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Células HBL-100
Cell line · Product number 300178
HBL-100 is a human breast epithelial cell line originally derived from the breast milk of a nursing mother. The milk was collected three days post-deliver...
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01General information
- Description
La HBL-100 es una línea celular epitelial mamaria humana derivada originalmente de la leche materna de una madre en período de lactancia. La leche se recolectó tres días después del parto y, a pesar de que no se observaron signos de lesiones mamarias en la donante ni antecedentes familiares de cáncer de mama, las células presentaron un cariotipo anormal en el séptimo paso. Esta línea celular se destaca por su capacidad para sintetizar una pequeña cantidad de lactosa y para responder a la estimulación con prolactina o estrógeno aumentando la producción de caseína. Los análisis microscópicos, como las micrografías electrónicas, han confirmado la presencia de microvellosidades, tonofibrillas y desmosomas en estas células, lo que resalta sus características epiteliales típicas.
Sin embargo, la línea celular HBL-100 ha presentado complicaciones significativas en cuanto a su identificación y caracterización. Se descubrió que contenía un cromosoma Y, lo que sugiere una identificación errónea, ya que inicialmente se pensaba que la línea celular era de origen femenino. La complejidad se acentúa por la presencia de secuencias genómicas del SV40 dentro de la línea celular, lo que contradice las creencias anteriores de que se había inmortalizado espontáneamente. Estos hallazgos han dado lugar a debates sobre el origen y la composición genética de la HBL-100, lo que la convierte en una línea celular problemática para la investigación sin una validación exhaustiva de sus características y origen.
- Tissue
- Mama
- Disease
- Carcinoma
- Synonyms
- HBL 100
- HBL100
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
- Tumourigenic
- Sí, en ratones desnudos. A niveles de pases inferiores a 35, la línea no es tumorigénica en ratones desnudos, pero forma colonias en agar blando. Se ha informado que la tumorigénicidad aumenta a partir del pase 35.
- Ploidy status
- Aneuploide
- MSI status
- Estable (MSS)
- Karyotype
- El número cromosómico de la línea madre es casi triploide, con un número modal de 67 cromosomas, y el componente 2S se presenta en un 0,6 %. La mayoría de los complementos cromosómicos consisten en unos 39 cromosomas normales y 28 cromosomas marcadores. Marcadores como 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt y muchos otros son comunes en la mayoría de las metafases. Faltan los cromosomas normales 11, 14, 15 y 16. Los cromosomas 2, 12, 17 y 19 son monosómicos, y el cromosoma X es disómico. El perfil de ADN para la amelogenina, un ensayo de PCR específico de cromosomas sexuales que puede distinguir los productos específicos del cromosoma X de los productos específicos del cromosoma Y, reveló la presencia de cromosomas Y en esta línea celular de origen supuestamente femenino. La confirmación de los hallazgos generales se logró mediante tinción QM, bandas C y FISH, con una sonda de pintura cromosómica completa dirigida al cromosoma Y humano.
04Identifiers
- Citation
- HBL-100 (número de catálogo de Cytion 300178)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_4362
05Expression and susceptibility
- Antigen expression
- HLA A1, A10, A11, B7, B8
- Isoenzymes
- G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Producto de la frecuencia fenotípica: 0,0008
- Viruses
- Las células contienen un genoma del SV40 integrado en tándem; se ha informado que podrían contener un retrovirus de tipo D similar o idéntico al virus de los monos Mason-Pfizer (MPMV).
- Reverse transcriptase
- Positivo
06Handling and culture
- Culture medium
- McCoys 5a, p: 3,0 g/L de glucosa, p: glutamina estable, p: 2,0 mM de piruvato de sodio, p: 2,2 g/L de NaHCO₃ (número de artículo de Cytion 820200a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.
- Supplements
- Añade al medio un 10 % de FBS
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retira el medio usado de las células adheridas y lávalas con PBS sin calcio ni magnesio. Para los frascos T25, usa de 3 a 5 ml de PBS, y para los frascos T75, usa de 5 a 10 ml. Luego, cubra las células por completo con Accutase, utilizando de 1 a 2 ml para los frascos T25 y 2,5 ml para los frascos T75. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos para desprenderse. Después de la incubación, mezcla suavemente las células con 10 ml de medio para resuspendarlas; luego, centrifuga a 300xg durante 3 minutos. Deseche el sobrenadante, resuspenda las células en medio fresco y transfiéralas a frascos nuevos que ya contengan medio fresco.
- Seeding density
- 1 x 10⁴ células/cm²
- Fluid renewal
- De 2 a 3 veces por semana
- Post-thaw recovery
- Después de descongelarlas, siembre las células a una densidad de 5 × 10⁴ células/cm² y deje que se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.
Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.
- Freeze medium
- Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
- Storage conditions
Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.
- Shipping conditions
Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.
08Donor
- Donor age
- 27 años
- Ethnicity
- caucásico
09Legal and safety
- Safety precautions
- Cuando se planea almacenar un criovial en nitrógeno líquido para su descongelación futura, es obligatorio cumplir con estrictas medidas de seguridad. Es esencial contar con guantes y ropa de protección adecuados, y se requiere el uso de una mascarilla o lentes de seguridad durante la transferencia de muestras congeladas hacia o desde el tanque de nitrógeno líquido. Esto tiene como objetivo mitigar el riesgo de lesiones por posibles explosiones de los criotubos al retirarlos, lo que puede provocar la proyección de fragmentos afilados.
- Warranty
En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.
Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.
- Material Transfer Agreement required
- Yes