMAPKおよびPI3K/Akt経路の調節は、過酸化水素によるアポトーシス毒性を抑制する

『Pharmaceuticals』（2021年）に掲載された本論文は、医薬品であるヘキサレリンが神経芽細胞腫細胞（Neuro-2a）においてPI3K/AKTおよびMAPKカスケードを調節し、過酸化水素によるNeuro-2a細胞のアポトーシスを抑制することを提唱した。

エンブリカ・オフィシナリス（Emblica officinalis）の果実エタノール抽出物は、ミクログリアにおける神経炎症を抑制し、Neuro-2A細胞における神経突起の伸長を促進する

『Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine』（2021年）に掲載されたこの研究論文は、エンブリカ・オフィシナリス（Emblica officinalis）の果実エキスがNeuro-2a細胞における神経炎症を抑制し、それゆえ神経炎症性疾患に対して有益である可能性を示唆した。

Neuro-2a細胞に関するリソース：プロトコル、動画など

以下は、Neuro-2a細胞に関するオンラインリソースの一覧です。これには、Neuro-2a細胞の培養およびトランスフェクションプロトコルが含まれます。 

• Neuro-2aトランスフェクションプロトコル：Neuro-2aはトランスフェクションに適した宿主細胞です。このリンクでは、この細胞株のトランスフェクションプロトコルについて解説しています。Neuro-2aのトランスフェクション効率は、使用する試薬によって異なります。

以下のリンクには、Neuro-2a細胞の培養プロトコルが掲載されています。

• Neuro-2a細胞培養プロトコル：このリンクでは、Neuro-2a細胞の継代培養プロトコルについて学ぶことができます。
• Neuro-2a細胞：このウェブサイトには、Neuro-2a細胞の培地、播種密度、および凍結保存培養や増殖培養の継代・取り扱いに関するプロトコルについての包括的な知識が掲載されています。

参考文献

1. Lulevich, V. ら，単一細胞力学は、アミロイドβペプチドと神経細胞の相互作用を解析するための高感度かつ定量的な手段を提供する。Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
2. You, Q. 他, 「レチノイン酸誘導性Neuro-2A細胞分化の調節におけるmiR-124の役割」。Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
3. Su, X. 他, レチノイン酸受容体γはマイクロRNA-124の標的となり、神経突起の伸長を阻害する。Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
4. Yin, Z. 他, ビスフェノールAへの曝露はNeuro-2A細胞において神経毒性を誘導し、シナプスおよび細胞骨格と関連している。Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
5. Chen, L. 他、イチョウ葉エキス（EGb）は、APPswを過剰発現するNeuro-2A細胞における酸化ストレスを抑制する。BioMed Research International, 2019. 2019.