KMS-12-PE

A linhagem celular KMS-12-PE, estabelecida a partir do derrame pleural do mesmo paciente, difere significativamente da KMS-12-BM em vários aspectos. As células KMS-12-PE representam um estágio mais terminal de diferenciação das células plasmáticas, conforme indicado pela ausência de CD20, mas com expressão contínua de CD38 e PCA-1. Uma característica marcante da KMS-12-PE é sua capacidade de produzir e secretar ectopicamente uma amilase do tipo salivar, tanto no derrame pleural do paciente quanto em cultura, o que a torna única entre as linhagens celulares de mieloma humano. Esse fenômeno está associado a uma deleção cromossômica próxima à região onde o gene da amilase está localizado, especificamente del(1)(p22→pter), observada em uma proporção significativa das células KMS-12-PE.

Apesar dessas diferenças distintas, tanto a KMS-12-PE quanto a KMS-12-BM compartilham o mesmo marcador clonal, a translocação t(11;14)(q13;q32), que é comum em casos de mieloma. No entanto, as células KMS-12-PE apresentam menos anomalias cromossômicas do que as KMS-12-BM e tendem a ser hipodiplóides. Assim como a KMS-12-BM, a KMS-12-PE não produz imunoglobulinas, seja na forma de superfície ou secretora, embora as células possuam um retículo endoplasmático bem desenvolvido. A ausência de tumorigenicidade em ambas as linhagens celulares, apesar de seu crescimento agressivo in vitro, e sua proliferação estável a longo prazo em meio sem soro tornam-nas ferramentas valiosas para o estudo da biologia do mieloma, particularmente no contexto do mieloma não produtor de Ig.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.