Preskoči na vsebino
HK-CRISPR-Pom121-mCherry
Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom

Dokumenti

HK-CRISPR-Pom121-mCherry

Cell line · Številka izdelka 300658

The HK-CRISPR-Pom121-mCherry cell line is a genetically engineered variant of HeLa Kyoto cells, designed for advanced cellular research. These cells have ...

€800.00brez davka in stroškov poštnine

Prilagajanje / Priporočila

Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija HK-CRISPR-Pom121-mCherry je gensko spremenjena različica celic HeLa Kyoto, zasnovana za napredne celične raziskave. Te celice so bile spremenjene s tehnologijo CRISPR-Cas9 tako, da je bila genu Pom121, ključni sestavini kompleksa jedrnih por (NPC), dodana fluorescentna oznaka mCherry. Ta sprememba raziskovalcem omogoča vizualizacijo gena Pom121 v realnem času, kar pomaga pri študijah jedrske dinamike in funkcij NPC.

Oznaka mCherry, ki oddaja rdečo fluorescenco, omogoča podrobno preučevanje obnašanja NPC in jedrno-citoplazemskega transporta s fluorescenčno mikroskopijo. Ta celična linija je dragoceno orodje za raziskovanje proteinov jedrnih por, uravnavanja izražanja genov, nadzora celičnega cikla in prenosa signalov.

Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-mediated mCherry tag on Pom121 enabling visualization of nuclear pore membrane components. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelnim celicam podobne celice z obliko mozaičnih kamenčkov

04Identifikatorji

Navajanje vira
HK-CRISPR-Pom121-mCherry (kataloška številka Cytion 300658)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Vlagatelj
Laboratorij Ellenberg (EMBL)

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
Pom121, mCherry-oznaka

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
30 let
Etnična pripadnost
Afroameričan