Gå direkt till innehållet
B-LCL-HROC72
Vävnad
Perifert blod
Sjukdom
Tjocktarmscancer
Metastaseringsställe
Ej tillämpligt (EBV-transformerade B-LCL från en patient med kolonkarcinom)

B-LCL-HROC72

Cell line · Produktnummer 302082

B-LCL-HROC72 is an Epstein-Barr virus (EBV)-immortalized human B lymphoblastoid cell line established from B lymphocytes isolated from either tumor tissue...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
1

01Allmän information

Beskrivning

B-LCL-HROC72 är en Epstein-Barr-virus (EBV)-immortaliserad human B-lymfoblastoidcellinje som etablerats från B-lymfocyter isolerade från antingen tumörvävnad eller perifert blod från en vuxen patient. Cellerna genererades genom ex vivo-infektion med EBV-innehållande supernatant härrörande från B95/8-marmosetcellinjen i närvaro av cyklosporin A för att undertrycka T- och NK-cellutväxt. Efter flera veckors odling uppnåddes stabil lymfoblastoid utväxt, vilket resulterade i en kontinuerligt prolifererande monoklonal eller oligoklonal B-cellpopulation lämplig för långvarig in vitro-expansion.

Immunofenotypiskt uppvisar B-LCL-HROC72 en mogen och aktiverad B-cellprofil som kännetecknas av uttryck av CD19 och CD20, tillsammans med höga nivåer av aktiverings- och mognadsmarkörer såsom CD23 och CD80. Starkt uttryck av MHC-molekyler av klass I och klass II indikerar bevarad antigenpresentationsförmåga. Beroende på den enskilda klonen kan varierande uttryck av differentieringsassocierade markörer såsom CD27, CD38 eller CD138 observeras, vilket återspeglar olika stadier av B-cellmognad. Cellerna är negativa för T-cellmarkörer, vilket bekräftar linjespecificitet.

Funktionellt utsöndrar B-LCL-HROC72 immunoglobulin av en definierad isotyp (t.ex. IgG, IgM eller IgA), som förblir stabil under långvarig odling. De utsöndrade antikropparna kan samlas in från odlingssupernatant och användas för nedströmsapplikationer, inklusive antigenbindande analyser, tumörcelligenkänningsstudier eller identifiering av sjukdomsassocierade antigener. Som en EBV-immortaliserad B-cellmodell utgör B-LCL-HROC72 en robust in vitro-plattform för undersökning av humorala immunsvar, B-cellaktivering och -differentiering samt antikroppsmedierade mekanismer i samband med tumörimmunologi eller systemiska immunsvar.

Vävnad
Perifert blod
Sjukdom
Tjocktarmscancer
Metastaseringsställe
Ej tillämpligt (EBV-transformerade B-LCL från en patient med kolonkarcinom)
Ansökningar
T-cells- och NK-cellsanalyser; HLA-typning; antigenpresentation; målceller för CTL-analys; immunrespons i samband med kolorektal cancer; HROC72-studier med patientanpassade biobanker

02Klassificering

Organism
Människa
Tillväxtegenskaper
Upphängning
GMO-status
GMO-S2
Detaljer om GMO-status
GMO-S2: This B-LCL contains a stably maintained EBV episome (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV is classified as risk group 2; BSL-2 containment required. This classification applies within Germany; regulations may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
2

03Egenskaper

Morfologi
Lymfoblastliknande (runda celler i suspension)
Celltyp
B lymfoblast

04Identifierare

Källa
B-LCL-HROC72 (Cytion katalognummer 302082)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
Not assigned

05Uttryck och mottaglighet

Virus
Transformant: EBV

06Hantering och odling

Odlingsmedium
RPMI 1640, med: 2,0 mM stabilt glutamin, med: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% värmeinaktiverad FBS
Vidareodling
Homogenisera försiktigt cellsuspensionen i kolven genom att pipettera upp och ner, och ta sedan ett representativt prov för att bestämma celltätheten per ml. Späd suspensionen till en cellkoncentration på 1 x 105 celler/ml med färskt odlingsmedium och fördela den justerade suspensionen i nya kolvar för vidare odling.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Etnicitet
Kaukasisk