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B-LCL-CDG4
Cell line · Product number 302015
B-LCL-CDG4 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young girl with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG...
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01General information
- Description
- A B-LCL-CDG4 é uma linhagem celular de linfócitos B transformada pelo EBV, derivada de uma menina com CDAII. A CDAII é uma anemia genética rara, pertencente à classe das doenças de glicosilação CDG. Pacientes com CDAII apresentam um defeito no gene SEC23B, componente do COPII, que está envolvido no sistema de transporte intracelular de proteínas (em particular, a formação de vesículas a partir do retículo endoplasmático). A paciente em questão é homozigótica para a mutação nesse gene. A glicoproteína da banda 3 das membranas eritrocitárias apresenta glicosilação insuficiente devido à glicosilação anômala dos motivos de polilactosamina das glicoproteínas, mas não dos glicoesfingolipídios; assim, a banda 3 dos eritrócitos com CDA II apresenta oligossacarídeos truncados do tipo híbrido. Isso aponta para um defeito adicional nas enzimas de glicosilação do aparelho de Golgi, a manossidase II ou a N-acetilglucosaminiltransferase II.
- Tissue
- Sangue periférico
- Disease
- Distúrbios congênitos da glicosilação
- Applications
- Genotipagem dos efeitos da CDG em células imunes, testes funcionais (por exemplo, antígenos de superfície das células B), testes com drogas citotóxicas, análise mutacional, análise de mecanismos de apoptose, tipagem de HLA, impacto da glicosilação defeituosa de distintas glicoproteínas celulares em diversas funções.
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Suspension
- Biosafety level
- 2
03Characteristics
- Morphology
- Células redondas
- Cell type
- Linfócito B
04Identifiers
- Citation
- B-LCL-CDG4 (número de catálogo da Cytion 302015)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_A9Y2
05Expression and susceptibility
- Surface antigens
- CD15 (Lewis x)+, CD15s (Lewis x sialilado)-, CD75s (noligossacarídeos lactosaminilados sialilados)+, CD173 (grupo sanguíneo H)-, CD174 (grupo sanguíneo Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (Tn sialilado)-, CD176 (TF)+
- Antigen expression
- CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-, MHC Classe I+, MHC Classe II (HLA-DR)+
- Viruses
- Transformante: EBV
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, com 2,0 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion: 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
- Supplements
- Adicione ao meio 10% de FBS inativado por calor
- Subculturing
- Mantenha as culturas adicionando ou substituindo periodicamente o meio de cultura. Inicie as culturas com uma densidade de 2 x 10⁵ células/ml e mantenha a concentração celular na faixa de 3 x 10⁵ a 5 x 10⁵ células/ml para um crescimento ideal.
- Fluid renewal
- Quando a cor média se transformou em amarelo
- Post-thaw recovery
- Médio
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.
Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.
- Freeze medium
- Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
- Storage conditions
Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.
- Shipping conditions
As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
08Donor
- Donor age
- Criança
- Ethnicity
- caucasiano
09Legal and safety
- Safety precautions
- Ao planejar o armazenamento de um criotubo em nitrogênio líquido para descongelamento futuro, é obrigatório seguir medidas de segurança rigorosas. É essencial o uso de luvas e roupas de proteção adequadas, além do uso obrigatório de máscara facial ou óculos de proteção durante a transferência de amostras congeladas para dentro ou para fora do tanque de nitrogênio líquido. Isso visa mitigar o risco de ferimentos decorrentes de possíveis explosões dos criotubos durante a remoção, o que pode resultar na projeção de fragmentos pontiagudos.
- Warranty
Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.
Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.
- Material Transfer Agreement required
- Yes