Skip to content
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP
Tissue
Nội cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô tuyến
Metastatic site
Vị trí khối u nguyên phát (nội cổ tử cung)
Synonyms
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78, HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

Documents

HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP

Cell line · Product number 301572

The HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line. Engineered using CRISPR/Cas9 technology, these cells express the CA...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

Low stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

Dòng tế bào HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP là một dòng tế bào Hela Kyoto được biến đổi gen. Được tạo ra bằng công nghệ CRISPR/Cas9, các tế bào này biểu hiện protein CAP-D2 được gắn với protein huỳnh quang xanh lá cây tăng cường dạng đơn thể (mEGFP), cho phép quan sát động học của CAP-D2 theo thời gian thực. Dấu hiệu mEGFP cho phép các nhà nghiên cứu nghiên cứu vị trí, vận chuyển và tương tác của protein bên trong tế bào.

Các biến đổi di truyền cung cấp thông tin về vai trò của CAP-D2 trong tín hiệu tế bào, tổ chức cytoskeleton và phản ứng với stress. Ngoài ra, dấu hiệu huỳnh quang cải thiện khả năng quan sát tế bào sống và sàng lọc quy mô lớn, khiến dòng tế bào này trở nên thiết yếu cho cả nghiên cứu cơ bản và ứng dụng.

Tissue
Nội cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô tuyến
Metastatic site
Vị trí khối u nguyên phát (nội cổ tử cung)
Applications
Sinh học phức hợp Condensin I; Quan sát hình ảnh tiểu đơn vị CAP-D2; Tỷ lệ thành phần của Condensin; Cấu trúc nhiễm sắc thể; Động học của bộ khung tế bào; Quan sát tế bào sống; Sàng lọc nội dung cao; Xác thực phương pháp knock-in bằng CRISPR
Synonyms
  • HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78
  • HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP knock-in at the CAP-D2 locus for condensin-complex studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Tế bào có hình dạng giống biểu mô với cấu trúc dạng đá mozaic
Cell type
Tế bào biểu mô

04Identifiers

Citation
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP (Số catalog của Cytion: 301572)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_UR42
Depositor
Phòng thí nghiệm Ellenberg (EMBL)

05Expression and susceptibility

Products
EGFP (Protein huỳnh quang xanh lá cây tăng cường)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, chứa: 4,5 g/L glucose, chứa: 4 mM L-glutamine, chứa: 3,7 g/L NaHCO₃, chứa: 1,0 mM natri pyruvate (số hiệu sản phẩm Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung 10% huyết thanh bò phôi (FBS) vào môi trường nuôi cấy
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Donor age
30 năm
Ethnicity
Người Mỹ gốc Phi