Hep-66.3A

A linhagem celular de hepatoma Hep-66.4A é derivada de um tumor hepático de camundongo, especificamente da linhagem C57BL/6J. Essa linhagem celular é caracterizada por sua origem hepatocítica, confirmada por meio da análise das proteínas dos filamentos intermediários. A Hep-66.4A expressa as queratinas simples K8 e K18, típicas das células hepáticas normais, bem como vimentina e queratina K19 em graus variáveis. Esses padrões proteicos confirmam a natureza hepatocítica da linhagem celular e sua classificação como linhagem de hepatoma.

A linhagem celular Hep-66.4A apresenta uma morfologia predominantemente epitelial, refletindo sua origem a partir de hepatócitos. Esse fenótipo morfológico é consistente com seu perfil de expressão proteica. A análise de impressão digital de DNA da Hep-66.4A não revelou nenhuma anomalia estrutural significativa, indicando um certo grau de estabilidade genômica. No entanto, foram observadas algumas alterações nas intensidades relativas de bandas específicas com o aumento do número de passagens, sugerindo uma variabilidade genômica menor ao longo de períodos prolongados de cultura.

Apesar da ausência de mutações detectáveis no gene p53 nos tumores hepáticos primários de camundongos, foram encontradas aberrações em algumas linhagens de hepatoma durante a propagação in vitro. A linhagem celular Hep-66.4A foi analisada quanto a mutações nos genes p53 e c-Ha-ras. A ausência de mutações detectáveis no gene p53 nessa linhagem durante as primeiras passagens sugere um background genético estável. Essa linhagem celular serve como um modelo valioso para o estudo do carcinoma hepatocelular, fornecendo insights sobre os mecanismos celulares e moleculares subjacentes à tumorigênese hepática.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.